一種產(chǎn)羧甲基纖維素酶的Achromobacter xylosoxidans菌株的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從堆肥中分離篩選出來的能產(chǎn)纖維素酶的細(xì)菌7B，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO:M2013365。菌株7B為革蘭氏陰性桿菌，在LB培養(yǎng)基上形成直徑為0.5～1mm，光滑、濕潤、有光澤、灰白色、邊緣整齊的菌落。采用BIOLOG微生物鑒定系統(tǒng)和16s rDNA序列分析鑒定該菌株為Achromobacter xylosoxidans。采用CMC發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，可得到0.183U/mL的羧甲基纖維素酶活力，有望應(yīng)用于纖維素酶的生產(chǎn)。
CCTCC NO:M2013365
2013.08.08
【專利說明】-種產(chǎn)竣甲基纖維素酶的Achromobacter xy Iosox idans 菌株

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及從牛糞堆肥樣品中篩選、分離、純化、得 到的能產(chǎn)纖維素酶的木糖氧化無色桿菌Achromobacter xylosoxidans7B。

【背景技術(shù)】
[0002] 進(jìn)入21世紀(jì)后，隨著化石燃料的前景趨向枯竭、碳排放過量、環(huán)境污染和生態(tài)失 衡等問題凸顯，人們?cè)絹碓綄⒛抗馔断蚩稍偕那鍧嵭履茉?。木質(zhì)纖維素，即是其中一種優(yōu) 良的資源。利用木質(zhì)纖維素生產(chǎn)燃料乙醇成為一種極具潛力的清潔能源技術(shù)。木質(zhì)纖維素 在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中儲(chǔ)量豐富，但價(jià)值未得到深度發(fā)掘。據(jù)估計(jì)，全球纖維素生產(chǎn)量為6600-8800 億噸/年。我國作為農(nóng)業(yè)大國，每年也產(chǎn)生大量的木質(zhì)纖維素?？梢姡举|(zhì)纖維素開發(fā)利用 前景極其廣闊。
[0003] 木質(zhì)纖維素的瓶頸之一就是廉價(jià)、高品質(zhì)生物酶的缺乏。木質(zhì)纖維素的主要成分 包含纖維素、半纖維素和木質(zhì)素，同時(shí)還可能含有少量的果膠、幾丁質(zhì)、硅酸鹽等成分。其 中，纖維素占比約為35-45%，為一類由葡萄糖分子通過β_1，4糖苷鍵連接形成的線狀多 聚葡萄糖?？梢越?jīng)由外切葡聚糖酶、內(nèi)切葡聚糖酶（end〇-i3-l，4-glucana Se，EC3. 2. 1.4) 和β-1，4-葡萄糖苷酶（0-l，4-glucosidase，EC3. 2. 1.21)的連續(xù)作用而降解成容易被應(yīng) 用發(fā)酵工業(yè)的單分子葡萄糖。挖掘在溫和條件下將其水解的生物酶制劑，無論是對(duì)該資源 的開發(fā)，還是對(duì)纖維素加工產(chǎn)業(yè)（紡織、造紙等）的技術(shù)改進(jìn)，具有重要意義。纖維素酶可 以按作用的最適pH條件劃分為酸性纖維素酶和堿性纖維素酶。酸性纖維素酶指作用的最 佳pH條件在酸性范圍的一類纖維素水解酶，目前發(fā)現(xiàn)的主要由一些絲狀真菌，如木霉、根 霉等微生物產(chǎn)生，主要用于纖維素資源開發(fā)研究、飼料工業(yè)，以及紡織工業(yè)對(duì)棉料的表面處 理。此類纖維素酶在商業(yè)化酶中占多數(shù)。
[0004] 而堿性纖維素酶則指在堿性條件下能夠催化裂解纖維素分子的一類水解 酶。目前的研究表明，該類纖維素酶一般只有纖維素內(nèi)切酶，即內(nèi)切-β-1，4葡聚糖酶 (end〇-0-l，4-glucanase，EC3.2. 1.4,簡稱內(nèi)切酶，EG或BGL)的活性，活力用羧甲基纖維 素（CMC)為底物測定，為此也稱之為羧甲基纖維素酶（CMCase)。由于堿性纖維素酶的作用 pH在堿性范圍內(nèi)，與紡織物洗滌條件比較一致，能夠在溫和條件下作用于污漬附著的位點(diǎn)， 卻不會(huì)對(duì)衣物造成損害，所以，該酶類產(chǎn)品目前主要用于洗滌工業(yè)，為加酶洗滌產(chǎn)品的必需 原料。至今為止，能夠產(chǎn)生堿性纖維素酶的微生物多為細(xì)菌菌株，包括芽孢梭菌屬、纖維單 胞菌屬、纖維弧菌屬、混合纖維弧菌、芽孢桿菌屬等的一些菌種，以及牛黃瘤胃梭菌、白色瘤 胃球菌、溶纖維菌，熱纖梭菌、解纖維梭菌、糞堿纖維單胞菌等菌種，國外該類酶的工業(yè)化生 產(chǎn)主要以芽孢桿菌屬的菌株（如Bacillus sp.KSM-635)為發(fā)酵菌種。國內(nèi)的研究受制于 缺乏堿性纖維素酶的高產(chǎn)菌株，鮮有大規(guī)模的發(fā)酵生產(chǎn)，挖掘新的微生物產(chǎn)纖維素酶菌株 仍極為必要。
[0005] 更為重要的是，生產(chǎn)中缺乏既有生產(chǎn)效益又具有環(huán)保附加效益的堿性纖維素酶生 產(chǎn)菌株，可以在降解纖維素的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)環(huán)境污染物的降解。為此，我們進(jìn)行了一系列天然 菌株的篩選工作。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是從自然環(huán)境中分離篩選出一株新的產(chǎn)纖維素酶、具有一定環(huán)保效 益的細(xì)菌菌株。
[0007] 本發(fā)明提供的菌株是從堆肥中樣品中分離得到一株具有纖維素酶生產(chǎn)能力的細(xì) 菌7B。經(jīng)鑒定，該菌株屬于木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans)，因而分類 命名為Achromobacter xylosoxidans 7B。 申請(qǐng)人:于2013年8月8日將其保藏于湖北省武 漢市武漢大學(xué)內(nèi)的中國典培養(yǎng)物保藏中心〔CCTCC〕，編號(hào)為：CCTCC N0:M2013365。
[0008] 本發(fā)明除了要求保護(hù)上述的木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B菌株外，還要求保護(hù)其在發(fā)酵生產(chǎn)羧甲基纖維素酶、制備降解纖維素的生 物酶制劑以及降解水體污染物上的應(yīng)用。
[0009] 所述的發(fā)酵生產(chǎn)羧甲基纖維素酶包括酸性羧甲基纖維素酶和堿性羧甲基纖維素 酶。
[0010] 所述的發(fā)酵生產(chǎn)羧甲基纖維素酶產(chǎn)量最大的條件為：溫度37°C，200rpm下?lián)u瓶培 養(yǎng)約60h。
[0011] 所述的發(fā)酵生產(chǎn)酸性羧甲基纖維素酶的最適作用pH為4. 0 ;所述的發(fā)酵生產(chǎn)堿性 羧甲基纖維素酶的最適作用pH為8. 6。
[0012] 所述的堿性羧甲基纖維素酶的最適反應(yīng)溫度為60°C。
[0013] 所述的水體污染物為乙苯、亞氨基二琥珀酸、硫丹以及工業(yè)COD。
[0014] 本發(fā)明具有的突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步是：
[0015] 本 申請(qǐng)人:從自然界中成功分離篩選出了一種未報(bào)道的能產(chǎn)纖維素酶的新菌株，拓 寬了纖維素酶生產(chǎn)菌株的選擇范圍，有利于推進(jìn)木質(zhì)纖維素降解利用中纖維素酶的進(jìn)一 步優(yōu)化。本發(fā)明所提供的菌株為好氧的短桿狀革蘭氏陽性菌，在LB培養(yǎng)基上形成直徑為 0. 5-1_，光滑、濕潤、有光澤、灰白色、邊緣整齊的菌落。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，該菌株在有氧條件下， pH = 8,培養(yǎng)溫度為30°C時(shí)生長最快。在最適產(chǎn)酶條件下最高酶活可達(dá)0. 183U/mL，且主要 呈現(xiàn)酸性纖維素酶活力。酸性CMC酶的最適作用pH為4. 0,堿性CMC酶的最適作用pH為 8. 6。堿性CMC酶活力為酸性CMC酶活力的70%。所述的菌株對(duì)BTEX、IDS和硫丹的降解 效率在70%以上。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖 1 為木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B CCTCC NO :M2013365 最適生長pH的測定結(jié)果。其中，培養(yǎng)基采用LB培養(yǎng)基；培養(yǎng)條件：有氧條件下，30°C， 200rpm搖瓶培養(yǎng)。
[0017] 圖 2 為木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B CCTCC NO :M2013365 最適生長溫度的測定結(jié)果。注：培養(yǎng)基采用LB培養(yǎng)基；培養(yǎng)條件：pH為7. 2, 200rpm搖瓶培 養(yǎng)。
[0018] 圖 3 為木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B CCTCC NO :M2013365 菌株生長曲線。注：培養(yǎng)基采用LB培養(yǎng)基；培養(yǎng)條件：pH8. 0,30°C，200rpm搖瓶培養(yǎng)。
[0019] 圖 4 為木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B CCTCC NO :M2013365 產(chǎn)纖維素酶的時(shí)間曲線。其中，菌株用培養(yǎng)基含蛋白胨5g/L，酵母抽提物5g/L，NaC15g/L， KH2P04lg/L，MgS04 · 7H202g/L，121°C滅菌 20min，用預(yù)先滅菌的 10% (W/V)Na2C03 溶液調(diào) pH 至8. 0?9. 0,在30°C，200rpm下?lián)u瓶培養(yǎng)，接種量5%，定時(shí)測定發(fā)酵菌纖維素酶活力。CMC 酶活力按QB2583-2003的方法測定，pH為8. 0,以lmin水解CMC-Na底物產(chǎn)生lumol的葡萄 糖殘基所需酶量為1個(gè)酶活單位。
[0020] 圖 5 為木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B CCTCC NO :M2013365 菌株所產(chǎn)纖維素酶的最適作用pH測定結(jié)果。pH3-6用檸檬酸鹽緩沖液，pH7-8用Tris-HCl 緩沖液，pH 9-12使用Gly-NaOH緩沖液。緩沖液的濃度均為0. lmol/L。測定溫度為42°C。 以lmin水解CMC-Na底物產(chǎn)生lumol的葡萄糖殘基為1個(gè)酶活單位。
[0021] 圖 6 為木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B CCTCCN0 :M2013365 菌株所產(chǎn)纖維素酶的最適作用溫度測定結(jié)果。菌株用培養(yǎng)基含蛋白胨5g/L，酵母抽提物 5g/L，NaCl 5g/L，KH2P04lg/L，MgS04 · 7H202g/L，121°C滅菌 20min，用預(yù)先滅菌的 10% (W/ V)Na2C03溶液調(diào)pH至8. 0?9. 0,在30°C，200rpm下?lián)u瓶培養(yǎng)64小時(shí)，接種量5%，然后取 發(fā)酵菌液按QB2583-2003的方法測定纖維素酶的CMC活力。以lmin水解CMC-Na底物產(chǎn)生 lumol的葡萄糖殘基為1個(gè)酶活單位。
[0022] 圖 7 為木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B CCTCC NO :M2013365 菌株所產(chǎn)纖維素酶的耐熱性測定結(jié)果。反應(yīng)pH :8. 0,保溫時(shí)間為4h。
[0023] 圖 8 為木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B CCTCC NO :M2013365 菌株所產(chǎn)纖維素酶受常見金屬離子影響測定結(jié)果。CK :對(duì)照，不加金屬離子；金屬離子濃 度：0· 5% ;酶反應(yīng)溫度：50°C ;反應(yīng)pH :8· 0。
[0024] 圖 9 為木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B CCTCC NO :M2013365 對(duì)污染物的降解能力測定結(jié)果。EB :乙苯；IDS :亞氨基二琥珀酸；ED :硫丹。

【具體實(shí)施方式】
[0025] 實(shí)施例1菌株篩選、分離與鑒定
[0026] 第一步：采樣
[0027] 廣西壯族自治區(qū)南寧市武鳴縣郊堆肥樣品。
[0028] 第二步：初篩、復(fù)篩及純化
[0029] 取樣品lg，加10ml無菌蒸餾水，充分振搖，靜止30分鐘，取上清液稀釋105倍，涂 布接種CMC-剛果紅平板篩選培養(yǎng)基，30°C培養(yǎng)72h至菌落長出，挑取透明水解圈較大的菌 落，接種CMC液體發(fā)酵培養(yǎng)基，37°C，200rpm搖瓶培養(yǎng)24h，測定培養(yǎng)液的堿性CMC酶活力。 選取活力最高的培養(yǎng)瓶，取菌液劃線接種CMC-剛果紅平板篩選培養(yǎng)基培養(yǎng)，純化菌株3次， 最后得到1株產(chǎn)堿性纖維素酶的高產(chǎn)菌株，命名為7B，斜面和冷凍干燥保藏。
[0030] 第三步：菌種鑒定
[0031] 形態(tài)觀察。LB培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌體用革蘭氏染色法進(jìn)行顯微觀察，可見菌株7B為革 蘭氏陰性桿菌。在LB培養(yǎng)基上形成直徑為0. 5-1_，光滑、濕潤、有光澤、灰白色、邊緣整齊 的菌落。如圖1和圖2所示，菌株在有氧條件下，pH = 8,培養(yǎng)溫度為30°C時(shí)生長最快。如 圖3所示，菌株在LB培養(yǎng)基中生長迅速，在約12h即結(jié)束對(duì)數(shù)期，60h 0D_達(dá)到1.5,且在 120h之內(nèi)菌數(shù)不明顯下降。
[0032] BI0L0G微生物鑒定系統(tǒng)的鑒定。用Biolog微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行?；罨木杲?種BUG培養(yǎng)基，接種量5 %，33°C，200rpm培養(yǎng)24-48h，調(diào)整菌液濁度至5%，將菌液加入儀 器的GENIII96孔生化鑒定板，利用儀器的MicroStation讀取鑒定板中各孔的顏色反應(yīng)特 征值，通過ML3DC分析程序與數(shù)據(jù)庫中細(xì)菌的生理生化數(shù)據(jù)進(jìn)行匹配，根據(jù)7B菌株與數(shù)據(jù) 庫菌株之間匹配的概率、相似性和位距對(duì)7B菌株進(jìn)行鑒定。最終將7B鑒定為菌株7B屬 Achromobacter xylosoxidans，其中，概率（Prob)為 0.990,相似性（Sim)為 0.842,距離 (Dist)為2. 129,結(jié)果可靠。
[0033] 基于16s rDNA序列的分子鑒定?；罨杲臃NLB培養(yǎng)基，接種量5%，37°C， 200rpm培養(yǎng)8h至對(duì)數(shù)期，菌數(shù)2X 108/mL以上。取培養(yǎng)液2mL，15000rpmX 10min離心，棄 上清液，菌體用無菌蒸餾水洗滌2次，收集菌體細(xì)胞，使用天根細(xì)菌基因組DNA抽屜試劑盒 提取DNA。以該基因組DNA為模板，采用通用引物27F/1492R，PCR擴(kuò)增菌株的16S rDNA序 列。50yL的反應(yīng)體系含PCR緩沖液5yL，正、反向引物各lumol/L，Mg2+2. 5mmol/L，dNTP 0. 02mmol/L，Taq DNA 聚合酶 1. 25U。反應(yīng)條件為：95°C變性 5min ;94°C變性 30s ;55°C退 火30s ;72°C延伸lmin，30個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸10min。PCR產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳檢 測、分離，然后用Agarose Gel DNA Purification Kit試劑盒切膠回收，用T41igase連接到 PMD-18T載體上。將帶有目的片段的載體通過轉(zhuǎn)化E. coli DH5 α菌株擴(kuò)增培養(yǎng)后，選擇陽 性克隆提取質(zhì)粒交上海生工測序。將測序得到的16s rDNA序列用NCBI的BLAST2. 0進(jìn)行 同源分析（Nucleotide-Nucleotide Blast)，搜索Genbank核酸數(shù)據(jù)庫，根據(jù)比對(duì)結(jié)果對(duì)菌 株進(jìn)行分子鑒定。發(fā)現(xiàn)其與JQ923444. 1 -種木糖氧化無色桿菌有99%以上的相似度，因此 將其鑒定為氧化木糖無色桿菌Achromobacter xylosoxidans。
[0034] 綜上，最終將該菌株鑒定為Achromobacter xylosoxidans。所得的16s rDNA序列 如序列表1所示。
[0035] 實(shí)施例2菌株產(chǎn)纖維素酶水平檢測
[0036] 根據(jù)圖1和圖2所示的生長的最適溫度和pH，將菌株7B接種CMC發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)， 繪制產(chǎn)酶曲線，結(jié)果如圖4所示。粗酶液制備方式為：活化菌株接種CMC發(fā)酵培養(yǎng)基，30°C， 200rpm培養(yǎng)48h，取培養(yǎng)液，4°C下4000rpm離心10min，取上清液，加55 %的（NH4) 2S04沉淀， 4°C，lOOOOrpm離心10min，收集沉淀,加入培養(yǎng)液同體積的pH 8. 0,0· lmol/L的Tris-HCl 緩沖液溶解。以CMC鈉鹽為底物，測定纖維素內(nèi)切酶的活力，即CMC酶活力。酶反應(yīng)體系含 粗酶液 〇· 5ml，CMC 鈉鹽 1%，0· lmol/L 的 Tris-HCl (pH 8. 0)緩沖液 2. 0ml。50°C水浴反應(yīng) 60min，立刻用DNS法測定CMC水解所釋放的葡萄糖量。以lmin水解CMC-Na底物產(chǎn)生lumol 的葡萄糖殘基所需酶量為1個(gè)酶活單位。
[0037] 結(jié)果顯示該菌株的纖維素酶生產(chǎn)為同步發(fā)酵性。28h時(shí)產(chǎn)酶達(dá)到最高值為 0. 183U/mL，并在此后穩(wěn)定的逐步降低。
[0038] 將反應(yīng)液的 pH用緩沖液調(diào)為 3· 0、4· 0、5· 0、6· 0、7· 0、8· 0、9· 0、10· 0、11· 0 和 12. 0， 測定不同pH下的CMC酶活力，用百分比表示測定結(jié)果。所用緩沖液分別為：pH 3-6用檸檬 酸鹽緩沖液，PH7. 0-8. 0用Tris-HCl緩沖液，pH 9-12使用Gly-NaOH緩沖液。緩沖液的濃 度均為0. lmol/L。通過此操作測定酶液的最適作用pH。結(jié)果如圖5所示，該菌株所產(chǎn)的纖 維素酶既有酸性CMC酶的活力，又有堿性CMC酶的活力。酸性CMC酶的最適作用pH為4. 0， 堿性CMC酶的最適作用pH為8. 6。堿性CMC酶活力為酸性CMC酶活力的70%。
[0039] 依據(jù)以上方法分別測定酶液的最適作用溫度、耐熱能力和金屬離子對(duì)酶液的作 用。發(fā)現(xiàn)菌株所產(chǎn)堿性CMC酶活力的最適作用溫度為60°C，溫度低于55°C或高于65°C時(shí)酶 活力均迅速下降，如圖6所示，可見該酶液的作用溫度范圍非常窄。通過將酶液在50°C下 保溫測定酶液的耐熱能力，結(jié)果如圖7所示，可見酶活呈線性下降，保溫lh酶活力下降超過 35%，保溫3h殘留酶活只有22%，而保溫4h酶活殘留低于15%，表明該菌株所產(chǎn)的堿性纖 維素內(nèi)切酶的熱穩(wěn)定性較差。在測定酶活力時(shí)加入0.5%的各種金屬離子，觀察金屬離子對(duì) 菌株1A所產(chǎn)堿性CMC酶活力的影響，結(jié)果如圖8所示，可見，Co 2+、Mn2+、Ca2+3種離子對(duì)酶活 有促進(jìn)，（：〇 2+和此2+分別使酶活力提高6.7(%和7.1(%。1( +、1%2+和附+3種離子對(duì)酶活力稍 有抑制，K+和Ni+加入酶反應(yīng)體系后分別使酶活力降低了 4. 7%、4. 4%。Fe2+和Na+對(duì)酶的 活力幾乎沒有影響。而Cu2+對(duì)菌株所產(chǎn)堿性CMC酶具有明顯的抑制作用，使酶活力顯著降 低了 46%。
[0040] 實(shí)施例3對(duì)BTEX和難降解螯合劑的處理
[0041] 本實(shí)施例在實(shí)驗(yàn)室水平進(jìn)行。采用2% CMC纖維素的10倍稀釋LB培養(yǎng)基模擬富 含有機(jī)質(zhì)的污水水體。分別以：添加〇. 02%的乙苯模擬BTEX污染的工業(yè)廢水；添加0. 1% IDS (亞氨基二琥珀酸）模擬難降解螯合劑污染水體；添加0. 1 %的硫丹模擬難降解農(nóng)藥污 染水體。實(shí)驗(yàn)采用l〇〇mL培養(yǎng)液，接種量1 %，30°C，轉(zhuǎn)速180rmp搖瓶培養(yǎng)48小時(shí)。每4小 時(shí)采樣檢測殘留COD與污染物。其中，乙苯殘留量的測定采用正己烷萃取+氣象色譜分析 法，其中色譜柱為HP-Innoax毛細(xì)管柱，柱溫90°C，柱流量lmL/min，載氣為N 2 ;C0D測定采 用重鉻酸鉀氧化法；IDS殘留測定采用350nm分光光度法。硫丹殘留采用硫丹酶聯(lián)免疫檢 測試劑盒（天津生物新品技術(shù)公司）測定。
[0042] 通過圖9可以看出，經(jīng)過48h的培養(yǎng)，COD(Cr)降至約500mg/L的水平，清除率為 85% ;乙苯清除率82% ;IDS清除率為78.8% ;硫丹的清除率為73. 3%。由于以上污染物 均為自然污染（土壤和水體）中較難清除的，而本菌株可以在48h的培養(yǎng)時(shí)間里清除70% 以上的污染物，具有較好的環(huán)境友好性。
【權(quán)利要求】
1. 一種木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B，其保藏編號(hào)為CCTCC NO ：M2013365〇
2. 權(quán)利要求1所述的木糖氧化無色桿菌（Achromobacter xylosoxidans) 7B在發(fā)酵生 產(chǎn)羧甲基纖維素酶、制備降解纖維素的生物酶制劑以及降解水體污染物上的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的水體污染物為乙苯、亞氨基二琥珀 酸、硫丹以及工業(yè)COD。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的發(fā)酵生產(chǎn)羧甲基纖維素酶包括酸 性羧甲基纖維素酶和堿性羧甲基纖維素酶。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的酸性羧甲基纖維素酶的作用pH為 4. 0 ;所述的堿性羧甲基纖維素酶的作用pH為8. 6。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的堿性羧甲基纖維素酶的反應(yīng)溫度 為 60。。。
【文檔編號(hào)】C12N9/42GK104232522SQ201410431833
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年8月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月28日
【發(fā)明者】蘆志龍, 陳東, 張穗生, 吳仁智, 陸琦, 黃日波 申請(qǐng)人:廣西科學(xué)院