一種屎腸球菌ef08及包含它的飼料添加物和飼料的制作方法
【專利摘要】本申請(qǐng)公開了一種屎腸球菌EF08及包含它的飼料添加物和飼料。屎腸球菌EF08，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)是：CGMCC?No.5549。本申請(qǐng)之飼料添加物憑借平衡腸道環(huán)境之菌相平衡，可降低腸道內(nèi)之有害菌過度消耗飼料，進(jìn)而提升經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之飼料轉(zhuǎn)換率，使經(jīng)濟(jì)動(dòng)物所攝取之飼料可以有效轉(zhuǎn)換為具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值之初級(jí)畜產(chǎn)品，進(jìn)而能夠達(dá)到提升經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之經(jīng)濟(jì)價(jià)值的功效。
【專利說明】-種屎腸球菌EF08及包含它的飼料添加物和飼料

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本申請(qǐng)涉及一種屎腸球菌EF08及包含它的飼料添加物和飼料。

【背景技術(shù)】
[0002] 陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物系包含家畜及家禽，如豬、牛、羊、鹿、雞、鴨、鵝等，該陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物 系可以生產(chǎn)肉、乳、蛋、皮毛等初級(jí)畜產(chǎn)品，并且經(jīng)由烹飪加工，而成為食品或商品，衍生不 同之經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，在上述陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之飼育過程中，常會(huì)于飼料中同時(shí)混參低劑量 抗生素，因?yàn)榈蛣┝靠股乜梢詺⑺老啦糠治⑸铮档拖纼?nèi)微生物數(shù)量，從而減 少微生物對(duì)飼料的利用損耗，進(jìn)而可以使陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物可以產(chǎn)出較多初級(jí)畜產(chǎn)品，提升陸 生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
[0004] 但抗生素之大量及不當(dāng)使用，可能會(huì)導(dǎo)致抗生素殘留于陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物體內(nèi)，而影 響消費(fèi)者之健康，還可能會(huì)造成環(huán)境或陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物消化道中出現(xiàn)抗藥性菌株，因此，歐盟 已于2006年全面禁止此類低劑量抗生素之應(yīng)用。
[0005] 因此，確實(shí)有需要提供一種飼料添加物，以取代少量抗生素之混參，進(jìn)而改善混參 少量抗生素所導(dǎo)致的各種問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本申請(qǐng)要解決的技術(shù)問題在于提供一種屎腸球菌EF08及包含它的飼料添加物和 飼料。
[0007] 為解決上述技術(shù)問題，本申請(qǐng)的技術(shù)方案是：
[0008] -種屎腸球菌EF08,保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保 藏號(hào)是：CGMCC No. 5549。 屎腸球菌EF08的保藏單位地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生 物研究所，保藏日期是2011年12月8日。
[0009] 申請(qǐng)人:經(jīng)驗(yàn)經(jīng)發(fā)現(xiàn)：上述屎腸球菌EF08可以改善陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物消化道菌相，以提 升陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之免疫系統(tǒng)狀態(tài)。屎腸球菌EF08的分類命名為Enterococcus faecium。
[0010] 上述屎腸球菌EF08,的16S rDNA序列為：
[0011] ctttttcaic cggagettge tceaecggaa mngrmgngt ggegaacggg tgagtaacac 60 gtgggtamx aagg細(xì)ttaa (:aggfgct>ia tar.cgtatai.! 120 caatcgiuiac cgcatggttt tgafttgiiaa- ggcgc'tttcg ggtgtcgctg atggatggac 1H0 ccgcggtgca ttagctagtt ggtgaggt.aac^etea《x，aHggccaeg>it gcatagccga 240 cctgagaggg tgatcgguca eHtt.gggm:t gHgucmiggc ccnaocfcct acgggaggca 300 guagtaggga Htxtteggcn atggacgmui MtctgjiccgH gcn<icgccgc gtgngtgn<)g 360 aaggttttug gatxgtaaaa etetgttgt.t agaga邱am.: aaggHtgaga gtamjtgttc: ..120 atcccttgac ggtatctaac cngmmgccn cggctB-acta cgtgccagca gccgcggtaa -180 tacgtaggtg gcaHgcgttg tccggattta ttgggegtaa agegagcgea ggeggtttct 540 taagtctgat gtgaaagccc ccggctcaac cggggagggt cattggaaac tgggagactt 600 gagtgcagaa gaggagagtg gaattceatg tgtageggtg aaatgcgtag atatatggag 660 gaacaccagt ggcgaaggcg gctctctggt ctgtaactga cgctgaggct cgaaagcgtg 720 gggtigcmmc aggattagat accctggtag tecacgcegt aaacgatgag tgetaagtgt 780 tggagggttt ccgcccttca gtgctgcagc taacgcatta agcactccgc ctggggagta 840 cgnccgcaag gttgfisactc naaggaattg aegggggece gcaciiagcgg tggagcatgt 900 ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt aecaggtett gacatccttt gaccactcta 960 gagatagagc ttccccttcg ggggcaaagt gacaggtggt gcatggttgt cgtcagcteg 1020 tgtcgtgaga tgttgggtts agtcecgcaa cgagcgcaae ccttattgtt agttgccatc 1080 atttagttgg gciictctiigc aagiietgceg gtgHCiiiiiice ggBggiitiggt ggggatgacg 1140 teaaatcatc atgececttH tgHc.etggge tHencHegtg ctHCHHtggg iuigtacaficg 1200 agttgcgaag tcgcgaggct aagctaatct cttaaagctt ctctcagttc ggattgcagg 1260 ctgcaactcg cctgcatgaa gccggaatcg ctagtaatcg cggatcage^i cgccgcggtg 1320 aatacgttcc cgggcettgt acaeacegec egteaeaeea egagag 1366〇
[0012] 一種飼料添加物，包含上述屎腸球菌EF08。
[0013] 上述飼料添加物可以提升經(jīng)濟(jì)動(dòng)物獲取營養(yǎng)的能力，動(dòng)物使體內(nèi)營養(yǎng)有效轉(zhuǎn)化為 初級(jí)畜產(chǎn)品產(chǎn)出所需，進(jìn)而提升陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之經(jīng)濟(jì)價(jià)值者。
[0014] 每克飼料添加物優(yōu)選包含108?1012CFU之上述屎腸球菌EF08。這樣可進(jìn)一步提升 經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的免疫及抗病能力。進(jìn)一步優(yōu)選，每克飼料添加物包含l〇 1(lCFU的屎腸球菌EF08。
[0015] 上述飼料添加物，還包含由植物乳桿菌LP28與嗜酸乳桿菌LASW所組成之群組， 植物乳桿菌LP28寄存于中國普通微生物保藏管理中心，其寄存編號(hào)為CGMCC No. 3346 ;嗜 酸乳桿菌LASW寄存于中國典型型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC N0:M204083。這樣可進(jìn) 一步提高飼料轉(zhuǎn)換率。
[0016] 上述飼料添加物，優(yōu)選，每克飼料添加物系包含108?1012CFU的植物乳桿菌LP28 和10 8?10nCFU的嗜酸乳桿菌LASW，其中，植物乳桿菌與嗜酸乳桿菌LASW的用量比為 (1:1)-(10:1)。這樣可更進(jìn)一步提高飼料轉(zhuǎn)換率。進(jìn)一步優(yōu)選，每克飼料添加物系包含 10 1(ICFU的植物乳桿菌LP28和109CFU的嗜酸乳桿菌LASW。
[0017] 一種包含上述飼料添加物的飼料，優(yōu)選，每克飼料包含104?108CFU的屎腸球菌 ER)8。這樣可更進(jìn)一步提升動(dòng)物免疫及抗病能力。進(jìn)一步優(yōu)選每克飼料包含106CFU的屎 腸球菌EF08。
[0018] 上述屎腸球菌EF08的用途，系用以促進(jìn)IL-10、TNF-a、IL-12p40和IFN-γ細(xì)胞 激素的分泌，抑制IL-4之分泌。
[0019] 上述屎腸球菌EF08的用途，系用以抑制有害菌之生長，優(yōu)選抑制大腸桿菌和腸道 沙門氏菌之生長。
[0020] 上述飼料優(yōu)選為陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物所用飼料。
[0021] 申請(qǐng)人:經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)：本申請(qǐng)之屎腸球菌EF08系能夠耐受胃酸及膽鹽，完整通過胃 部，長時(shí)間存活于腸道之中，并可以吸附于腸道上皮細(xì)胞，同時(shí)分泌并釋放乳酸鹽，降低腸 道環(huán)境pH值，并藉由其良好抑菌效力，以抑制腸道之有害菌之生長，以促使腸道環(huán)境達(dá)到 菌相平衡，且能促進(jìn)IL-10、TNF- a、IL-12p40及IFN- γ等細(xì)胞激素的分泌，進(jìn)而達(dá)到提升 經(jīng)濟(jì)動(dòng)物免疫及抗病能力之功效，因此，該屎腸球菌EF08系可以單獨(dú)或混合其他成份，以 形成一飼料添加物，混參于陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之飼料中，以供給陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，從而有效提升該 陸生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之免疫及抗病能力。
[0022] 本申請(qǐng)飼料添加物可以為藥劑或其它等各種形式。
[0023] 本申請(qǐng)未特別說明的技術(shù)均可參照現(xiàn)有技術(shù)。
[0024] 本申請(qǐng)之飼料添加物憑借平衡腸道環(huán)境之菌相平衡，可降低腸道內(nèi)之有害菌過度 消耗飼料，進(jìn)而提升經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之飼料轉(zhuǎn)換率，使經(jīng)濟(jì)動(dòng)物所攝取之飼料可以有效轉(zhuǎn)換為具 有經(jīng)濟(jì)價(jià)值之初級(jí)畜產(chǎn)品，進(jìn)而能夠達(dá)到提升經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之經(jīng)濟(jì)價(jià)值的功效，同時(shí)有效提升 經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之免疫及抗病能力。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0025] 圖1系本申請(qǐng)屎腸球菌EF08之耐酸性試驗(yàn)測(cè)試結(jié)果。
[0026] 圖2系本申請(qǐng)屎腸球菌EF08之耐膽鹽試驗(yàn)測(cè)試結(jié)果。
[0027] 圖3系本申請(qǐng)屎腸球菌EF08之抑菌效力測(cè)試結(jié)果。
[0028] 圖4a系本申請(qǐng)屎腸球菌EF08之促進(jìn)IL-10分泌活性。
[0029] 圖4b系本申請(qǐng)屎腸球菌EF08之促進(jìn)TNF- α分泌活性。
[0030] 圖4c系本申請(qǐng)屎腸球菌EF08之促進(jìn)IL-12p40分泌活性。
[0031] 圖4d系本申請(qǐng)屎腸球菌EF08之促進(jìn)IFN- γ分泌活性。
[0032] 圖5系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼離乳仔豬，對(duì)離乳仔豬糞便中之 氨含量影響結(jié)果。
[0033] 圖6系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼離乳仔豬，對(duì)離乳仔豬糞便中之 pH值影響結(jié)果。
[0034] 圖7a系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼離乳仔豬，對(duì)離乳仔豬糞便中 之乳酸菌菌群影響結(jié)果。
[0035] 圖7b系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼離乳仔豬，對(duì)離乳仔豬糞便中 之大腸桿菌菌群影響結(jié)果。
[0036] 圖7c系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼離乳仔豬，對(duì)離乳仔豬糞便中 之菌相比例影響結(jié)果。
[0037] 圖8系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼離乳仔豬，對(duì)離乳仔豬體內(nèi)免疫 球蛋白A影響結(jié)果。
[0038] 圖9a系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼懷孕及哺乳母豬，對(duì)產(chǎn)出之仔 豬糞便中的乳酸菌菌群影響結(jié)果。
[0039] 圖9b系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼懷孕及哺乳母豬，對(duì)產(chǎn)出之仔 豬糞便中的大腸桿菌菌群影響結(jié)果。
[0040] 圖9c系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼懷孕及哺乳母豬，對(duì)產(chǎn)出之仔 豬糞便中的菌相比例影響結(jié)果。
[0041] 圖10系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼懷孕及哺乳母豬，對(duì)產(chǎn)出之仔 豬體內(nèi)免疫球蛋白A影響結(jié)果。
[0042] 圖11a系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼蛋雞，對(duì)產(chǎn)蛋前期蛋雞之產(chǎn)蛋 率影響結(jié)果。
[0043] 圖lib系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼蛋雞，對(duì)產(chǎn)蛋前期蛋雞之平均 日產(chǎn)蛋量影響結(jié)果。
[0044] 圖12a系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼蛋雞，對(duì)產(chǎn)蛋高峰期蛋雞之產(chǎn) 蛋率影響結(jié)果。
[0045] 圖12b系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼蛋雞，對(duì)產(chǎn)蛋高峰期蛋雞之平 均日產(chǎn)蛋量影響結(jié)果。
[0046] 圖13a系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼蛋雞，對(duì)產(chǎn)蛋下降期蛋雞之產(chǎn) 蛋率影響結(jié)果。
[0047] 圖13b系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼蛋雞，對(duì)產(chǎn)蛋下降期蛋雞之平 均日產(chǎn)蛋量影響結(jié)果。
[0048] 圖14系以混參本申請(qǐng)飼料添加物之市售飼料喂飼蛋雞，對(duì)蛋雞之ND抗體衰退程 度影響結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0049] 為讓本申請(qǐng)之上述及其他目的、特征及優(yōu)點(diǎn)能更明顯易懂，下文特舉本申請(qǐng)之較 佳實(shí)施例，并配合所附圖式，作詳細(xì)說明如下：
[0050] 本申請(qǐng)之屎腸球菌EF08 (Enterococcus faecium)，系自健康成人糞便中選殖獲 得；該屎腸球菌EF08系具有降低腸道pH值、改善腸道菌相及促進(jìn)周邊血液細(xì)胞分泌多種細(xì) 胞激素之能力。
[0051] 本申請(qǐng)之屎腸球菌EF08系經(jīng)由順序相接的以下各步驟處理而獲得，A、培養(yǎng)步驟； B、鑒定步驟；C、保存步驟，各步驟具體如下：
[0052] A、培養(yǎng)步驟：該培養(yǎng)步驟系分離健康成人糞便所含有之乳酸菌進(jìn)行培養(yǎng)；
[0053] 具體為取樣自一健康成人糞便，將所取樣置于一培養(yǎng)液進(jìn)行增殖培養(yǎng) (enrichment culture)，待適當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間后將該培養(yǎng)液進(jìn)行序列稀釋，另接種至一培養(yǎng)基 以挑選可生長之菌株；
[0054] 上述增殖培養(yǎng)具體系將所取樣以1:50之體積比例接種于一 MRS液態(tài)培養(yǎng)基（配 方系如表1所記載），以37°C培養(yǎng)20小時(shí)而獲得一增殖培養(yǎng)菌液，再以序列稀釋該增殖培 養(yǎng)菌液，將稀釋后之增殖培養(yǎng)菌液以涂抹法接種于MRS固態(tài)培養(yǎng)基（系于上述MRS液態(tài)培 養(yǎng)基中另添加質(zhì)量用量為MRS液態(tài)培養(yǎng)基質(zhì)量的1. 5%的瓊脂），挑選可生長之菌株；上述 1:5指取樣體積：MRS液態(tài)培養(yǎng)基體積=1:50 ;
[0055] 表1、MRS液態(tài)培養(yǎng)基配方（1L)
[0056]

【權(quán)利要求】
1. 一種屎腸球菌EF08,其特征在于：保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生 物中心，保藏號(hào)是：CGMCC No. 5549。
2. 如權(quán)利要求1所述的屎腸球菌EF08,其特征在于：其16S ri)NA序列為： ctttttecae cggagcttgc ?ccjiccggmi mmgmigagt ggegaacggg tgagtaacac 60 gtgggtaacc t.gce(.:atc.:a.g 機(jī)ggggat冊(cè) cact.t.gg掛m eaggt.g(.:t· tnccgtataa 120 enatcgaaac cgcatggttt. tgatttgaaa ggcgctttcg ggtgt.cget.g at.ggat.ggac 180 ccgcggtgca ttagctagtt ggtgaggtaa cggc^tracu：H ogg(U：acgat gcatagccga. 2.1() cctgiigaggg tgfitcggccn eHttgggact gagacncgge cemiaetcct acgggaggca 300 gcagtaggga atcttcggca atggacgaaii gtctgiicegii gcmicgccgc gtgHgtrgaag 360 aHggttttcg gatcgt-H<iaa etetgtt.gtt Hgag<iHg<-mc H<iggHtgaga gtmictgtt.c ?20 ateccttgac ggtatctaac eagfiaageea cggctaaeta cgtgceagca gcegcggtaa. 480 tacgtuggt.g gcmigcgttg tecggattfii ttgggcgtm-ι agcgagcgca ggcggtttct 540 taagtctgat gtgmmgcce eeggetoiac cggggagggt eattggHaac tgggagactt 600 gagtgcuig?u-i gaggagagtg gaattceatg tgtngeggtg aaatgcgtag atatatggag 660 gaacaccagt ggcgaaggcg gctctctggt ctgtaactga cgctgaggct cgaaagcgtg 720 gggagcaaac aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgag tgctaagtgt 780 tggagggttt ccgcccttca gtgctgeagc taacgeatta iigeactecgc etggggagta 840 cgaccgcaag gttgeaactc aaaggaattg acgggggccc gcecaagcgg tggegcatgt 900 ggtttfcuittc gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatccttt gaccactcta 960 gagatagagc ttccccttcg ggggcaaagt gacaggtggt gcatggttgt cgtcagrtcg 1020 tgtcgtgaga tgttgggtta HgtcecgciMJ cgagcgcaae ccttattgtt agttgccatc 1080 atttagttgg gcactctage aagactgccg gtgacaaace ggaggaaggt ggggatgaeg 1140 tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc tscacscgtg etacastggg aagtacaacg 1200 agttgcgaag tcgcgaggct aagctairtct cttaaagctt ctctcsgttc ggattgcagg 1260 ctgcaactcg cctgcatgaa gccggaatcg ctagtaatcg cggatcagca cgccgcggtg 1320 aatacgttcc cgggcettgt iicacacegcx cgixaeaeca cgagiig 1366〇
3. -種飼料添加物，其特征在于：包含權(quán)利要求1或2所述的屎腸球菌EF08。
4. 如權(quán)利要求3所述的飼料添加物，其特征在于：每克飼料添加物包含108?1012CFU 的權(quán)利要求1或2所述的屎腸球菌EF08。
5. 如權(quán)利要求3-4任意一項(xiàng)所述的飼料添加物，其特征在于：還包含由植物乳桿菌 LP28與嗜酸乳桿菌LASW所組成之群組，植物乳桿菌LP28寄存于中國普通微生物保藏管理 中心，保藏號(hào)是為CGMCC No. 3346 ;嗜酸乳桿菌LASW寄存于中國典型型培養(yǎng)物保藏中心，保 藏號(hào)為 CCTCC N0:M204083。
6. 如權(quán)利要求5所述的飼料添加物，其特征在于：每克飼料添加物還包含108? 1012CFU的植物乳桿菌LP28和10 8?10nCFU的嗜酸乳桿菌LASW，其中，植物乳桿菌LP28與 嗜酸乳桿菌LASW的用量比為（1:1)-(10:1)。
7. 如權(quán)利要求6所述的飼料添加物，其特征在于：每克飼料添加物系包含101(ICFU的 權(quán)利要求1或2所述的屎腸球菌EF08、10 1(ICFU的植物乳桿菌LP28和109CFU的嗜酸乳桿菌 LASW。
8. -種包含權(quán)利要求3-7任意一項(xiàng)所述的飼料添加物的飼料，其特征在于：每克飼料 包含10 4?108CFU的權(quán)利要求1或2所述的屎腸球菌EF08。
9. 如權(quán)利要求1或2所述的屎腸球菌EF08的用途，其特征在于：系用以促進(jìn)IL-10、 TNF- a、IL-12p40和IFN- γ細(xì)胞激素的分泌，抑制IL-4之分泌。
10. 如權(quán)利要求1或2所述的屎腸球菌EF08的用途，其特征在于：系用以抑制大腸桿 菌和腸道沙門氏菌之生長。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK104195075SQ201410401691
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年8月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月14日
【發(fā)明者】李庭羽, 王志軒, 林金生, 余碧, 徐添根, 楊連傳 申請(qǐng)人:生合生物科技股份有限公司