蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，將蛹蟲(chóng)草干燥，粉碎至80~120目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理1~3min；然后加熱至60~90℃，攪拌反應(yīng)20~60min，然后過(guò)濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲(chóng)草多糖；濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8~10，加入堿性蛋白酶水解8~12h，煮沸1~5min，終止酶解反應(yīng)，過(guò)濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲(chóng)草多肽。本發(fā)明提供的提取工藝，可同時(shí)提取出蛹蟲(chóng)草多糖和多肽，實(shí)現(xiàn)蛹蟲(chóng)草資源的充分利用，并且提取條件溫和，提取出產(chǎn)品的生物活性高，提取方法簡(jiǎn)單易操作。
【專(zhuān)利說(shuō)明】蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥材料【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝。

【背景技術(shù)】
[0002]現(xiàn)代社會(huì)生活節(jié)奏較快，多數(shù)人身體處于亞健康狀態(tài)，炎癥、癌癥、腫瘤等疾病時(shí)有發(fā)生。蛹蟲(chóng)草作為一種食、藥兼用真菌，其有效成分例如蟲(chóng)草多肽、蟲(chóng)草多糖等在醫(yī)療、保健、食療等各方面都具有顯著功效，因此蛹蟲(chóng)草系列產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)研究應(yīng)該受到重視。
[0003]有關(guān)研究表明，蛹蟲(chóng)草富含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖三大類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以及多種維生素和微量元素，含有豐富的蟲(chóng)草酸(甘露醇)、蟲(chóng)草素(3’ -脫氧腺苷)、蟲(chóng)草多糖和超氧化物歧化酶(SOD)等生物活性物質(zhì)。蛹蟲(chóng)草子座含蛋白質(zhì)25.73%、糖27.75%、脂肪2.93%，其中氨基酸總含量為11.45 mg/g，微量元素Se、Zn、Cu的含量比冬蟲(chóng)夏草高出三倍以上，還測(cè)定到蛹蟲(chóng)草子座包含多種B族維生素和W、VE,以及蟲(chóng)草酸、SOD和蟲(chóng)草素等特殊化學(xué)成分，其中SOD的含量為584 u/mg。姜泓等(2000)、呂子明等(2008)使用大孔吸附樹(shù)脂和硅膠色譜柱等分離純化技術(shù)，從蛹蟲(chóng)草中首次分離純化出4種新型化合物，即蟲(chóng)草環(huán)肽Α、Ν6-[β-(乙酰胺甲酰)氧乙基]腺苷、二十四烷酸單甘油酯、Ν-(2-羥乙基)腺苷。此夕卜，王剛等利用浸提、濃縮、色譜分離等常規(guī)提取分離方法，從蛹蟲(chóng)草子座中分離出一種腦苷脂類(lèi)化合物一腦苷脂B，此物質(zhì)被證明在動(dòng)植物細(xì)胞識(shí)別中起重要作用。Byung等從蛹蟲(chóng)草子座中分離得到分子量為12kDa的小分子蛋白肽，經(jīng)檢測(cè)其對(duì)尖孢鐮刀菌有顯著抗菌活性，并能對(duì)人乳腺癌和膀胱癌細(xì)胞有抑制作用；Ng等從蛹蟲(chóng)草中提取到天然活性肽Cordymin，測(cè)定到此多肽分子量為10.90kDa，其對(duì)玉米小班病菌、球腔菌、絲核菌、加拿大白色念珠菌都有顯著抑制作用；宗靜采用胃蛋白酶和胰蛋白酶雙酶酶解蛹蟲(chóng)草子座制備的蛹蟲(chóng)草多肽具有一定的還原能力。在蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草多糖等活性成分提取過(guò)程中，子座剩余物多被以殘?jiān)问綇U棄，造成資源浪費(fèi)及環(huán)境污染，且在熱水浸提蟲(chóng)草素所得蛹蟲(chóng)草剩余物中，會(huì)有一些蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草多糖的殘留，具有抗氧化、抑菌、提高機(jī)體免疫力等功能。因此利用熱水浸提蟲(chóng)草素所得蛹蟲(chóng)草剩余物制備具有特定生物學(xué)功能的蛹蟲(chóng)草多肽，不僅有利于蛹蟲(chóng)草資源的綜合利用，更能進(jìn)一步挖掘開(kāi)發(fā)蛹蟲(chóng)草的潛在價(jià)值。SDS-PAGE和葡聚糖凝膠層析技術(shù)作為現(xiàn)階段在蛋白多肽物質(zhì)測(cè)定分離中應(yīng)用最廣的方法之一，可分離鑒定分子量在15-200kDa范圍內(nèi)的大分子蛋白及肽類(lèi)物質(zhì)，對(duì)多肽組分的帶電性質(zhì)、形狀等也可作出初步鑒定。另外，蛹蟲(chóng)草HWM剩余物經(jīng)酶解后所得的酶解液呈現(xiàn)棕色且顏色較深，影響了后續(xù)蛹蟲(chóng)草多肽的分離純化。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，可同時(shí)提取出蛹蟲(chóng)草多糖和多肽，實(shí)現(xiàn)蛹蟲(chóng)草資源的充分利用，并且提取條件溫和，提取出產(chǎn)品的生物活性高，提取方法簡(jiǎn)單易操作。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:
一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
1)將蛹蟲(chóng)草干燥，粉碎至8(Γ120目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理f3min ；
2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲(chóng)草水溶液加熱至6(T90°C，攪拌反應(yīng)2(T60min，然后過(guò)濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲(chóng)草多糖；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8?10，加入堿性蛋白酶水解8?12h，煮沸I飛min，終止酶解反應(yīng)，過(guò)濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲(chóng)草多肽。
[0006]步驟I)中蛹蟲(chóng)草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:1(Γ20，單位為g/mL。
[0007]步驟I)超聲處理的超聲頻率為100(Tl800W。
[0008]步驟2)中加熱至80°C,攪拌反應(yīng)40min。
[0009]步驟3)中堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入400(T6000U。
[0010]步驟3)中堿性蛋白酶水解1h,煮沸2min。
[0011]有益效果:本發(fā)明提供的一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，可同時(shí)提取出蛹蟲(chóng)草多糖和多肽，實(shí)現(xiàn)蛹蟲(chóng)草資源的充分利用，并且提取條件溫和，提取出產(chǎn)品的生物活性高，提取方法簡(jiǎn)單易操作。
[0012]【具體實(shí)施方式】實(shí)施例1
一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲(chóng)草干燥，粉碎至100目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理Imin ;蛹蟲(chóng)草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:18，單位為g/mL。
[0013]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲(chóng)草水溶液加熱至90°C，攪拌反應(yīng)20min，然后過(guò)濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲(chóng)草多糖，提取率65% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8，加入堿性蛋白酶水解8h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入4000U，煮沸3min，終止酶解反應(yīng)，過(guò)濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲(chóng)草多肽，提取率78%。
[0014]實(shí)施例2
一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲(chóng)草干燥，粉碎至80目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理f 3min ;蛹蟲(chóng)草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:10，單位為g/mL。
[0015]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲(chóng)草水溶液加熱至70°C，攪拌反應(yīng)30min，然后過(guò)濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲(chóng)草多糖，提取率63% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至10，加入堿性蛋白酶水解8h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入5000U，煮沸3min，終止酶解反應(yīng)，過(guò)濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲(chóng)草多肽，提取率71%。
[0016]實(shí)施例3
一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲(chóng)草干燥，粉碎至80目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理2min ;蛹蟲(chóng)草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:18，單位為g/mL。
[0017]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲(chóng)草水溶液加熱至80°C，攪拌反應(yīng)30min，然后過(guò)濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲(chóng)草多糖，提取率66% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至9，加入堿性蛋白酶水解10h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入5000U，煮沸2min，終止酶解反應(yīng)，過(guò)濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲(chóng)草多肽，提取率75%。
[0018]實(shí)施例4
一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲(chóng)草干燥，粉碎至80目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理3min ;蛹蟲(chóng)草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:15，單位為g/mL。
[0019]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲(chóng)草水溶液加熱至90°C，攪拌反應(yīng)20min，然后過(guò)濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲(chóng)草多糖，提取率69% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8，加入堿性蛋白酶水解12h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入6000U，煮沸5min，終止酶解反應(yīng)，過(guò)濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲(chóng)草多肽，提取率76%。
[0020]實(shí)施例5
一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲(chóng)草干燥，粉碎至120目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理2min ;蛹蟲(chóng)草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:16，單位為g/mL。
[0021]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲(chóng)草水溶液加熱至60°C，攪拌反應(yīng)2(T60min，然后過(guò)濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲(chóng)草多糖，提取率68% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至9，加入堿性蛋白酶水解8h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入6000U，煮沸l(wèi)min，終止酶解反應(yīng)，過(guò)濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲(chóng)草多肽，提取率72%。
[0022]實(shí)施例6
一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲(chóng)草干燥，粉碎至100目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理2min ;蛹蟲(chóng)草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:14，單位為g/mL。
[0023]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲(chóng)草水溶液加熱至90°C，攪拌反應(yīng)20min，然后過(guò)濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲(chóng)草多糖，提取率70% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8，加入堿性蛋白酶水解10h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入4000U，煮沸2min，終止酶解反應(yīng)，過(guò)濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲(chóng)草多肽，提取率79%。
[0024]實(shí)施例7
一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲(chóng)草干燥，粉碎至120目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理Imin ;蛹蟲(chóng)草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:12，單位為g/mL。
[0025]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲(chóng)草水溶液加熱至70°C，攪拌反應(yīng)35min，然后過(guò)濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲(chóng)草多糖，提取率74% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8.5，加入堿性蛋白酶水解10h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入5000U，煮沸2min，終止酶解反應(yīng)， 過(guò)濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲(chóng)草多肽，提取率84%。
【權(quán)利要求】
1.一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于包括如下步驟:1)將蛹蟲(chóng)草干燥，粉碎至8(Γ120目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理f3min ； 2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲(chóng)草水溶液加熱至6(T90°C，攪拌反應(yīng)2(T60min，然后過(guò)濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲(chóng)草多糖； 3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8?10，加入堿性蛋白酶水解8?12h，煮沸I飛min，終止酶解反應(yīng)，過(guò)濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲(chóng)草多肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于:步驟I)中蛹蟲(chóng)草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:1(Γ20，單位為g/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于:步驟I)超聲處理的超聲頻率為100(Tl800W。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于:步驟2)中加熱至80°C,攪拌反應(yīng)40min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于:步驟3)中堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入400(T6000U。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛹蟲(chóng)草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于:步驟3)中堿性蛋白酶水解10h，煮沸2min。
【文檔編號(hào)】C12P21/06GK104403012SQ201410623832
【公開(kāi)日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月10日
【發(fā)明者】金仲恩, 全春蘭, 張帆 申請(qǐng)人:蘇州蔻美新材料有限公司