一種酶法制備11a,17a-二羥基-孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種酶法制備 11A,17A- 二羥基 - 孕甾 -1,4- 二烯 -3,20- 二酮的方法，將底物 11A,17A- 二羥基 - 孕甾 -1- 烯 -3,20- 二酮、 3- 甾酮 -1- 脫氫酶、甲萘醌、助溶劑加入到 pH8~11 的水相緩沖溶液中，在溫度 30~50 ℃下，攪拌反應(yīng)，得到 11A,17A- 二羥基 - 孕甾 -1,4- 二烯 -3,20- 二酮；其中，在起始反應(yīng)體系中，底物的濃度為 5~10g/l ； 3- 甾酮 -1- 脫氫酶的投料量是底物質(zhì)量的 0.5~4 倍，助溶劑為選自二甲基亞砜、聚乙二醇 -400 及吐溫 -60 中的一種或多種的組合。本發(fā)明反應(yīng)的底物濃度可達(dá) 10g/L ，在 3 小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)化率最高可達(dá) 99% ，產(chǎn)品收率高，質(zhì)量好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】-種酶法制備11 A, 17A-二羥基-孕甾-1,4-二烯-3, 20-二 酮的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物制藥和生物化工【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種酶法制備11A, 17A-二 羥基-孕留-1，4-二烯-3, 20-二酮的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 由化合物I :11A-羥基孕留-1,4-二烯-3-酮，其結(jié)構(gòu)式為

【權(quán)利要求】
1. 一種酶法制備11A，17A-二羥基-孕甾-1，4-二烯-3, 20-二酮的方法，其特征在于： 將底物11A，17A-二羥基-孕甾-1-烯-3, 20-二酮、3-甾酮-1-脫氫酶、甲萘醌、助溶劑加入 到pH 6. 5~11的水相緩沖溶液中，在溫度15°C?50°C下，攪拌反應(yīng)生成所述的11A，17A-二 羥基-孕甾-1，4-二烯-3, 20-二酮，反應(yīng)時(shí)間為3~24小時(shí)，轉(zhuǎn)化率為1(Γ99%，其中， 在起始反應(yīng)體系中，所述底物的濃度為5~10g/l ; 所述的3-留酮-1-脫氫酶的投料質(zhì)量是所述底物質(zhì)量的0. 5~4倍； 所述的助溶劑為選自二甲基亞砜、聚乙二醇-400及吐溫-60中的一種或多種的組合， 助溶劑的投料體積為反應(yīng)體系總體積的29Γ50%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備11A，17A-二羥基-孕甾-1，4-二烯-3, 20-二酮的 方法，其特征在于：所述甲萘醌與所述的底物的投料質(zhì)量比為1:1~1〇。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備11A，17A-二羥基-孕甾-1，4-二烯-3, 20-二酮的 方法，其特征在于：所述的助溶劑為二甲基亞砜，其投料體積為反應(yīng)體系總體積的99Γ11%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備11A，17A-二羥基-孕甾-1，4-二烯-3, 20-二 酮的方法，其特征在于：所述的溶劑為聚乙二醇-400,其投料體積為反應(yīng)體系總體積的 10%?50%。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備11A，17A-二羥基-孕甾-1，4-二烯-3, 20-二酮的 方法，其特征在于：所述的溶劑為吐溫-60,其投料體積為反應(yīng)體系總體積的2. 59Γ10%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備11A，17A-二羥基-孕甾-1，4-二烯-3, 20-二酮的 方法，其特征在于：所述的水相緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩 沖溶液。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的酶法制備11A，17A-二羥基-孕甾-1，4-二烯-3, 20-二 酮的方法，其特征在于：所述的水相緩沖溶液的pH為8~9. 5。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備11A，17A-二羥基-孕甾-1，4-二烯-3, 20-二酮的 方法，其特征在于：使所述反應(yīng)在溫度30°C?45°C下進(jìn)行。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備11A，17A-二羥基-孕甾-1，4-二烯-3, 20-二酮 的方法，其特征在于：采用HPLC/MS監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，當(dāng)檢測轉(zhuǎn)化率為大于等于99%時(shí)，結(jié)束 反應(yīng)，以硅藻土過濾，收集濾餅，濾餅用甲醇洗滌，過濾，收集濾液，40°C?45°C條件下減壓蒸 餾有機(jī)相至干燥，得白色固體，將所述白色固體用去離子水洗滌，過濾，收集濾餅，室溫下溶 于丙酮中，滴加去離子水，攪拌，析出白色固體，過濾，干燥即得所述11A，17A-二羥基-孕 留 -1，4_ 二稀 _3, 20-二麗。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備11A，17A-二羥基-孕留-1，4-二烯-3, 20-二酮 的方法，其特征在于：所述的3-留酮-1-脫氫酶為重組蛋白，來源于微生物。
【文檔編號(hào)】C12P33/02GK104263791SQ201410464478
【公開日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月12日
【發(fā)明者】梁曉亮, 李國慶, 唐園園 申請(qǐng)人:蘇州漢酶生物技術(shù)有限公司