一種含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)，是經(jīng)雞肉肉糜的制備、雞肉肉糜的滅菌、菌懸液的制備、混合菌液的制備、標準物質(zhì)的制備、包裝制得成品；再經(jīng)標準物質(zhì)的定值、均勻性試驗、穩(wěn)定性試驗、不確定度評估得到所述標準物質(zhì)，制得標準物質(zhì)的規(guī)格為2g/瓶，其中金黃色葡萄球菌的濃度為100~300CFU/瓶；使用前，在標準物質(zhì)中加入7mL無菌水，使其溶解即可使用。本發(fā)明所制得的含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)經(jīng)凍干脫水，使其品質(zhì)穩(wěn)定、質(zhì)量可控，可用于生物特性物質(zhì)的鑒定、評價、分析、安全監(jiān)控等，可實現(xiàn)更簡便、準確的生物特性物質(zhì)檢測。
【專利說明】一種含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明具體涉及一種含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)。

【背景技術(shù)】
[0002] 標準菌種是生物特性標準物質(zhì)中較為特殊的一類，也是生物標準物質(zhì)研究的重要 內(nèi)容之一。而目前在微生物、畜禽等相關(guān)成分標準物質(zhì)的研究上還相對空白，已研制的標準 物質(zhì)準確度不高，且很多標準物質(zhì)不能提供出不確定度的參考信息。本發(fā)明建立了一種金 黃色葡萄球菌標準菌種的制備方法，期望其能夠發(fā)揮包括鑒定、評價、分析、安全監(jiān)控等用 途，為生物特性物質(zhì)的檢測提供更簡便、準確的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)，所制得的含 雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)經(jīng)凍干脫水，使其品質(zhì)穩(wěn)定、質(zhì)量可控，可用于生物特 性物質(zhì)的鑒定、評價、分析、安全監(jiān)控等，可實現(xiàn)更簡便、準確的生物特性物質(zhì)檢測。
[0004] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)，是經(jīng)雞肉肉糜的制備、雞肉肉糜的滅菌、 菌懸液的制備、混合菌液的制備、標準物質(zhì)的制備、包裝制得成品；再經(jīng)標準物質(zhì)的定值、均 勻性試驗、穩(wěn)定性試驗、不確定度評估得到所述標準物質(zhì)。
[0005] 所述成品的制備具體包括以下步驟： 1) 雞肉肉糜的制備：將雞胸脯肉切成小塊，并挑除脂肪及筋膜等組織，用滅菌處理過 的高速組織搗碎機攪碎2min至肉糜狀；將雞肉肉糜放于均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器勻質(zhì) 3min ； 2) 雞肉肉糜的滅菌：將勻質(zhì)后的雞肉肉糜采用6°Co γ輻射滅菌，使菌落總數(shù)小于10 CFU/g，以達到基質(zhì)無菌的要求，再于-70°C下備用； 3) 菌懸液的制備：將凍干管中的標準金黃色葡萄球菌菌種用滅菌生理鹽水溶解后， 劃線接種于BP平板上，35-37°C下培養(yǎng)18-24h ;再從BP平板上挑取單個典型菌落，劃線接 種于營養(yǎng)瓊脂斜面，35-37°C下培養(yǎng)18-24h ;取菌苔劃線接種于BP平板上35-37°C下培養(yǎng) 18-24h后挑取單菌落接種到BHI肉湯中，35-37°C下培養(yǎng)18-24h，制成菌懸液； 4) 混合菌液的制備：取培養(yǎng)至對數(shù)期中后期的新鮮菌懸液，測定其0D_值，根據(jù)濃 度標準曲線估算菌液的濃度；采用梯度稀釋法，用滅菌生理鹽水將菌懸液稀釋至菌濃度為 1. 5X 104~3. 5X 104CFU/mL ;吸取lmL菌液稀釋液加入到300mL保護劑中，制備成混合菌液； 5) 標準物質(zhì)的制備：將5g滅菌后的雞肉肉糜裝入25mL的西林瓶中，每瓶加入4mL混 合菌液后，輕輕蓋上丁基膠塞，再樣品均勻碼放于凍干機的隔板層上進行凍干； 6) 包裝：凍干結(jié)束后，壓蓋密封西林瓶，加鋁蓋封口后于-20°C保存，制得所述含雞肉 基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)。
[0006] 步驟1)所述雞胸脯肉需先經(jīng)抗生素殘留檢測，不含抗生素。
[0007] 步驟2)所用6°Co γ的輻射劑量為6KGY。
[0008] 步驟3)所述保護劑是將脫脂乳、PVP、蔗糖和L-谷氨酸加水配制而成； 每100mL保護劑中脫脂乳的質(zhì)量濃度為20%、PVP的質(zhì)量濃度為8%、蔗糖的質(zhì)量濃度為 12%、L-谷氨酸的質(zhì)量濃度為1%。
[0009] 步驟4)所述濃度標準曲線是將菌懸液于35-37°C下分別培養(yǎng)14、15、16、17、18、 19h后，采用傾注法計算菌落數(shù)，并測定0D_值，再以0D_值為橫坐標，對應(yīng)菌落數(shù)的對數(shù) 值為縱坐標，繪制而成。
[0010] 步驟5)所述凍干采用美國LABC0NC0公司生產(chǎn)的FreeZone Triad冷凍干燥機；凍 干過程的參數(shù)設(shè)定如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)，其特征在于：經(jīng)雞肉肉糜的制備、雞 肉肉糜的滅菌、菌懸液的制備、混合菌液的制備、標準物質(zhì)的制備、包裝制得成品；再經(jīng)標準 物質(zhì)的定值、均勻性試驗、穩(wěn)定性試驗、不確定度評估得到所述標準物質(zhì)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)，其特征在于：所述成 品的制備具體包括以下步驟： 1) 雞肉肉糜的制備：將雞胸脯肉切成小塊，并挑除脂肪及筋膜，用滅菌處理過的高速組 織搗碎機攪碎2min至肉糜狀；將雞肉肉糜放于均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器勻質(zhì)3min ; 2) 雞肉肉糜的滅菌：將勻質(zhì)后的雞肉肉糜采用6°Co γ輻射滅菌，使菌落總數(shù)小于10 CFU/g，再于-70°C下備用； 3) 菌懸液的制備：將凍干管中的標準金黃色葡萄球菌菌種用滅菌生理鹽水溶解后， 劃線接種于BP平板上，35-37°C下培養(yǎng)18-24h ;再從BP平板上挑取單個典型菌落，劃線接 種于營養(yǎng)瓊脂斜面，35-37°C下培養(yǎng)18-24h ;取菌苔劃線接種于BP平板上35-37°C下培養(yǎng) 18-24h后挑取單菌落接種到BHI肉湯中，35-37°C下培養(yǎng)18-24h，制成菌懸液； 4) 混合菌液的制備：取培養(yǎng)至對數(shù)期中后期的新鮮菌懸液，測定其OD_值，根據(jù)濃 度標準曲線估算菌液的濃度；采用梯度稀釋法，用滅菌生理鹽水將菌懸液稀釋至菌濃度為 1. 5X 104~3. 5X 104CFU/mL ;吸取lmL菌液稀釋液加入到300mL保護劑中，制備成混合菌液； 5) 標準物質(zhì)的制備：將5g滅菌后的雞肉肉糜裝入25mL的西林瓶中，每瓶加入4mL混 合菌液后，輕輕蓋上丁基膠塞，再樣品均勻碼放于凍干機的隔板層上進行凍干； 6) 包裝：凍干結(jié)束后，壓蓋密封西林瓶，加錯蓋封口后于_20°C保存制得成品。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)，其特征在于：步驟1) 所述雞胸脯肉需先經(jīng)抗生素殘留檢測，不含抗生素。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)，其特征在于：步驟2) 所用6°Co Y的輻射劑量為6KGY。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)，其特征在于：步驟3) 所述保護劑是將脫脂乳、PVP、蔗糖和L-谷氨酸加水配制而成； 每100mL保護劑中脫脂乳的質(zhì)量濃度為20%、PVP的質(zhì)量濃度為8%、蔗糖的質(zhì)量濃度為 12%、L-谷氨酸的質(zhì)量濃度為1%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)，其特征在于：步驟4) 所述濃度標準曲線是將菌懸液于35-37°C下分別培養(yǎng)14、15、16、17、18、19h后，采用傾注法 計算菌落數(shù)，并測定〇D 6(?值，再以0D_值為橫坐標，對應(yīng)菌落數(shù)的對數(shù)值為縱坐標，繪制而 成。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)，其特征在于：步驟5) 所述凍干采用美國LABC0NC0公司生產(chǎn)的FreeZone Triad冷凍干燥機。
8. 根據(jù)權(quán)利要求2所述含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)，其特征在于：所制得 的含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)的規(guī)格為2g/瓶；其中金黃色葡萄球菌的濃度為 100?300 CFU/瓶。
9. 一種如權(quán)利要求1所述含雞肉基質(zhì)的金黃色葡萄球菌標準物質(zhì)的應(yīng)用，其特征在 于：使用前，在標準物質(zhì)中加入7mL無菌水，使其溶解。
【文檔編號】C12Q1/14GK104140994SQ201410385542
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2014年8月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月7日
【發(fā)明者】鄭晶, 柯璐, 陳彬, 林杰, 彭華毅 申請人:福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心