一種產(chǎn)朊酵母還原生產(chǎn)碘苯基丙酸甲酯的方法
【專利摘要】一種細(xì)胞法生產(chǎn)手性溴苯基丙酸甲酯的方法。一種挪威假絲酵母細(xì)胞直接催化還原制備手性(-)-(2R,3S)-3-（4-溴苯基）-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯的方法，反應(yīng)罐中加入磷酸鹽緩沖液，加入苧麻紗布調(diào)控底物、產(chǎn)物濃度，用酵母細(xì)胞進(jìn)行生物還原反應(yīng)，產(chǎn)品收率高，對映體過量率高，具有很好應(yīng)用價值。
【專利說明】一種產(chǎn)朊酵母還原生產(chǎn)碘苯基丙酸甲酯的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于制藥工程【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及到產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞生物還原制備手 性醫(yī)藥中間體（_)-(2S，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯的技術(shù)。

【背景技術(shù)】
[0002] 羥基手性酯是合成手性藥物、精細(xì)化學(xué)品、農(nóng)藥品和其他特殊材料的重要中間體。 生物催化羰基化合物的不對稱還原具有環(huán)境友好、條件溫和、選擇性高等優(yōu)點(diǎn)，作為綠色 高效制備羥基手性酯的優(yōu)先途徑，被越來越多地應(yīng)用于生產(chǎn)一些高附加值的羥基手性酯。 生物催化制備羥基手性酯具有很好的應(yīng)用前景。
[0003] 生物催化具有催化效率高、選擇性強(qiáng)、條件溫和、環(huán)境友好等突出優(yōu)點(diǎn)，是可持續(xù) 發(fā)展過程中替代和拓展傳統(tǒng)有機(jī)化學(xué)合成的重要方法。其中手性拆分和不對稱合成是生物 催化最具吸引力的應(yīng)用領(lǐng)域。在作為生物催化劑的六大類酶中，水解酶能夠催化動力學(xué)拆 分外消旋體得到手性產(chǎn)品，在工業(yè)生物催化中一直扮演著重要角色。近幾年來，氧化還原 酶在工業(yè)上的應(yīng)用得到了迅速增長。目前，采用水解酶動力學(xué)拆分法、生物還原法和生物 氧化法工業(yè)制備光學(xué)活性手性化合物的比例為4:2:1。
[0004] 生物還原法相對于動力學(xué)拆分法而言，最大的優(yōu)勢在于理論收率可達(dá)100%，原子 經(jīng)濟(jì)性好。然而生物還原反應(yīng)需要輔酶或輔因子的參與，一定程度上限制了其應(yīng)用。由于 輔酶依賴性的緣故，生物還原反應(yīng)中多釆用整細(xì)胞作為催化劑，實(shí)現(xiàn)體內(nèi)輔酶循環(huán)再生的 同時免去了酶的分離純化步驟。
[0005] (_)-(2S，3S)-3- (4-碘苯基）-3_羥基-2-甲基丙酸甲酯是合成手性藥物、精細(xì) 化學(xué)品、農(nóng)藥品的重要手性砌塊，由于有2個手性中心，使得化學(xué)合成較為困難，成本高。本 發(fā)明將采用生物催化制備（_)-(2S，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明采用產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞催化制備（_)-(2S，3S)-3- (4-碘苯基）-3_羥 基-2-甲基丙酸甲酯，反應(yīng)式如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞生物還原制備（-)-(2S，3S)-3-(4-碘苯基)-3-羥基-2-甲 基丙酸甲酯的方法，其特征在于反應(yīng)罐中加入磷酸鹽緩沖液，裝料系數(shù)為0.6-0. 7, pH為 6. 2,加入吸附了底物的硅藻土，使底物2-(4-氟苯甲酰)-2-丙烯酸甲酯添加量為80-90 g/ L，麥芽浸膏22-26 g，木糖12-13 g/L，直鏈的10碳醇聚氧乙烯醚為16-18g/L，121°C高壓滅 菌30分鐘；冷卻至30-31°C時，加入濕酵母細(xì)胞使?jié)舛葹?9-32g/L，通氣比為0. 17-0. 2V/ (V分鐘)，進(jìn)行生物還原反應(yīng)，反應(yīng)時間為81-86小時；反應(yīng)結(jié)束后，分別濾出細(xì)胞、硅藻土， 用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液、萃取硅藻土，合并乙酸乙酯萃取液和萃取硅藻土的乙酸乙酯，蒸出 乙酸乙酯，得到產(chǎn)物（_)-(2S，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯，反應(yīng)轉(zhuǎn)化 率94-96 %，產(chǎn)品收率92-94 %，對映體過量率97-98 %。
2. 權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于濕酵母細(xì)胞制備過程如下：產(chǎn)朊假絲酵母經(jīng)斜 面、搖瓶、種子罐培養(yǎng)得到種子液；發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，裝料系數(shù)為〇. 6-0. 7,121°C高壓滅 菌30分鐘，冷卻至27-28°C，將產(chǎn)朊假絲酵母種子液接種至發(fā)酵罐，接種比例為6-6. 5%，通 氣比為1. 7-1. 8V/ (V分鐘)，27-28°C培養(yǎng)21-23小時，用過濾式離心機(jī)離心得到濕酵母細(xì) 胞，用作生物還原反應(yīng)催化劑。
3. 權(quán)利要求1所述的方法，其特征在培養(yǎng)液成份為：葡萄糖20-22 g/L，麥芽浸膏23-25 g/L，木糖 6-7 g/L，（NH4)2S04 4. 8-5 . 3 g/L，KH2P04 9-11 g/L，MgS04.7H20 0.3-0.4 g/L， CaCl2 0· 35-0. 4 g/L,硫酸銨 0· 2-0. 25g/L，硫酸鎂 0· 3-0. 4g/L, ρΗ6· 2。
4. 權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述吸附了底物的硅藻土制作方法為，將底物 溶于乙酸乙酯，底物與乙酸乙酯的比率為0. 5 :2,得到底物的乙酸乙酯溶液，用硅藻土吸收 此溶液，然后，烘干、回收乙酸乙酯，即得到吸附底物的硅藻土，調(diào)節(jié)底物與硅藻土用量，使 得底物與硅藻土的質(zhì)量比率為〇. 37-0. 4。
【文檔編號】C12P7/62GK104263767SQ201410518174
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月1日
【發(fā)明者】張媛媛, 梁方方, 張銀, 劉慧 , 王美玲, 隋洪南, 劉均洪 申請人:青島科技大學(xué)