生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素在制備抗hiv功能食品中的應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素在制備抗HIV功能食品中的應(yīng)用，實(shí)驗(yàn)證明生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素對(duì)HIV-1病毒有較高的抑制活性，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素的血液代謝產(chǎn)物對(duì)HIV-1病毒感染細(xì)胞有明顯的抑制作用，生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素能夠抗1型人類(lèi)免疫缺陷病毒。
【專(zhuān)利說(shuō)明】生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素在制備抗HIV功能食品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 我們?nèi)祟?lèi)的身體由上萬(wàn)億個(gè)細(xì)胞組成，這些細(xì)胞是人體結(jié)構(gòu)的基本功能單位，細(xì) 胞的健康是在核酸的調(diào)控下，依靠蛋白質(zhì)、多種氨基酸、多肽、多糖、多種微量元素、礦物質(zhì) 等帶有生物活性的物質(zhì)以維持細(xì)胞的正常代謝。細(xì)胞有特定的職責(zé)，協(xié)同工作，保持著我們 的身體健康。身體內(nèi)的每個(gè)組織由細(xì)胞構(gòu)成，而相關(guān)細(xì)胞組織集群便構(gòu)成了人體的器官。雖 然這些器官由功能不同的細(xì)胞構(gòu)成，但是，它們需要同樣的基本營(yíng)養(yǎng)成分，這便是支撐細(xì)胞 代謝的基礎(chǔ)物質(zhì)。細(xì)胞是有壽命的，理論上說(shuō)，如果為細(xì)胞提供合適的、足夠的基本營(yíng)養(yǎng)成 分，淘汰凋亡的細(xì)胞，精確復(fù)制已經(jīng)存在的健康的細(xì)胞，提高人體對(duì)于疾病的自愈能力，我 們?nèi)祟?lèi)可延緩衰老，保持健康。
[0003] 人體對(duì)于疾病的自愈能力，即是人類(lèi)依靠自身的內(nèi)在生命力，依靠免疫系統(tǒng)、神經(jīng) 系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)為主的修復(fù)機(jī)制，修復(fù)受損的細(xì)胞、擺脫疾病與亞健康狀態(tài)的一種保持 身體健康的能力。當(dāng)人體的自愈力下降時(shí)，是因?yàn)槟承┤梭w器官組織系統(tǒng)缺少足夠的營(yíng)養(yǎng) 因子，細(xì)胞不能正常地代謝，不能完全正確地復(fù)制健康細(xì)胞和液化凋亡的細(xì)胞。由于細(xì)胞的 不正確的復(fù)制，使得細(xì)胞的正常功能打了折扣，身體的自我修復(fù)能力減低，這直接影響了人 體對(duì)于疾病的抵抗能力，一旦遭遇外界不良因素，人體就會(huì)生病。
[0004] 艾滋病是一種危害性極大的傳染病，由感染人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV)引起。它是 一種感染人類(lèi)免疫系統(tǒng)細(xì)胞的慢病毒，屬于反轉(zhuǎn)錄病毒的一種。該病毒破壞人體的免疫能 力，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)失去抵抗力，從而導(dǎo)致各種疾病及癌癥得以在人體內(nèi)生存，發(fā)展到最后， 導(dǎo)致艾滋病。至今尚未研制出根治艾滋病的特效藥物，也還沒(méi)有可用于預(yù)防的有效疫苗。艾 滋病已被我國(guó)列入乙類(lèi)法定傳染病，并被列為國(guó)境衛(wèi)生監(jiān)測(cè)傳染病之一。目前臨床上治療 本病強(qiáng)調(diào)綜合療法，包括：一般治療、抗病毒治療、恢復(fù)或改善免疫功能的治療及機(jī)會(huì)性感 染和惡性腫瘤的治療。其中抗病毒治療是艾滋病治療的關(guān)鍵，通過(guò)降低病毒載量，維持和重 建免疫功能，從而提高生活質(zhì)量，降低HIV相關(guān)的發(fā)病率和死亡率。因此，開(kāi)發(fā)有效抗HIV 病毒感染的功能性食品是科研工作者的重要任務(wù)。目前尚未發(fā)現(xiàn)報(bào)道能有效抗HIV病毒感 染的功能性食品，與治療藥物相比，功能性食品能夠提高患者的順應(yīng)性，降低使用痛苦，使 治療過(guò)程無(wú)負(fù)擔(dān)、治療效果無(wú)副作用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素在制備抗 HIV功能食品中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：
[0007] 生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素在制備抗HIV功能食品中的應(yīng)用。
[0008] 生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素是用下述方法制成：
[0009]( -）母液的制備：
[0010] (1)選取谷類(lèi)為原料，清洗分離雜質(zhì)后，置于紙漿蒸煮機(jī)中加入原料總重量 30 %?50 %的水，啟動(dòng)紙漿蒸煮機(jī)，旋轉(zhuǎn)浸泡30?60分鐘；
[0011] ⑵停止旋轉(zhuǎn)，將水放凈，打開(kāi)冷氣機(jī)，通入冷氣，旋轉(zhuǎn)保持_4°C以下60?90分 鐘，停止旋轉(zhuǎn)；
[0012] (3)關(guān)閉冷氣機(jī)，打開(kāi)空壓機(jī)，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，升溫至室溫；
[0013] (4)關(guān)閉空壓機(jī)，停止旋轉(zhuǎn)，通入蒸汽，旋轉(zhuǎn)，保持KKTC，30?60分鐘，關(guān)閉蒸汽；
[0014] (5)停止旋轉(zhuǎn)，打開(kāi)空壓機(jī)，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，降至30°C?50°C ;
[0015] (6)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量1 %?3%的營(yíng)養(yǎng)配料粉，旋轉(zhuǎn)30?60分鐘；所述 營(yíng)養(yǎng)配料為重量比為1:2:3:1的靈芝、枸杞、藍(lán)莓果和肉桂；
[0016] (7)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量0. 2%?0. 4%的復(fù)合酶，旋轉(zhuǎn)1?2小時(shí)；
[0017] (8)加入原料總重量0.2%?1%食用菌種，旋轉(zhuǎn)使均勻；停止旋轉(zhuǎn)，分裝至發(fā)酵 桶，在28?35°C發(fā)酵8?15天，即得母液備用；
[0018] (二）膠料的制備：
[0019] (1)另取谷類(lèi)為第二原料，用18?30°C水浸泡8?16小時(shí)；浙水，置于容器內(nèi)；
[0020] (2)向容器內(nèi)加入第二原料重量1?2倍的水，煮1?3小時(shí)；
[0021] (3)過(guò)濾，去除水，獲得膠料備用；
[0022] (三）成品的制備：
[0023] (1)將母液與膠料按重量比為1 :1?2的比例，混合，分離除漁，得混合液；
[0024] (2)加入混合液重量1 %?2%的低聚異麥芽糖，混合液重量0. 2%?0. 7%的黃原 膠，混合液重量〇?1%的阿膠，均質(zhì)；灌裝滅菌，得生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素。
[0025] 原料優(yōu)選為黑糯米、黃糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米 中的至少五種。
[0026] 述第二原料優(yōu)選為黑糯米、黃糯米和白糯米至少一種。
[0027] 復(fù)合酶優(yōu)選為質(zhì)量比為3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纖維素酶和果膠酶。
[0028] 食用菌種優(yōu)選為面包酵母，甜酒曲酵母、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和保加利亞乳桿 菌至少兩種。
[0029] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0030] 實(shí)驗(yàn)證明，生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素對(duì)細(xì)胞有較低的毒性，且對(duì)HIV-1病毒有較高的 抑制活性。生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素的血液代謝產(chǎn)物對(duì)HIV-1病毒感染細(xì)胞有明顯的抑制作 用，生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素能夠抗1型人類(lèi)免疫缺陷病毒。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 本發(fā)明的實(shí)施例是為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好的理解本發(fā)明，但并不對(duì)本 發(fā)明作任何限制。
[0032] 本發(fā)明所采用的各個(gè)食用酵母菌均購(gòu)自安琪酵母股份有限公司（但并不對(duì)本發(fā) 明作任何限制，其它公司生產(chǎn)的功能相同的食用酵母菌也可以用于本發(fā)明）；各個(gè)乳桿菌 購(gòu)自丹麥漢森公司（但并不對(duì)本發(fā)明作任何限制，其它公司生產(chǎn)的功能相同的乳桿菌也可 以用于本發(fā)明）。
[0033] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0034] 實(shí)施例1
[0035] 生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素用下述方法制成：
[0036](一）母液的制備：
[0037] (1)選取重量比例為1:1:1:2:2的黑糯米、黃糯米、紫米、黍米和大米五種谷物為 原料，清洗分離雜質(zhì)后，置于紙漿蒸煮機(jī)中加入原料總重量30 %的水，啟動(dòng)紙漿蒸煮機(jī)，旋 轉(zhuǎn)浸泡30分鐘；浸泡的目的是使原料充分吸收水份；
[0038] (2)停止旋轉(zhuǎn)，將水放凈，打開(kāi)冷氣機(jī)，通人冷氣，旋轉(zhuǎn)保持_4°C以下60分鐘，停止 旋轉(zhuǎn)；放冷的目的是使吸水后的原料膨脹；
[0039] (3)關(guān)閉冷氣機(jī)，打開(kāi)空壓機(jī)，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，升溫至室溫；提前預(yù)熱的目的 是為了下一步通蒸汽之前的溫度升高而節(jié)省能源；
[0040] (4)關(guān)閉空壓機(jī)，停止旋轉(zhuǎn)，通入蒸汽，旋轉(zhuǎn)，保持l〇〇°C，60分鐘，關(guān)閉蒸汽；其目 的是熟化并消毒；
[0041] (5)停止旋轉(zhuǎn)，打開(kāi)空壓機(jī)，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，降至30°C ;其目的為后續(xù)加入營(yíng) 養(yǎng)配料、復(fù)合酶及菌種提供合適的溫度；
[0042] (6)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量2%的營(yíng)養(yǎng)配料粉，旋轉(zhuǎn)30分鐘；所述營(yíng)養(yǎng)配料為 重量比為1:2:3:1的靈芝、枸杞、藍(lán)莓果和肉桂；
[0043] (7)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量0. 2%的復(fù)合酶，旋轉(zhuǎn)1小時(shí)；復(fù)合酶是質(zhì)量比為 3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纖維素酶和果膠酶；
[0044] (8)加入原料總重量0.2%食用菌種，旋轉(zhuǎn)使均勻；停止旋轉(zhuǎn)，分裝至發(fā)酵桶，在 28°C發(fā)酵15天，即得母液備用；食用菌種為重量比為3:1的面包酵母菌和保加利亞乳桿 菌；
[0045] (二）膠料的制備：
[0046] (1)另取重量比為1:1的黃糯米和白糯米為第二原料，用18°C水浸泡16小時(shí)；浙 水，將浙水后的米置于容器內(nèi)；
[0047] (2)向容器內(nèi)加入第二原料重量1倍的水，煮1小時(shí)；
[0048] (3)過(guò)濾，去除水，獲得膠料備用；
[0049] (三）成品的制備：
[0050] (1)將母液與膠料按重量比為1 :1的比例，混合，分離除漁，得混合液；
[0051] ⑵加入混合液重量1 %的低聚異麥芽糖，混合液重量0. 2 %的黃原膠，均質(zhì)；灌裝 滅菌，得生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素。
[0052] 本實(shí)施例中的旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速均為15轉(zhuǎn)/分鐘。
[0053] 實(shí)施例2
[0054] 生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素用下述方法制成：
[0055] (一）母液的制備：
[0056] (1)選取重量比為1:1:2:1:1:2:1的黑糯米、紫米、黍米、白糯米、粟米、高粱米和 大米七種谷物為原料，清洗分離雜質(zhì)后，置于紙漿蒸煮機(jī)中加入原料總重量40%的水，啟動(dòng) 紙漿蒸煮機(jī)，旋轉(zhuǎn)浸泡40分鐘；
[0057] (2)停止旋轉(zhuǎn)，將水放凈，打開(kāi)冷氣機(jī)，通人冷氣，旋轉(zhuǎn)保持-4°C以下80分鐘，停止 旋轉(zhuǎn)；
[0058] (3)關(guān)閉冷氣機(jī)，打開(kāi)空壓機(jī)，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，升溫至室溫；
[0059] (4)關(guān)閉空壓機(jī)，停止旋轉(zhuǎn)，通入蒸汽，旋轉(zhuǎn)，保持KKTC，50分鐘，關(guān)閉蒸汽；
[0060] (5)停止旋轉(zhuǎn)，打開(kāi)空壓機(jī)，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，降至40°C ;
[0061] (6)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量1 %的營(yíng)養(yǎng)配料粉，旋轉(zhuǎn)60分鐘；所述營(yíng)養(yǎng)配料為 重量比為1:2:3:1的靈芝、枸杞、藍(lán)莓果和肉桂；
[0062] (7)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量0. 3%的復(fù)合酶，旋轉(zhuǎn)1. 5小時(shí)，復(fù)合酶是質(zhì)量比為 3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纖維素酶和果膠酶；
[0063] (8)加入原料總重量0.5%食用菌種，旋轉(zhuǎn)使均勻；停止旋轉(zhuǎn)，分裝至發(fā)酵桶，在 32°C發(fā)酵12天，即得母液備用；食用菌種為重量比為2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和植物 乳桿菌；
[0064] (二）膠料的制備：
[0065] (1)另取重量比為1 :1的黃糯米和白糯米為第二原料，用30°C水浸泡8小時(shí)；浙 水，置于容器內(nèi)；
[0066] (2)向容器內(nèi)加入第二原料重量1. 5倍的水，煮2小時(shí)；
[0067] (3)過(guò)濾，去除水，獲得膠料備用；
[0068](三）成品的制備：
[0069] (1)將母液與膠料按重量比為1 :1. 5的比例，混合，分離除漁，得混合液；
[0070] (2)加入混合液重量2%的低聚異麥芽糖，混合液重量0. 4%的黃原膠，混合液重 量〇. 1 %的阿膠，均質(zhì)；灌裝滅菌，得生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素。
[0071] 本實(shí)施例中的旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速均為20轉(zhuǎn)/分鐘。
[0072] 實(shí)施例3
[0073] 生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素用下述方法制成：
[0074](一）母液的制備：
[0075] (1)選取重量比為1:1:1:2:1:0. 5:1:1:0. 5的黑糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、 香米、高粱米、大米和薏米九種谷物為原料，清洗分離雜質(zhì)后，置于紙漿蒸煮機(jī)中加入原料 總重量50%的水，啟動(dòng)紙楽蒸煮機(jī)，旋轉(zhuǎn)浸泡60分鐘；
[0076] (2)停止旋轉(zhuǎn)，將水放凈，打開(kāi)冷氣機(jī)，通入冷氣，旋轉(zhuǎn)保持_4°C以下90分鐘，停止 旋轉(zhuǎn)；
[0077] (3)關(guān)閉冷氣機(jī)，打開(kāi)空壓機(jī)，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，升溫至室溫；
[0078] (4)關(guān)閉空壓機(jī)，停止旋轉(zhuǎn)，通入蒸汽，旋轉(zhuǎn)，保持KKTC，30分鐘，關(guān)閉蒸汽；
[0079] (5)停止旋轉(zhuǎn)，打開(kāi)空壓機(jī)，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，降至50°C ;
[0080] (6)停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量3%的營(yíng)養(yǎng)配料粉，旋轉(zhuǎn)30分鐘；營(yíng)養(yǎng)配料為重量 比為1:2:3:1的靈芝、枸杞、藍(lán)莓果和肉桂；
[0081] ⑵停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量0. 4%的復(fù)合酶，旋轉(zhuǎn)2小時(shí)，復(fù)合酶是質(zhì)量比為 3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纖維素酶和果膠酶；
[0082] (8)加入原料總重量1 %食用菌種，旋轉(zhuǎn)使均勻；停止旋轉(zhuǎn)，分裝至發(fā)酵桶，在35°C 發(fā)酵8天，即得母液備用；食用菌種為重量比為2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和嗜酸乳桿 囷；
[0083] (二）膠料的制備：
[0084] (1)另取黑糯米為第二原料，用25°C水浸泡10小時(shí)；浙水，置于容器內(nèi)；
[0085] (2)向容器內(nèi)加入第二原料重量2倍的水，煮3小時(shí)；
[0086] (3)過(guò)濾，去除水，獲得膠料備用；
[0087] (三）成品的制備：
[0088] (1)將母液與膠料按重量比為1 :2的比例，混合，分離除漁，得混合液；
[0089] (2)加入混合液重量2%的低聚異麥芽糖，混合液重量0. 7%的黃原膠，混合液重 量1 %的阿膠，均質(zhì)；灌裝滅菌，得生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素。
[0090] 各實(shí)施例中的轉(zhuǎn)速為15-20轉(zhuǎn)/分鐘，其目的是例物料混勻，但對(duì)轉(zhuǎn)速并不限制， 達(dá)到混勻目的的其它轉(zhuǎn)速也可以使用。
[0091] 在實(shí)施例1 一 3的基礎(chǔ)上再加以微波、氣流干燥、噴霧等烘干技術(shù)，可將本發(fā)明制 成粉體狀食品，減輕了液體灌裝的重量，方便外出攜帶，食用時(shí)即沖即食；
[0092] 在實(shí)施例1 一 3的基礎(chǔ)上再在上述成品工序中將黃原膠的加入比例提高，加入天 然果膠，也可制成類(lèi)似果凍狀食品，或添加到巧克力、麥乳精、餅干、面包等食品中食用；也 可精制成口服液服用。又可制成固體羹狀食品，此外，本發(fā)明還可制成餅干、糖果、點(diǎn)心等食 品，方便各類(lèi)群體食用。
[0093] 實(shí)施例4
[0094] 實(shí)施例3制備的生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素對(duì)1型人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV-1)感染 MAGI-CCR5、TZM-bl細(xì)胞的抑制作用以及對(duì)細(xì)胞的毒性作用（實(shí)驗(yàn)由吉林大學(xué)艾滋病疫苗 國(guó)豕工程實(shí)驗(yàn)室完成）：
[0095] 采用MAGI-CCR5細(xì)胞和TZM-bl細(xì)胞按照文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)HIV-1病毒感染力u。 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MAGI-CCR5細(xì)胞（帶有β -半乳糖苷酶報(bào)告基因）和TZM-bl細(xì)胞（帶有 熒光素酶報(bào)告基因），分別以1X 1〇5個(gè)/孔和1X 1〇4個(gè)/孔的濃度接入24孔和96孔培養(yǎng) 板，培養(yǎng)24h ;
[0096] 24孔培養(yǎng)板各孔加入200 μ L含HIV-1病毒和不同體積生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素的 細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)MAGI-CCR5細(xì)胞進(jìn)行感染抑制實(shí)驗(yàn)，HIV-1病毒用量為每孔40ngRT(逆轉(zhuǎn)錄 酶），生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素在200 μ L體系中所占體積分別為50 μ L，25 μ L，12. 5 μ L，6. 25 μ L，3· 12 μ L, 1· 56 μ L，即濃度為 0· 2500, 0· 1250, 0· 0625, 0· 0313, 0· 0156, 0· 0078 ( μ L/ μ L)， 每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，并設(shè)置只加 HIV-1病毒的陽(yáng)性對(duì)照孔及空細(xì)胞培養(yǎng)液處理的陰性對(duì) 照孔；感染2h后每孔用lmL含10%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液終止感染，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞；
[0097] 96孔培養(yǎng)板各孔加入50 μ L含HIV-1病毒和不同體積生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素的細(xì)胞 培養(yǎng)液對(duì)TZM-bl細(xì)胞進(jìn)行感染抑制實(shí)驗(yàn)，HIV-1病毒用量為每孔lOngRT，生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng) 養(yǎng)素在 50 μ L 體系中所占體積分別為 12. 5 μ L，6. 25 μ L，3. 12 μ L，1. 56 μ L，0· 78 μ L，0· 39 μ L，即濃度為 0· 2500, 0· 1250, 0· 0625, 0· 0313, 0· 0156, 0· 0078 ( μ L/ μ L)，每個(gè)濃度設(shè) 3 個(gè) 復(fù)孔，并設(shè)置只加 HIV-1病毒的陽(yáng)性對(duì)照孔及空細(xì)胞培養(yǎng)液處理的陰性對(duì)照孔；感染2h后 每孔用200μ L含10%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液終止感染，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞；
[0098] 培養(yǎng)48h后，按照底物顯色試劑盒說(shuō)明書(shū)，MAGI-CCR5細(xì)胞采用X-gal底物顯色法 檢測(cè)被感染細(xì)胞，計(jì)數(shù)顯藍(lán)色的細(xì)胞即為被感染細(xì)胞；TZM-bl細(xì)胞采用熒光素酶底物檢測(cè) 被感染細(xì)胞，在多標(biāo)記微孔板檢測(cè)系統(tǒng)上測(cè)定熒光值，熒光值的大小反映被感染細(xì)胞數(shù)量。
[0099] 計(jì)算細(xì)胞感染率（％)時(shí)，以只加 HIV-1病毒孔中的藍(lán)色細(xì)胞數(shù)（MAGI-CCR5細(xì)胞） 和只加 HIV-1病毒孔中的熒光值（TZM-bl細(xì)胞）為陽(yáng)性值（100%)，MAGI-CCR5細(xì)胞感染率 (%) =(生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素孔藍(lán)色細(xì)胞數(shù)-陰性對(duì)照孔藍(lán)色細(xì)胞數(shù)V(陽(yáng)性對(duì)照孔藍(lán)色 細(xì)胞數(shù)-陰性對(duì)照孔藍(lán)色細(xì)胞數(shù)）X l〇〇%，TZM-bl細(xì)胞感染率（％ )=(生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng) 養(yǎng)素孔熒光值-陰性對(duì)照孔熒光值）八陽(yáng)性對(duì)照孔熒光值-陰性對(duì)照孔熒光值）\1〇〇%， 3個(gè)復(fù)孔的計(jì)算結(jié)果取平均值。
[0100] 生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素抗1型人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV-ι)感染的效果以細(xì)胞感染率 評(píng)價(jià)，感染率越低說(shuō)明效果越好，獨(dú)立實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，結(jié)果取三次平均值。
[0101] 結(jié)果表明：生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素對(duì)HIV-ι病毒感染MAGI-CCR5、TZM-bl細(xì)胞有明 顯的抑制作用，且呈濃度依賴(lài)性；生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素在MAGI-CCR5和TZM-bl細(xì)胞中對(duì) 111￥-1的半數(shù)抑制濃度1(： 5(|(病毒抑制率為50(%時(shí)的藥物濃度）分別為0.04221117^1^和 0· 0310μ L/μ L(表 1):
[0102] 表1生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素對(duì)HIV-1病毒感染MAGI-CCR5、TZM-bl細(xì)胞的抑制作用
[0103]
【權(quán)利要求】
1. 生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素在制備抗HIV功能食品中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所述生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素是用下述方法制 成： (一） 母液的制備： (1) 選取谷類(lèi)為原料，清洗分離雜質(zhì)后，置于紙漿蒸煮機(jī)中加入原料總重量30%? 50%的水，啟動(dòng)紙漿蒸煮機(jī)，旋轉(zhuǎn)浸泡30?60分鐘； (2) 停止旋轉(zhuǎn)，將水放凈，打開(kāi)冷氣機(jī)，通入冷氣，旋轉(zhuǎn)保持_4°C以下60?90分鐘，停 止旋轉(zhuǎn)； (3) 關(guān)閉冷氣機(jī)，打開(kāi)空壓機(jī)，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，升溫至室溫； (4) 關(guān)閉空壓機(jī)，停止旋轉(zhuǎn)，通入蒸汽，旋轉(zhuǎn)，保持100°C，30?60分鐘，關(guān)閉蒸汽； (5) 停止旋轉(zhuǎn)，打開(kāi)空壓機(jī)，通入室溫空氣，旋轉(zhuǎn)，降至30°C?50°C ; (6) 停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量1 %?3 %的營(yíng)養(yǎng)配料粉，旋轉(zhuǎn)30?60分鐘；所述營(yíng)養(yǎng) 配料為重量比為1:2:3:1的靈芝、枸杞、藍(lán)莓果和肉桂； (7) 停止旋轉(zhuǎn)，加入原料總重量0. 2%?0. 4%的復(fù)合酶，旋轉(zhuǎn)1?2小時(shí)； (8) 加入原料總重量0.2%?1%食用菌種，旋轉(zhuǎn)使均勻；停止旋轉(zhuǎn)，分裝至發(fā)酵桶，在 28?35°C發(fā)酵8?15天，即得母液備用； (二） 膠料的制備： ⑴另取谷類(lèi)為第二原料，用18?30°C水浸泡8?16小時(shí)；浙水，置于容器內(nèi)； (2) 向容器內(nèi)加入第二原料重量1?2倍的水，煮1?3小時(shí)； (3) 過(guò)濾，去除水，獲得膠料備用； (三） 成品的制備： (1) 將母液與膠料按重量比為1 :1?2的比例，混合，分離除渣，得混合液； (2) 加入混合液重量1 %?2%的低聚異麥芽糖，混合液重量0. 2%?0. 7%的黃原膠， 混合液重量〇?1%的阿膠，均質(zhì)；灌裝滅菌，得生物強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)素。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是所述原料為黑糯米、黃糯米、白糯米、紫米、黍 米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是所述第二原料為黑糯米、黃糯米和白糯米至 少一種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是所述復(fù)合酶是質(zhì)量比為3:3:1:1的糖化酶、淀 粉酶、纖維素酶和果膠酶。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是所述食用菌種為面包酵母，甜酒曲酵母、植物 乳桿菌、嗜酸乳桿菌和保加利亞乳桿菌至少兩種。
【文檔編號(hào)】A23L1/10GK104146257SQ201410408472
【公開(kāi)日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年8月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月19日
【發(fā)明者】董福生, 姜春來(lái), 于湘暉, 王儲(chǔ) 申請(qǐng)人:天津市泉又今生物科技有限公司