一種副干酪乳桿菌直投式菌種中霉菌和酵母的定性檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種副干酪乳桿菌直投式菌種中霉菌和酵母的定性檢測(cè)方法，屬于微生物檢驗(yàn)【技術(shù)領(lǐng)域】。該檢測(cè)方法包括下述順序的檢驗(yàn)步驟：（1）制備樣品：制得1:20的樣品勻液；（2）制備培養(yǎng)基；（3）第一次抽濾，將過濾好的濾膜貼在已制備好的孟加拉紅瓊脂平板上；（4）第二次抽濾，將第一次抽濾后的濾膜放入20-40g無菌生理鹽水中稀釋后，進(jìn)行第二次抽濾，過濾好的濾膜貼在已制備好的孟加拉紅瓊脂平板上；（5）第三次抽濾；（6）結(jié)果觀察：最后將上述平板置于28±1℃培養(yǎng)5天，觀察濾膜上菌落的生長(zhǎng)情況。本發(fā)明主要解決直接用國標(biāo)法檢測(cè)會(huì)受稀釋倍數(shù)、抑制作用等因素的干擾而使檢測(cè)結(jié)果有很大誤差的問題。
【專利說明】一種副干酪乳桿菌直投式菌種中霉菌和酵母的定性檢測(cè)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物檢驗(yàn)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種副干酪乳桿菌直投式菌種中霉菌和酵母的檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]直投式酸奶發(fā)酵劑(Directed Vat Set，DVS)是指一系列高度濃縮和標(biāo)準(zhǔn)化的冷凍干燥發(fā)酵劑菌種，可直接加入到熱處理的原料乳中進(jìn)行發(fā)酵，而無需對(duì)其進(jìn)行活化、擴(kuò)培等其它預(yù)處理工作。直投式發(fā)酵劑的活菌數(shù)一般為101(l-1012CFU/g，由于直投式發(fā)酵劑的活力強(qiáng)、類型多，生產(chǎn)廠家可以根據(jù)需要任意選擇，從而豐富了乳酸菌產(chǎn)品的品種。直投發(fā)酵劑不需要擴(kuò)大培養(yǎng)，可直接使用，產(chǎn)品質(zhì)量相對(duì)穩(wěn)定，成為目前大型乳品企業(yè)的首選。乳酸菌直投式菌種基本是國外進(jìn)口，有一百多年的生產(chǎn)歷史，質(zhì)量相對(duì)穩(wěn)定，由于直投式菌種價(jià)格相對(duì)較貴，打開后如不及時(shí)使用，會(huì)導(dǎo)致活力下降并且容易污染，故對(duì)乳酸菌直投式菌種進(jìn)廠檢驗(yàn)相對(duì)較少，偶爾抽檢一下活菌數(shù)，霉菌酵母含量直接用國標(biāo)法檢測(cè)，沒有對(duì)直投式菌種進(jìn)行預(yù)處理，由于乳酸菌對(duì)霉菌酵母的抑制作用，檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。在實(shí)際生產(chǎn)中，偶爾有部分批次產(chǎn)品生產(chǎn)過程中產(chǎn)酸弱，同時(shí)伴隨保質(zhì)期過程有鼓蓋現(xiàn)象，無法查找到產(chǎn)品出質(zhì)量問題的原因。目前國內(nèi)對(duì)直投式菌種的研究論文有90多篇，基本圍繞乳酸菌遺傳穩(wěn)定性、傳代培養(yǎng)、菌株選育、分離鑒定、生化特性等，而對(duì)直投式菌種純度的檢驗(yàn)方法沒有相應(yīng)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)單實(shí)用的副干酪乳桿菌直投式菌種中霉菌和酵母的定性檢測(cè)方法，主要解決直接用國標(biāo)法檢測(cè)會(huì)受稀釋倍數(shù)、抑制作用等因素的干擾而使檢測(cè)結(jié)果有很大誤差的問題。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的具有的有益效果有:
1、本發(fā)明根據(jù)乳酸菌與霉菌酵母不同的形態(tài)大小，通過抽濾的微過濾形式，避免了乳酸菌抑制霉菌酵母生長(zhǎng)的干擾因素，使檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確。酵母細(xì)胞的大小是(1-5)umX (5-30) um、霉菌孢子的大小是(2-10) um,副干酪乳桿菌直投式菌種由于采用冷凍真空干燥，工藝菌株寬度一般小于lum。根據(jù)不同菌株分子大小不同的特性，通過Ium微膜抽濾，將副干酪乳桿菌和霉菌酵母分離開，即霉菌和酵母留在濾膜上，副干酪乳桿菌分離在濾液中。
[0005]2、本發(fā)明通過定性檢驗(yàn)，首次將直投式菌種中是否有霉菌和酵母檢測(cè)出來，避免了副干酪乳桿菌對(duì)檢測(cè)過程的干擾。
[0006]3、本發(fā)明的實(shí)施將有效的控制國外進(jìn)口直投式菌種的產(chǎn)品質(zhì)量，保證乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品在生產(chǎn)過程中的穩(wěn)定性，同時(shí)避免了產(chǎn)品保質(zhì)期發(fā)生的鼓蓋質(zhì)量問題。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0007]圖1為實(shí)施例1中第一次抽濾后濾膜上菌落的培養(yǎng)結(jié)果；
圖2為實(shí)施例1中第二次抽濾后濾膜上菌落的培養(yǎng)結(jié)果；
圖3為實(shí)施例1中第三次抽濾后濾膜上菌落的培養(yǎng)結(jié)果；
圖4為試驗(yàn)例A中濾膜上菌落的培養(yǎng)結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0008]下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不限于該實(shí)施例。
[0009]實(shí)施例1
一種副干酪乳桿菌直投式菌種中霉菌和酵母的定性檢測(cè)方法，包括下述順序的工藝步驟:
(1)制備樣品:在100級(jí)的潔凈工作臺(tái)進(jìn)行過濾操作，稱取5g副干酪乳桿菌直投式菌種至盛有95g滅菌生理鹽水的錐形瓶中，用拍擊式震蕩器震蕩2min，在無菌環(huán)境中靜置30min，制得質(zhì)量比為1:20的樣品勻液；
(2)制備培養(yǎng)基:加熱溶解商用孟加拉紅培養(yǎng)基，高壓蒸汽121°C滅菌15min，滅菌后，待培養(yǎng)基冷卻至45-50°C時(shí)，傾注到滅菌平板上，培養(yǎng)基厚度為5mm，凝固待用；
(3)第一次抽濾:首先用無菌鑷子夾起滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，固定好濾器，取1g步驟(I)制得的樣品勻液通過孔徑Ium的濾膜過濾，然后將過濾好的濾膜貼在已制備好的孟加拉紅瓊脂平板上，平鋪并避免在濾膜和培養(yǎng)基之間夾留著氣泡；
(4)第二次抽濾:取1g步驟(I)制得的樣品勻液通過孔徑Ium的濾膜過濾，然后將過濾好的濾膜放入20g無菌生理鹽水中，用拍擊式震蕩器震蕩2min，制得二次稀釋液，取1g二次稀釋液通過孔徑Ium的濾膜過濾，然后將過濾好的濾膜貼在已制備好的孟加拉紅瓊脂平板上，平鋪并避免在濾膜和培養(yǎng)基之間夾留著氣泡；
(5)第三次抽濾:取1g步驟(4)制得的二次稀釋液，通過孔徑Ium的濾膜過濾，將過濾好的濾膜放入20g無菌生理鹽水中，用拍擊式震蕩器震蕩2min，制得三次稀釋液，取1g三次稀釋液通過孔徑Ium的濾膜過濾，然后將過濾好的濾膜貼在已制備好的孟加拉紅瓊脂平板上，平鋪并避免在濾膜和培養(yǎng)基之間夾留著氣泡；
(6)結(jié)果觀察:將上述平板置于28±1°C培養(yǎng)5天，觀察濾膜上菌落的生長(zhǎng)情況，看有無霉菌和酵母典型菌落。
[0010]該實(shí)施例濾膜上菌落的培養(yǎng)結(jié)果如下:
第一次抽濾后濾膜上菌落的培養(yǎng)結(jié)果見圖1。從圖1可見濾膜一片白色，霉菌酵母沒有檢測(cè)出來。這是因?yàn)榈谝淮纬闉V后濾膜上副干酪乳桿菌數(shù)量較多，抑制了霉菌、酵母的生長(zhǎng)。
[0011]第二次抽濾后濾膜上菌落的培養(yǎng)結(jié)果見圖2。從圖2可見濾膜出現(xiàn)淡粉色，有少量酵母菌。這是因?yàn)榈诙纬闉V后濾膜上副干酪乳桿菌數(shù)量相對(duì)減少，對(duì)霉菌、酵母生長(zhǎng)的抑制作用相對(duì)減弱。
[0012]第三次抽濾后濾膜上菌落的培養(yǎng)結(jié)果見圖3。從圖3可見濾膜出現(xiàn)粉色，可確定此副干酪乳桿菌直投式菌種樣品中有霉菌酵母存在。這是因?yàn)榈谌纬闉V后濾膜上副干酪乳桿菌數(shù)量相對(duì)較少，對(duì)霉菌、酵母生長(zhǎng)基本沒有抑制作用。
[0013]總之，一次抽濾后由于乳酸菌抽濾下去的少，濾膜上乳酸菌還較多，阻礙酵母和霉菌的生長(zhǎng)，二次抽濾后濾膜上酵母和霉菌的生長(zhǎng)情況受乳酸菌抑制作用弱，濾膜微紅，三次抽濾后留在濾膜上的乳酸菌數(shù)量基本很少了，故濾膜上有霉菌酵母的典型菌落，證明乳酸菌直投式菌種樣品中有霉菌和酵母存在。
[0014]試驗(yàn)例A
(1)取一定量的副干酪乳桿菌直投式菌種，加入無菌MRS培養(yǎng)基中，在37± I °C溫度條件下培養(yǎng)24小時(shí)；
(2)用無菌鑷子夾起滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，固定好濾器，取1g上述(I)中MRS樣品，通過孔徑Ium的濾膜過濾，然后將過濾好的濾膜貼在已制備好的孟加拉紅瓊脂平板上，平鋪并避免在濾膜和培養(yǎng)基之間夾留著氣泡；
(3)將平板置于28±1°C培養(yǎng)5天，并防止干燥；
培養(yǎng)5天后，濾膜上菌落的生長(zhǎng)情況見圖4。從圖4可以看出，副干酪乳桿菌直投式菌種通過擴(kuò)培后，霉菌、酵母檢測(cè)現(xiàn)象較為明顯，能確定副干酪乳桿菌直投式菌種中有霉菌、酵母存在。
【權(quán)利要求】
1.一種副干酪乳桿菌直投式菌種中霉菌和酵母的定性檢測(cè)方法，其特征在于:包括下述順序的檢測(cè)步驟: (1)制備樣品:稱取5g副干酪乳桿菌直投式菌種至盛有95g滅菌生理鹽水的錐形瓶中，震蕩2min后靜置30min，制得1:20的樣品勻液； (2)制備培養(yǎng)基:加熱溶解商用孟加拉紅培養(yǎng)基，高壓蒸汽121°C滅菌15min，滅菌后，待培養(yǎng)基冷卻至45-50°C時(shí)，傾注到滅菌平板上，培養(yǎng)基厚度在5mm以上，凝固待用； (3)第一次抽濾:固定好濾器，取1g步驟(I)制得的樣品勻液通過孔徑Ium的濾膜過濾，然后將過濾好的濾膜貼在已制備好的孟加拉紅瓊脂平板上； (4)第二次抽濾:取1g步驟(I)制得的樣品勻液通過孔徑Ium的濾膜過濾，然后將過濾好的濾膜放入20-40g無菌生理鹽水中，用拍擊式震蕩器震蕩2min，制得二次稀釋液，取1g 二次稀釋液通過孔徑Ium的濾膜過濾，然后將過濾好的濾膜貼在已制備好的孟加拉紅瓊脂平板上； (5)第三次抽濾:取1g步驟(4)制得的二次稀釋液，通過孔徑Ium的濾膜過濾，將過濾好的濾膜放入20-40g無菌生理鹽水中，用拍擊式震蕩器震蕩2min，制得三次稀釋液，取1g三次稀釋液通過孔徑Ium的濾膜過濾，然后將過濾好的濾膜貼在已制備好的孟加拉紅瓊脂平板上； (6)結(jié)果觀察:將上述平板置于28±1°C培養(yǎng)5天，觀察濾膜上菌落的生長(zhǎng)情況，看有無霉菌和酵母典型菌落。
【文檔編號(hào)】C12Q1/04GK104328162SQ201410639027
【公開日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2014年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月13日
【發(fā)明者】董雪鳳, 楊子彪, 趙旭燕 申請(qǐng)人:云南皇氏來思爾乳業(yè)有限公司