利用發(fā)酵提高糙米γ—氨基丁酸的方法
【專利摘要】本發(fā)明為利用發(fā)酵提高糙米中γ—氨基丁酸的方法。解決糙米中γ—氨基丁酸含量低，己有發(fā)酵工藝復(fù)雜，不適于提高糙米中γ—氨基丁酸含量，增加糙米營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值和口感的問(wèn)題。本發(fā)明以糙米或添加了谷氨酸鈉的糙米為原料，接種高產(chǎn)γ—氨基丁酸（GABA）乳酸菌P—14菌株，進(jìn)行發(fā)酵，獲得富含GABA的發(fā)酵糙米。該P(yáng)—14菌株分離自傳統(tǒng)泡菜，發(fā)酵原料為經(jīng)過(guò)滅菌的糙米，發(fā)酵產(chǎn)物能達(dá)到食品安全級(jí)。經(jīng)過(guò)發(fā)酵處理，糙米的營(yíng)養(yǎng)性和保健性都可得到不同程度的提高，可以滿足人民對(duì)食品營(yíng)養(yǎng)和保健功能的需求。
【專利說(shuō)明】利用發(fā)酵提高糙米Y—氨基丁酸的方法
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】:
本發(fā)明涉及一種乳酸菌發(fā)酵提高糙米Y—氨基丁酸的方法。
[0002]【背景技術(shù)】:
Y—氨基丁酸(GABA)是一種重要的非蛋白氨基酸，具有增進(jìn)腦活力、安神、調(diào)解激素分泌、改善脂質(zhì)代謝、降血壓、治療癲癇和改善更年期綜合癥等重要的生理功能。GABA分布非常廣泛，在動(dòng)物、植物和微生物中均有存在，在各種谷類、蔬菜、水果和蘑菇中有微量的含量。通過(guò)化學(xué)法、植物富集法和微生物法均可制備GABA。與前兩者相比，微生物發(fā)酵法具有條件溫和、設(shè)備要求相對(duì)簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。
[0003]目前國(guó)內(nèi)主要是利用浸泡發(fā)芽來(lái)富集糙米中Y—氨基丁酸。通過(guò)糙米發(fā)芽富集能力有限，發(fā)芽對(duì)溫濕度條件要求高，且發(fā)芽容易出現(xiàn)長(zhǎng)霉現(xiàn)象，發(fā)芽條件難以控制。
[0004]《糙米酵素發(fā)酵工藝對(duì)Y—氨基丁酸和谷胱甘肽含量的影響研究》文章介紹了以糙米為原料接種酵母菌進(jìn)行發(fā)酵研究發(fā)酵工藝對(duì)Y—氨基丁酸的影響；申請(qǐng)?zhí)枮?008100686241的發(fā)明公開(kāi)了以大米為原料接種紅曲進(jìn)行發(fā)酵制備富含GABA紅曲米的方法。
[0005]申請(qǐng)?zhí)枮?011101020988的發(fā)明公開(kāi)了以糙米、葡萄糖、玉米粉、大豆粉等為主要原料接種乳酸菌進(jìn)行發(fā)酵，獲得富含GABA的發(fā)酵產(chǎn)物；《富含Y—氨基丁酸乳酸菌發(fā)酵功能飲料的研制》文章介紹了以糙米汁、黃豆芽汁和牛奶酶解液為培養(yǎng)基，研制乳酸菌發(fā)酵飲料；《Y—氨基丁酸的功能性及其在稻米制品中的富集利用》文章介紹日本大阪生物環(huán)境研究所向米糠抽屜液中加入碳源、氮源，接種乳酸菌和酵母菌進(jìn)行發(fā)酵后獲得富含GABA的產(chǎn)物；申請(qǐng)?zhí)枮?01010145627.8的發(fā)明專利公開(kāi)了將米糠、谷氨酸及奶粉混合后接種商業(yè)型乳酸菌粉(嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌)發(fā)酵，獲得富含GABA的產(chǎn)物。
[0006]上述報(bào)道發(fā)酵原料是由糙米或米糠與其他配料組成，最終發(fā)酵產(chǎn)物除糙米外還存在其他配料。
[0007]申請(qǐng)?zhí)枮?01210302371.6的發(fā)明專利公布了以小米糠、谷氨酸鈉為原料，谷氨酸鈉與米糠、蒸餾水混合后調(diào)節(jié)初始PH值為3— 5，接種短乳桿菌CCTCC NO: M 209132進(jìn)行發(fā)酵。該報(bào)道以小米糠為原料，提高了小米糠附加值，但小米糠和糙米的使用范圍不同，小米糠使用范圍相對(duì)糙米更窄，發(fā)酵初期需要進(jìn)行PH值調(diào)整，增加了發(fā)酵工序。
[0008]而微生物發(fā)酵富集能力與微生物的性能相關(guān)，微生物發(fā)酵產(chǎn)Y —氨基丁酸能力越強(qiáng)，則富集能力越強(qiáng)，且發(fā)酵條件比發(fā)芽條件更易控制，發(fā)酵工藝更易操作。研究表明，大米經(jīng)過(guò)發(fā)酵處理，營(yíng)養(yǎng)性和保健性都得到了不同程度的提高，因此通過(guò)接種產(chǎn)Y—氨基丁酸乳酸菌發(fā)酵糙米不但可以提高糙米中Y—氨基丁酸，而且可以改善糙米風(fēng)味、口感等其他品質(zhì)。
[0009]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明的目的是提供一種通過(guò)乳酸菌發(fā)酵提高糙米中Y—氨基丁酸含量，增加糙米營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值，具有獨(dú)特風(fēng)味、口感，發(fā)酵工藝更簡(jiǎn)單，發(fā)酵產(chǎn)物組分單一的利用發(fā)酵提高糙米Y—氨基丁酸的方法。
[0010]為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
利用發(fā)酵提高糙米Y—氨基丁酸的方法，以糙米為原料，接種乳酸菌進(jìn)行發(fā)酵，所述乳酸菌為短乳桿菌(Lac?ο如&77心brevis)?—U菌株,保藏編號(hào)為CGMCC NO: 9029，2014年4月9日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。
[0011]以添加了谷氨酸鈉的糙米為原料。
[0012]其步驟如下:
1)糙米粉碎后得糙米粉，糙米粉與水按10g:90mL比例混合，
2)向糙米水混合物中添加谷氨酸鈉，谷氨酸鈉添加量為每1g糙米與90mL水混合后添加lg，
3)糙米、水和谷氨酸鈉混合后，發(fā)酵原料pH值為自然pH值，
4)糙米、水和谷氨酸鈉混合后，每1g糙米、90mL水、Ig谷氨酸鈉混合物接種5mL乳酸菌種子發(fā)酵劑，發(fā)酵3天后，獲得富含GABA的發(fā)酵糙米。
[0013]步驟I)中糙米粉碎后過(guò)60目篩網(wǎng)，步驟3)中糙米、水和谷氨酸鈉混合后，121°C滅菌30分鐘，未進(jìn)行pH值調(diào)節(jié)，發(fā)酵pH值為自然pH值，步驟4)中，發(fā)酵溫度為30°C，每1g糙米、90mL水、Ig谷氨酸鈉混合物接種5mL乳酸菌種子發(fā)酵劑,發(fā)酵3天。
[0014]步驟3)中乳酸菌種子發(fā)酵劑制備方法為:將乳酸菌接種到5mL MRS液體培養(yǎng)基中18—24小時(shí)，以lmL/100mL接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至菌液0D600值為0.8—1.2,6000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘收集菌體，無(wú)菌生理鹽水洗滌2遍，用MRS液體培養(yǎng)基1/10倍體積的無(wú)菌生理鹽水重懸，制得高濃度菌液，所得高濃度菌懸液即為乳酸菌種子發(fā)酵劑。
[0015]上述P —14菌株的分離方法，采用梯度稀釋混菌法從四川自然發(fā)酵泡菜水中分離。包括以下步驟:將ImL泡菜水用9mL無(wú)菌生理鹽水進(jìn)行梯度稀釋，稀釋到泡菜水濃度為10一6— 10—8mL/mL，取ImL稀釋液于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，傾倒固體培養(yǎng)基并混勻，待培養(yǎng)基凝固后，置于30°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)48— 96小時(shí)，出現(xiàn)大量細(xì)菌菌落，挑取具有不同特征的單菌落，在分離培養(yǎng)基上劃線純化，并進(jìn)一步培養(yǎng)，得到純菌株。純化的菌株采用2種方式保藏，①用液體培養(yǎng)基在30°C培養(yǎng)24— 36小時(shí)后，在培養(yǎng)好的液體培養(yǎng)基中添加甘油，使甘油終濃度為20g/100mL，一20°C凍存，每隔I年轉(zhuǎn)接一次；?將菌種穿刺接種在半固體培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)48小時(shí)后，放于4°C冷藏，每隔4個(gè)月轉(zhuǎn)接一次。
[0016]短乳桿菌P—14菌株接種在固體培養(yǎng)基上，30°C培養(yǎng)48小時(shí)后，觀察菌落特征，菌落較大、圓形、突起，乳白色，表面濕潤(rùn)光滑，邊緣整齊，與短乳桿菌形態(tài)相似；通過(guò)革蘭氏染色后在顯微鏡下觀察細(xì)胞特征，革蘭氏染色陽(yáng)性，細(xì)胞呈短桿狀，無(wú)芽孢。過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)陰性，在15°C生長(zhǎng)，45°C不生長(zhǎng)，氯化鈉耐受范圍為O — 6%(v/w)，能利用阿拉伯糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、麥芽糖、木糖發(fā)酵產(chǎn)酸，能緩慢利用蜜二糖產(chǎn)酸，不能發(fā)酵苦杏仁苷、纖維二糖、七葉靈、乳糖、甘露醇、甘露糖、松三糖、棉子糖、鼠李糖、核糖、水楊苷、山梨醇、蔗糖、海藻糖。其生理生化特征與短乳桿菌(L.brevis)最相似，但也存在一定差異，其不能利用七葉靈、核糖、棉子糖產(chǎn)酸，而短乳桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株L.brevis DSM20054能發(fā)酵以上三類糖產(chǎn)酸。本發(fā)明中短乳桿菌P —14不能利用核糖產(chǎn)酸，這一性質(zhì)與產(chǎn)GABA短乳桿菌L.brevis CCTCCM208054不同。本發(fā)明中短乳桿菌P —14菌株不能利用甘露糖發(fā)酵，與高產(chǎn)GABA短乳桿菌L2保藏號(hào)為CCTCCM 209132不同。提取DNA后，用細(xì)菌通用引物27F，1492R擴(kuò)增出其16SrDNA，送至英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司測(cè)序，序列長(zhǎng)度為1434bp，與短乳桿菌(L.brevis)相似性高達(dá)99%以上。鑒定該菌株為短乳桿菌(L.brevis)。本發(fā)明短乳桿菌P —14菌株與Genbank中短乳桿菌相似性為99%以上，而短乳桿菌L.brevis CCTCCM 208054和短乳桿菌CCTCCM 209132與短乳桿菌相似性為97%。
[0017]P —14菌株產(chǎn)GABA定性檢測(cè)，采用薄層層析法，具體步驟包括:挑取適量冷藏的菌體接種到5mL液體培養(yǎng)基中，30°C靜置發(fā)酵48小時(shí)，取I μ L發(fā)酵液在硅膠薄層層析板上點(diǎn)樣，以濃度為0.2% (w/w)的GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液、添加有2% (w/w) GABA的液體培養(yǎng)基為對(duì)照。展層后于105°C顯色5min，拍照。觀察薄層層析結(jié)果，本發(fā)明的P—14菌株發(fā)酵液具有與GABA標(biāo)品相同層析距離的條帶。
[0018]P—14菌株產(chǎn)GABA定量檢測(cè)，采用氨基酸自動(dòng)分析儀(塞卡姆S—433D型)。挑取適量冷藏的菌體劃線接種到固體培養(yǎng)基上，待長(zhǎng)出單菌落，挑取一個(gè)單菌落菌體接種到10mL液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)10小時(shí)，制成活菌體數(shù)約為18個(gè)的種子發(fā)酵液，將種子發(fā)酵液以2%(v/V)的接種量接種在250mL裝有10mL液體培養(yǎng)基的三角瓶中，30°C靜置發(fā)酵72小時(shí)，所得發(fā)酵液于10000 Xg離心10min，取上清液經(jīng)0.22 μ m膜過(guò)濾后用氨基酸自動(dòng)分析儀分析其氨基酸組成，以未接種的液體培養(yǎng)基為對(duì)照。結(jié)果表明本發(fā)明的P —14菌株發(fā)酵液中GABA含量達(dá)到了 501mg/100g
短乳桿菌P —14菌株活化后接種到液體培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)，0D600為1.1一1.2，6000Xg離心5min收集菌體，用無(wú)菌生理鹽水洗滌后制成0D600為10左右的濃菌懸液，添加3mL到20g福照滅菌糙米粉中(糙米粉:無(wú)菌水=1:2 ;w/v), 30°C靜置發(fā)酵3三天，以未接種輻照糙米粉作對(duì)照，凍干后用氨基酸自動(dòng)分析儀分析其GABA含量變化，接種發(fā)酵糙米粉中GABA含量為65mg/100g，未接種糙米粉中GABA含量為llmg/100g，GABA含量提高了 5倍。
[0019]上述短乳桿菌P —14菌株保藏編號(hào)為:CGMCC NO:9029，保藏單位:中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，保藏日期:2014年4月9日。
[0020]上述液體培養(yǎng)基配方為:蛋白胨10g，牛肉粉5g，酵母粉4g，葡萄糖20g，谷氨酸鈉1g,乙酸鈉5g，磷酸氫二鉀2g，檸檬酸三銨2g，硫酸鎂0.2g，硫酸錳0.05g,吐溫80 ImL,蒸餾水 100mL, ρΗ6.2 左右。
[0021]上述固體培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基添加1.7 — 2.0% (w/v)瓊脂。
[0022]上述半固體培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基添加I (w/v)瓊脂。
[0023]上述薄層層析展層劑組成:正丁醇:冰醋酸:水(v:v:v=4:1:3)，展層劑中含0.4%
卻二酮。
[0024]而微生物發(fā)酵富集能力與微生物的性能相關(guān)，微生物發(fā)酵產(chǎn)Y —氨基丁酸能力越強(qiáng)，則富集能力越強(qiáng)，且發(fā)酵條件比發(fā)芽條件更易控制，發(fā)酵工藝更易操作。研究表明，大米經(jīng)過(guò)發(fā)酵處理，營(yíng)養(yǎng)性和保健性都得到了不同程度的提高，因此通過(guò)接種產(chǎn)Y—氨基丁酸乳酸菌發(fā)酵糙米不但可以提高糙米中Y—氨基丁酸，而且可以改善糙米風(fēng)味、口感等其他品質(zhì)。
[0025]本發(fā)明采用乳酸菌發(fā)酵形成的糙米發(fā)酵物具有與酵母發(fā)酵和霉菌發(fā)酵不一樣的特征，如風(fēng)味、口感等，作為食品添加物，可豐富食品加工種類。本發(fā)明發(fā)酵菌株為從泡菜水中分離的短乳桿菌brevis)?一14菌株,保藏編號(hào)為CGMCC N0:9029,食用安全性有保證，且具有其特殊性。
[0026]種子發(fā)酵劑經(jīng)過(guò)無(wú)菌生理鹽水洗滌、重懸，不會(huì)將MRS液體培養(yǎng)基中其它成分帶入發(fā)酵原料中。
[0027]本發(fā)明發(fā)酵原料為添加了一定量谷氨酸鈉的糙米，發(fā)酵后產(chǎn)物為富含GABA的糙米，不含有其他配料，發(fā)酵產(chǎn)物組分單一，形成的糙米粉可以有更廣泛的應(yīng)用前景。
[0028]本發(fā)明發(fā)酵初期pH值為原料自然pH值，發(fā)酵工藝更簡(jiǎn)單。

【具體實(shí)施方式】
[0029]實(shí)施例1:
用接種環(huán)挑取一環(huán)短乳桿菌P —14接種到5mL MRS液體培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)24小時(shí)，以lmL/100mL接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至菌液0D600值為1.12，6000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘收集菌體，無(wú)菌生理鹽水洗滌2遍，用原培養(yǎng)液1/10倍體積的無(wú)菌生理鹽水重懸，制得乳酸菌種子發(fā)酵劑。
[0030]糙米粉碎后過(guò)6 0目篩，篩下糙米粉與水按10g: 90mL比例混合，向糙米水混合物中添加谷氨酸鈉，每1g糙米與90mL水混合后添加Ig谷氨酸鈉，充分混勻后經(jīng)過(guò)121°C滅菌處理30分鐘，每1g糙米、90mL水、Ig谷氨酸鈉混合物接種5mL乳酸菌種子發(fā)酵劑，在30°C發(fā)酵3天。
[0031]發(fā)酵結(jié)束，糙米有其獨(dú)特的發(fā)酵風(fēng)味和口感，發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)過(guò)冷凍干燥后采用氨基酸自動(dòng)分析儀(塞卡姆S — 433D型)測(cè)定GABA含量，其含量為1639 mg/100g (干重)。
[0032]實(shí)施例2:
用接種環(huán)挑取一環(huán)短乳桿菌P —14接種到5mL MRS液體培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)24小時(shí)，以lmL/100mL接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至菌液0D600值為1.12，6000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘收集菌體，無(wú)菌生理鹽水洗滌2遍，用原培養(yǎng)液1/10倍體積的無(wú)菌生理鹽水重懸，制得乳酸菌種子發(fā)酵劑。
[0033]糙米粉碎后過(guò)60目篩，篩下糙米粉與水按10g:90mL比例混合，充分混勻后經(jīng)過(guò)121 °C滅菌處理30分鐘，每1g糙米、90mL水混合物接種5mL乳酸菌種子發(fā)酵劑，在30°C發(fā)酵3天。
[0034]發(fā)酵結(jié)束，糙米有其獨(dú)特的發(fā)酵風(fēng)味和口感，發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)過(guò)冷凍干燥后采用氨基酸自動(dòng)分析儀(塞卡姆S — 433D型)測(cè)定GABA含量，其含量為22mg/100g (干重)。
[0035]實(shí)施例3:
用接種環(huán)挑取一環(huán)不產(chǎn)GABA乳酸菌接種到5mL MRS液體培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)24小時(shí)，以lmL/100mL接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至菌液0D600值為1.21，6000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘收集菌體，無(wú)菌生理鹽水洗滌2遍，用原培養(yǎng)液1/10倍體積的無(wú)菌生理鹽水重懸，制得乳酸菌種子發(fā)酵劑。
[0036]糙米粉碎后過(guò)60目篩，篩下糙米粉與水按10g: 90mL比例混合，向糙米水混合物中添加谷氨酸鈉，每1g糙米與90mL水混合后添加Ig谷氨酸鈉，充分混勻后經(jīng)過(guò)121°C滅菌處理30分鐘,每1g糙米、90mL水、Ig谷氨酸鈉混合物接種5mL不產(chǎn)GABA乳酸菌種子發(fā)酵劑，在30°C發(fā)酵3天。
[0037]發(fā)酵結(jié)束，糙米有其獨(dú)特的發(fā)酵風(fēng)味和口感，發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)過(guò)冷干燥后采用氨基酸自動(dòng)分析儀(塞卡姆S — 433D型)測(cè)定GABA含量，其含量為8.5 mg/100g (干重)。
[0038]實(shí)施例4:
用接種環(huán)挑取一環(huán)不產(chǎn)GABA乳酸菌接種到5mL MRS液體培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)24小時(shí)，以lmL/100mL接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至菌液0D600值為1.21，6000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘收集菌體，無(wú)菌生理鹽水洗滌2遍，用原培養(yǎng)液1/10倍體積的無(wú)菌生理鹽水重懸，制得乳酸菌種子發(fā)酵劑。
[0039]糙米粉碎后過(guò)60目篩，篩下糙米粉與水按10g:90mL比例混合，充分混勻后經(jīng)過(guò)121°C滅菌處理30分鐘，每1g糙米、90mL水混合物接種5mL不產(chǎn)GABA乳酸菌種子發(fā)酵劑，在30°C發(fā)酵3天。
[0040]發(fā)酵結(jié)束，糙米有其獨(dú)特的發(fā)酵風(fēng)味和口感，發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)過(guò)冷凍干燥后采用氨基酸自動(dòng)分析儀(塞卡姆S — 433D型)測(cè)定GABA含量，其含量為7.5mg/100g (干重)。
[0041]糙米粉碎后過(guò)60目篩，篩下糙米粉與水按10g:90mL比例混合，充分混勻后經(jīng)過(guò)121°C滅菌處理30分鐘，不接種乳酸菌，30°C條件下放置3天，冷凍干燥后采用氨基酸自動(dòng)分析儀(塞卡姆S — 433D型)測(cè)定GABA含量，其含量為10.41mg/100g。
[0042]不接種的糙米中GABA含量為10.41mg/100g ;在添加和不添加谷氨酸鈉的情況下接種不產(chǎn)GABA乳酸菌進(jìn)行發(fā)酵，糙米中GABA含量都不超過(guò)10mg/100g ;接種P —14進(jìn)行發(fā)酵，不添加谷氨酸鈉時(shí)，糙米中GABA含量為22mg/100g，添加谷氨酸鈉時(shí)，糙米中GABA含量為1639mg/100g。因此接種不產(chǎn)GABA乳酸菌發(fā)酵，不能使糙米粉中GABA含量增加，而接種短乳桿菌(lactobacillus brevis)?一14菌株,進(jìn)行發(fā)酵,能顯著提高糙米粉中GABA含量，尤其是添加1%(w/v)谷氨酸鈉后，效果更顯著。發(fā)酵后的糙米有其獨(dú)特的發(fā)酵風(fēng)味和口感。
[0043]本發(fā)明中GABA測(cè)定方法為:將發(fā)酵后的樣品置于一20°C凍24小時(shí)后，冷凍干燥48小時(shí)。取適量樣品，加1mL 6mol/L鹽酸，排除空氣后，在110°C下水解，取一定量定容過(guò)濾后的水解溶液，真空干燥后以0.02mol/L鹽酸溶解定容后上機(jī)測(cè)試。Sykam氨基酸自動(dòng)分析儀，陽(yáng)離子樹(shù)脂(150mmX4.6mm);檢測(cè)波長(zhǎng)為570nm，440nm ;柱溫為57— 74°C梯度溫度；洗脫液流量為0.45ml/min ;反應(yīng)溫度為130°C。
[0044]本發(fā)明中的MRS液體培養(yǎng)基配方為:蛋白胨10g，牛肉粉5g，酵母粉4g，葡萄糖20g，谷氨酸鈉10g，乙酸鈉5g，磷酸氫二鉀2g，檸檬酸三銨2g，硫酸鎂0.2g，硫酸錳0.05g,吐溫80 lmL，蒸餾水100mL, ρΗ6.2左右。
[0045]無(wú)菌生理鹽水制備方法:氯化鈉8.5g定容至1L。
【權(quán)利要求】
1.利用發(fā)酵提高糙米Y—氨基丁酸的方法，其特征在于以糙米為原料，接種乳酸菌進(jìn)行發(fā)酵，所述乳酸菌為短乳桿菌UactobaciIIus brevis、P一14菌株,保藏編號(hào)為CGMCCN0:9029，2014年4月9日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用發(fā)酵提高糙米Y—氨基丁酸的方法，其特征在于以添加了谷氨酸鈉的糙米為原料。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用發(fā)酵提高糙米Y—氨基丁酸的方法，其特征在于其步驟如下: 1)糙米粉碎后得糙米粉，糙米粉與水按10g:90mL比例混合， 2)向糙米水混合物中添加谷氨酸鈉，谷氨酸鈉添加量為每1g糙米與90mL水混合后添加谷氨酸鈉lg， 3)糙米、水和谷氨酸鈉混合后，發(fā)酵原料pH值為自然pH值， 4)糙米、水和谷氨酸鈉混合后，每1g糙米、90mL水、Ig谷氨酸鈉混合物接種5mL乳酸菌種子發(fā)酵劑，發(fā)酵3天后，獲得富含GABA的發(fā)酵糙米。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用發(fā)酵提高糙米Y—氨基丁酸的方法，其特征在于步驟I)中糙米粉碎后過(guò)60目篩網(wǎng)，步驟3)中糙米、水和谷氨酸鈉混合后，121°C滅菌30分鐘，未進(jìn)行pH值調(diào)節(jié)，發(fā)酵pH值為自然pH值，步驟4)中，發(fā)酵溫度為30°C，每1g糙米、90mL水、Ig谷氨酸鈉混合物接種5mL乳酸菌種子發(fā)酵劑，發(fā)酵3天。
5.根據(jù)要求4所述的利用發(fā)酵提高糙米Y—氨基丁酸的方法，其特征在于步驟3)中乳酸菌種子發(fā)酵劑制備方法為:將乳酸菌接種到5mL MRS液體培養(yǎng)基中18 — 24小時(shí)，以ImL/1OOmL接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至菌液0D600值為0.8—1.2,6000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘收集菌體，無(wú)菌生理鹽水洗滌2遍，用MRS液體培養(yǎng)基1/10倍體積的無(wú)菌生理鹽水重懸，制得高濃度菌液，所得高濃度菌懸液即為乳酸菌種子發(fā)酵劑。
【文檔編號(hào)】C12R1/24GK104164459SQ201410349172
【公開(kāi)日】2014年11月26日 申請(qǐng)日期:2014年7月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月22日
【發(fā)明者】朱宇, 董玲, 姚英政, 黎劍 申請(qǐng)人:四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所