一種生產(chǎn)(2r,3s)含碘甲基丙酸甲酯的生物還原法
【專利摘要】一種生產(chǎn) (2R,3S) 含碘甲基丙酸甲酯的生物還原法。 一種生物還原制備手性醫(yī)藥中間體(?)-(2R,3S)-3-（4-碘苯基）-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯的方法，反應(yīng)罐中加入磷酸鹽緩沖液，加入白土調(diào)控底物、產(chǎn)物濃度，用 耶氏 解脂假絲酵母細胞進行生物還原反應(yīng)，得到產(chǎn)物，產(chǎn)品收率高，對映體過量率高，具有很好的應(yīng)用前景。
【專利說明】一種生產(chǎn)（2R,3S)含碘甲基丙酸甲酯的生物還原法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于制藥工程【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及到耶氏解脂假絲酵母細胞生物還原制 備手性醫(yī)藥中間體（_)-(2R，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯的技術(shù)。

【背景技術(shù)】
[0002] 羥基手性酯是合成手性藥物、精細化學(xué)品、農(nóng)藥品和其他特殊材料的重要中間體。 生物催化羰基化合物的不對稱還原具有環(huán)境友好、條件溫和、選擇性高等優(yōu)點，作為綠色 高效制備羥基手性酯的優(yōu)先途徑，被越來越多地應(yīng)用于生產(chǎn)一些高附加值的羥基手性酯。 生物催化制備羥基手性酯具有很好的應(yīng)用前景。
[0003] 生物催化具有催化效率高、選擇性強、條件溫和、環(huán)境友好等突出優(yōu)點，是可持續(xù) 發(fā)展過程中替代和拓展傳統(tǒng)有機化學(xué)合成的重要方法。其中手性拆分和不對稱合成是生物 催化最具吸引力的應(yīng)用領(lǐng)域。在作為生物催化劑的六大類酶中，水解酶能夠催化動力學(xué)拆 分外消旋體得到手性產(chǎn)品，在工業(yè)生物催化中一直扮演著重要角色。近幾年來，氧化還原 酶在工業(yè)上的應(yīng)用得到了迅速增長。目前，采用水解酶動力學(xué)拆分法、生物還原法和生物 氧化法工業(yè)制備光學(xué)活性手性化合物的比例為4:2:1。
[0004] 生物還原法相對于動力學(xué)拆分法而言，最大的優(yōu)勢在于理論收率可達100%，原子 經(jīng)濟性好。然而生物還原反應(yīng)需要輔酶或輔因子的參與，一定程度上限制了其應(yīng)用。由于 輔酶依賴性的緣故，生物還原反應(yīng)中多釆用整細胞作為催化劑，實現(xiàn)體內(nèi)輔酶循環(huán)再生的 同時免去了酶的分離純化步驟。
[0005] (_)-(2R，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯是合成手性藥物、精細 化學(xué)品、農(nóng)藥品的重要手性砌塊，由于有2個手性中心，使得化學(xué)合成較為困難，成本高。本 發(fā)明將采用生物催化制備（_)-(2R，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明采用耶氏解脂假絲酵母細胞催化制備（-)-(2R，3S) -3-(4-碘苯基)-3_羥 基-2-甲基丙酸甲酯，反應(yīng)式如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種耶氏解脂假絲酵母細胞生物還原制備（_)-(2R，3S)-3- (4-碘苯基）-3_羥 基-2-甲基丙酸甲酯的方法，其特征在于反應(yīng)罐中加入磷酸鹽緩沖液，裝料系數(shù)為 0. 6-0. 7，pH為7. 8，加入吸附了底物的白土，使底物2-( 4-氟苯甲酰)-2_丙烯酸甲酯添加量 為80-90 g/L，麥芽浸膏22-26 g，葡萄糖18-22 g/L，木糖12-13 g/L，山梨坦單月桂酸酯為 20-22g/L，12rC高壓滅菌30分鐘；冷卻至32-33°C時，加入濕酵母細胞使?jié)舛葹?9-32g/ L，通氣比為0. 13-0. 16VAV分鐘)，進行生物還原反應(yīng)，反應(yīng)時間為95-100小時；反應(yīng)結(jié)束 后，分別濾出細胞、白土，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液、萃取白土，合并乙酸乙酯萃取液和萃取白 土的乙酸乙酯，蒸出乙酸乙酯，得到產(chǎn)物（_)-(2R，3S)-3- (4-氟苯基）-3_羥基-2-甲基 丙酸甲酯，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率94-96 %，產(chǎn)品收率92-94 %，對映體過量率97-98 %。
2. 權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于濕酵母細胞制備過程如下：耶氏解脂假絲酵母 經(jīng)斜面、搖瓶、種子罐培養(yǎng)得到種子液；發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，裝料系數(shù)為0. 6-0. 7,121°C高 壓滅菌30分鐘，冷卻至28-29°C，將耶氏解脂假絲酵母種子液接種至發(fā)酵罐，接種比例為 6-6. 5%，通氣比為0. 5-1V/ (V分鐘)，28-29°C培養(yǎng)42-48小時，用過濾式離心機離心得到 濕酵母細胞，用作生物還原反應(yīng)催化劑。
3. 權(quán)利要求1所述的方法，其特征在培養(yǎng)液成份為：葡萄糖20-25 g/L，酵母浸膏 10-15 g/L，KH2PO4 4. 4-5.5 g/L，MgSO4 7H20 0.5-0. 6 g/L，玉米油 5-7 g/L，黃豆粉 16-20 區(qū)凡，口11值為7.8。
4. 權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述吸附了底物的白土制作方法為，將底物溶 于乙酸乙酯，底物與乙酸乙酯的比率為0.5 :2,得到底物的乙酸乙酯溶液，用白土吸收此溶 液，然后，烘干、回收乙酸乙酯，即得到吸附底物的白土，調(diào)節(jié)底物與白土用量，使得底物與 白土的質(zhì)量比率為〇. 29-0. 33。
【文檔編號】C12P7/62GK104313066SQ201410518180
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年10月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月1日
【發(fā)明者】劉均洪, 曹延俊, 劉慧 , 張銀, 隋洪南 申請人:青島科技大學(xué)