用于解淀粉乳桿菌l6高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其培育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了用于解淀粉乳桿菌L6高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其培育方法。用于解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基的基礎(chǔ)培養(yǎng)基由豆腐黃漿水經(jīng)離心去除不溶物形成；以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，所述營(yíng)養(yǎng)成分由4-12份蛋白胨、5-20份酵母提取物和7.5-40份玉米淀粉組成；培養(yǎng)基的高密度培養(yǎng)解淀粉乳桿菌L6的方法：將冷藏保存的解淀粉乳桿菌接入MRS液體培養(yǎng)基，得到種子液；將種子液接種于在培養(yǎng)基中，在溫度32-47°C下進(jìn)行發(fā)酵6-24小時(shí)；終止發(fā)酵。通過(guò)本發(fā)明的培養(yǎng)方法可以得到4.5X109cfu/mL以上活菌數(shù)的解淀粉乳桿菌的高密度培養(yǎng)物，為進(jìn)一步利用該菌株制備直投式解淀粉乳桿菌發(fā)酵劑奠定了基礎(chǔ)。
【專利說(shuō)明】用于解淀粉乳桿菌L6局密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其培育方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物的培養(yǎng)，特別涉及解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基及 培養(yǎng)技術(shù)。屬于微生物培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 黃漿水為豆腐制作過(guò)程中產(chǎn)生的黃色浙水，含有大量水溶性的糖類如水蘇糖、棉 籽糖等低聚糖，以及異黃酮、蛋白質(zhì)和維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，非常適合微生物的生長(zhǎng)。直接排 放不僅會(huì)造成資源的浪費(fèi)，而且會(huì)嚴(yán)重污染環(huán)境與土壤，因此實(shí)現(xiàn)對(duì)黃漿水的綜合利用引 起了國(guó)內(nèi)外科學(xué)工作者的關(guān)注。
[0003] 近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，豆制品加工過(guò)程中產(chǎn)生的黃漿水，在存貯的過(guò)程中經(jīng)自然發(fā)酵 所生成的酸漿水，是一種良好的豆腐凝固劑，已在部分豆制品生產(chǎn)廠家使用，以酸漿水制成 的豆腐色澤微黃、口感鮮嫩，無(wú)化學(xué)點(diǎn)漿劑的苦澀味，屬純天然食品。但目前使用的酸漿水 均為自然發(fā)酵，所涉及到的微生物除產(chǎn)酸的乳酸菌外，還含有部分其它的細(xì)菌和酵母等，其 中也有可能污染蠟樣芽孢桿菌、葡萄球菌等雜菌，對(duì)豆腐及其制品的食用安全性構(gòu)成危害。
[0004] 本實(shí)驗(yàn)室從自然發(fā)酵的豆腐酸漿中分離得到一株乳酸菌Lactobacillus amylolyticus L6,取得了以下良好結(jié)果：
[0005] (1)將Lactobacillus amylolyticus L6種子液接入到滅菌的黃楽水中，進(jìn)行純種 發(fā)酵，獲得了一種新型的豆腐點(diǎn)漿劑，解決了自然發(fā)酵酸漿水中微生物生長(zhǎng)雜亂的問(wèn)題，提 高了酸漿豆腐的質(zhì)量安全性。
[0006] (2)該菌株可以直接利用黃漿水中的低聚糖和淀粉等生長(zhǎng)產(chǎn)酸，無(wú)需補(bǔ)充其它碳 源和營(yíng)養(yǎng)素即可達(dá)到點(diǎn)漿劑所需酸度，降低了生產(chǎn)成本。
[0007] 高密度培養(yǎng)技術(shù)，也就是高密度發(fā)酵技術(shù)。一般來(lái)說(shuō)，高密度培養(yǎng)是指應(yīng)用一定的 培養(yǎng)技術(shù)或裝置提高菌體的發(fā)酵密度，使菌體密度較傳統(tǒng)培養(yǎng)方式有顯著的提高，從而達(dá) 到減少培養(yǎng)體積，縮短生產(chǎn)周期，最終提高特定產(chǎn)物的比生產(chǎn)速率，減少設(shè)備投資從而降低 生產(chǎn)成本，提高在市場(chǎng)上的競(jìng)爭(zhēng)力。
[0008] 隨著發(fā)酵劑的商業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用的迅速增加，工業(yè)發(fā)酵的基本目標(biāo)自然轉(zhuǎn)向了以 最小的代價(jià)獲得最大的產(chǎn)值和利潤(rùn)。而實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)的工程手段是建立相應(yīng)的高效發(fā)酵模 式。
[0009] 解淀粉乳桿菌Lactobacillus amylolyticus L6通過(guò)使用MRS液體培養(yǎng)基制備種 子發(fā)酵液時(shí)活菌數(shù)不高，另外市售MRS培養(yǎng)基價(jià)格較高限制了其在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的在于提供一種原料廉價(jià)，解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)的高密度培養(yǎng)基制備的濃縮型發(fā)酵劑含有的活菌數(shù)高達(dá)4. 5X IO9Cfu/ ml的用于解淀粉乳桿菌L6高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其培育方法。
[0011] 本發(fā)明中解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)為本發(fā)明人從自 然發(fā)酵的豆腐酸漿水中提取并分離鑒定的菌種。菌種（株）L6保藏在中國(guó)微生物菌種保 藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址在北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院中科院微生物研究 所，其菌種保藏編號(hào)為=CGMCCN0. 9090,保藏日期為2014年4月25日，菌種的分類命名為 解淀粉乳桿菌（Lactobacillus amylolyticus)，保藏證明參見(jiàn)在 申請(qǐng)人:申請(qǐng)的申請(qǐng)?zhí)枮?201410277246. 3的發(fā)明專利申請(qǐng)。
[0012] 本發(fā)明使用豆腐黃楽水作為解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并對(duì)其培養(yǎng)條件進(jìn)行了研究，旨在提高培養(yǎng)物中解淀粉乳桿菌 L6(Lactobacillus amylolyticus L6)的活菌密度，制備廉價(jià)的乳酸菌濃縮發(fā)酵劑，為 進(jìn)一步利用其制備直投式發(fā)酵劑奠定基礎(chǔ)。在利用解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)發(fā)酵黃漿水，進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)制備豆腐凝固劑時(shí)，乳酸菌濃縮發(fā)酵劑的 制備就顯得尤為重要。乳酸菌濃縮發(fā)酵劑制備的關(guān)鍵是要實(shí)現(xiàn)對(duì)其進(jìn)行高活性、高密度的 培養(yǎng)以及價(jià)格低廉。
[0013] 本發(fā)明目的通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0014] -種用于解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基，由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)成分組 成，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基由豆腐黃漿水經(jīng)離心去除不溶物形成；以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，所述營(yíng)養(yǎng)成分 由4-12份蛋白胨、5-20份酵母提取物和7. 5-40份玉米淀粉組成；每1升基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入 4_12g蛋白胨，5-20g酵母提取物和7. 5-40g玉米淀粉。
[0015] 優(yōu)選地，所述營(yíng)養(yǎng)成分加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基后還包括滅菌，所述滅菌的溫度為 120°C -122°C，所述滅菌的時(shí)間為15min-20min。
[0016] 所述每1升基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入8. 2g蛋白胨、10. 7g酵母提取粉和22g玉米淀粉。
[0017] 應(yīng)用所述培養(yǎng)基的高密度培養(yǎng)解淀粉乳桿菌L6的方法，包括如下步驟：
[0018] A)菌種發(fā)酵液的制備：將冷藏保存的解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)接入裝有已經(jīng)滅菌的MRS液體培養(yǎng)基的容器內(nèi)，在32°C-47°C下靜置培 養(yǎng)10h-24h，得到種子液；
[0019] B)發(fā)酵：將所述種子液接種于在培養(yǎng)基中，在溫度32-47°C下進(jìn)行發(fā)酵6-24小時(shí)； 所述種子液的加入量為培養(yǎng)基體積的2% -6% ;
[0020] C)終止發(fā)酵：達(dá)到所述發(fā)酵時(shí)間后置于-4°C冷藏保存，終止發(fā)酵，得到解淀粉乳 桿菌L6的高密度發(fā)酵液。
[0021] 所述高密度發(fā)酵液中解淀粉乳桿菌L6的菌數(shù)達(dá)到4. 5X 109Cfu/mL以上。
[0022] 所述MRS液體培養(yǎng)基的制備為：將牛肉膏10g，蛋白胨10g，酵母浸粉5g，葡萄糖 20g，吐溫-80 lmL，K2HPO4 · 3H202g，NaAc · 3H205g，檸檬酸三銨 2g，MgSO4 · 7Η200· 58g 和 MnSO4 · H2OO. 25g 加入蒸餾水到 1L，調(diào) pH 到 6· 4±0· 2。
[0023] 所述發(fā)酵的溫度優(yōu)選為42°C，發(fā)酵的時(shí)間優(yōu)選為12h。
[0024] 由以上方法制備得到的解淀粉乳桿菌L6的高密度發(fā)酵液可作為豆腐黃漿水制備 豆腐凝固劑時(shí)的發(fā)酵劑，尤其可用于直投式解淀粉乳桿菌發(fā)酵劑的制備。
[0025] 相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：
[0026] (1)解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)的高密度培養(yǎng)基制備的 濃縮型發(fā)酵劑含有的活菌數(shù)高達(dá)4. 5 X 109cfu/ml。優(yōu)于商業(yè)化MRS液體培養(yǎng)基培養(yǎng)效果。
[0027] (2)本發(fā)明涉及的高密度培養(yǎng)基，使用豆腐黃漿水作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，廉價(jià)的原料降 低了生產(chǎn)成本，具有推廣價(jià)值。
[0028] (3)本發(fā)明涉及的解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)的高密度 培養(yǎng)方法，條件簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。

【具體實(shí)施方式】
[0029] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，應(yīng)該理解為，這些實(shí)施例僅用于例證 的目的，并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0030] 本發(fā)明具體實(shí)施例中所涉及的材料：玉米淀粉購(gòu)買自明譽(yù)（香港）食品有限公司； 蛋白胨購(gòu)買自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；酵母提取粉購(gòu)買自廣東環(huán)凱微生物科技 有限公司。
[0031] 實(shí)施例中所涉及的菌種：解淀粉乳桿菌L6為本發(fā)明人從自然發(fā)酵豆腐酸漿水中 提取并分離鑒定的菌種，保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其菌種 保藏編號(hào)為CGMCC No. 9090。
[0032] 實(shí)施例1
[0033] 解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
[0034] (1)菌種發(fā)酵液的制備：
[0035] 將冷凍保存的解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)接種于滅菌的 MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度42°C下培養(yǎng)18h，連續(xù)轉(zhuǎn)接三次，即得菌種發(fā)酵液。
[0036] (2)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制：
[0037] a.基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備：取豆腐黃漿水，經(jīng)離心去除不溶物，作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0038] b.分別稱取下述原料：10g蛋白胨，5g酵母提取粉，7. 5g玉米淀粉。
[0039] c.將上述原料溶于IL步驟a獲得的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，攪拌均勻，pH值自然，裝于錐 形瓶中，在溫度121°C下滅菌15min。即得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0040] (3)發(fā)酵：
[0041] 將步驟（1)得到的解淀粉乳桿菌L6菌種發(fā)酵液按照發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5%接種于 在步驟（2)得到的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度42°C下，進(jìn)行靜置培養(yǎng)24h。
[0042] (4)終止發(fā)酵：
[0043] 達(dá)到所述發(fā)酵時(shí)間后，將錐形瓶置于4°C冷藏保存，終止發(fā)酵，得到解淀粉乳桿菌 L6活菌數(shù)達(dá)到I. 09X 109cfu/mL以上的解淀粉乳桿菌L6高密度發(fā)酵液。
[0044] 實(shí)施例2
[0045] 解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
[0046] (1)菌種發(fā)酵液的制備：
[0047] 將冷凍保存的解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)接種于滅菌的 MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度42°C下培養(yǎng)18h，連續(xù)轉(zhuǎn)接三次，即得菌種發(fā)酵液。
[0048] (2)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制：
[0049] a.基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備：取豆腐黃漿水，經(jīng)離心去除不溶物，作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0050] b.分別稱取下述原料：10g蛋白胨，15g酵母提取粉，27. 5g玉米淀粉；
[0051] C.將上述原料溶于IL步驟a獲得的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，攪拌均勻，pH值自然，裝于錐 形瓶中，在溫度121°C下滅菌15min。即得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0052] (3)發(fā)酵：
[0053] 將步驟⑴得到的解淀粉乳桿菌L6菌種發(fā)酵液按照發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5%接種于 在步驟（2)得到的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度42°C下，進(jìn)行靜置培養(yǎng)24h。
[0054] (4)終止發(fā)酵：
[0055] 達(dá)到所述發(fā)酵時(shí)間后，將錐形瓶置于4°C冷藏保存，終止發(fā)酵，得到解淀粉乳桿菌 L6活菌數(shù)達(dá)到I. 93X 109cfu/mL以上的解淀粉乳桿菌L6高密度發(fā)酵液。
[0056] 實(shí)施例3
[0057] 解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
[0058] (1)菌種發(fā)酵液的制備：
[0059] 將冷凍保存的解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)接種于滅菌的 MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度42°C下培養(yǎng)18h，連續(xù)轉(zhuǎn)接三次，即得菌種發(fā)酵液。
[0060] (2)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制：
[0061] a.基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備：取豆腐黃漿水，經(jīng)離心去除不溶物，作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0062] b.分別稱取下述原料：8. 2g蛋白胨，10. 7g酵母提取粉，22g玉米淀粉；
[0063] c.將上述原料溶于IL步驟a獲得的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，攪拌均勻，pH值自然，裝于錐 形瓶中，在溫度121°C下滅菌15min。即得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0064] (3)發(fā)酵：
[0065] 將步驟⑴得到的解淀粉乳桿菌L6菌種發(fā)酵液按照發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5%接種于 在步驟（2)得到的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度42°C下，進(jìn)行靜置培養(yǎng)12h。
[0066] (4)終止發(fā)酵：
[0067] 達(dá)到所述發(fā)酵時(shí)間后，將錐形瓶置于4°C冷藏保存，終止發(fā)酵，得到解淀粉乳桿菌 L6活菌數(shù)達(dá)到4. 5X 109cfu/mL以上的解淀粉乳桿菌L6高密度發(fā)酵液。
[0068] 實(shí)施例4
[0069] 解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
[0070] (1)菌種發(fā)酵液的制備：
[0071] 將冷凍保存的解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)接種于滅菌的 MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度42°C下培養(yǎng)18h，連續(xù)轉(zhuǎn)接三次，即得菌種發(fā)酵液。
[0072] (2)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制：
[0073] a.基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備：取豆腐黃漿水，經(jīng)離心去除不溶物，作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0074] b.分別稱取下述原料：8. 2g蛋白胨，10. 7g酵母提取粉，22g玉米淀粉；
[0075] c.將上述原料溶于IL步驟a獲得的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，攪拌均勻，pH值自然，裝于錐 形瓶中，在溫度121°C下滅菌15min。即得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0076] (3)發(fā)酵：
[0077] 將步驟（1)得到的解淀粉乳桿菌L6菌種發(fā)酵液按照發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5%接種于 在步驟（2)得到的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度47°C下，進(jìn)行靜置培養(yǎng)6h。
[0078] (4)終止發(fā)酵：
[0079] 達(dá)到所述發(fā)酵時(shí)間后，將錐形瓶置于4°C冷藏保存，終止發(fā)酵，得到解淀粉乳桿菌 L6活菌數(shù)達(dá)到I. 205X 109cfu/mL以上的解淀粉乳桿菌L6高密度發(fā)酵液。
[0080] 實(shí)施例5
[0081] 解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
[0082] (1)菌種發(fā)酵液的制備：
[0083] 將冷凍保存的解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)接種于滅菌的 MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度42°C下培養(yǎng)18h，連續(xù)轉(zhuǎn)接三次，即得菌種發(fā)酵液。
[0084] (2)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制：
[0085] a.基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備：取豆腐黃漿水，經(jīng)離心去除不溶物，作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0086] b.分別稱取下述原料：8. 2g蛋白胨，10. 7g酵母提取粉，22g玉米淀粉；
[0087] c.將上述原料溶于IL步驟a獲得的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，攪拌均勻，pH值自然，裝于錐 形瓶中，在溫度121°C下滅菌15min。即得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0088] (3)發(fā)酵：
[0089] 將步驟⑴得到的解淀粉乳桿菌L6菌種發(fā)酵液按照發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5%接種于 在步驟（2)得到的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度37°C下，進(jìn)行靜置培養(yǎng)12h。
[0090] (4)終止發(fā)酵：
[0091] 達(dá)到所述發(fā)酵時(shí)間后，將錐形瓶置于4°C冷藏保存，終止發(fā)酵，得到解淀粉乳桿菌 L6活菌數(shù)達(dá)到2. 89X 109cfu/mL以上的解淀粉乳桿菌L6高密度發(fā)酵液。
[0092] 實(shí)施例6
[0093] 解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
[0094] (1)菌種發(fā)酵液的制備：
[0095] 將冷凍保存的解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)接種于滅菌的 MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度42°C下培養(yǎng)18h，連續(xù)轉(zhuǎn)接三次，即得菌種發(fā)酵液。
[0096] (2)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制：
[0097] a.基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備：取豆腐黃漿水，經(jīng)離心去除不溶物，作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0098] b.分別稱取下述原料：8. 2g蛋白胨，10. 7g酵母提取粉，22g玉米淀粉；
[0099] c.將上述原料溶于IL步驟a獲得的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，攪拌均勻，pH值自然，裝于錐 形瓶中，在溫度121°C下滅菌15min。即得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0100] ⑶發(fā)酵：
[0101] 將步驟⑴得到的解淀粉乳桿菌L6菌種發(fā)酵液按照發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5%接種于 在步驟（2)得到的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度32°C下，進(jìn)行靜置培養(yǎng)18h。
[0102] (4)終止發(fā)酵：
[0103] 達(dá)到所述發(fā)酵時(shí)間后，將錐形瓶置于4°C冷藏保存，終止發(fā)酵，得到解淀粉乳桿菌 L6活菌數(shù)達(dá)到2. 04X 109cfu/mL以上的解淀粉乳桿菌L6高密度發(fā)酵液。
[0104] 實(shí)施例7 (對(duì)比實(shí)施例1)
[0105] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的解淀粉乳桿菌L6高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基的特點(diǎn)，以本實(shí)施例作 為對(duì)比。
[0106] (1)菌種發(fā)酵液的制備：
[0107] 將冷凍保存的解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)接種于滅菌的 MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度42°C下培養(yǎng)18h，連續(xù)轉(zhuǎn)接三次，即得菌種發(fā)酵液。
[0108] (2)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制：
[0109] 取豆腐黃漿水，經(jīng)離心去除不溶物，pH值自然，裝于錐形瓶中，在溫度121°C下滅 菌15min。即得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0110] ⑶發(fā)酵：
[0111] 將步驟⑴得到的解淀粉乳桿菌L6菌種發(fā)酵液按照發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5%接種于 在步驟（2)得到的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度42°C下，進(jìn)行靜置培養(yǎng)24h。
[0112] (4)終止發(fā)酵：
[0113] 達(dá)到所述發(fā)酵時(shí)間后，將錐形瓶置于4°C冷藏保存，終止發(fā)酵，得到解淀粉乳桿菌 L6活菌數(shù)達(dá)到8X 106cfu/mL的解淀粉乳桿菌L6高密度發(fā)酵液。
[0114] 對(duì)比實(shí)施例1顯示，通過(guò)本發(fā)明提供的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基獲得的解淀粉乳桿菌 L6的活菌菌數(shù)要顯著高于單獨(dú)使用黃漿水作為高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基所獲得的活菌數(shù)量。
[0115] 實(shí)施例8 (對(duì)比實(shí)施例2)
[0116] 為顯示本發(fā)明的解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基的特點(diǎn)，以本實(shí)施例作 為對(duì)比：
[0117] (1)菌種發(fā)酵液的制備：
[0118] 將冷凍保存的解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)接種于滅菌 的，在溫度42°C下培養(yǎng)18h，連續(xù)轉(zhuǎn)接三次，即得菌種發(fā)酵液。
[0119] ⑵發(fā)酵培養(yǎng)基的配制：
[0120] MRS液體培養(yǎng)基在溫度121°C下滅菌15min。即得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0121] (3)發(fā)酵：
[0122] 以上述發(fā)酵培養(yǎng)基體積計(jì)，將步驟（1)得到的解淀粉乳桿菌L6菌種發(fā)酵液按照發(fā) 酵培養(yǎng)基體積的5%接種于在步驟（2)得到的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度42°C下，進(jìn)行靜置培養(yǎng) 24h。
[0123] (4)終止發(fā)酵：
[0124] 達(dá)到所述發(fā)酵時(shí)間后，將錐形瓶置于4°C冷藏保存，終止發(fā)酵，得到解淀粉乳桿菌 L6活菌數(shù)達(dá)到5. 5X 108cfu/mL的解淀粉乳桿菌L6高密度發(fā)酵液。
[0125] 對(duì)比實(shí)施例顯示，通過(guò)本發(fā)明提供的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基獲得的解淀粉乳桿菌L6 的活菌數(shù)量要顯著高于使用商用MRS培養(yǎng)基作為解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基 所獲得的活菌數(shù)量。
[0126] 本發(fā)明利用豆腐工業(yè)的副產(chǎn)物豆腐黃漿水作為解淀粉乳桿菌L6的基礎(chǔ)培養(yǎng)基， 并利用菌種能夠分泌淀粉酶并催化淀粉水解的特點(diǎn)，補(bǔ)充淀粉作為碳源顯著促進(jìn)了菌種的 生長(zhǎng)，同時(shí)適當(dāng)添加蛋白胨和酵母抽提物，獲得了菌數(shù)在IO 9CfVmL以上的增殖培養(yǎng)基和培 養(yǎng)方法，與單獨(dú)使用豆腐黃漿水作培養(yǎng)基（對(duì)比實(shí)施例1)相比，菌數(shù)高出3個(gè)數(shù)量級(jí)，與商 用培養(yǎng)基MRS(對(duì)比實(shí)施例2)相比，菌數(shù)也高出1個(gè)數(shù)量級(jí)，顯示出本發(fā)明使用的高密度培 養(yǎng)基具有價(jià)格低廉、增殖效果好的特點(diǎn)，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用。
【權(quán)利要求】
1. 一種用于解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基，由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)成分組成， 其特征在于，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基由豆腐黃漿水經(jīng)離心去除不溶物形成；以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，所述營(yíng) 養(yǎng)成分由4-12份蛋白胨、5-20份酵母提取物和7. 5-40份玉米淀粉組成；每1升基礎(chǔ)培養(yǎng) 基加入4-12g蛋白胨，5-20g酵母提取物和7. 5-40g玉米淀粉。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于， 所述營(yíng)養(yǎng)成分加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基后還包括滅菌，所述滅菌的溫度為120°C _122°C，所述滅菌 的時(shí)間為15min_20min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于解淀粉乳桿菌L6的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于， 所述每1升基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入8. 2g蛋白胨、10. 7g酵母提取粉和22g玉米淀粉。
4. 應(yīng)用權(quán)利要求1所述培養(yǎng)基的高密度培養(yǎng)解淀粉乳桿菌L6的方法，其特征在于包括 如下步驟： A) 菌種發(fā)酵液的制備：將冷藏保存的解淀粉乳桿菌L6 (Lactobacillus amylolyticus L6)接入裝有已經(jīng)滅菌的MRS液體培養(yǎng)基的容器內(nèi)，在32°C -47°C下靜置培養(yǎng)10h-24h，得 到種子液； B) 發(fā)酵：將所述種子液接種于在培養(yǎng)基中，在溫度32-47°C下進(jìn)行發(fā)酵6-24小時(shí)；所 述種子液的加入量為培養(yǎng)基體積的2% -6% ; C) 終止發(fā)酵：達(dá)到所述發(fā)酵時(shí)間后置于-4°C冷藏保存，終止發(fā)酵，得到解淀粉乳桿菌 L6的高密度發(fā)酵液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的高密度培養(yǎng)解淀粉乳桿菌L6的方法，其特征在于，所述高密 度發(fā)酵液中解淀粉乳桿菌L6的菌數(shù)達(dá)到4. 5X 109Cfu/mL以上。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的高密度培養(yǎng)解淀粉乳桿菌L6的方法，其特征在于，所述MRS 液體培養(yǎng)基的制備為：將牛肉膏l(xiāng)〇g，蛋白胨l〇g，酵母浸粉5g，葡萄糖20g，吐溫-80 lmL， K2HP04 · 3H202g，NaAc · 3H205g，檸檬酸三銨 2g，MgS04 · 7H200. 58g 和 MnS04 · H200. 25g 加 入蒸餾水到1L，調(diào)pH到4±(λ 2。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的高密度培養(yǎng)解淀粉乳桿菌L6的方法，其特征在于，所述發(fā)酵 的溫度為42°C，發(fā)酵的時(shí)間為12h。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK104212743SQ201410419744
【公開(kāi)日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月22日
【發(fā)明者】李理, 劉力 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué)