一種脫脂植物粕中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種脫脂植物粕中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法，其特征在于，包括:1)預(yù)處理：將脫脂植物粕粉碎過篩；2)提取酶解：粉碎后的脫脂植物粕進(jìn)行提取和復(fù)合酶解，固液分離；3)酶滅活：對(duì)步驟2)中獲得的上清液進(jìn)行酶滅活，固液分離；4)濃縮干燥：將步驟3)獲得的上清液濃縮干燥，獲得多肽產(chǎn)品。得到的多肽產(chǎn)品經(jīng)檢測同時(shí)具有抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性(降壓活性)、抗氧化活性、抗菌性、抗炎癥活性和提高免疫力活性。方法工藝簡單、容易控制、通用性強(qiáng)，易于放大生產(chǎn)。
【專利說明】一種脫脂植物粕中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及生物化工【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及脫脂植物柏中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法

【背景技術(shù)】
[0002]目前，從植物中提取的油類品種繁多，因而存在多種脫脂植物柏資源值得深入開發(fā)。從植物脫脂柏類制備的植物分離蛋白降解物中存在大量生物活性多肽，這些多肽部分的活性種類十分豐富，與蛋白來源、使用的酶種類、制備工藝、分子量范圍及序列長度密切相關(guān)。目前，被證明的植物分離蛋白降解出的多肽生物活性種類包括:抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性、抑制血小板凝結(jié)活性、抗氧化活性、抗腫瘤活性、抗菌性、抗炎癥活性、提高免疫力活性、組織修復(fù)活性等。
[0003]常用的多肽制備方法主要有:生物酶降解法、化學(xué)合成法、酸/堿降解法及基因工程法等。生物酶法:酶法工藝是當(dāng)今多肽產(chǎn)品研究與開發(fā)、規(guī)模化生產(chǎn)以及產(chǎn)品創(chuàng)新的主要方向，從蛋白的酶解產(chǎn)物中篩選具有特殊功效的多肽是近年來多肽領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)?；瘜W(xué)合成法:主要以經(jīng)特殊處理后的氨基酸為原料定向合成某種單肽，該技術(shù)主要用于醫(yī)藥、藥品原料中間體、用于診斷試劑等。化學(xué)水解法:主要包括酸解法或堿解法，在高溫條件下經(jīng)過強(qiáng)酸或強(qiáng)堿破壞多肽鏈，將蛋白質(zhì)降解形成多肽?；蚬こ谭?采用基因工程的方法通過DNA重組技術(shù)再通過發(fā)酵的方法制備多肽，這種方法多用來生產(chǎn)長肽和蛋白質(zhì)，而生物活性肽許多都是短肽，限制該技術(shù)的大規(guī)模應(yīng)用。
[0004]如何將植物蛋白酶解成具有不同生理活性的多肽是現(xiàn)在的研究熱點(diǎn)。如專利(CN200910231736.9)以小麥蛋白為原料，先采用胃蛋白酶酶解，后采用胰蛋白酶或胰酶進(jìn)行酶解，經(jīng)滅酶、冷卻、離心后，收集上清液干燥得到具有阿片活性的多肽。再如專利(CN03158292.3)以桿菌內(nèi)切酶水解小麥胚芽提取物，得到具有降血壓、提高免疫力和抗氧化作用的多肽混合物。再如專利(CN201210394066.4)用堿性蛋白酶和中性蛋白酶將玉米蛋白粉酶解為低聚肽水解液，再進(jìn)行復(fù)合風(fēng)味蛋白酶酶解、雙氧水脫色、過氧化氫酶酶解和高溫滅酶，最后加入微量元素進(jìn)行螯合反應(yīng)，從而獲得玉米低聚肽螯合物，既能補(bǔ)充人體所必須的功能性小分子多肽，又能補(bǔ)充人體所需的各種微量元素。然而，這些方法都是針對(duì)某種植物蛋白的，缺少通用性的植物蛋白酶解方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明目的在于提供一種脫脂植物柏中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法，利用不同種類蛋白酶相互搭配，對(duì)脫脂植物柏中的蛋白質(zhì)進(jìn)行酶解，然后經(jīng)滅酶、濃縮、干燥得到多肽產(chǎn)品，得到的多肽產(chǎn)品經(jīng)檢測同時(shí)具有抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性(降壓活性)、抗氧化活性、抗菌性、抗炎癥活性和提高免疫力活性。該方法操作工藝簡單、容易控制、通用性強(qiáng)，易于放大生產(chǎn)。
[0006]本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的:以脫脂植物柏為原料，在提取過程中加入枯草芽孢桿菌蛋白酶、菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶，在提取的同時(shí)進(jìn)行酶解，然后經(jīng)酶滅活、濃縮、干燥等步驟得到具有多種活性的多肽產(chǎn)品，具體方法步驟如下:
[0007]I)預(yù)處理
[0008]將脫脂植物柏粉碎，過50?200目篩。
[0009]2)提取酶解
[0010]按脫脂植物柏重量:水體積比為1:4?1:10的比例，將脫脂植物柏和水放置于容器中，25?85°C下攪拌，按脫脂植物柏重量的0.3?I %加入復(fù)合酶，復(fù)合酶含有枯草芽孢桿菌蛋白酶、菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比為(6?12): (2?4): (I?3)，提取酶解30?180分鐘，完成后離心分離，收集上清液。
[0011]具體實(shí)施過程中，優(yōu)選地，所述復(fù)合酶加入量為脫脂植物柏重量的0.4?0.8%，所述提取酶解溫度為30°C?80°C，所述浸提時(shí)間為60?150分鐘。
[0012]3)酶滅活
[0013]將步驟2)收集的上清液煮沸或調(diào)節(jié)pH，滅酶，離心收集上清液。
[0014]具體實(shí)施過程中，滅酶方式優(yōu)選為煮沸10分鐘。
[0015]4)濃縮干燥
[0016]將步驟3)收集的上清液濃縮、干燥，得到多肽產(chǎn)品。該產(chǎn)品經(jīng)檢測具有降壓活性、抗氧化活性、抗菌性、抗炎癥活性和提高免疫力活性。
[0017]5)多肽精制
[0018]對(duì)得到的多肽混合物，可以通過層析、超濾等方法進(jìn)行分離，獲得具有不同活性的多肽產(chǎn)品。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本方法提供的脫脂植物柏蛋白聯(lián)合水解技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0020](I)通用性強(qiáng)，脫脂花生柏、脫脂大豆柏、脫脂小麥胚芽柏、脫脂玉米柏均能得到具有多種活性的多肽產(chǎn)品；
[0021](2)使用的酶均屬于國家允許添加的食品添加劑，無需處理即可用于食品行業(yè)；
[0022](3)工藝穩(wěn)定、操作簡便、設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)化、成本低廉，便于推廣應(yīng)用。

【具體實(shí)施方式】
[0023]以下參照具體的實(shí)施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0024]實(shí)施例1
[0025]I)將脫脂花生柏1kg粉碎，過100目篩。
[0026]2)在粉碎后的花生柏中加入50kg水，放置于提取罐中，50°C下攪拌，加入50g復(fù)合酶，復(fù)合酶含有枯草芽孢桿菌蛋白酶、菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比為7:2:1，提取酶解120分鐘，完成后離心分離，收集上清液。
[0027]3)將步驟2)收集的上清液煮沸，滅酶，離心收集上清液。
[0028]4)將步驟3)收集的上清液濃縮、干燥，得到多肽產(chǎn)品3.28kg。
[0029]實(shí)施例2
[0030]I)將脫脂大豆柏1kg粉碎，過100目篩。
[0031]2)在粉碎后的大豆柏中加入70kg水，放置于提取罐中，60°C下攪拌，加入30g復(fù)合酶，復(fù)合酶含有枯草芽孢桿菌蛋白酶、菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比為10:3:3，提取酶解150分鐘，完成后離心分離，收集上清液。
[0032]3)將步驟2)收集的上清液煮沸，滅酶，離心收集上清液。
[0033]4)將步驟3)收集的上清液濃縮、干燥，得到多肽產(chǎn)品2.87kg。
[0034]實(shí)施例3
[0035]I)將脫脂小麥胚芽柏1kg粉碎，過100目篩。
[0036]2)在粉碎后的小麥胚芽柏中加入40kg水，放置于提取罐中，50°C下攪拌，加入70g復(fù)合酶，復(fù)合酶含有枯草芽孢桿菌蛋白酶、菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比為8:2:3，提取酶解90分鐘，完成后離心分離，收集上清液。
[0037]3)將步驟2)收集的上清液煮沸，滅酶，離心收集上清液。
[0038]4)將步驟3)收集的上清液濃縮、干燥，得到多肽產(chǎn)品2.76kg。
[0039]實(shí)施例4
[0040]I)將脫脂玉米柏1kg粉碎，過100目篩。
[0041]2)在粉碎后的玉米柏中加入10kg水，放置于提取罐中，65°C下攪拌，加入30g復(fù)合酶，復(fù)合酶含有枯草芽孢桿菌蛋白酶、菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比為6:3:3，提取酶解180分鐘，完成后離心分離，收集上清液。
[0042]3)將步驟2)收集的上清液煮沸，滅酶，離心收集上清液。
[0043]4)將步驟3)收集的上清液濃縮、干燥，得到多肽產(chǎn)品2.27kg。
[0044] 申請(qǐng)人:聲明，本發(fā)明通過上述實(shí)施例來說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明并不局限于上述實(shí)施例，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述實(shí)施例才能實(shí)施。所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對(duì)本發(fā)明的任何改進(jìn)，對(duì)本發(fā)明所選用原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍和公開范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種脫脂植物柏中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法，其特征在于，包括: 1)預(yù)處理:將脫脂植物柏粉碎過篩； 2)提取酶解:粉碎后的脫脂植物柏進(jìn)行提取和復(fù)合酶解，固液分離； 3)酶滅活:對(duì)步驟2)中獲得的上清液進(jìn)行酶滅活，固液分離； 4)濃縮干燥:將步驟3)獲得的上清液濃縮干燥，獲得多肽產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的脫脂植物柏中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法，其特征在于，步驟I)中，所述脫脂植物柏包括但不限于花生柏、大豆柏、芝麻柏、玉米柏、小麥胚芽柏。
3.如權(quán)利要求1或2所述的脫脂植物柏中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法，其特征在于，步驟I)中進(jìn)行篩分時(shí)，所優(yōu)選篩目范圍為50?200目，更優(yōu)選為100目。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的脫脂植物柏中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法，其特征在于，步驟2)中，所述脫脂植物柏與水的按g/ml的重量體積比為1:4?1:10，所述復(fù)合酶加入量為脫脂植物柏重量的0.3?1%，所述復(fù)合酶包括枯草芽孢桿菌蛋白酶、菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比為(6?12): (2?4): (I?3)，所述提取酶解溫度為25°C?85°C，所述浸提時(shí)間為30?180分鐘； 優(yōu)選地，所述復(fù)合酶加入量為脫脂植物柏重量的0.4?0.8%，所述提取酶解溫度為30°C?80°C，所述浸提時(shí)間為60?150分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的脫脂植物柏中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法，其特征在于，步驟3)中，所述酶滅活方式為煮沸或調(diào)節(jié)pH，優(yōu)選為將步驟2)中收集的上清液煮沸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的脫脂植物柏中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法，其特征在于，步驟4)中，將步驟3)中收集的上清液濃縮、干燥，制備具有多種生物活性的多肽產(chǎn)品。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的脫脂植物柏中蛋白質(zhì)復(fù)合酶解方法，其特征在于，還包括使用層析、超濾等方法對(duì)步驟4)獲得的多肽產(chǎn)品進(jìn)行進(jìn)一步精制。
【文檔編號(hào)】C12P21/06GK104313094SQ201410559079
【公開日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月21日
【發(fā)明者】楊子豐, 孔英俊, 張貴鋒, 馬嘯宇, 張澤玉, 陳靜, 康躋耀 申請(qǐng)人:河北子豐生物科技有限公司