一種紫花苜蓿多肽的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種紫花苜蓿多肽的制備方法，其包括以下步驟：(1)紫花苜蓿葉蛋白的提?。?2)脫色脫腥；(3)酶解；(4)噴霧干燥，即得。其中，步驟(1)采用加熱法獲得紫花苜蓿粗蛋白，步驟(2)采用乙醇浸提脫色脫腥，步驟(3)中所用的酶制劑為Protamex酶和Flavourzyme1000L酶，所得紫花苜蓿多肽含量占75％左右，多肽粉氣味具有淡淡的青草香味，溶解后氣味清新、有淡淡的青草香味、無苦澀感，可直接服用。
【專利說明】一種紫花苜蓿多肽的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及保健食品領(lǐng)域一種多肽的制備方法，特別涉及一種紫花苜蓿多肽的制 備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 綠色植物葉子是地球上最大的一種再生資源，它富含蛋白質(zhì)和各種維生素，合理 利用和開發(fā)綠色植物中的蛋白質(zhì)和其它營養(yǎng)成分是解決人類蛋白質(zhì)資源緊缺的一條重要 途徑。紫花苜蓿作為一種多年生豆科植物，在我國種植面積較廣。自古以來，苜蓿既可作為 食物入菜充饑，又可作為藥物治療疾患。紫花苜蓿富含豐富的蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)、氨基 酸組成比較齊全，國外研究表明苜蓿葉蛋白的生物價高達(dá)80%，可與牛乳和肉類相媲美。20 世紀(jì)80年代以來，美國、英國、澳大利亞和俄羅斯等國家就十分重視從各種栽培牧草中提 取纖維素、蛋白質(zhì)、莖葉等有效物質(zhì)的技術(shù)研究和產(chǎn)品開發(fā)，對苜蓿等進行多層次加工和綜 合利用，已工廠化生產(chǎn)出苜蓿纖維素、葉蛋白等產(chǎn)品，并以此為基料，用于飼料業(yè)、食品業(yè)和 醫(yī)藥業(yè)中，取得了較高的經(jīng)濟效益。
[0003] 目前苜蓿葉蛋白的提取方法大多為加熱絮凝法、酸法處理、堿法處理、酶法、發(fā)酵 法、有機溶劑法等。專利CN102351944A中采用超聲波輔助酶法提取苜蓿葉蛋白，優(yōu)化了苜 蓿葉蛋白的提取成本，對其品質(zhì)進一步精制，適合工業(yè)化生產(chǎn)。張澤生等則對苜蓿葉蛋白的 脫色和脫腥工藝進行了研究，采用無水乙醇浸提脫色、脫腥的最佳工藝條件為：液固體積質(zhì) 量比6 : 1;浸提溫度85°C;浸提時間4小時；浸提級數(shù)3級。所得葉蛋白的草腥味非常淡， 蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為57.01%(食品與生物技術(shù)學(xué)報，2006,25(4):16)。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)均是苜蓿葉蛋白，尚未見苜蓿多肽的制備方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于充分利用紫花苜蓿富含高蛋白質(zhì)的優(yōu)勢，提供一種富含營養(yǎng)功 效成分、具有生物活性的紫花苜蓿多肽的制備方法。本發(fā)明所提出的一種紫花苜蓿多肽的 制備方法包括以下步驟：
[0006] (1)紫花苜蓿葉蛋白的提?。唬?)脫色脫腥；（3)酶解；(4)噴霧干燥，即得。
[0007] 步驟（1)中所述的紫花苜蓿葉蛋白的提取方法為：
[0008] 紫花苜蓿莖葉用自來水清洗浙干后將其切成2cm?3cm小段，紫花苜蓿嫩莖葉和 水放入組織搗碎機內(nèi)打漿處理，取出后將全部汁液及紫花苜蓿殘渣移入膠體磨內(nèi)處理，期 間向膠體磨內(nèi)投入1?2倍紫花苜蓿重量的水，過濾得紫花苜蓿汁液；
[0009] 將紫花苜蓿汁液加熱，加熱溫度為75°C?85°C，優(yōu)選80°C，保溫處理lOmin得深綠 色絮狀物沉淀，靜置分離后去除上清液，將絮狀物沉淀離心處理得離心沉淀物，干燥得紫花 苜蓿葉蛋白。
[0010] 步驟⑵中所述的脫色脫腥方法為：
[0011] 紫花苜蓿葉蛋白與無水乙醇質(zhì)量比控制在1 : 5?1 : 10之間，浸提溫度85°C以 下，浸提時間6h?10h，棄去浸提液，得沉淀物。
[0012] 步驟（3)中所述的酶解方式是加入Protamex酶和FlavourzymelOOOL酶， Protamex酶的用量為苜猜蛋白重量的0· 5%。?1. 5%。，優(yōu)選為1. 0%〇，F(xiàn)lavourzymelOOOL酶 的用量為紫花苜蓿蛋白重量的1. 0%。?2. 5%。，優(yōu)選為2. 0%。。
[0013] 步驟⑷中采用的噴霧干燥條件為進風(fēng)溫度為180°C?190°C，排風(fēng)溫度為65°C? 85。。。
[0014] 本發(fā)明具有以下優(yōu)點和有益效果：
[0015] (1)多肽含量達(dá)70%?75%左右，所得產(chǎn)品呈淡白色粉末，易于溶解。
[0016] (2)所得紫花苜蓿多肽粉氣味具有淡淡的青草香味，溶解后氣味清新、有淡淡的青 草香味、無苦澀感，可直接服用。
[0017] (3)本發(fā)明操作工藝簡單，原材料易于取材且價格低廉，制備過程中反應(yīng)條件易于 控制，生產(chǎn)成本相對低廉。實驗中選用的兩種酶制劑易于獲得，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

【具體實施方式】
[0018] 下面詳細(xì)敘述本發(fā)明的實施例，需要說明的是，本實施例是敘述性的，不是限定性 的，不能以此限定本發(fā)明的保護范圍。
[0019] 實施例1
[0020] 紫花苜蓿葉蛋白的提取：取初花期紫花苜蓿（第二茬?第三茬）頂端8cm?10cm 嫩莖葉部分為加工原料，挑揀去除變黃、萎蔫、腐爛、有蟲害的葉子及其它雜質(zhì)，用自來水清 洗干凈（2次?3次）浙干后切成2cm?3cm小段，按質(zhì)量比紫花苜蓿嫩莖葉：水=1 : 2 放入組織搗碎機內(nèi)打漿處理5min，取出后將全部汁液及紫花苜蓿殘渣移入膠體磨內(nèi)，齒輪 設(shè)置最細(xì)卡度后處理l〇min，期間向膠體磨內(nèi)投入一倍紫花苜蓿重量的水，并采用200目尼 龍濾布過濾得紫花苜蓿汁液；將紫花苜蓿汁液10000ml直接加熱，加熱過程中不斷進行機 械攪拌，待溫度升至75°C時保溫處理10min得深綠色絮狀物沉淀，靜置分離后去除上清液， 將絮狀物沉淀于離心機內(nèi)以4000r/min離心處理10min得離心沉淀物，常溫條件下自然干 燥得苜蓿葉蛋白，其蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65. 22 %。
[0021] 紫花苜蓿蛋白脫色脫腥處理：將所得紫花苜蓿蛋白采用120目篩進行粉碎，在苜 蓿葉蛋白與無水乙醇質(zhì)量比為1 : 5,浸提溫度85°C下，浸提處理8h，得到的苜蓿葉蛋白顏 色淺灰白色，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為64. 15,所得產(chǎn)品仍具有較淡的草腥味。
[0022] 酶解及干燥：將脫色脫腥處理后紫花苜蓿蛋白放入酶解罐內(nèi)，酶解罐內(nèi)紫花苜蓿 蛋白與水的質(zhì)量比為1 : 1，待罐內(nèi)溫度達(dá)55°C，自然pH值條件下，加入相當(dāng)于紫花苜蓿葉 蛋白重量0. 5%。的Protamex酶（中國諾維信生物科技有限公司），同時加入相當(dāng)于紫花苜 蓿葉蛋白重量1. 0%。的FlavourzymelOOOL酶（中國諾維信生物科技有限公司），在溫度為 55°C，自然pH值條件下酶解處理3h，在10(TC高溫下滅酶60min，過濾收集酶解液。使用雙 效濃縮器將收集的酶解液濃縮至濃縮液相對密度為l.〇5g/ml，采用進風(fēng)溫度為180°C，排 風(fēng)溫度為75°C的噴霧干燥條件進行噴霧干燥，所得多肽干粉含水率< 4. 0 %，將所得干粉 進行磨粉過120目篩放入指定容器內(nèi)貯存。
[0023] 按以上工藝制得的紫花苜蓿多肽粉，經(jīng)取樣、分析測試后，多肽含量為70. 05%，且 所得產(chǎn)品呈淡白色粉末，易于溶解，溶解后氣味清新、不具有草腥味，而是淡淡的青草香味、 幾乎無苦澀感。
[0024] 實施例2
[0025] 紫花苜蓿葉蛋白的制備：取初花期紫花苜蓿（第二茬?第三茬）頂端8cm?10cm 嫩莖葉部分為加工原料，挑揀去除變黃、萎蔫、腐爛、有蟲害的葉子及其它雜質(zhì)，用自來水清 洗干凈（2次?3次）浙干后切成2cm?3cm小段，按質(zhì)量比紫花苜蓿嫩莖葉：水=1 : 2 放入組織搗碎機內(nèi)打漿處理5min，取出后將全部汁液及紫花苜蓿殘渣移入膠體磨內(nèi)，齒輪 設(shè)置最細(xì)卡度后處理l〇min，期間向膠體磨內(nèi)投入一倍紫花苜蓿重量的水，并采用200目尼 龍濾布過濾得紫花苜蓿汁液；將紫花苜蓿汁液10000ml直接加熱，加熱過程中不斷進行機 械攪拌，待溫度升至80°C時保溫處理lOmin得深綠色絮狀物沉淀，靜置分離后去除上清液， 將絮狀物沉淀于離心機內(nèi)以4000r/min離心處理lOmin得離心沉淀物，常溫條件下自然干 燥得苜蓿葉蛋白，其蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為68. 16%。
[0026] 紫花苜蓿蛋白脫色脫腥處理：將所得紫花苜蓿蛋白采用120目篩進行粉碎，在苜 蓿葉蛋白與無水乙醇質(zhì)量比為1 : 8,浸提溫度85°C下，浸提處理10h，得到的苜蓿葉蛋白顏 色淺灰白色，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為67. 13%，所得產(chǎn)品仍具有較淡的草腥味。
[0027] 酶解及干燥：將脫色脫腥處理后紫花苜蓿蛋白放入酶解罐內(nèi)，酶解罐內(nèi)紫花苜蓿 蛋白與水的質(zhì)量比為1 : 1，待罐內(nèi)溫度達(dá)55°C，自然pH值條件下，加入相當(dāng)于紫花苜蓿葉 蛋白重量2. 0%。的Protamex酶（中國諾維信生物科技有限公司），同時加入相當(dāng)于紫花苜 蓿葉蛋白重量1. 0%。的FlavourzymelOOOL酶（中國諾維信生物科技有限公司），在溫度為 55°C，自然pH值條件下酶解處理3h，在10(TC高溫下滅酶60min，過濾收集酶解液。使用雙 效濃縮器將收集的酶解液濃縮至濃縮液相對密度為1. l〇g/ml，采用進風(fēng)溫度為185°C，排 風(fēng)溫度為80°C的噴霧干燥條件進行噴霧干燥，所得多肽干粉含水率< 4. 0%，將所得干粉 進行磨粉過120目篩放入指定容器內(nèi)貯存。
[0028] 按以上工藝制得的紫花苜蓿多肽粉，經(jīng)取樣、分析測試后，多肽含量為74. 65%，且 所得產(chǎn)品呈淡白色粉末，易于溶解，溶解后氣味清新、不具有草腥味，而是淡淡的青草香味、 幾乎無苦澀感。
[0029] 實施例3
[0030] 紫花苜蓿葉蛋白的制備：取初花期紫花苜蓿（第二茬?第三茬）頂端8cm?10cm 嫩莖葉部分為加工原料，挑揀去除變黃、萎蔫、腐爛、有蟲害的葉子及其它雜質(zhì)，用自來水清 洗干凈（2次?3次）浙干后切成2cm?3cm小段，按質(zhì)量比紫花苜蓿嫩莖葉：水=1 : 2 放入組織搗碎機內(nèi)打漿處理5min，取出后將全部汁液及紫花苜蓿殘渣移入膠體磨內(nèi)，齒輪 設(shè)置最細(xì)卡度后處理l〇min，期間向膠體磨內(nèi)投入一倍紫花苜蓿重量的水，并采用200目尼 龍濾布過濾得紫花苜蓿汁液；將紫花苜蓿汁液10000ml直接加熱，加熱過程中不斷進行機 械攪拌，待溫度升至85°C時保溫處理8min得深綠色絮狀物沉淀，靜置分離后去除上清液， 將絮狀物沉淀于離心機內(nèi)以4000r/min離心處理lOmin得離心沉淀物，常溫條件下自然干 燥得苜蓿葉蛋白，其蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為66. 24%，所得產(chǎn)品仍具有較淡的草腥味。
[0031] 紫花苜蓿蛋白脫色脫腥處理：將所得紫花苜蓿蛋白采用120目篩進行粉碎，在苜 蓿葉蛋白與無水乙醇質(zhì)量比為1 : 10,浸提溫度85°c下，浸提處理6h，得到的苜蓿葉蛋白顏 色淺灰白色，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為64.68%。
[0032] 酶解及干燥：將脫色脫腥處理后紫花苜蓿蛋白放入酶解罐內(nèi)，酶解罐內(nèi)紫花苜蓿 蛋白與水的質(zhì)量比為1 : 1，待罐內(nèi)溫度達(dá)55°c，自然pH值條件下，加入相當(dāng)于紫花苜蓿葉 蛋白重量1. 5%。的Protamex酶（中國諾維信生物科技有限公司），同時加入相當(dāng)于紫花苜 蓿葉蛋白重量2. 5%。的FlavourzymelOOOL酶（中國諾維信生物科技有限公司），在溫度為 55°C，自然pH值條件下酶解處理3h，在10(TC高溫下滅酶60min，過濾收集酶解液。使用雙 效濃縮器將收集的酶解液濃縮至濃縮液相對密度為1. 15g/ml，采用進風(fēng)溫度為190°C，排 風(fēng)溫度為85°C的噴霧干燥條件進行噴霧干燥，所得多肽干粉含水率< 4. 0 %，將所得干粉 進行磨粉過120目篩放入指定容器內(nèi)貯存。
[0033] 按以上工藝制得的紫花苜蓿多肽粉，經(jīng)取樣、分析測試后，多肽含量為73. 26%，且 所得產(chǎn)品呈淡白色粉末，易于溶解，溶解后氣味清新、不具有草腥味，而是淡淡的青草香味、 幾乎無苦澀感。
[0034] 實施例4
[0035] 紫花苜蓿葉蛋白的制備：取初花期紫花苜蓿（第二茬?第三茬）頂端8cm?10cm 嫩莖葉部分為加工原料，挑揀去除變黃、萎蔫、腐爛、有蟲害的葉子及其它雜質(zhì)，用自來水清 洗干凈（2次?3次）浙干后切成2cm?3cm小段，按質(zhì)量比紫花苜蓿嫩莖葉：水=1 : 2 放入組織搗碎機內(nèi)打漿處理5min，取出后將全部汁液及紫花苜蓿殘渣移入膠體磨內(nèi)，齒輪 設(shè)置最細(xì)卡度后處理l〇min，期間向膠體磨內(nèi)投入一倍紫花苜蓿重量的水，并采用200目尼 龍濾布過濾得紫花苜蓿汁液；將紫花苜蓿汁液10000ml直接加熱，加熱過程中不斷進行機 械攪拌，待溫度升至80°C時保溫處理10min得深綠色絮狀物沉淀，靜置分離后去除上清液， 將絮狀物沉淀于離心機內(nèi)以4000r/min離心處理10min得離心沉淀物，常溫條件下自然干 燥得苜蓿葉蛋白，其提取率為68. 05 %。
[0036] 紫花苜蓿蛋白脫色脫腥處理：將所得紫花苜蓿蛋白采用120目篩進行粉碎，在苜 蓿葉蛋白與無水乙醇質(zhì)量比為1 : 6,浸提溫度85°C下，浸提處理8h，得到的苜蓿葉蛋白顏 色淺灰白色，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為66. 96%，所得產(chǎn)品仍具有較淡的草腥味。
[0037] 酶解及干燥：將脫色脫腥處理后紫花苜蓿蛋白放入酶解罐內(nèi)，酶解罐內(nèi)紫花苜蓿 蛋白與水的質(zhì)量比為1 : 1，待罐內(nèi)溫度達(dá)55°C，自然pH值條件下，加入相當(dāng)于紫花苜蓿葉 蛋白重量1. 0%。的Protamex酶（中國諾維信生物科技有限公司），同時加入相當(dāng)于紫花苜 蓿葉蛋白重量2. 0%。的FlavourzymelOOOL酶（中國諾維信生物科技有限公司），在溫度為 55°C，自然pH值條件下酶解處理3h，在10(TC高溫下滅酶60min，過濾收集酶解液。使用雙 效濃縮器將收集的酶解液濃縮至濃縮液相對密度為1. l〇g/ml，采用進風(fēng)溫度為180°C，排 風(fēng)溫度為65°C的噴霧干燥條件進行噴霧干燥，所得多肽干粉含水率< 4. 0%，將所得干粉 進行磨粉過120目篩放入指定容器內(nèi)貯存。
[0038] 按以上工藝制得的紫花苜蓿多肽粉，經(jīng)取樣、分析測試后，多肽含量為74. 06%，且 所得產(chǎn)品呈淡白色粉末，易于溶解，溶解后氣味清新、不具有草腥味，而是淡淡的青草香味、 幾乎無苦澀感。
[0039] 實施例5
[0040] 對實施例 1-4 產(chǎn)品依據(jù) GB 5009. 3、GB 5009. 4、GB/T 5009. 11、GB 5009. 12、GB/ T 5009. 17、GB4789. 2-15中規(guī)定的方法進行食品衛(wèi)生檢驗，結(jié)果顯示：水分含量< 4. 0%， 灰分< 1. 5%，無機砷（以 AS 計，mg/kg)0. 22,鉛（以 Pb 計，mg/kg)0. 62,萊（以 Hg 計，mg/ kg)彡 0.05,菌落總數(shù)（cfu/g)l.(m〇3,大腸菌群（MPN/100g) <35,霉菌（cfu/g) < 10,酵 母（cfu/g)彡10,致病菌未檢出。符合GB16740-1997保?。üδ埽┦称吠ㄓ脴?biāo)。
【權(quán)利要求】
1. 一種紫花苜蓿多肽的制備方法，包括以下步驟：（1)紫花苜蓿葉蛋白的提取；（2)脫 色脫腥；（3)酶解；(4)噴霧干燥，即得。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫花苜蓿多肽的制備方法，其特征在于，步驟（3)中所用的酶 為 Protamex 酶和 FlavourzymelOOOL 酶。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫花苜蓿多肽的制備方法，其特征在于，所述Protamex酶的 用量為苜蓿蛋白重量的〇. 5%。?1. 5%。。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的紫花苜蓿多肽的制備方法，其特征在于，所述Protamex酶的 用量為苜蓿蛋白重量的1.0%。。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫花苜蓿多肽的制備方法，其特征在于，所述 FlavourzymelOOOL酶的用量為苜蓿蛋白重量的1. 0%。?2. 5%〇。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的紫花苜蓿多肽的制備方法，其特征在于，所述 FlavourzymelOOOL酶的用量為苜蓿蛋白重量的2. 0%〇。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫花苜蓿多肽的制備方法，其特征在于，所述步驟（1)采用加 熱法，加熱溫度75°C?85°C，優(yōu)選80°C。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫花苜蓿多肽的制備方法，其特征在于，所述步驟（2)脫色脫 腥方法為，紫花苜蓿葉蛋白與無水乙醇質(zhì)量比控制在1 : 5?1 : 10之間，優(yōu)選1 : 8。
9. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的紫花苜蓿多肽的制備方法，其特征在于，浸提溫度為85°C，浸 提時間為6h?10h，優(yōu)選8h。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫花苜蓿多肽的制備方法，其特征在于，所述步驟（4)中噴 霧干燥條件為進風(fēng)溫度為180°C?190°C，排風(fēng)溫度為65°C?85°C。
【文檔編號】C12P21/06GK104195204SQ201410374398
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年7月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月30日
【發(fā)明者】林波, 于秀玲 申請人:內(nèi)蒙古天奇生物科技有限公司