一種丁內(nèi)酯化合物的制備方法與作為海洋防污劑的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種丁內(nèi)酯化合物的制備方法與作為海洋防污劑的應(yīng)用，制備時(shí)先對(duì)真菌Aspergillus terreus(WZ-2011-2905)進(jìn)行菌種培養(yǎng)，再對(duì)該真菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，將所得菌絲體用氯仿-甲醇混合液(1∶1)浸提3次減壓濃縮后，用乙酸乙酯萃取3次得粗浸膏；乙酸乙酯相粗浸膏依次進(jìn)行正相硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析、HPLC高效液相色譜，即得式I化合物。本發(fā)明提供一種海洋生物防污劑，其特征在于以本發(fā)明的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于防治藤壺附著引起的海洋生物污損。
CGMCC No9517
2014.09.02
【專利說明】一種丁內(nèi)酯化合物的制備方法與作為海洋防污劑的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種丁內(nèi)酯（butyrolactones)化合物的制備方法與應(yīng)用，特別是涉 及一種對(duì)海洋污損生物藤壺Balanus amphitrite幼蟲具有極強(qiáng)的抑制活性的丁內(nèi)酯及其 制備方法與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 海洋生物污損是有機(jī)分子、微生物、動(dòng)物、植物、以及它們的副產(chǎn)物在海洋潛沒設(shè) 施表面的危害性積聚。這種危害性積聚經(jīng)常發(fā)生在沒有保護(hù)的海洋潛沒設(shè)施的表面，包 括海運(yùn)和旅游的船舶，海軍軍艦，熱交換器，海洋傳感器以及水產(chǎn)養(yǎng)殖基地等。生物污損 引起了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，僅以美國海軍軍艦為例，每年在這方面的經(jīng)濟(jì)損失在18到26億 美元之間，而美國海軍軍艦數(shù)量?jī)H占全球船舶數(shù)量的〇. 5%，因此海洋生物污損是極其嚴(yán) 重的自然危害。藤壺因其很強(qiáng)的黏附能力是目前所知的污損生物中非常普遍的代表性生 物。自2008年全球取消了有毒防污劑有機(jī)錫的使用后，尋找安全高效的海洋防污劑成為 國際上急需解決的課題。海洋天然產(chǎn)物被認(rèn)為是新型海洋防污劑的重要來源。實(shí)際上，在 過去的幾十年里已經(jīng)從海綿，珊瑚和海藻等海洋生物中發(fā)現(xiàn)了很多有強(qiáng)抗污損活性的化合 物。然而，從上述大型生物中發(fā)現(xiàn)的活性化合物由于受到量的限制而大大影響了其潛在的 應(yīng)用。海洋微生物由于在實(shí)驗(yàn)室中可以大規(guī)模發(fā)酵，不易破壞自然環(huán)境，而成為活性海洋 化合物的最重要來源。然而，近年來尚未見到從海兔來源的真菌中獲得有重要抗污損活 性的丁內(nèi)酯化合物作為防污劑的使用。（J.A. Callow，M.E. Callow，Nat. Commun. 2011，2， 244-253 ；C. M. Kirschner, A. Β. Brennan, Annu. Rev. Mater. Res. 2012,42,1-19 ；M. Schultz, J. Bendick，E. Holm，W. Hertel，Biofouling 2011，27, 87-98 ;N. Fusetani，Nat. Prod. Rep. 2004, 21，94-104 ;N. Fusetani，Nat. Prod. Rep. 2011，28,400-410 ;P. -Y. Qian，Y. Xu， N.Fusetani，Biofouling 2010, 26, 223-234。）


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種來源于海兔真菌的丁內(nèi)酯化合物的制備方法與作為 海洋防污劑的應(yīng)用，它能滿足現(xiàn)有技術(shù)的上述需求。菌種保藏信息：保藏單位名稱：中國微 生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3 號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所；保藏日期：2014年09月02日；保藏編號(hào)：CGMCC9517 ;分類命 名：Aspergillus terreus。
[0004] 本發(fā)明提供式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽： 或其藥

【權(quán)利要求】
1. 一種式I結(jié)構(gòu)的丁內(nèi)酯化合物，其特征在于包括以下步驟：先在菌種培養(yǎng)基中對(duì)真 菌Aspergillus terreus(WZ-2011-2905)進(jìn)行菌種培養(yǎng)，再在發(fā)酵培養(yǎng)基中對(duì)該真菌進(jìn)行 發(fā)酵培養(yǎng)，將所得菌絲體用氯仿-甲醇混合液（1 : 1)浸提3次減壓濃縮后，用乙酸乙酯萃 取3次得粗浸膏；乙酸乙酯相粗浸膏分別進(jìn)行正相硅膠柱層析、S印hadex LH-20凝膠柱層 析后，再經(jīng)HPLC高效液相制備色譜，將所得洗脫液濃縮，得到式I化合物；其中式I化合物 的結(jié)構(gòu)為：
或其藥學(xué)上可接受的鹽；其中所述菌種培養(yǎng)基中含有葡 萄糖、酵母膏、蛋白胨、瓊脂、粗海鹽、水；所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中含有大米、粗海鹽、水；所述 的色譜分離為正相硅膠柱色譜分離、凝膠柱層析分離和高效液相色譜分離。
2. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述菌種培養(yǎng)基優(yōu)選含有葡萄糖 0· 1 % -5.0 %、酵母膏 0.01 % -1 %、蛋白胨 0.01 % -1 %、瓊脂 0· 1 % -3.0 %、氯化鈉 0. 05% -5%，其余為水，上述百分含量均為重量百分比，培養(yǎng)溫度優(yōu)選為0-30°C，培養(yǎng)時(shí)間 優(yōu)選為3-15天。
3. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)選含有大米 1. 0 % -80. 0 %、氯化鈉0. 05 % -5 %，其余為水，上述百分含量均為重量百分比，培養(yǎng)溫度優(yōu) 選為0-30°C，培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選為10-60天。
4. 如權(quán)利要求2-3任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于所述的正相硅膠柱層析采用的 固定相為200-300目硅膠，流動(dòng)相為體積比為15% -60 %的乙酸乙酯-石油醚混合溶劑； 所述Sephadex LH-20凝膠柱層析采用的流動(dòng)相為體積比為氯仿：甲醇=1 : 1的混合溶 齊U ;所述HPLC高效液相制備色譜中采用的色譜柱為Kromasil 10\25〇1'臟，511111，流速為 1. 0-5. OmL/min，流動(dòng)相為體積比50% -80%的甲醇-水混合溶劑。
5. -種海洋生物防污劑，其特征在于其含有權(quán)利要求1所述的式I化合物或其藥學(xué)上 可接受的鹽作為有效成分。
6. 權(quán)利要求1所述的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備海洋防污劑中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12P17/04GK104293846SQ201410512799
【公開日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年9月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月20日
【發(fā)明者】邵長(zhǎng)倫, 王長(zhǎng)云, 牟曉鳳, 邊文濤 申請(qǐng)人:中國海洋大學(xué)