一種酚嗪類抗腫瘤抗生素及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明是一種新的酚嗪類抗腫瘤抗生素，其特點(diǎn)是通過發(fā)酵培養(yǎng)保藏登記號(hào)為CCTCCNo.M2013727的一株鏈霉菌菌株(Streptomycessp.)YIMR4,再對(duì)其發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，得到分子式為C25H16N404，分子量為436的一種新的抗腫瘤抗生素，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的抗腫瘤抗生素對(duì)人胃癌及人宮頸癌腫瘤細(xì)胞有抑制作用。
【專利說明】一種酚嗪類抗腫瘤抗生素及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種新的酚嗪類抗腫瘤抗生素及其制備方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 不斷出現(xiàn)的新疾病及病原菌對(duì)抗生素耐藥性的增強(qiáng)迫使人們必須加快新藥的研 發(fā)，從微生物中發(fā)現(xiàn)高效低毒的天然源新藥先導(dǎo)化合物是近年來研究的熱點(diǎn)之一。由于目 前對(duì)普通土壤環(huán)境微生物的研究已有較長歷史，從中發(fā)現(xiàn)新穎結(jié)構(gòu)活性化合物的難度越來 越大，為了尋找新抗生素先導(dǎo)化合物，人們已將目光轉(zhuǎn)向棲息于特殊生境的微生物。
[0003] 廣泛存在于植物體內(nèi)的內(nèi)生菌由于長期與其宿主植物的共同進(jìn)化，擁有特殊的代 謝途徑，產(chǎn)生活性新化合物的幾率較大，是一類具有較好開發(fā)潛力的新微生物資源。云南 西雙版納擁有豐富的藥用植物資源，其中蘊(yùn)藏著大量的植物內(nèi)生菌，開展從中尋找活性新 先導(dǎo)化合物的研究，為后續(xù)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新藥研發(fā)奠定基礎(chǔ)具有重要意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種不同于已知酚嗪類抗生素結(jié)構(gòu)的新抗腫瘤抗生素，它對(duì) 人胃癌及人宮頸癌腫瘤細(xì)胞有抑制作用。
[0005] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素，本抗生素的產(chǎn)生菌株已保藏在中國典型培養(yǎng)物保 藏中心；地址：中國.武漢；保藏日期：2013年12月29日；保藏登記入冊編號(hào)為 CCTCC No. M2013727 ;通過培養(yǎng)一株分離自云南西雙版納藥用植物組織內(nèi)的鏈霉菌菌株 )?Μ R4,再對(duì)其發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，得到本抗腫瘤抗生素；本抗腫 瘤抗生素是分子式為C25H16N 4O4，分子量為436的化合物，該化合物具有如下結(jié)構(gòu)：

【權(quán)利要求】
1. 一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是該方法包括如下步驟： (1) 菌種液體種子培養(yǎng)： ①液體種子培養(yǎng)基的制備：取酵母膏2. (Γ6. Og、葡萄糖2. (Γ6. Og、麥芽膏3. (Γ7. Og、 復(fù)合維生素2.5?4.5 11^、加水至10001111，？!17.2，120°(：滅菌301^11;@發(fā)酵：將菌株打皿 R4接種到滅菌后的培養(yǎng)基中，28° C下于轉(zhuǎn)速為19(Γ250轉(zhuǎn)/分鐘的搖床上搖瓶發(fā)酵2天 (2) 菌種發(fā)酵培養(yǎng)： ①發(fā)酵培養(yǎng)基的制備：取淀粉20. (Γ30. Og、牛肉膏I. (Γ5. Og、葡萄糖0. 5~1. 5g、酵母 膏 3.0?7.0g、蛋白胨 L0?5.0g、CaC03 2.0?6.0g、加水至 1000ml，pH 7.0，120。C滅菌 30min ;②發(fā)酵：將上述方法（1)中得到的菌株ΠΜ R4種子液加到滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，加菌種 量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的10 %，28° C下于轉(zhuǎn)速為19(Γ250轉(zhuǎn)/分鐘的搖床上搖瓶發(fā)酵6~8 天； (3) 發(fā)酵液處理： ①發(fā)酵液經(jīng)250(Γ3500轉(zhuǎn)/分鐘離心，離心時(shí)間為15?25分鐘；②以等體積乙酸乙醋 萃取發(fā)酵上清液:Γ5次，回收乙酸乙醋，菌絲體用丙酮浸泡并超聲破碎，回收丙酮，合并二 部分提取物，得到具有活性部位的棕褐色膏狀物；③進(jìn)行硅膠柱層析，以三氯甲烷：甲醇 40 :1至1 :1梯度洗脫，收集含有該化合物的組分，回收溶劑，得到粗品一種抗腫瘤抗生素 將粗品一種抗腫瘤抗生素依次進(jìn)行甲醇凝膠及三氯甲烷：甲醇30 :1硅膠柱層析，回 收溶劑，得到一種抗腫瘤抗生素較純品；⑤將一種抗腫瘤抗生素較純品進(jìn)行甲醇凝膠柱層 析，回收溶劑，得到一種抗腫瘤抗生素純品，所述抗腫瘤抗生素的結(jié)構(gòu)為：
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是所述的 酵母膏為4. 0g、葡萄糖為4. 0g、麥芽膏為5. 0g、復(fù)合維生素為3. 5mg。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是所述的 淀粉為24. 0g、牛肉膏為3. 0g、葡萄糖為I. 0g、酵母膏為5. 0g、蛋白胨為3. OgXaCO3S 4. 0g。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是所述的 搖床轉(zhuǎn)數(shù)為220轉(zhuǎn)/分鐘，所述發(fā)酵時(shí)間為7天。
【文檔編號(hào)】C12R1/465GK104212852SQ201410409077
【公開日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年8月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月9日
【發(fā)明者】李一青, 戎賀, 趙立興, 徐麗華 申請(qǐng)人:云南大學(xué)