黑莓籽有效成分在制備降血脂保健品或藥物上的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物提取物應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及黑莓籽有效成分的另一種新應(yīng)用，具體涉及其在具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和抗脂質(zhì)過氧化作用的降血脂保健品或藥物上的應(yīng)用。本發(fā)明研究證實(shí)了黑莓籽石油醚部位、正丁醇部位和黑莓籽油對(duì)高脂血癥小鼠具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和抗脂質(zhì)過氧化作用，能改善脂質(zhì)在小鼠肝臟和脾中的蓄積，減少氧化應(yīng)激，推測(cè)其是黑莓籽有效成分降血脂的作用機(jī)制之一。
【專利說明】黑莓籽有效成分在制備降血脂保健品或藥物上的應(yīng)用
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】 本發(fā)明屬于植物提取物應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種黑莓籽有效成分在制備降血脂保 健品或藥物上的新應(yīng)用。
[0002]

【背景技術(shù)】 隨著人們生活水平的提高和醫(yī)學(xué)科學(xué)的進(jìn)步，人們的健康水平得到很大的提高，在控 制感染性疾病方面得到了很大的進(jìn)步。血脂異常俗稱高脂血癥。近年來，隨著生活習(xí)慣和 飲食習(xí)慣改變等因素影響，高脂血癥發(fā)病率有明顯增長(zhǎng)趨勢(shì)，已經(jīng)成為危害人類身體健康 的重大疾病之一，是引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的最主要因素，動(dòng)脈粥樣硬化所致的心血管疾病是 當(dāng)前危機(jī)人類健康和生命的主要疾病之一。心腦血管病具有發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高 和復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)。這類病在全世界已成為危害人類健康的"頭號(hào)殺手"。美國心肺血研究 院進(jìn)行7年的冠心病防治研究證實(shí)，降血脂藥的應(yīng)用可減少心臟病死亡率24%，減少非致 死性心臟病發(fā)作率19%。降脂藥能延緩或減輕AS病變的發(fā)展，并促進(jìn)其消退。
[0003] 目前國外開發(fā)的新型降血脂藥物多是人工合成的化合物，并且多以他汀類降脂藥 為主，但有肝臟和肌肉毒副作用，嚴(yán)重者可導(dǎo)致橫紋肌溶解癥。我國的降血脂藥物多是天然 的、無毒的或無毒副作用的。目前有三十多種中藥被用于高脂血癥的治療當(dāng)中，已報(bào)道的中 藥降脂活性成分包括蛋白質(zhì)、黃酮類、皂苷類、活性多糖、不飽和脂肪酸、酚類成分、蒽醌類、 生物堿類和萜類等。中藥降脂藥療效肯定、持續(xù)、副作用小。隨著現(xiàn)代科技手段的不斷進(jìn) 步，眾多中外學(xué)者對(duì)中藥中具有降脂活性的成分進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)中藥的降脂作用主要從抑制 膽固醇的吸收、調(diào)節(jié)血脂代謝、促進(jìn)膽固醇排泄來體現(xiàn)，科學(xué)地解釋了中藥的治療機(jī)制，為 應(yīng)用中藥治療高脂血癥提供了理論依據(jù)。
[0004] 在當(dāng)今時(shí)代，為預(yù)防和治療世界上日益增多的高血脂及其相關(guān)的心腦血管病患 者，深入研究具有降脂功能的食物和藥用植物，努力發(fā)現(xiàn)和開發(fā)降脂作用顯著、沒有任何毒 副作用的降血脂藥物或保健食品成為國內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。
[0005] 黑莓spp. Blackberry)屬于薔薇科（Rasaceae)懸鉤子屬聚合果類植 物，其果實(shí)具有很高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，具有改善人體新陳代謝、清除自由基、延緩衰 老、增強(qiáng)免疫力等功能，特別具有降低膽固醇含量、防治心臟疾病、抗癌（降低化療引起的 毒副作用）和抗血栓的功效。
[0006] 黑莓籽是黑莓果酒、黑莓汁等加工產(chǎn)品的副產(chǎn)物，含有豐富的多酚類化合物，多年 來被大量遺棄，造成資源的大量浪費(fèi)。近幾年，技術(shù)人員從黑莓籽中提取了黑莓籽油。
[0007] 研究表明，黑莓籽油含有較高的不飽和脂肪酸，如棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸和 亞麻酸等，能夠提供給人體基本的脂肪酸，而且這些脂肪酸不能通過任何已知的化學(xué)途徑 合成，必須從食物中獲取。另外，籽油具有有效清除自由基、有效抑制H 202誘導(dǎo)的小鼠紅細(xì) 胞氧化溶血和VC- FeS04體系誘導(dǎo)的小鼠肝組織丙二醛生成及VC-FeS04體系誘導(dǎo)的小鼠肝 線粒體腫脹的作用，與其抗心血管脂氧化和抗癌活性息息相關(guān)；此外，還發(fā)現(xiàn)黑莓籽經(jīng)脫脂 后的主要有效成分為原花青素，是由單體黃烷-3-醇以不同聚合度連接而成的多酚類化合 物，具有高效的清除自由基的能力，具有治療動(dòng)脈硬化、消炎防腫、抗突變和預(yù)防癌癥等廣 泛用途。未見黑莓籽對(duì)調(diào)節(jié)血脂代謝和抗脂質(zhì)過氧化，用于治療高脂血癥作用的報(bào)道。
[0008]


【發(fā)明內(nèi)容】
本發(fā)明為了擴(kuò)大黑莓籽的應(yīng)用領(lǐng)域，通過灌胃高脂乳劑誘導(dǎo)小鼠高脂血癥，測(cè)定血清 中TG、TC、HDL-C和LDL-C的含量評(píng)價(jià)其調(diào)節(jié)血脂的作用，測(cè)定血清中MDA的含量和S0D的 活力，評(píng)價(jià)其體內(nèi)抗脂質(zhì)過氧化的作用，為合理開發(fā)和利用黑莓籽資源提供科學(xué)依據(jù)，提供 了黑莓籽在調(diào)節(jié)血脂和抗脂質(zhì)過氧化方面的新應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的，采用以下技術(shù)方案： 黑莓籽有效成分在制備降血脂保健品或藥物上的應(yīng)用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽 的石油醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
[0010] 黑莓籽有效成分在抗脂質(zhì)過氧化的應(yīng)用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽的石油醚 部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
[0011] 黑莓籽有效成分改善脂質(zhì)在肝腎脾的蓄積應(yīng)用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽的 石油醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
[0012] 黑莓籽有效成分(石油醚部位、正丁醇部位和黑莓籽油）采用以下方法制得，黑莓 籽用石油醚冷浸脫脂，脫脂后的提取液回收石油醚得到黑莓籽油；脫脂后的黑莓籽殘?jiān)?乙醇（65-80V%)冷浸，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油 醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物， 即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0013] 為了提高黑莓籽有效成分的提取效果，可以在石油醚冷浸前將黑莓籽粉碎。
[0014] 石油醚冷浸脫脂時(shí)，重復(fù)4-5次，每次3-4d，合并提取液；每次石油醚的用量是黑 莓籽質(zhì)量的8-10倍，冷浸溫度為室溫。
[0015] 乙醇冷浸時(shí)，重復(fù)2-3次，每次3-4d，合并乙醇提取液；每次乙醇的用量是黑莓籽 殘?jiān)|(zhì)量的8-10倍，冷浸溫度為室溫。
[0016] 本發(fā)明從黑莓籽中提取到了石油醚部位、正丁醇部位和黑莓籽油，并采用灌胃高 脂乳劑誘導(dǎo)高血脂小鼠模型，首次研究黑莓籽對(duì)高脂乳劑誘導(dǎo)的高脂血癥小鼠的影響。研 究證實(shí)了這些有效部位均具有不同程度的降低血清中TG、TC、LDL-C和MDA的含量、升高 HDL-C的含量及S0D的活力的功效，其中石油醚低劑量組能顯著性地降低血清中TG、TC、 LDL-C和MDA的含量，升高HDL-C的含量及S0D的活力；正丁醇部位中低劑量組均能顯著性 的降低血清中TG、TC、LDL-C和MDA的含量，升高S0D的活力；黑莓籽油高劑量組能顯著性 地降低血清中TG、TC、LDL-C和MDA的含量，升高S0D的活力；黑莓籽油中劑量組能顯著性 地降低血清中TG、TC和MDA的含量，升高HDL-C的含量和S0D的活力；正丁醇部位高劑量 組能顯著性地降低血清中TG和MDA的含量，升高HDL-C的含量及S0D的活力，黑莓籽油低 劑量組能降低血清中TG、TC和LDL-C的含量，升高HDL-C的含量，石油醚部位高（TG和TC)、 中（TC和HDL-C)劑量組能顯著性改變，其他各指標(biāo)雖不具有顯著性，但與模型組相比，均具 有一定的效果；另外，研究肝腎脾系數(shù)發(fā)現(xiàn)，除石油醚高劑量組外，其他各組均能不同程度 地顯著性降低肝系數(shù)和脾系數(shù)；僅有正丁醇低劑量組能顯著性地降低腎系數(shù)，這些有效部 位均能改善脂質(zhì)在小鼠肝臟和脾中的蓄積，減少氧化應(yīng)激。由以上數(shù)據(jù)可知，黑莓籽有效部 位具有一定程度的調(diào)節(jié)血脂代謝和抗脂質(zhì)過氧化、改善脂質(zhì)在小鼠肝臟和脾中的蓄積、減 少氧化應(yīng)激的作用，推測(cè)其是黑莓籽降血脂的作用機(jī)制之一。
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【具體實(shí)施方式】 實(shí)施例1 黑莓籽有效成分的提取方法，步驟如下：500g黑莓籽粉碎，每次使用4000mL石油醚冷 浸脫脂，重復(fù)4次，每次4d，過濾，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油145. 04g ; 脫脂后的黑莓籽殘?jiān)?41g用2800mL乙醇（70V%)冷浸，重復(fù)3次，每次3d，合并乙 醇提取液，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙 酯、正丁醇進(jìn)行萃取，得到的石油醚萃取物2. 34g、乙酸乙酯萃取物5. 46g和正丁醇萃取物 13. 42g，即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0018] 實(shí)施例2 黑莓籽有效成分的提取方法，步驟如下：500 g黑莓籽粉碎，每次使用5000 mL石油醚 冷浸脫脂，重復(fù)5次，每次3 d，過濾，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162. 50 g ; 脫脂后的黑莓籽殘?jiān)?32g用3000mL乙醇（65V%)冷浸，重復(fù)2次，每次4d，合并乙 醇提取液，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙 酯、正丁醇進(jìn)行萃取，得到的石油醚萃取物2. 02g、乙酸乙酯萃取物5. 10g和正丁醇萃取物 14. 28g，即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0019] 實(shí)施例3 黑莓籽有效成分的提取方法，步驟如下：500 g黑莓籽粉碎，每次使用4500 mL石油醚 冷浸脫脂，重復(fù)4次，每次4d，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162. 26 g ; 脫脂后的黑莓籽殘?jiān)?35g用3300mL乙醇（80V%)冷浸，重復(fù)3次，每次4d，合并乙 醇提取液，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙 酯、正丁醇進(jìn)行萃取，得到的石油醚萃取物2. 26g、乙酸乙酯萃取物5. 54g和正丁醇萃取物 12. 94g，即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0020] 效果實(shí)驗(yàn)黑莓籽不同部位對(duì)高脂乳劑誘導(dǎo)的高脂乳劑小鼠的影響 實(shí)驗(yàn)原料：將實(shí)施例1-3制得的石油醚部位、正丁醇部位、黑莓籽油分別混合作為三種 實(shí)驗(yàn)原料。
[0021] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠，體重22 ± 2 g，SPF級(jí)，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司質(zhì) 檢中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXD魯20080002。
[0022] 實(shí)驗(yàn)試劑：甘油三酯（TG)測(cè)定試劑盒（浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司，Lot : 2014030025);總膽固醇（TC)測(cè)定試劑盒(浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司，Lot :2014040011); 丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物工程研究所，20140324) ;S0D試劑盒(測(cè)總）（南京建 成生物工程研究所，20140507);高密度脂蛋白膽固醇（HDL)測(cè)定試劑盒(北京化康泰臨床 試劑有限公司，20130718);低密度脂蛋白膽固醇（LDL)測(cè)定試劑盒(北京化康泰臨床試劑 有限公司，20130722);決明降脂片（吉林吉春制藥有限公司批號(hào)：070501);丙硫氧嘧啶 (Merck, Germany) ;3號(hào)膽鹽(北京奧博星生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：100602816);膽固醇(純 度>99. 5%，北京奧博星生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：1029352);豬油（自制)。
[0023] 實(shí)驗(yàn)儀器：LRH-150恒溫培養(yǎng)箱；Multiskan MK3酶標(biāo)儀；電子天平；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀； UV-2000型紫外可見分光光度計(jì)；CS-H1型混合器；各規(guī)格的微量移液器及槍頭等。
[0024] 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果 1、實(shí)驗(yàn)方法 高脂乳劑的配制：取1 g丙硫氧啼陡、20 g膽固醇和40 g葡萄糖在乳缽中一起研碎， 取豬油40 g (自制豬油先用40°C水浴融化）導(dǎo)入乳缽，研磨，然后再加入1 mL吐溫-80和 2 mL丙二醇，向2 g 3號(hào)膽鹽中加入20 mL水配置成10%的溶液，再將膽鹽溶液倒入乳缽中 研磨均勻，最后用蒸餾水定容至100 mL，超聲30 min直至乳劑呈稀奶油狀，密封后放入冰箱 中，用時(shí)37°C水浴融化即可。
[0025] 動(dòng)物分組與處理：取健康昆明小鼠120只（22±2 g)隨機(jī)分為12組，每組10只，分 別為空白組，模型組，陽性對(duì)照組(決明降脂片），黑莓籽石油醚部位高劑量組（800 mg/kg)、 中劑量組（400 mg/kg)和低劑量組（200 mg/kg)，黑莓籽正丁醇部位高劑量組（600 mg/kg)、 中劑量組（300 mg/kg)和低劑量組（150 mg/kg)，黑莓籽油高劑量組（1000 mg/kg)、中劑量 組（500 mg/kg)和低劑量組（250 mg/kg)。上午除空白組外給小鼠按照0.2 mL/10g灌胃高 脂乳劑進(jìn)行造模，下午灌胃相應(yīng)的藥物，于第14d給藥2h后，禁食不禁水12h后，摘除眼球 取血，血漿室溫靜置5min，待血清分離后離心，得到血清，放置于冰箱0-3°C保存，用于測(cè)定 TG、TC、HDL-C、LDL-C、MDA和S0D。采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17. 0對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理， 所有數(shù)據(jù)采用i 表示，以O(shè)ne-way AN0VA分析各組別之間的顯著性差異，兩組均數(shù)比較 米用?檢驗(yàn)。
[0026] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 表1黑莓籽不同部位對(duì)高腿血癥小鼠脂質(zhì)代謝的影響（i±S·，《=10)

【權(quán)利要求】
1. 黑莓籽有效成分在制備降血脂保健品或藥物上的應(yīng)用，所述黑莓籽有效成分為黑莓 籽的石油醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
2. 黑莓籽有效成分在抗脂質(zhì)過氧化方面的應(yīng)用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽的石油 醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
【文檔編號(hào)】A23L1/29GK104189139SQ201410334901
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年7月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月15日
【發(fā)明者】魏金鳳, 周琳, 康文藝, 尹震花 申請(qǐng)人:河南大學(xué)