一種開發(fā)小麥親緣物種特異分子標(biāo)記的方法及應(yīng)用的制作方法【專利摘要】本發(fā)明屬于作物遺傳育種與農(nóng)業(yè)生物【
技術(shù)領(lǐng)域：
】，提供一種用于開發(fā)小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的標(biāo)記引物和方法，及該標(biāo)記引物和方法的應(yīng)用。本發(fā)明共提供了157對引物對，經(jīng)過引物對擴(kuò)增后的百薩偃麥草特異片段，全部定位于百薩偃麥草染色體上，說明該引物對的特異性；同時，通過本發(fā)明提供的百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的開發(fā)方法獲得的特異擴(kuò)增片段在百薩偃麥草中的多態(tài)率高達(dá)40.2％，說明本方法的可行性。本發(fā)明通過157對引物獲得182個定位于百薩偃麥草染色體的分子標(biāo)記，數(shù)量大，為從中發(fā)掘百薩偃麥草有益性狀基因進(jìn)而將有利基因通過分子標(biāo)記輔助選擇轉(zhuǎn)移到栽培小麥中提供了便利?！緦＠f明】一種開發(fā)小麥親緣物種特異分子標(biāo)記的方法及應(yīng)用【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明屬于作物遺傳育種與農(nóng)業(yè)生物【
技術(shù)領(lǐng)域：
】，涉及一種用于開發(fā)小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的標(biāo)記引物和方法，及該標(biāo)記引物和方法的應(yīng)用?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]小麥親緣物種中蘊(yùn)含豐富的有利基因，是小麥遺傳改良的重要基因資源。遠(yuǎn)緣雜交和染色體工程技術(shù)是轉(zhuǎn)移和利用小麥親緣物種有利基因的主要途徑。小麥親緣物種特異分子標(biāo)記的開發(fā)有助于加快外源染色體中的有益基因向小麥轉(zhuǎn)移和利用。[0003]基于PCR(polymerasechainreaction)的分子標(biāo)記具有簡單、有效和經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，在分子標(biāo)記輔助選擇中得到廣泛應(yīng)用。目前，小麥親緣物種基于PCR的染色體特異分子標(biāo)記的開發(fā)主要通過三個途徑，一是利用小麥中已經(jīng)開發(fā)的標(biāo)記直接在親緣物中通過擴(kuò)增篩選，獲得小麥親緣物種特異標(biāo)記（見參考文獻(xiàn)：陳華鋒，錢保俐，莊麗芳，陳全戰(zhàn)，馮祎高，裴自友，亓增軍，陳佩度，劉大鈞.普通小麥中國春-百薩偃麥草異染色體系的分子標(biāo)記分析·作物學(xué)報，2007,33:1232-1239;ZhangJ-Y,LiX-M,WangRichardR.-C.,CortesA.,RosasV.andA.Mujeebi-Kazi.MolecularcytogeneticcharacterizationofEb-genomechromosomesinThinopyrumbessarabicumdisomicadditionlinesofbreadwheat.PlantSci，2002,163(I):167-174);二是利用已經(jīng)公開發(fā)表的小麥EST(expressedsequencetag)序列，通過比對分析，然后根據(jù)保守性區(qū)段設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增可變區(qū)開發(fā)的物種特異標(biāo)記（DanielJ.Mullan,AmandaPlatteter,NatashaL.Teakle,RudiAppels,TimothyD.Colmer,JosephM.Anderson,andMichaelG.Francki,EST-derivedSSRmarkersfromdefinedregionsofthewheatgenometoidentifyLophopyrumelongatumspecificloci.Genome,2005,48:811-822);三是基于基因組測序?yàn)榛A(chǔ)開發(fā)的物種特異標(biāo)記（見參考文獻(xiàn)：陳士強(qiáng)，秦樹文，黃澤峰，戴毅，張璐璐，高營營，高勇，陳建民.基于SLAF-seq技術(shù)開發(fā)長穗偃麥草染色體特異分子標(biāo)記.作物學(xué)報，2013,39(4):727-734)。[0004]隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展，通過轉(zhuǎn)錄組測序可以迅速獲得小麥親緣物種大量的基因EST序列，同時隨著越來越多的小麥基因組序列數(shù)據(jù)的公布，通過比對分析可以從小麥親緣物種的轉(zhuǎn)錄組序列中篩選獲得這些物種特異的EST序列，從而為設(shè)計(jì)該物種特異分子標(biāo)記提供了可能。但是，經(jīng)過檢索，并沒有發(fā)現(xiàn)通過高通量測序?qū)π←溣H緣物種百薩偃麥草的特異分子標(biāo)記進(jìn)行篩選研究。而百薩偃麥草由于具有強(qiáng)耐鹽、磷高效、抗病、分蘗強(qiáng)等多種優(yōu)良性狀，如果能利用其基因進(jìn)行小麥改良，對拓展栽培小麥遺傳基礎(chǔ)、培育高產(chǎn)耐逆品種具有重要的應(yīng)用潛力?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0005]本發(fā)明的目的在于公開一種開發(fā)小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的標(biāo)記引物和方法，為接下來其他小麥親緣物種特異分子標(biāo)記的開發(fā)提供指導(dǎo)。[0006]同時，通過本發(fā)明提供的標(biāo)記引物和方法獲得百薩偃麥草特異分子標(biāo)記，為將百薩偃麥草的優(yōu)良基因向小麥轉(zhuǎn)移提供便利。[0007]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：[0008]本發(fā)明提供一種用于開發(fā)小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的標(biāo)記引物，其序列如下所示：[0009]I)lfzl725:上游引物TGGCTTTGTCATTGCCAGT;下游GCCATAACGGAGATCTGGAG;[0010]2)Ifz1728:上游引物CGCAGTCAAATCAAATGGAA;下游引物CTCCAGCTCGACGGAAGC;[0011]3)lfzl730:上游引物TTGAACCCCGACTTTTTCAG;下游引物ATGTACCTCACCTCCCATGC;[0012]4)Ifz1731:上游引物CGCGATGAATAGTTTGAGCA;下游引物GACAGCGAAITTGGAGAAGC;[0013]5)Ifz1743:上游引物GATGTGTTTGTGCAGGTTGG;下游引物TGGGTTCAGGGAAGGATATG;[0014]6)Ifz1745:上游引物GTCAGCACGACCACCTGTT;下游引物CCGGCGTCAGATGATAGAG;[0015]7)Ifz1747:上游引物GAGAGGCTTGAGCCAATCAG;下游引物AATTCTGTCCTGGGCAACAC;[0016]8)Ifz1751:上游引物ATGCATATGCGTCCAACTGA;下游引物ACAAGACCGAGGCTGAGATG;[0017]9)Ifz1754:上游引物GAGAAGGGGCAAAATGGAAT;下游引物CTAATGGCATGGTGGTGTTG;[0018]10)lfzl755:上游引物ACACCCCAGCTGCAACTAAC;下游引物GTGAGGAGAAGGAGCAAGCA；[0019]11)lfzl756:上游引物ATGAGCACGTGAGACTGTGG;下游引物CAGGCCTCTTTGCCTCATAG；[0020]12)lfzl757:上游引物TCACAGGAAACACCATCAGG;下游引物TTGAGTGGGTACACGATTGC；[0021]13)lfzl758:上游引物GATTGAGGGAACGAGCAAGA;下游引物TGATCGATCTGACCACCAAA；[0022]14)lfzl759:上游引物AGTTGGCTTGGGTCAGATTG;下游引物TGTAGGAGGCTCGCTCAAAT；[0023]15)lfzl762:上游引物GGCCTTGTGGTAACTCCAAA;下游引物AAGCTGCCTGACGACATTCT；[0024]16)lfzl763:上游引物TTTCACCGTTTGCATTAGCA;下游引物GAAGTGGCTTTTCCATCCAA；[0025]17)lfzl767:上游引物ACTGGCTAGCACACCGACTT;下游引物CTGTGTGCTGGTTGCCTCTA；[0026]18)lfzl781:上游引物CACGTTCCATGATGTTGGTC;下游引物CCACGATCATATGCCTCCTT；[0027]19)lfzl783:上游引物CATGGAAGGCTTGAAATGGT;下游引物CCGGGTGAGTTGAGTTTGAT；[0028]20)lfzl784:上游引物GATGCCCCTAACAAGACGAA;下游引物ATGTCGGAGATCAGGTGGAC；[0029]21)lfzl790:上游引物GGATCAAGGAAGAAAGGTTGC;下游引物CTCCAACACGATGGAGGTCT；[0030]22)lfzl793:上游引物GCCACCAGAAGGATCTTGAC;下游引物CATAGCCCCTTAGCTCGTTG；[0031]23)lfzl797:上游引物TACGACTGAAGCAAGCATCG;下游引物AGGGAAACCTCCACACTTCC；[0032]24)lfzl799:上游引物CCCAAATTCCCCATTTCTCT;下游引物GGAGATGGGAGTGACCTCAA；[0033]25)lfzl804:上游引物CACGCAATTCATCGAACACT;下游引物GTATCCATAGCTGCGCCAAT；[0034]26)lfzl806:上游引物TCATCCACAAAATGGCAAAA;下游引物TTCCTCAAGTCCCACCAAAG；[0035]27)lfzl808:上游引物ATTGAACCGGTGAGAGATCG;下游引物CGATCTGCGTCTTCCCTCTA；[0036]28)lfzl809:上游引物CCACGATGGGATCAGTTACC;下游引物GCTACTTGCGTGCAACACAT；[0037]29)lfzl810:上游引物ATCGCCAGCCTCTTGAGTT;下游引物CGACACAGCAGACCATCAGT;[0038]30)lfzl816:上游引物CGGAAGGTTGCTGATGAGAT;下游引物GGCACCCACAGTCAAAAAGA；[0039]31)lfzl817:上游引物ATGACACTCACCTGCCTTCC;下游引物TTCTGGCAAACCACGTCATA；[0040]32)lfzl820:上游引物CTTCATGGCACGTACGGTTA;下游引物ATTCCACGCATCTTGAACCT；[0041]33)lfzl821:上游引物ATGAACGGGAAGTGTCGAAG;下游引物GAGGACGGTTGTAGCAAGGA；[0042]34)lfzl822:上游引物GCATCTCTGGCCTTGTCTTC;下游引物GACGGCACACTCCTCCTAGA；[0043]35)lfzl826:上游引物AGAGTGACACCGTCCGTGA;下游引物CTCCAGTCTCCCGACCTTAG;[0044]36)lfzl829:上游引物GGTGGGTATACAGCGGAGAA;下游引物GTGCTACACCGAGCCATTTT；[0045]37)lfzl836:上游引物GATATCTGCCGGTGACGAAC;下游引物CAGAGAAACACAGCAAAGCTGA；[0046]38)lfzl838:上游引物CCTGAACAAGAACCCTCCAA;下游引物AATAATACCCCCGGCTTCAG；[0047]39)lfzl841:上游引物TCCTTTCTCACTGCCCATTC;下游引物TCATGAGTGCGGTTCATCTC；[0048]40)lfzl850:上游引物TTTTTCCCTTGTGGCTTTTG;下游引物GATGCCTACCTCCCAGACAA；[0049]41)lfzl852:上游引物CAAATCCCAAGGCAGTCCTA;下游引物CTTGCCACCAATCACCTCTT；[0050]42)lfzl853:上游引物CTCGCAGAGAAGGTGGAGAC;下游引物CACCTTCGAATCCCTTGAAA；[0051]43)lfzl857:上游引物AGTCGCCGGTACGATGTAGT;下游引物ACGCTTCCTCCAGAGAGAGA；[0052]44)lfzl859:上游引物TGCCGAAGACTGAGCACTAA;下游引物TCGCCTTCTACAGTCCAGGT；[0053]45)lfzl866:上游引物TTGAGGCTCTCCCGTAAGAA;下游引物GCCCCCAGAAAGAAAGAAAA；[0054]46)lfzl876:上游引物CTGCGGTATAGGGTGACACA;下游引物GCTACTTGTTGGGCCTGAAG；[0055]47)lfzl877:上游引物TGGACAGCCTGAACATGAAG;下游引物CGCAGATGAAGATGCCCTAC；[0056]48)lfzl879:上游引物AAGAGGAGGAGCCCAGGTAG;下游引物CACGGATTCGAACTCCACTT；[0057]49)lfzl880:上游引物GCCTGGATGAAATGGAGAAA;下游引物TAGCACTGTCCAGCGATTTG；[0058]50)lfzl882:上游引物CAGGGACTTTCCTTCGATCA;下游引物GCACTGCCTTTCTCAAGGTC；[0059]51)lfzl883:上游引物GGTTGATGGGAGATGCAGAA;下游引物GGCCGACAGTATAGCTCCTG；[0060]52)lfzl884:上游引物GACAGTGACCTCGATGAGCA;下游引物AAACCATGTTTGTCGGCATT；[0061]53)lfzl886:上游引物TGAAAGTTGTAGCGCCAGTG;下游引物ACCAGAGTCGTCATCCATCC；[0062]54)lfzl899:上游引物GCTAGGTTATGCCGAAGACG;下游引物CCTCCATCTCCCATGGAGTC；[0063]55)lfzl900:上游引物GCCAAGCACATCACTCTGAA;下游引物GCGACTACATGTACCGCAAA；[0064]56)lfzl901:上游引物CATTGTCCATCCAATGAGGA;下游引物GCGACTACATGTACCGCAAA；[0065]57)lfzl906:上游引物CCACTGCATCCATCTTCCTT;下游引物GCCTTCTCTTCCATGCTTCTT；[0066]58)lfzl907:上游引物GTCCTCGATGCAGAGGAATC;下游引物TTTGCTTCACCTCCTCGTCT；[0067]59)lfzl908:上游引物GCTGGCTTGGAGCTATGTTC;下游引物TACCATCAGCCTTGGTCCTC；[0068]60)lfzl913:上游引物TCAAGTGCAGACTTGCGAAC;下游引物AAAATGGAACTGGGGGAAAC；[0069]61)lfzl914:上游引物AAGCGTACCTTCTGCAAGGA;下游引物TTTTTCGTGGCAAAGATGATT；[0070]62)lfzl917:上游引物CTCCAGCAGGTTCTCGATGT;下游引物TGTTTATCCCCTGGTTCTGG；[0071]63)lfzl920:上游引物CGACAAATGCCAGAGAGTGA;下游引物ACTGCTACGTCGCTGACCTC；[0072]64)lfzl922:上游引物TCCTTGCAGACAAGCTGGAT;下游引物CTTTGGTGTCCCCGAAATC;[0073]65)lfzl923:上游引物ATGGAAGACCGTTGAGGTTG;下游引物CTCCAACCACCTTCTTGCAC；[0074]66)lfzl924:上游引物CACCGTTCTTTGGCTATGGT;下游引物CTGATTTCTGGGTTGCTGCT；[0075]67)lfzl934:上游引物TTGCAGTACCATCGCAAAAG;下游引物GCAGCCAGATGTCTGTCCAT；[0076]68)lfzl936:上游引物ACCGCAGAATCAACAGGAGT;下游引物GCCCTCCCTTGCTTTACTTT；[0077]69)lfz2213:上游引物AATAACAAACGGCAGGAACG;下游引物AGCCACGATCAACGATAAGG；[0078]70)lfz2214:上游引物CTCGCTAGTCGGGAAGGAG;下游引物CGGACATGGACAGAGATGGT;[0079]71)lfz2215:上游引物CTCAGACGGGAGGAAGACAG;下游引物ATCGAGTACTTCCCGCTCCT；[0080]72)lfz2220:上游引物GCAGCATTCAGCAAAAATCA;下游引物ATTGGGGAGGTAGGATGAGG；[0081]73)lfz2221:上游引物GGGATGGTTGCTTGTGAAAC;下游引物TCAATTTCATTGCCCAGACA；[0082]74)lfz2222:上游引物GGCCACGCCTCTGAGTTAC;下游引物AGAGGCCTAGGTGGCTCATT;[0083]75)lfz2225:上游引物TTGAGTGAGCATCGATGGAG;下游引物CCTGAAATCGCAGCACTGTA；[0084]76)lfz2226:上游引物ACTGGAACGATGAGGACTGC;下游引物TGTCACAACCATCATGAGCA；[0085]77)lfz2228:上游引物CGTCATCACTGCGAGAAGAA;下游引物GCACGTCCACATACATTTGC；[0086]78)lfz2229:上游引物CTCCGACCTTGACTCCTCTG;下游引物TGTCTACCGAGTTGCTCACG；[0087]79)lfz2232:上游引物ACTTACACATGGGGCACACA;下游引物AATGAGGAAGGCATCCATTG；[0088]80)lfz2233:上游引物TCCCAAGGTGACCATTTTGT;下游引物GAAACGGTTGCTGTGAAGGT；[0089]81)lfz2235:上游引物GAGCTCACCGAGTGGTTCTG;下游引物TTGTGGTGGAGGTACACGAA；[0090]82)lfz2237:上游引GACCGAACGATTTGATCCAC;下游引物CGAAAATAAAACCGCAGGAG;[0091]83)lfz2240:上游引物CACGCCCAGACTCAGATACA;下游引物AAGGAATGATCCTCGACCAA；[0092]84)lfz2241:上游引物GGATTGACAAGAGGCAGGAA;下游引物GAAACAGGGGAAGGAAGGAG；[0093]85)lfz2244:上游引物CAAAATCCTGCAACCCTGAT;下游引物CTCTTCATAGGCCGCTTCAG；[0094]86)lfz2247:上游引物GGGATCTGATTTTCGAGTGC;下游引物GACGAAAGGAAAACGGAACA；[0095]87)lfz2249:上游引物ACATTGGAGGAACCCATCCT;下游引物GCAGCCGCCAAATTAGAT;[0096]88)lfz2254:上游引物GGCCGTGAAGTAATGATGGT;下游引物TTAGCAGATTTGCCCACCTC；[0097]89)lfz2256:上游引物GGCTTTGTGAACCGATTGAG;下游引物GAGGGCTTTATGCTCGTCTG；[0098]90)lfz2257:上游引物GGCTTTGTGAACCGATTGAG;下游引物GAGGGCTTTATGCTCGTCTG；[0099]91)lfz2258:上游引物TCCCAACAGCTGCCTTAGTC;下游引物CTTTCTCTCCCCGTCTCCTT；[0100]92)lfz2263:上游引物GCAAGATCCCCCATCAGTTA;下游引物CAGCCACTCCATTACCCAGT；[0101]93)lfz2264:上游引物ACCCGAAAATAGGGGAGAAA;下游引物CCCTGAATTCACTCCTCTGC；[0102]94)lfz2267:上游引物CATCCAGATCTCCGGCTAGA;下游引物ATTTTCGCACACACTCCACA；[0103]95)lfz2268:上游引物ACGTCTGGCGAACAATTACC;下游引物AGGGCACTGCGTAGATGAAG；[0104]96)lfz2274:上游引物TGGAGGAGGTAGTGGATTCG;下游引物ATGGAGGAAGGACGTGTGAG；[0105]97)lfz2281:上游引物GCAGTGGAAGATGAGGTGGT;下游引物GCGTGTGTGCTTCTTCATGT；[0106]98)lfz2282:上游引物TTTGGGGGATTCGTCCTAGT;下游引物CGTAGCCGGAAGACAGACTC；[0107]99)lfz2283:上游引物GGGGATAAGCAGCAGAGACA;下游引物TACGAGGCTGGGTCCTCTAA；[0108]100)lfz2287:上游引物CTTCTCCCCCTTGAGAGTCC;下游引物ACGACAGGGAGGAATGAATG；[0109]101)lfz2296:上游引物GAAGCTGCGGCTACTCAATC;下游引物GGTATCAACTGTAACTCTT；[0110]102)lfz2304:上游引物AAGCCTTATGGGAGGCAGTT;下游引物GAACCCCAAGGATCCTGAAT；[0111]103)lfz2306:上游引物CCTTATCCAATCCCGTCTCA;下游引物CCGCACTTGACTGCTACAGA；[0112]104)lfz2308:上游引物TCACACGAACCAACGAGAAC;下游引物TACTGGAACATGGGCCTAGC；[0113]105)lfz2310:上游引物CTTGCTTCTCCCACTTGCTC;下游引物TTTGATGGGCTTTGGTTAGG；[0114]106)lfz2314:上游引物GGCTGTCGTACTGGACGAAT;下游引物CCAGTGGCATCAGTCCATC；[0115]107)lfz2318:上游引物GGGTTGCTGAGTCCACTGAT;下游引物CTCGGGGATCATTCAAGAAA；[0116]108)lfz2322:上游引物TCATGGCTCACATGGCTATC;下游引物ACAATTGGGACCATCCAAAA；[0117]109)lfz2325:上游引物TCGATCACCCACAAGAACAA;下游引物AGAGAGCGGACGTGTTCAGT；[0118]110)lfz2326:上游引物CTGCTGAAACTCCCCAAGAC;下游引物CGGCGTGTACATAGCATAGG；[0119]111)lfz2327:上游引物GTGGCTCGATGACGAATACC;下游引物TGCTGTGTTCTCCTCCCTTT；[0120]112)lfz2330:上游引物ATCGGAGAGCTTCTGTTCCA;下游引物ATTTGGTGGCCTTCACTGTC；[0121]113)lfz2335:上游引物CTAGTCCCAGCGCCTAACAA;下游引物TAAAATCGGCCTCATCCTTG；[0122]114)lfz2336:上游引物ACACAGTGGGAAGTGGGAAG;下游引物CTCTAGTCGCACGGTCTGGT；[0123]115)lfz2337:上游引物GACGGAAGGTTGGACAAAAA;下游引物TTCCTCCTCCCTTCCACTCT；[0124]116)lfz2339:上游引物GCCTTTGCCTAGCCTAGCTT;下游引物CAGCCACCCTCAGGTGTTAT；[0125]117)lfz2340:上游引物TGTCTCTGGCGAGTTTCTGA;下游引物AGCAATCCAGTCCTCGTCAC；[0126]118)lfz2341:上游引物TTTCCATGTCAAGGTGGTCA;下游引物CACCAACACAACGACACCTC；[0127]119)lfz2342:上游引物GTGGCCCTTTCCTTCTCTCT;下游引物ACCAGAAGGTCCCAGAGGAT；[0128]120)lfz2343:上游引物TCTTCTTCCTCACGCCCTTA;下游引物GCTCGAGTCCGTAGAAGTGG；[0129]121)lfz2344:上游引物GCTTAACGCTTCTGGTCGTC;下游引物GCCGCTAGTGTAGCAGGTCT；[0130]122)lfz2345:上游引物GCGAATCGTTACACGGAAAT;下游引物TCGGTGAGGTGAAAGGTCTC；[0131]123)lfz2346:上游引物CAGACTCAGCAGACCAACCA;下游引物CATCTCCACCCAATGGTTTT；[0132]124)lfz2349:上游引物CCGTGGCAATAAGAGGAAAA;下游引物CTTGATTTCAGCAGGCTTCC；[0133]125)lfz2352:上游引物AGCCAGGAGTTGGTGCTCTA;下游引物ATGCGAACGAGGATCAAAAG；[0134]126)lfz2354:上游引物ACGGACTCTTCTCCCTCCAT;下游引物TAGTGCAGCATCCGTTCTTG；[0135]127)lfz2358:上游引物GCTGCAGCCACCTTATTCTC;下游引物AACCCCGGATCTATGTTTCC；[0136]128)lfz2375:上游引物CCCACACCACTCCTTCAACT;下游引物TTTGACCTCGGTTTGTCCTC；[0137]129)lfz2386:上游引物TGTAGAATCCTTGGGCCATC;下游引物TTGCACTTTCTGTGGCATGT；[0138]130)lfz2393:上游引物AGAAGATTGCTGAGGGCAAA;下游引物CCATTGAGGCGCTGAATTAT；[0139]131)lfz2394:上游引物GACGAGGATTCTGCATGGTT;下游引物CCCTCATCCTTCAAGTCCAA；[0140]132)lfz2395:上游引物AAAAGGCTCCTCACAAGCAA;下游引物CAACGAGCTTGATGCTGAAA；[0141]133)lfz2396:上游引物GACGAAGAAGAGGCAAGGTG;下游引物TCTCCCTCATCTCGGTTCTC；[0142]134)lfz2403:上游引物TGCAGCTACTGCAATCAAGG;下游引物ATTTTGCTGTGGGCTGTAGG；[0143]135)lfz2405:上游引物TGTAGAAGCAGGGGGAGTTG;下游引物CCAGCAGTTCATCACCTGAA；[0144]136)lfz2406:上游引物TGGAGACAGTGAGGCTGTTG;下游引物CCTTGCATAGCTCCCTTGAG；[0145]137)lfz2407:上游引物CAGGCTGTATGTGCTTGACC;下游引物GGCGTCGCTAGTGAGATAGG；[0146]138)lfz2408:上游引物AGTCGCCCAATGTATCCAAC;下游引物CGATATCCATTCGGTGCTCT；[0147]139)lfz2416:上游引物ACTCGGAGCAGCGAAAGTAG;下游引物AGGCCTATGCACAGCCATAC；[0148]140)lfz2420:上游引物GTGTGCACAAATGCTCTGCT;下游引物ACGATCAATCCCAGCATCTC；[0149]141)lfz2422:上游引物TTTGAAATGTCCTCGCACAG;下游引物AAGGAACGCATATGGAATCG；[0150]142)lfz2453:上游引物AAAACGAGGCATCACAATCC;下游引物GCTTAGCGAAGAGCTTGCAT；[0151]143)lfz2457:上游引物AGAAGAGTGCGGATGCTGAT;下游引物AATCTGCTCAAGCCCTGAAA；[0152]144)lfz2459:上游引物GGGGCTACAATCACCCAGTA;下游引物GCAGCAAGCAAAAACTTTCC；[0153]145)lfz2463:上游引物ACTTGGATGGCAAATTGGAG;下游引物TTCTCCAGGCGAAGTTGTCT；[0154]146)lfz2466:上游引物GCAGCAAACTGGGTCAAAAT;下游引物TGAGGAAAAACTGGGTCAGG；[0155]147)lfz2467:上游引物CTACATGCTGGTTGGCTGAA;下游引物CACCCTACCTTGCTCGTCTC；[0156]148)lfz2472:上游引物CCCTGTTGCTCAAGATGGAT;下游引物TGGACGAGCAAGACTGACAC；[0157]149)lfz2473:上游引物TGTCGCGTGATGTGGTATTT;下游引物TCATCGCAATTTGACTGAGC；[0158]150)lfz2475:上游引物TGAGGTGGTTGTCGGAGAG;下游引物GTACTTGCTTTCGCCTGGAA；[0159]151)lfz2481:上游引物AACCAGCTTCGCAGGAGAG;下游引物AGTGGTGTCGTGATCGAGGT；[0160]152)lfz2484:上游引物TCAACCTCCTCAGCTTGCTT;下游引物GCGTCCAATCGTGATTTTCT；[0161]153)lfz2486:上游引物GCCCAACATCAATCAGACCT;下游引物TACACTGCCCGTTCGTGATA；[0162]154)lfz2493:上游引物CGAGGAGGAGAGGTTGAGTG;下游引物TCCTCATGGAAGAAGGCAAC；[0163]155)lfz2495:上游引物TCGAACAGGACGAGGAAGTC;下游引物GGACCAGCCACAAGTTCATC；[0164]156)lfz2499:上游引物GGCTTCACGCATGAAATTCT;下游引物AGCTCGGCAGTGTCAACTTT；[0165]157)lfz2501:上游引物ATAAAAAGGCAAGCCCACCT;下游引物CAAGTGGAACAGAGCAAGCA。[0166]2.本發(fā)明還提供一種高效開發(fā)小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的方法，包括如下步驟：[0167](1)以百薩偃麥草為對象，獲取總RNA，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，獲得EST序列；[0168](2)將步驟（1)得到的EST序列與小麥D基因組進(jìn)行blast比對，獲得與小麥D基因組沒有相似性的EST序列；[0169](3)以步驟⑵得到的與小麥D基因組沒有相似性的EST序列為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)引物對；[0170](4)以普通小麥"中國春"、百薩偃麥草、中國春-百薩偃麥草雙倍體的全基因組DNA作為模板，經(jīng)PCR擴(kuò)增，最后得到在百薩偃麥草特異性的擴(kuò)增片段；[0171](5)以中國春-百薩偃麥草異染色體系的全基因組DNA作為模板，定位步驟（4)獲得的百薩偃麥草的特異性擴(kuò)增片段，確定擴(kuò)增片段在百薩偃麥草染色體上的位置，即定位于百薩偃麥草染色體上的特異性擴(kuò)增片段為百薩偃麥草特異性分子標(biāo)記。[0172]3.權(quán)利要求2所述的高效開發(fā)小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的方法，其特征在于：步驟（3)設(shè)計(jì)的引物對包括上述1提供的引物對。[0173]4.本發(fā)明還提供高效開發(fā)小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的方法在開發(fā)小麥其他親緣物種特異分子標(biāo)記上的應(yīng)用。[0174]5.本發(fā)明還提供上述1提供的標(biāo)記引物在小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記開發(fā)上的應(yīng)用。[0175]6.本發(fā)明還提供標(biāo)記引物獲得的小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記在小麥新品種選育上的應(yīng)用。[0176]7.利用上述2或3提供的方法獲得的小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記在小麥新品種選育上的應(yīng)用。[0177]本發(fā)明提供的方法，概括性地可以表述如下：[0178]以百薩偃麥草（ThinopyrumbessarabicumL0ve，2n=2x=14,JJ)(見參考文獻(xiàn)：裴自友，溫輝芹，陳華鋒，莊麗芳，亓增軍.百薩偃麥草在小麥遺傳改良中的應(yīng)用研究進(jìn)展.陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008,54(1):70-74)為試材，通過轉(zhuǎn)錄組測序和拼接，獲得了EST序列，這些序列和小麥D基因組（Aegilopstauschii)基因組序列（JiaJ·，ZhaoS.,KongX.,LiY.,ZhaoG.,Heff.,R.Appels,M.Pfeifer,TaoY.,ZhangX.,JingR.,ZhangC.,MaΥ.,GaoL.,GaoC.,Μ.Spannagl,Κ.F.Mayer,LiD.,PanS.,ZhengF.,HuQ.,XiaX.,LiJ.,LiangQ.,ChenJ.,Τ.Wicker,GouC.,KuangΗ.,HeG.,LuoΥ.,Β.Keller,XiaQ.,LuΡ.,WangJ.,ZouΗ.,ZhangR.,XuJ.,GaoJ.,C.Middleton,QuanΖ.,LiuG.,YangΗ.,LiuX.,HeΖ.,MaoL.,Aegilopstauschiidraftgenomesequencerevealsagenerepertoireforwheatadaptation.Nature,2013.496(7443):1-5.)進(jìn)BLASTl：匕對(ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/blast/executables/blast+/LATEST/),篩選在小麥D基因組中沒有相似性的序列，說明這些序列可能為百薩偃麥草物種特異性的EST序列，然后隨機(jī)選取部分EST序列，利用在線軟件（http://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/)設(shè)計(jì)引物507對，分別以普通小麥中國春、百薩偃麥草和中國春-百薩偃麥草雙倍體和一套中國春-百薩偃麥草異染色體系（見參考文獻(xiàn)：陳華鋒，錢保俐，莊麗芳，陳全戰(zhàn)，馮祎高，裴自友，亓增軍，陳佩度，劉大鈞.普通小麥中國春-百薩偃麥草異染色體系的分子標(biāo)記分析·作物學(xué)報，2007,33:1232-1239;ShenYuefeng，ShenJian,Dawadondup,ZhuangLifang1WangYanzhi1PuJing,FengYigao,ChuChenggen,WangXiue&QiZengjun,PhysicallocalizationofanovelbluegrainedgenederivedfromThinopyrumbessarabicum,MolBreeding,2013,31:195-204)的全基因組DNA作為模板，經(jīng)過PCR擴(kuò)增分析，最后得到在百薩偃麥草具有特異擴(kuò)增片段的引物，并將獲得的特異擴(kuò)增片段定位于百薩偃麥草的不同染色體，即獲得百薩偃麥草染色體特異的分子標(biāo)記。[0179]有益效果：[0180]1.本發(fā)明以普通小麥中國春、百薩偃麥草和中國春-百薩偃麥草雙二倍體和一套中國春-百薩偃麥草異染色體系的全基因組DNA作為模板，獲得的在百薩偃麥草的特異擴(kuò)增片段多態(tài)率高達(dá)40.2%，說明本發(fā)明提供的方法的可行性。[0181]2.本發(fā)明通過157對引物獲得182個百薩偃麥草分子標(biāo)記，分子標(biāo)記數(shù)量大，為從中發(fā)掘百薩偃麥草有益性狀基因進(jìn)而通過分子標(biāo)記輔助選擇將有益性狀基因轉(zhuǎn)移到栽培小麥中提供了便利。[0182]3.本發(fā)明分別利用獲得的23對和12對百薩偃麥草特異標(biāo)記引物對對三個小麥-百薩偃麥草易位系進(jìn)行了擴(kuò)增分析，明確了這三個易位系中，一個涉及百薩偃麥草染色體1J，另兩個涉及6JS的不同區(qū)段，并將這36個特異標(biāo)記分別定位IJ和6JS的兩個不同區(qū)段，顯示了這些引物對在小麥-百薩偃麥草易位系的選育及百薩偃麥草基因轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用潛力。[0183]4.本發(fā)明合成的507對引物中，346對引物（68.2%)在普通小麥中國春中亦能穩(wěn)定擴(kuò)增，亦可以作為小麥的分子標(biāo)記引物，豐富了小麥的分子標(biāo)記資源，，顯示了這些引物對在小麥及其他親緣物種研究中的應(yīng)用潛力。【專利附圖】【附圖說明】[0184]圖1引物對lfzl872、lfzl873、lfzl876、lfzl878、lfzl883、lfzl884、lfzl885、lfzl889、lfzl896、lfzl900、lfzl901、lfzl904在小麥中國春、百薩偃麥草、中國春-百薩偃麥草雙倍體中的擴(kuò)增。a:引物對lfzl872;b:引物對lfzl873;c:引物對lfzl876;d:引物對lfzl878;e:引物對lfzl883;f:引物對lfzl884;g:引物對lfzl885;h:引物對lfzl889;i:引物對lfzl896;j:引物對lfzl900;k:引物對lfzl901;1:引物對lfzl904;泳道：M:DL2000;1:中國春；2:百薩偃麥草；3:中國春-百薩偃麥草雙倍體；.箭頭示特異擴(kuò)增條帶，lfzl872、lfzl873、lfzl876、lfzl883、lfzl884、lfzl889、lfzl900、lfzl901、lfzl904多態(tài)引物。[0185]圖2引物對Ifzl755、lfzl757、lfzl880、lfzl882在中國春、中國春-百薩偃麥草雙倍體、百薩偃麥草及其中國春-百薩偃麥草異染色體系中的擴(kuò)增。a圖：引物對lfzl755與lfzl757;泳道M:DL2000,大小分別為1000bp、750bp、500bp、250bpb圖：引物對lfzl880與lfzl882;泳道M:DL2000,大小分別為500bp、250bp;1:中國春；2:中國春-百薩偃麥草雙倍體；3:百薩偃麥草；4:中國春-百薩偃麥草二體代換系DSlJ(IB);5:中國春-百薩偃麥草易位系T2JS-2BS·2BL;6:中國春-百薩偃麥草二體易位附加系DA6JS·2JL;7:中國春-百薩偃麥草二體易位附加系DA3JS*4幾；8:中國春-百薩偃麥草二體附加系DA4J;9:中國春-百薩偃麥草二體代換系DS5J(5A);10:中國春-百薩偃麥草二體代換系DS6J(6A);11:中國春-百薩偃麥草二體易位附加系DA3JS·7JS;箭頭示特異擴(kuò)增條帶。【具體實(shí)施方式】[0186]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照本領(lǐng)域的公知手段。[0187]實(shí)施例1[0188]選取處于分蘗盛期的百薩偃麥草，將其轉(zhuǎn)移到裝滿石英砂的花盆中，在Hogland營養(yǎng)液中培養(yǎng)兩周后，轉(zhuǎn)入250mmol.T1NaCl溶液中進(jìn)行脅迫，脅迫3小時后和12小時后分別剪取葉片。采用Trizol試劑提取百薩偃麥草總RNA，然后利用Agilent2100(安捷倫2100)平臺對樣本進(jìn)行檢測，對合格的樣品（RIN>7.5,總量大于15ug總RNA)構(gòu)建轉(zhuǎn)錄組文庫。在上機(jī)測序之前，進(jìn)一步采用qPCR方法對轉(zhuǎn)錄組文庫進(jìn)行質(zhì)量檢測，確認(rèn)文庫中片段大小為330bp以及文庫濃度為55.51nM，最后在Hiseq2500高通量測序平臺上進(jìn)行4G深度的從頭測序。[0189]在Hiseq2500平臺獲得的原始測序數(shù)據(jù)經(jīng)去除含有接頭信息的reads、低質(zhì)量reads(即質(zhì)量值Q<5的堿基數(shù)占整個read的50%以上的reads)及未測出的堿基比例占整個堿基比例大于10%(以N表示）的reads后，最終獲得22,466,730cleanreads和4,493,346,OOOcleanbases。運(yùn)用Trinity方法對cleanreads進(jìn)行組裝，共獲得47908條EST序列，獲得的EST序列長度從最短的20Ibp到最長11032bp分布，平均長度為870bp。EST的N50達(dá)到1334bp，N50是指將拼接好的EST序列從長到短排列（或從短到長），然后相加，當(dāng)恰好加到總長度的50%時，那一條序列的長度就叫EST序列的N50。N50值是評定轉(zhuǎn)錄組測序后拼接好壞的一個標(biāo)準(zhǔn)，一般來說是越大越好，拼接質(zhì)量越高。[0190]比對分析：采用blast軟件子程序blastn，比較百薩偃麥草轉(zhuǎn)錄組EST序列與小麥D基因組序列（http://gigadb.org/dataset/100054;Jiaetal.Aegilopstauschiidraftgenomesequencerevealsagenerepertoireforwheatadaptation.Nature,2013.496(7443):1-5.)，發(fā)現(xiàn)42915條（占總獲得的47908條EST序列89.7%)序列在小麥D基因組中有同源序列，而4957條（ESTs)沒有相似性序列（"Nohitsfound")，說明這些序列可能為百薩偃麥草物種特異性的序列，隨機(jī)選擇4957條中的部分百薩偃麥草ESTs設(shè)計(jì)507對引物（如表1和表2所示）。以普通小麥"中國春"、百薩偃麥草、中國春-百薩偃麥草雙倍體的全基因組DNA作為模板，經(jīng)PCR擴(kuò)增，獲得百薩偃麥草特異性擴(kuò)增片段及相對應(yīng)的引物對。這里的特異性擴(kuò)增片段指的是在中國春中沒有出現(xiàn)而在百薩偃麥草和中國春-百薩偃麥草雙倍體同時出現(xiàn)的特異性擴(kuò)增片段。如表1所示，共獲得204對百薩偃麥草特異性引物對，擴(kuò)增出209條百薩偃麥草特異性片段，即209個百薩偃麥草特異分子標(biāo)記。。[0191]引物設(shè)計(jì)原則：米用primer3.0(http://bioinfo.ut.ee/primer3-〇.4.0/)設(shè)計(jì)引物，遵循一般引物設(shè)計(jì)原則，引物大小為18-27個堿基，一般為20個堿基；Tm值60°C為宜，本專利的目的之一是為了追蹤設(shè)計(jì)百薩偃麥草特異標(biāo)記引物，因此引物以擴(kuò)增出的片段大小為250-1000bp為宜（太短多態(tài)性可能受引物二聚體影響，一般TaqaseIMIN擴(kuò)增lKbp，因此產(chǎn)物大小以250-1000bp為宜）。[0192]PCR擴(kuò)增：[0193]PCR反應(yīng)體系：【權(quán)利要求】1.一種用于開發(fā)小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的標(biāo)記引物，其特征在于：序列如下所示：1.lfzl725:上游引物TGGCTTTGTCATTGCCAGT;下游引物GCCATAACGGAGATCTGGAG;2.lfzl728:上游引物CGCAGTCAAATCAAATGGAA;下游引物CTCCAGCTCGACGGAAGC;3.lfzl730:上游引物TTGAACCCCGACTTTTTCAG;下游引物ATGTACCTCACCTCCCATGC;4)lfzl731:上游引物CGCGATGAATAGITTGAGCA;下游引物GACAGCGAAITTGGAGAAGC;5.lfzl743:上游引物GATGTGTTTGTGCAGGTTGG;下游引物TGGGTTCAGGGAAGGATATG;6.lfzl745:上游引物GTCAGCACGACCACCTGTT;下游引物CCGGCGTCAGATGATAGAG;7.lfzl747:上游引物GAGAGGCTTGAGCCAATCAG;下游引物AATTCTGTCCTGGGCAACAC;8.lfzl751:上游引物ATGCATATGCGTCCAACTGA;下游引物ACAAGACCGAGGCTGAGATG;9.lfzl754:上游引物GAGAAGGGGCAAAATGGAAT;下游引物CTAATGGCATGGTGGTGTTG;10.lfzl755:上游引物ACACCCCAGCTGCAACTAAC;下游引物GTGAGGAGAAGGAGCAAGCA;11.lfzl756:上游引物ATGAGCACGTGAGACTGTGG;下游引物CAGGCCTCTTTGCCTCATAG;12.lfzl757:上游引物TCACAGGAAACACCATCAGG;下游引物TTGAGTGGGTACACGATTGC;13.lfzl758:上游引物GATTGAGGGAACGAGCAAGA;下游引物TGATCGATCTGACCACCAAA;14.lfzl759:上游引物AGTTGGCTTGGGTCAGATTG;下游引物TGTAGGAGGCTCGCTCAAAT;15.lfzl762:上游引物GGCCTTGTGGTAACTCCAAA;下游引物AAGCTGCCTGACGACATTCT;16.lfzl763:上游引物TTTCACCGTTTGCATTAGCA;下游引物GAAGTGGCTTTTCCATCCAA;17.lfzl767:上游引物ACTGGCTAGCACACCGACTT;下游引物CTGTGTGCTGGTTGCCTCTA;18.lfzl781:上游引物CACGTTCCATGATGTTGGTC;下游引物CCACGATCATATGCCTCCTT;19.lfzl783:上游引物CATGGAAGGCTTGAAATGGT;下游引物CCGGGTGAGTTGAGTTTGAT;20.lfzl784:上游引物GATGCCCCTAACAAGACGAA;下游引物ATGTCGGAGATCAGGTGGAC;21.lfzl790:上游引物GGATCAAGGAAGAAAGGTTGC;下游引物CTCCAACACGATGGAGGTCT;22.lfzl793:上游引物GCCACCAGAAGGATCTTGAC;下游引物CATAGCCCCTTAGCTCGTTG;23.lfzl797:上游引物TACGACTGAAGCAAGCATCG;下游引物AGGGAAACCTCCACACTTCC;24.lfzl799:上游引物CCCAAATTCCCCATTTCTCT;下游引物GGAGATGGGAGTGACCTCAA;25.lfzl804:上游引物CACGCAATTCATCGAACACT;下游引物GTATCCATAGCTGCGCCAAT;26.lfzl806:上游引物TCATCCACAAAATGGCAAAA;下游引物TTCCTCAAGTCCCACCAAAG;27.lfzl808:上游引物ATTGAACCGGTGAGAGATCG;下游引物CGATCTGCGTCTTCCCTCTA;28.lfzl809:上游引物CCACGATGGGATCAGTTACC;下游引物GCTACTTGCGTGCAACACAT;29.lfzl810:上游引物ATCGCCAGCCTCTTGAGTT;下游引物CGACACAGCAGACCATCAGT;30.lfzl816:上游引物CGGAAGGTTGCTGATGAGAT;下游引物GGCACCCACAGTCAAAAAGA;31.lfzl817:上游引物ATGACACTCACCTGCCTTCC;下游引物TTCTGGCAAACCACGTCATA;32.lfzl820:上游引物CTTCATGGCACGTACGGTTA;下游引物ATTCCACGCATCTTGAACCT;330)lfzl821:上游引物ATGAACGGGAAGTGTCGAAG;下游引物GAGGACGGTTGTAGCAAGGA;34.lfzl822:上游引物GCATCTCTGGCCTTGTCTTC;下游引物GACGGCACACTCCTCCTAGA;35.lfzl826:上游引物AGAGTGACACCGTCCGTGA;下游引物CTCCAGTCTCCCGACCTTAG;36.lfzl829:上游引物GGTGGGTATACAGCGGAGAA;下游引物GTGCTACACCGAGCCATTTT;37.lfzl836:上游引物GATATCTGCCGGTGACGAAC;下游引物CAGAGAAACACAGCAAAGCTGA;38.lfzl838:上游引物CCTGAACAAGAACCCTCCAA;下游引物AATAATACCCCCGGCTTCAG;39.lfzl841:上游引物TCCTTTCTCACTGCCCATTC;下游引物TCATGAGTGCGGTTCATCTC;40.lfzl850:上游引物TTTTTCCCTTGTGGCTTTTG;下游引物GATGCCTACCTCCCAGACAA;41.lfzl852:上游引物CAAATCCCAAGGCAGTCCTA;下游引物CTTGCCACCAATCACCTCTT;42.lfzl853:上游引物CTCGCAGAGAAGGTGGAGAC;下游引物CACCTTCGAATCCCTTGAAA;43.lfzl857:上游引物AGTCGCCGGTACGATGTAGT;下游引物ACGCTTCCTCCAGAGAGAGA;44.lfzl859:上游引物TGCCGAAGACTGAGCACTAA;下游引物TCGCCTTCTACAGTCCAGGT;45.lfzl866:上游引物TTGAGGCTCTCCCGTAAGAA;下游引物GCCCCCAGAAAGAAAGAAAA;46.lfzl876:上游引物CTGCGGTATAGGGTGACACA;下游引物GCTACTTGTTGGGCCTGAAG;47.lfzl877:上游引物TGGACAGCCTGAACATGAAG;下游引物CGCAGATGAAGATGCCCTAC;48.lfzl879:上游引物AAGAGGAGGAGCCCAGGTAG;下游引物CACGGATTCGAACTCCACTT;49.lfzl880:上游引物GCCTGGATGAAATGGAGAAA;下游引物TAGCACTGTCCAGCGATTTG;50.lfzl882:上游引物CAGGGACTTTCCTTCGATCA;下游引物GCACTGCCTTTCTCAAGGTC;51.lfzl883:上游引物GGTTGATGGGAGATGCAGAA;下游引物GGCCGACAGTATAGCTCCTG;52.lfzl884:上游引物GACAGTGACCTCGATGAGCA;下游引物AAACCATGTTTGTCGGCATT;53.lfzl886:上游引物TGAAAGTTGTAGCGCCAGTG;下游引物ACCAGAGTCGTCATCCATCC;54.lfzl899:上游引物GCTAGGTTATGCCGAAGACG;下游引物CCTCCATCTCCCATGGAGTC;55.lfzl900:上游引物GCCAAGCACATCACTCTGAA;下游引物GCGACTACATGTACCGCAAA;56.lfzl901:上游引物CATTGTCCATCCAATGAGGA;下游引物GCGACTACATGTACCGCAAA;57.lfzl906:上游引物CCACTGCATCCATCTTCCTT;下游引物GCCTTCTCTTCCATGCTTCTT;58.lfzl907:上游引物GTCCTCGATGCAGAGGAATC;下游引物TTTGCTTCACCTCCTCGTCT;59.lfzl908:上游引物GCTGGCTTGGAGCTATGTTC;下游引物TACCATCAGCCTTGGTCCTC;60.lfzl913:上游引物TCAAGTGCAGACTTGCGAAC;下游引物AAAATGGAACTGGGGGAAAC;61.lfzl914:上游引物AAGCGTACCTTCTGCAAGGA;下游引物TTTTTCGTGGCAAAGATGATT;62.lfzl917:上游引物CTCCAGCAGGTTCTCGATGT;下游引物TGTTTATCCCCTGGTTCTGG;63.lfzl920:上游引物CGACAAATGCCAGAGAGTGA;下游引物ACTGCTACGTCGCTGACCTC;64.lfzl922:上游引物TCCTTGCAGACAAGCTGGAT;下游引物CTTTGGTGTCCCCGAAATC;65.lfzl923:上游引物ATGGAAGACCGTTGAGGTTG;下游引物CTCCAACCACCTTCTTGCAC;66.lfzl924:上游引物CACCGTTCTTTGGCTATGGT;下游引物CTGATTTCTGGGTTGCTGCT;67.lfzl934:上游引物TTGCAGTACCATCGCAAAAG;下游引物GCAGCCAGATGTCTGTCCAT;68.lfzl936:上游引物ACCGCAGAATCAACAGGAGT;下游引物GCCCTCCCTTGCTTTACTTT;69.lfz2213:上游引物AATAACAAACGGCAGGAACG;下游引物AGCCACGATCAACGATAAGG;70.lfz2214:上游引物CTCGCTAGTCGGGAAGGAG;下游引物CGGACATGGACAGAGATGGT;71.lfz2215:上游引物CTCAGACGGGAGGAAGACAG;下游引物ATCGAGTACTTCCCGCTCCT;72.lfz2220:上游引物GCAGCATTCAGCAAAAATCA;下游引物ATTGGGGAGGTAGGATGAGG;73.lfz2221:上游引物GGGATGGTTGCTTGTGAAAC;下游引物TCAATTTCATTGCCCAGACA;74.lfz2222:上游引物GGCCACGCCTCTGAGTTAC;下游引物AGAGGCCTAGGTGGCTCATT;75.lfz2225:上游引物TTGAGTGAGCATCGATGGAG;下游引物CCTGAAATCGCAGCACTGTA;76.lfz2226:上游引物ACTGGAACGATGAGGACTGC;下游引物TGTCACAACCATCATGAGCA;77.lfz2228:上游引物CGTCATCACTGCGAGAAGAA;下游引物GCACGTCCACATACATTTGC;78.lfz2229:上游引物CTCCGACCTTGACTCCTCTG;下游引物TGTCTACCGAGTTGCTCACG;79.lfz2232:上游引物ACTTACACATGGGGCACACA;下游引物AATGAGGAAGGCATCCATTG;80.lfz2233:上游引物TCCCAAGGTGACCATTTTGT;下游引物GAAACGGTTGCTGTGAAGGT;81.lfz2235:上游引物GAGCTCACCGAGTGGTTCTG;下游引物TTGTGGTGGAGGTACACGAA;82.lfz2237:上游引GACCGAACGATTTGATCCAC;下游引物CGAAAATAAAACCGCAGGAG;83.lfz2240:上游引物CACGCCCAGACTCAGATACA;下游引物AAGGAATGATCCTCGACCAA;84.lfz2241:上游引物GGATTGACAAGAGGCAGGAA;下游引物GAAACAGGGGAAGGAAGGAG;85.lfz2244:上游引物CAAAATCCTGCAACCCTGAT;下游引物CTCTTCATAGGCCGCTTCAG;86.lfz2247:上游引物GGGATCTGATTTTCGAGTGC;下游引物GACGAAAGGAAAACGGAACA;87.lfz2249:上游引物ACATTGGAGGAACCCATCCT;下游引物GCAGCCGCCAAATTAGAT;88.lfz2254:上游引物GGCCGTGAAGTAATGATGGT;下游引物TTAGCAGATTTGCCCACCTC;89.lfz2256:上游引物GGCTTTGTGAACCGATTGAG;下游引物GAGGGCTTTATGCTCGTCTG;90.lfz2257:上游引物GGCTTTGTGAACCGATTGAG;下游引物GAGGGCTTTATGCTCGTCTG;91.lfz2258:上游引物TCCCAACAGCTGCCTTAGTC;下游引物CTTTCTCTCCCCGTCTCCTT;92.lfz2263:上游引物GCAAGATCCCCCATCAGTTA;下游引物CAGCCACTCCATTACCCAGT;93.lfz2264:上游引物ACCCGAAAATAGGGGAGAAA;下游引物CCCTGAATTCACTCCTCTGC;94.lfz2267:上游引物CATCCAGATCTCCGGCTAGA;下游引物ATTTTCGCACACACTCCACA;95.lfz2268:上游引物ACGTCTGGCGAACAATTACC;下游引物AGGGCACTGCGTAGATGAAG;96.lfz2274:上游引物TGGAGGAGGTAGTGGATTCG;下游引物ATGGAGGAAGGACGTGTGAG;97.lfz2281:上游引物GCAGTGGAAGATGAGGTGGT;下游引物GCGTGTGTGCTTCTTCATGT;98.lfz2282:上游引物ITTGGGGGATTCGTCCTAGT;下游引物CGTAGCCGGAAGACAGACTC;99.lfz2283:上游引物GGGGATAAGCAGCAGAGACA;下游引物TACGAGGCTGGGTCCTCTAA;100.lfz2287:上游引物CTTCTCCCCCTTGAGAGTCC;下游引物ACGACAGGGAGGAATGAATG;101.lfz2296:上游引物GAAGCTGCGGCTACTCAATC;下游引物GGTATCAACTGTAACTCTT;102.lfz2304:上游引物AAGCCTTATGGGAGGCAGTT;下游引物GAACCCCAAGGATCCTGAAT;103.lfz2306:上游引物CCTTATCCAATCCCGTCTCA;下游引物CCGCACTTGACTGCTACAGA;104.lfz2308:上游引物TCACACGAACCAACGAGAAC;下游引物TACTGGAACATGGGCCTAGC;105.lfz2310:上游引物CTTGCTTCTCCCACTTGCTC;下游引物TTTGATGGGCTTTGGTTAGG;106.lfz2314:上游引物GGCTGTCGTACTGGACGAAT;下游引物CCAGTGGCATCAGTCCATC;107.lfz2318:上游引物GGGTTGCTGAGTCCACTGAT;下游引物CTCGGGGATCATTCAAGAAA;108.lfz2322:上游引物TCATGGCTCACATGGCTATC;下游引物ACAATTGGGACCATCCAAAA;109.lfz2325:上游引物TCGATCACCCACAAGAACAA;下游引物AGAGAGCGGACGTGTTCAGT;110.lfz2326:上游引物CTGCTGAAACTCCCCAAGAC;下游引物CGGCGTGTACATAGCATAGG;111.lfz2327:上游引物GTGGCTCGATGACGAATACC;下游引物TGCTGTGTTCTCCTCCCTTT;112.lfz2330:上游引物ATCGGAGAGCTTCTGTTCCA;下游引物ATTTGGTGGCCTTCACTGTC;113.lfz2335:上游引物CTAGTCCCAGCGCCTAACAA;下游引物TAAAATCGGCCTCATCCTTG;114.lfz2336:上游引物ACACAGTGGGAAGTGGGAAG;下游引物CTCTAGTCGCACGGTCTGGT;115.lfz2337:上游引物GACGGAAGGTTGGACAAAAA;下游引物TTCCTCCTCCCTTCCACTCT;116.lfz2339:上游引物GCCTTTGCCTAGCCTAGCTT;下游引物CAGCCACCCTCAGGTGTTAT;117.lfz2340:上游引物TGTCTCTGGCGAGTTTCTGA;下游引物AGCAATCCAGTCCTCGTCAC;118.lfz2341:上游引物TTTCCATGTCAAGGTGGTCA;下游引物CACCAACACAACGACACCTC;119.lfz2342:上游引物GTGGCCCTTTCCTTCTCTCT;下游引物ACCAGAAGGTCCCAGAGGAT;120.lfz2343:上游引物TCTTCTTCCTCACGCCCTTA;下游引物GCTCGAGTCCGTAGAAGTGG;121.lfz2344:上游引物GCTTAACGCTTCTGGTCGTC;下游引物GCCGCTAGTGTAGCAGGTCT;122.lfz2345:上游引物GCGAATCGTTACACGGAAAT;下游引物TCGGTGAGGTGAAAGGTCTC;123.lfz2346:上游引物CAGACTCAGCAGACCAACCA;下游引物CATCTCCACCCAATGGTTTT;124.lfz2349:上游引物CCGTGGCAATAAGAGGAAAA;下游引物CTTGATTTCAGCAGGCTTCC;125.lfz2352:上游引物AGCCAGGAGTTGGTGCTCTA;下游引物ATGCGAACGAGGATCAAAAG;126.lfz2354:上游引物ACGGACTCTTCTCCCTCCAT;下游引物TAGTGCAGCATCCGTTCTTG;127.lfz2358:上游引物GCTGCAGCCACCTTATTCTC;下游引物AACCCCGGATCTATGTTTCC;128.lfz2375:上游引物CCCACACCACTCCTTCAACT;下游引物TTTGACCTCGGTTTGTCCTC;129.lfz2386:上游引物TGTAGAATCCTTGGGCCATC;下游引物TTGCACTTTCTGTGGCATGT;130.lfz2393:上游引物AGAAGATTGCTGAGGGCAAA;下游引物CCATTGAGGCGCTGAATTAT;131.lfz2394:上游引物GACGAGGATTCTGCATGGTT;下游引物CCCTCATCCTTCAAGTCCAA;132.lfz2395:上游引物AAAAGGCTCCTCACAAGCAA;下游引物CAACGAGCTTGATGCTGAAA;133.lfz2396:上游引物GACGAAGAAGAGGCAAGGTG;下游引物TCTCCCTCATCTCGGTTCTC;134.lfz2403:上游引物TGCAGCTACTGCAATCAAGG;下游引物ATTTTGCTGTGGGCTGTAGG;135.lfz2405:上游引物TGTAGAAGCAGGGGGAGTTG;下游引物CCAGCAGTTCATCACCTGAA;136.lfz2406:上游引物TGGAGACAGTGAGGCTGTTG;下游引物CCTTGCATAGCTCCCTTGAG;137.lfz2407:上游引物CAGGCTGTATGTGCTTGACC;下游引物GGCGTCGCTAGTGAGATAGG;138.lfz2408:上游引物AGTCGCCCAATGTATCCAAC;下游引物CGATATCCATTCGGTGCTCT;139.lfz2416:上游引物ACTCGGAGCAGCGAAAGTAG;下游引物AGGCCTATGCACAGCCATAC;140.lfz2420:上游引物GTGTGCACAAATGCTCTGCT;下游引物ACGATCAATCCCAGCATCTC;141.lfz2422:上游引物ITTGAAATGTCCTCGCACAG;下游引物AAGGAACGCATATGGAATCG;142.lfz2453:上游引物AAAACGAGGCATCACAATCC;下游引物GCTTAGCGAAGAGCTTGCAT;143.lfz2457:上游引物AGAAGAGTGCGGATGCTGAT;下游引物AATCTGCTCAAGCCCTGAAA;144.lfz2459:上游引物GGGGCTACAATCACCCAGTA;下游引物GCAGCAAGCAAAAACTTTCC;145.lfz2463:上游引物ACTTGGATGGCAAATTGGAG;下游引物TTCTCCAGGCGAAGTTGTCT;146.lfz2466:上游引物GCAGCAAACTGGGTCAAAAT;下游引物TGAGGAAAAACTGGGTCAGG;147.lfz2467:上游引物CTACATGCTGGTTGGCTGAA;下游引物CACCCTACCTTGCTCGTCTC;148.lfz2472:上游引物CCCTGTTGCTCAAGATGGAT;下游引物TGGACGAGCAAGACTGACAC;149.lfz2473:上游引物TGTCGCGTGATGTGGTATTT;下游引物TCATCGCAATTTGACTGAGC;150.lfz2475:上游引物TGAGGTGGTTGTCGGAGAG;下游引物GTACTTGCTTTCGCCTGGAA;151.lfz2481:上游引物AACCAGCTTCGCAGGAGAG;下游引物AGTGGTGTCGTGATCGAGGT;152.lfz2484:上游引物TCAACCTCCTCAGCTTGCTT;下游引物GCGTCCAATCGTGATTTTCT;153.lfz2486:上游引物GCCCAACATCAATCAGACCT;下游引物TACACTGCCCGTTCGTGATA;154.lfz2493:上游引物CGAGGAGGAGAGGTTGAGTG;下游引物TCCTCATGGAAGAAGGCAAC;155.lfz2495:上游引物TCGAACAGGACGAGGAAGTC;下游引物GGACCAGCCACAAGTTCATC;156.lfz2499:上游引物GGCTTCACGCATGAAATTCT;下游引物AGCTCGGCAGTGTCAACTTT;157.lfz2501:上游引物ATAAAAAGGCAAGCCCACCT;下游引物CAAGTGGAACAGAGCAAGCA。2.-種高效開發(fā)小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的方法，其特征在于：包括如下步驟：(1)以百薩偃麥草為對象，獲取總RNA，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，獲得EST序列；(2)將步驟（1)得到的EST序列與小麥D基因組進(jìn)行blast比對，獲得與小麥D基因組沒有相似性的EST序列；(3)以步驟（2)得到的與小麥D基因組沒有相似性的EST序列為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)引物對；(4)以普通小麥"中國春"、百薩偃麥草、中國春-百薩偃麥草雙二倍體的全基因組DNA作為模板，經(jīng)PCR擴(kuò)增，最后得到在百薩偃麥草具有特異性的擴(kuò)增片段；(5)以中國春-百薩偃麥草異染色體系的全基因組DNA作為模板，定位步驟（4)獲得的百薩偃麥草的特異性擴(kuò)增片段，確定擴(kuò)增片段在百薩偃麥草染色體上的位置，即定位于百薩偃麥草染色體上的特異性擴(kuò)增片段為百薩偃麥草特異性分子標(biāo)記。3.權(quán)利要求2所述的高效開發(fā)小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的方法，其特征在于：步驟（3)設(shè)計(jì)的引物對包括權(quán)利要求1所示的引物對。4.權(quán)利要求2所述的高效開發(fā)小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記的方法在開發(fā)小麥其他親緣物種特異分子標(biāo)記上的應(yīng)用。5.權(quán)利要求1所述的標(biāo)記引物在小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記開發(fā)上的應(yīng)用。6.利用權(quán)利要求1所述的標(biāo)記引物獲得的小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記在小麥新品種培育上的應(yīng)用。7.利用權(quán)利要求2或3所述方法獲得的小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標(biāo)記在小麥新品種培育上的應(yīng)用?！疚臋n編號】C12N15/11GK104263826SQ201410473529【公開日】2015年1月7日申請日期:2014年9月16日優(yōu)先權(quán)日:2014年9月16日【發(fā)明者】亓增軍,李晨旭,劉志濤,莊麗芳申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)