高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑及其制備方法，屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖【技術(shù)領(lǐng)域】。其主要取短乳桿菌、脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物和乳酸、聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯，按重量比例充分混合，經(jīng)灌裝機灌裝后封口，每個包裝凈含量為5L。本發(fā)明可直接投入養(yǎng)殖水體，快速有效降解養(yǎng)殖水體中的蛋白質(zhì)、碳水化合物等有機物質(zhì)，去除水體中氨氮、亞硝酸鹽等有害氮素，不增加水體耗氧率，降低并維持水體pH的穩(wěn)定，拮抗水體中的有害微生物、防止水草腐爛，促進(jìn)養(yǎng)殖生物的攝食，優(yōu)化和修復(fù)養(yǎng)殖環(huán)境，為高溫期的養(yǎng)殖生物營造一個健康良好的水體生態(tài)環(huán)境。
【專利說明】高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑及其制備方法，屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]隨著經(jīng)濟的快速發(fā)展和養(yǎng)殖業(yè)者對高產(chǎn)高效益的追求，中國的水產(chǎn)養(yǎng)殖朝著高密度、集約化、規(guī)?；姆较虬l(fā)展，形成了高生物負(fù)載量和高投入量的養(yǎng)殖模式，使得水體的富營養(yǎng)化日益嚴(yán)重。水體富營養(yǎng)化的根本原因是植物性營養(yǎng)元素(氮、磷)的含量過高，而氮磷等植物性營養(yǎng)元素來自工業(yè)廢水、生活污水的不當(dāng)排放以及水產(chǎn)養(yǎng)殖中過量投入飼料、漁肥等產(chǎn)生的自身污染。
[0003]養(yǎng)殖水體富營養(yǎng)化的直觀表現(xiàn)是水體中氮磷元素含量高，水體中的藻類(主要是藍(lán)藻)短時間內(nèi)大量繁殖并聚集，造成水體PH升高，溶氧下降，氨氮和亞硝態(tài)氮對養(yǎng)殖生物產(chǎn)生毒性。尤其在高溫期間，隨著水溫的不斷升高，養(yǎng)殖水體中的有害微生物劇增，水體中殘剩的肥料、飼料、生物排泄物和代謝產(chǎn)物不斷地累積，可分解產(chǎn)生氨氮、亞硝酸鹽等有害物質(zhì)，降低水體溶氧，影響水環(huán)境質(zhì)量，危害養(yǎng)殖生物健康。而此時因藻類大量生長，使水體PH值上升，加劇了這種危害作用。因此如何在保證高溫期間養(yǎng)殖生物安全的前提下有效凈化養(yǎng)殖水質(zhì)、降低水質(zhì)PH和氮素含量是養(yǎng)殖業(yè)者關(guān)注的焦點。
[0004]近年來，相關(guān)的研究和應(yīng)用取得了一定的效果，主要是通過外源添加高活性的微生物來達(dá)到凈化的目的，但同樣存在諸多問題。在水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的凈化上，多采用安全高效的微生物控制技術(shù)，如EM菌、芽孢桿菌等，成本低、使用方便、效果顯著，可有效控制水體的有機污染，降低水體中氨氮、亞硝酸鹽的污染水平。但目前所使用的這類微生物制劑多為好氧性微生物，在高溫季節(jié)使用會加大水體的耗氧，使得本身含量已不高的溶解變得更低，甚至可導(dǎo)致水體缺氧。而低溶氧又反過來抑制微生物本身的活性。同時此類微生物對水體pH的降低和穩(wěn)定效果不佳。而高PH下一些無機氮素對養(yǎng)殖生物的毒性會增強。因此水產(chǎn)養(yǎng)殖在高溫期的一項重點工作是水質(zhì)的健康管理，降低pH、有效去除氮素，這需要開發(fā)一種環(huán)境友好的，集凈化水質(zhì)、防止缺氧、降堿脫氮于一體的功能性生物制劑，為水產(chǎn)養(yǎng)殖的良性發(fā)展提供技術(shù)支撐。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑及其制備方法，利用短乳桿菌、脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物和乳酸、聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯，經(jīng)合理加工和復(fù)配后直接投入養(yǎng)殖水體，快速有效降解養(yǎng)殖水體中的蛋白質(zhì)、碳水化合物等有機物質(zhì)，去除水體中氨氮、亞硝酸鹽等有害氮素，不增加水體耗氧率，降低并維持水體PH的穩(wěn)定，拮抗水體中的有害微生物、防止水草腐爛，促進(jìn)養(yǎng)殖生物的攝食，優(yōu)化和修復(fù)養(yǎng)殖環(huán)境，為高溫期的養(yǎng)殖生物營造一個健康良好的水體生態(tài)環(huán)境。
[0006]本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題而采用的技術(shù)方案是:一種高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑，按重量份計包括:短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物45?55份，脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物35?50份，乳酸3飛份，聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯廣2份。將上述物料混合均勻后裝入包裝瓶中，即得產(chǎn)品高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑。
[0007]—種高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑的制備方法，其主要步驟如下:
(O短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物制備:從試管斜面上取一環(huán)短乳桿菌菌苔，接種到50 mL經(jīng)過滅菌處理的MRS液體培養(yǎng)基中，于35 1:靜置培養(yǎng)40 h;然后將其接入5 L經(jīng)過滅菌處理的MRS液體培養(yǎng)基中，于35 1:靜置培養(yǎng)30 h，制成菌種種子液備用；此時菌種種子液的活菌數(shù)彡19 CFU.ml/1 ；
在0.5噸不銹鋼發(fā)酵罐中加入總體積350 L的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)121 1:滅菌處理15min后冷卻備用；
將上述菌種種子液接入不銹鋼發(fā)酵罐，在35 °C、轉(zhuǎn)速120 r.rniiT1的條件下培養(yǎng)30h，待菌種種子液濃度彡19CFU.ml/1時放入經(jīng)滅菌的500 L桶中備用；
(2)脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物制備:從試管斜面上取一環(huán)脫氮副球菌菌苔，接種到50mL經(jīng)過滅菌處理的LB液體培養(yǎng)基中，于30 1:靜置培養(yǎng)30 h ;然后將其接入5 L經(jīng)過滅菌處理的LB液體培養(yǎng)基中，于30 1:靜置培養(yǎng)28h，制成菌種種子液備用；此時菌種種子液的活菌數(shù)彡19 CFU.ml/1 ；
在0.5噸不銹鋼發(fā)酵罐中加入總體積350 L的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)121 °C滅菌15 min后冷卻備用；
將上述菌種種子液接入不銹鋼發(fā)酵罐，在30 °C、轉(zhuǎn)速120 r.HiirT1的條件下培養(yǎng)30h，待菌種種子液濃度彡19CFU.ml/1時放入經(jīng)滅菌的500 L桶中備用；
(3)混合:先將短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物和脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物混合，然后加入乳酸，最后加入聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯，混勻后包裝。
[0008]進(jìn)一步地，在本發(fā)明的所述步驟(I)中，所述的MRS液體培養(yǎng)基包括:牛肉膏10g.!^1,蛋白胨10 g.L—1,酵母膏5 g.!^1，葡萄糖5 g.L_\朽1檬酸二胺2 g.171,吐溫80I g.L—1,乙酸鈉5 g.L—1,磷酸氫二鉀2 g.L—1,硫酸鎂0.2 g.L—1、硫酸猛0.05 g.L—1,碳酸鈣20 g.L—1，將所述MRS液體培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至6.5，經(jīng)121°C滅菌處理15 min后冷卻備用。
[0009]進(jìn)一步地，在本發(fā)明的所述步驟(2)中，所述的LB液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)富集培養(yǎng)基，包括蛋白胨10 g.!/1，酵母膏5 g.Γ1, NaCl 10 g.L—1，將所述LB液體培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至7.0，經(jīng)1211:滅菌處理201^11后冷卻備用。
[0010]進(jìn)一步地，本發(fā)明的所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基，其組份比例按重量份數(shù)計包括:糖蜜(糖分含量> 55%)15份、大豆粉5份、鮮魚膏5份、酵母膏5份、乙酸鈉2份、硫酸鎂0.1份、磷酸氫二鉀1.0份、水66.9份，將所有組份于室溫條件下在不銹鋼發(fā)酵罐中溶解混合，將所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至6.5飛.8，經(jīng)121 °〇滅菌處理15 min，冷卻后備用。
[0011]本發(fā)明中各組分的作用原理如下:
1、短乳桿菌:短乳桿菌(Lactobacillus brevis)屬乳桿菌目、乳桿菌科、短乳桿菌屬，分布較廣，在植物莖葉表面附有，在泡菜中更為常見，在人和動物體消化系統(tǒng)中以小腸最多。短乳桿菌細(xì)胞呈桿狀，不形成芽孢，革蘭氏染色陽性；接觸酶、氧化酶陰性；在空氣中不生長，兼性厭氧，發(fā)酵葡萄糖、葡萄糖酸鈉、阿拉伯糖、果糖、核糖、乳糖、麥芽糖、蜜二糖、半乳糖產(chǎn)酸；能在與人體小腸膽鹽濃度接近的環(huán)境中生長；食鹽的適宜濃度大致為2°/Γ3% ;在pH 6.0附近生長良好，在pH 3.0的環(huán)境中也能表現(xiàn)出良好的耐酸性，但pH過低或者過高都會抑制其生長；發(fā)酵的適宜溫度是29.5?30°C。
[0012]短乳桿菌可自行產(chǎn)生天然的抗生素一乳酸桿菌素(Lactobacillin)，乳酸桿菌素具有刺激機體分泌抗體、提高免疫力和促進(jìn)有益菌的生長、選擇性殺死致病菌等重要功能。短乳桿菌產(chǎn)生的多糖能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生干擾素，引起非特異性免疫。短乳桿菌有較強的去除亞硝酸鹽能力，若亞硝酸鹽含量在250 mg噸―1以內(nèi)，接種短乳桿菌48 h亞硝酸鹽就可全部去除，短乳桿菌去除亞硝酸鹽的最適PH值為5.(Γ6.0，最適溫度為30°C;若亞硝酸鹽含量在200 mg.L-1以內(nèi)，短乳桿菌對亞硝酸鹽的去除量與底物濃度有著極顯著的線性關(guān)系。
[0013]本發(fā)明利用其分泌乳酸和乳酸桿菌素來降低水體pH值，清除水體的有機污染，同時轉(zhuǎn)化去除水體中的亞硝酸鹽、高溫期使用不耗水體溶氧等。
[0014]2、脫氮副球菌:脫氮副球菌(Paracoccus denitrificans)屬于變形菌門(Proteobacteria)、甲型變形菌綱(Alphaproteobacteria)、紅細(xì)菌目(Rhodobacterales)、紅細(xì)菌科(Rhodobacteraceae)、副球菌屬(Paracoccus),是一種革蘭氏陰性菌，球狀或短桿狀成簇，不運動。菌落直徑大小約2-3_，圓形、邊緣完整、平滑、白色不透明。它可在溫度5^37°C, ρΗ7.(Γ8.5范圍內(nèi)生長，最適生長溫度為25?35°C，最適pH為7.5左右。它們生活在好氧或厭氧環(huán)境中，適應(yīng)性強，常見于土壤以及自然或人工的湖泊或海洋中。脫氮副球菌可以在好氧條件下進(jìn)行反硝化作用，同時又是一種兼性化能無機自養(yǎng)細(xì)菌。既能在H2、02、CO2同時存在的情況下進(jìn)行自養(yǎng)生長，也能利用各種糖類、氨基酸等有機物進(jìn)行異養(yǎng)生長。另外對有機污染物具有很高的降解能力。本發(fā)明主要將其作為菌種來生產(chǎn)菌液，利用其具有的異養(yǎng)硝化和好氧反硝化能力，實現(xiàn)在溶氧變化較大的條件下有效治理水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的無機氮素污染。
[0015]3、乳酸:學(xué)名為2-羥基丙酸，是一種化合物，在多種生物化學(xué)過程中起作用。其分子式為C3H6O3，是一個含有羥基的羧酸，因此是一個α-羥酸(AHA)。在水溶液中它的羧基釋放出一個質(zhì)子，而產(chǎn)生乳酸根離子CH3CH0HC00 —。乳酸有很強的防腐保鮮功效，可用在果酒、飲料、肉類、食品、糕點制作、蔬菜腌制以及罐頭加工、糧食加工、水果的貯藏，具有調(diào)節(jié)PH值、延長保質(zhì)期、調(diào)味、保持食品色澤、提高產(chǎn)品質(zhì)量等作用；在農(nóng)藥方面可用于生產(chǎn)緩釋農(nóng)藥，例如除草劑，具有對農(nóng)作物和土壤無毒無害且高效的特點；還用于青飼料貯藏齊U、牧草成熟劑；在飼料中作為生長促進(jìn)劑。乳酸可以降低胃內(nèi)的PH值，起到活化消化酶、改善氨基酸消化能力的作用，并對腸道上皮的生長有好處。
[0016]本發(fā)明利用其對水體pH的緩沖和降低作用來凈化水質(zhì)，并保持產(chǎn)品中微生物的貯存有效期和活性。
[0017]4、聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯:俗名為吐溫-40，表面活性劑。分子式為:C22H42O6.(C2H4O)no本品為琥珀色油狀液體，相對密度1.05?1.10，折射率1.470，粘度0.4?0.6Pa.s (25°C), HLB值15.6。溶于水、稀酸、稀堿和多數(shù)有機溶劑，不溶于植物油和礦物油。用作乳化劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、擴散劑和纖維潤滑劑。本發(fā)明利用其緩沖和穩(wěn)定作用。
[0018]本發(fā)明具有如下優(yōu)點:本發(fā)明利用短乳桿菌、脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物和乳酸、聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯，經(jīng)合理加工和復(fù)配后直接投入養(yǎng)殖水體，快速有效降解養(yǎng)殖水體中的蛋白質(zhì)、碳水化合物等有機物質(zhì)，去除水體中氨氮、亞硝酸鹽等有害氮素，不增加水體耗氧率，降低并維持水體PH的穩(wěn)定，拮抗水體中的有害微生物、防止水草腐爛，促進(jìn)養(yǎng)殖生物的攝食，優(yōu)化和修復(fù)養(yǎng)殖環(huán)境，為高溫期的養(yǎng)殖生物營造一個健康良好的水體生態(tài)環(huán)境。
[0019]本發(fā)明的高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑使用方便，使用量小，每畝水面每米水深的用量僅為100(Tl500 mL ;使用后不會造成水體缺氧，可顯著降低水體中有機物質(zhì)、氨氮、亞硝酸鹽、硫化氫等有害物質(zhì)的含量，降低PH值，改善水質(zhì)和底質(zhì)的環(huán)境質(zhì)量；可拮抗水體中的病原微生物，防止水草腐爛，改善高溫期養(yǎng)殖生物的攝食情況和生存條件，提高養(yǎng)殖產(chǎn)量和質(zhì)量。
[0020]需要說明的是:本發(fā)明中的短乳桿菌Lactobacillus brevis, CGMCC1.558,由中國普通微生物菌種保藏管理中心提供；本發(fā)明中的脫氮副球菌Paracoccus denitrificans,ACCC10489,由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供。

【具體實施方式】
[0021]下述的不銹鋼發(fā)酵罐、混合機、包裝機等均為常規(guī)設(shè)備，在市場上購買，無任何特殊要求，采用通常的加工方法。本發(fā)明所采用的物料來源方便，均可在市場上購買。
[0022]下面本發(fā)明將結(jié)合實施例作進(jìn)一步描述:
實施例1:
以下實施例均采用如下工藝步驟:
(I)MRS液體培養(yǎng)基的制備:該MRS液體培養(yǎng)基包括:牛肉膏10 g.L—1，蛋白胨10g.L—1,酵母膏5 g.L—1,葡萄糖5 g.L_\朽1檬酸二胺2 g.L_\吐溫80 I g.L_\乙酸鈉5g.L—1，磷酸氫二鉀2 8*171，硫酸鎂0.2 8*171、硫酸錳0.05 g.L—1，碳酸鈣20 g.L—1，將MRS液體培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至6.5，經(jīng)121°C滅菌處理15 min后冷卻備用。
[0023](2)LB液體培養(yǎng)基的制備:LB液體培養(yǎng)基的LB液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)富集培養(yǎng)基，包括蛋白胨10 g.!/1，酵母膏5 g-T1jNaCl 10 g.L—1，將LB液體培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至7.0，經(jīng)121 °C滅菌處理20min后冷卻備用。
[0024](3)液體發(fā)酵培養(yǎng)基的制備:液體發(fā)酵培養(yǎng)基，其組份比例按重量份數(shù)計包括:糖蜜(糖分含量> 55%) 15份、大豆粉5份、鮮魚膏5份、酵母膏5份、乙酸鈉2份、硫酸鎂0.1份、磷酸氫二鉀1.0份、水66.9份，將所有組份于室溫條件下在不銹鋼發(fā)酵罐中溶解混合，將所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至6.5飛.8，經(jīng)121 °〇滅菌處理15 min，冷卻后備用。
[0025](4)短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物制備:從試管斜面上取一環(huán)短乳桿菌菌苔，接種到50mL經(jīng)過滅菌處理的MRS液體培養(yǎng)基中，于35 1:靜置培養(yǎng)40 h ;然后將其接入5 L經(jīng)過滅菌處理的MRS液體培養(yǎng)基中，于35 1:靜置培養(yǎng)30 h，制成菌種種子液備用；此時菌種種子液的活菌數(shù)彡19 CFU.mL'
[0026]在0.5噸不銹鋼發(fā)酵罐中加入總體積350 L的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)121 °C滅菌處理15 min后冷卻備用。
[0027]將上述菌種種子液接入該0.5噸不銹鋼發(fā)酵罐，在35 °C、轉(zhuǎn)速120 r.mirT1的條件下培養(yǎng)30 h，待菌種種子液濃度> 19CFU.mL—1時放入經(jīng)滅菌的500 L桶中備用。
[0028](5)脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物制備:從試管斜面上取一環(huán)脫氮副球菌菌苔，接種到50 mL經(jīng)過滅菌處理的LB液體培養(yǎng)基中，于30 1:靜置培養(yǎng)30 h ;然后將其接入5 L經(jīng)過滅菌處理的LB液體培養(yǎng)基中，于30 1:靜置培養(yǎng)28h，制成菌種種子液備用；此時菌種種子液的活菌數(shù)彡19 CFU.mL—1。
[0029]在0.5噸不銹鋼發(fā)酵罐中加入總體積350 L的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)121 °C滅菌15min后冷卻備用。
[0030]將上述菌種種子液接入該0.5噸不銹鋼發(fā)酵罐，在30 °C、轉(zhuǎn)速120 r.mirT1的條件下培養(yǎng)30 h，待菌種種子液濃度> 19CFU.mL—1時放入經(jīng)滅菌的500 L桶中備用。
[0031](6)混合:按重量份數(shù)計，取短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物45?55份，脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物35?50份，乳酸3飛份，聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯f 2份，混合均勻后裝入包裝瓶中，即得產(chǎn)品高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑。
[0032]實施例1:
在上述步驟(3)中，將液體發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至6.5飛.8 ；
在上述步驟(6)中，按重量份數(shù)計，取短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物50份，脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物45份，乳酸4份，聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯I份，混合均勻后裝入包裝瓶中，即得產(chǎn)品高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑。
[0033]應(yīng)用實施例1:
取實施例1制備的產(chǎn)品在浙江上虞一白對蝦養(yǎng)殖池塘使用。
[0034]面積10畝，夏季高溫(8月)時池塘水質(zhì)過濃，水色不好，呈深綠色，底質(zhì)有些黑臭，水體氨氮達(dá)1.2 mg.L_\亞硝酸鹽為0.35 mg.L—1，溶解氧為4.2 mg.L—1，水體透明度低，為18 cm, pH達(dá)9.2，蝦類生長不良。第一天上午10點將上述配方的生物制劑用于養(yǎng)殖池塘中，用量為100g/畝.米水深。用后2天池塘中的亞硝酸鹽降為0.18 mg.L_\氨氮降為0.8 mg.L—1，溶解氧為4.8 mg.L_S pH為8.8水質(zhì)變得清爽；5天后水體透明度增大至25cm，底質(zhì)臭味消退，蝦類活動恢復(fù)正常，蛻殼增加。
[0035]實施例2:
在上述步驟(3)中，將液體發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至6.5飛.8 ；
在上述步驟(6)中，按重量份數(shù)計，取短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物48份，脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物46份，乳酸5份，聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯I份，混合均勻后裝入包裝瓶中，即得產(chǎn)品高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑。
[0036]應(yīng)用實施例2:
取實施例2制備的產(chǎn)品在浙江湖州一加州鱸魚養(yǎng)殖池塘使用。
[0037]面積15畝，夏季高溫(8月)時池塘水質(zhì)過濃，水色不好，呈深綠色，底質(zhì)有些黑臭，水體氨氮達(dá)I.6 mg.L4,亞硝酸鹽為0.32 mg.I71，溶解氧為4.0 mg.I71, pH達(dá)8.9,水體透明度低，為15 cm，魚類生長攝食情況不佳。第一天上午10點將上述配方的生物制劑用于養(yǎng)殖池塘中，用量為100g/畝.米水深。用后2天池塘中的亞硝酸鹽降為0.20 mg.L—1，氨氮降為0.95 mg ，溶解氧為4.5 mg*r1,pH為8.6，水質(zhì)變得清爽；5天后水體透明度增大至23 cm，底質(zhì)臭味消退，魚類活動恢復(fù)正常，攝食增加。
[0038]實施例3:
在上述步驟(3)中，將液體發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至6.5飛.8 ；
在上述步驟(6)中，按重量份數(shù)計，取短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物47份，脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物46份，乳酸5份，聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯2份，混合均勻后裝入包裝瓶中，即得產(chǎn)品高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑。
[0039]應(yīng)用實施例3:
取實施例3制備的產(chǎn)品在浙江杭州一甲魚養(yǎng)殖池塘使用。
[0040]面積10畝，夏季高溫(7月)時池塘水質(zhì)過濃，水色不好，呈深綠色，底質(zhì)有些黑臭，水體氨氮達(dá)2.3 mg.L_\亞硝酸鹽為0.38 mg.L_S溶解氧為3.8 mg.L_S pH達(dá)8.9,水體透明度低，為20 cm,甲魚生長不良。第一天上午10點將上述配方的生物制劑用于養(yǎng)殖池塘中，用量為1500g/畝?米水深。用后2天池塘中的亞硝酸鹽降為0.12 mg.1/1,氨氮降為0.82 mg.L—1，溶解氧為5.0 mg.L-1，pH為8.5，水質(zhì)變得清爽；5天后水體透明度增大至30cm，底質(zhì)臭味消退，甲魚活動恢復(fù)正常，攝食增加。
【權(quán)利要求】
1.一種高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑，其特征在于:按重量份計包括:短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物45?55份，脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物35?50份，乳酸3飛份，聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯廣2份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑的制備方法，其主要步驟如下: (1)短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物制備:從試管斜面上取一環(huán)短乳桿菌菌苔，接種到50mL經(jīng)過滅菌處理的MRS液體培養(yǎng)基中，于35 1:靜置培養(yǎng)40 h;然后將其接入5 L經(jīng)過滅菌處理的MRS液體培養(yǎng)基中，于35 1:靜置培養(yǎng)30 h，制成菌種種子液備用； 在0.5噸不銹鋼發(fā)酵罐中加入總體積350 L的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)121 1:滅菌處理15min后冷卻備用； 將上述菌種種子液接入不銹鋼發(fā)酵罐，在35 °C、轉(zhuǎn)速120 r.HiirT1的條件下培養(yǎng)30h，待菌種種子液濃度彡19CFU.ml/1時放入經(jīng)滅菌的500 L桶中備用； (2)脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物制備:從試管斜面上取一環(huán)脫氮副球菌菌苔，接種到50mL經(jīng)過滅菌處理的LB液體培養(yǎng)基中，于30 1:靜置培養(yǎng)30 h ;然后將其接入5 L經(jīng)過滅菌處理的LB液體培養(yǎng)基中，于30 1:靜置培養(yǎng)28h，制成菌種種子液備用； 在0.5噸不銹鋼發(fā)酵罐中加入總體積350 L的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)121 °C滅菌15 min后冷卻備用； 將上述菌種種子液接入不銹鋼發(fā)酵罐，在30 °C、轉(zhuǎn)速120 r.HiirT1的條件下培養(yǎng)30h，待菌種種子液濃度彡19CFU.ml/1時放入經(jīng)滅菌的500 L桶中備用； (3)混合:先將短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物和脫氮副球菌的高濃度培養(yǎng)物混合，然后加入乳酸，最后加入聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯，混勻后包裝。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑的制備方法，其特征在于:在所述步驟(I)中，所述的MRS液體培養(yǎng)基包括:牛肉膏10 g.L—1，蛋白胨10 g -Γ1,酵母膏 5 g.1^1,葡萄糖 5 g.L-1,朽1 檬酸二胺 2 g.17^:1^80 I g.171,乙酸鈉 5 g.L-1,磷酸氫二鉀2 g.L—1，硫酸鎂0.2 g.L—1、硫酸錳0.05 g.L—1，碳酸鈣20 g.L—1，將所述MRS液體培養(yǎng)基的PH調(diào)節(jié)至6.5，經(jīng)121 °C滅菌處理15 min后冷卻備用。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑的制備方法，其特征在于:在所述步驟(2)中，所述的LB液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)富集培養(yǎng)基，包括蛋白胨10 g.L—1，酵母膏5 g.L_S NaCl 10 g.L—1，將所述LB液體培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至7.0,經(jīng)121°C滅菌處理20min后冷卻備用。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高溫期間養(yǎng)殖水體降堿脫氮的生物制劑的制備方法，其特征在于:所述的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，其組份比例按重量份數(shù)計包括:糖蜜(糖分含量> 55%) 15份、大豆粉5份、鮮魚膏5份、酵母膏5份、乙酸鈉2份、硫酸鎂0.1份、磷酸氫二鉀1.0份、水66.9份，將所有組份于室溫條件下在不銹鋼發(fā)酵罐中溶解混合，將所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至6.5飛.8，經(jīng)121 °〇滅菌處理15 min，冷卻后備用。
【文檔編號】C12R1/24GK104293722SQ201410568427
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月23日
【發(fā)明者】楊長根, 蘭春春 申請人:浙江上升農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司