京科528三系配套雜交種制種方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種京科528三系配套雜交種制種方法，本發(fā)明提供了一種雜交制種的方法，包括如下步驟：以玉米不育系S 90110-2為不育系，玉米自交系90110-2為保持系，玉米自交系京2437為恢復(fù)系，進(jìn)行三系配套制種，得到雜交種京科528。本發(fā)明的實驗證明，本發(fā)明利用育成的不育系S 90110-2、保持系90110-2和恢復(fù)系京2437進(jìn)行京科528三系配套雜交種制種，配制的不育化雜交種京科528種子在產(chǎn)量、抗性及其他農(nóng)藝性狀上與常規(guī)制種方法生產(chǎn)的京科528種子基本相同。CGMCC No865720131225
【專利說明】京科日28 H系配套雜交種制種方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種京科528 H系配套雜交種制種方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 強(qiáng)優(yōu)勢雜交種的選育和推廣是提高玉米產(chǎn)量的重要途徑。利用常規(guī)的制種方法配 制雜交種需要對母本進(jìn)行人工去雄，不僅耗費大量的勞動力，增加種子生產(chǎn)成本，且存在由 于去雄不及時、不徹底影響種子質(zhì)量的潛在風(fēng)險。利用雄性不育系制種是保證種子純度提 高玉米產(chǎn)量的一種有效方法。
[0003] 早在上世紀(jì)五六十年代，國內(nèi)外就開始了對玉米不育化制種的研究。細(xì)胞質(zhì)雄性 不育由于容易實現(xiàn)不育系、保持系和恢復(fù)系的配套，是玉米育種中利用的主要類型。細(xì)胞質(zhì) 雄性不育系可劃分為T、S和C型。60年代初，T型不育系引入我國。由于對玉米小斑病"T 小種"?；郧秩?，T型不育系的應(yīng)用受到嚴(yán)重限制。70年代，我國育種工作者從國外引進(jìn) C型、S型不育系。C型不育系雖然不育性較穩(wěn)定、徹底，但其恢復(fù)系通常需要重新轉(zhuǎn)育，周 期長且步驟繁瑣，導(dǎo)致該型不育系在實踐中難W普及應(yīng)用。S型不育系是3種類型中最大的 一個組，已有研究證明昌7-2等黃改系材料是其天然強(qiáng)恢復(fù)系。但S型不育系的育性因基 因型背景的不同而有較大差異，在特定的遺傳背景下育性高度穩(wěn)定。國內(nèi)優(yōu)良玉米雜交種 的父本多屬黃改種質(zhì)，因此充分利用S型不育系可W節(jié)省恢復(fù)系的轉(zhuǎn)育工作，是實現(xiàn)快速 不育化制種研究和應(yīng)用的有效途徑。
[0004] 實現(xiàn)玉米細(xì)胞質(zhì)雄性不育化制種的關(guān)鍵是不育系、保持系和恢復(fù)系的選育。選育 不育系最常用的方法是回交轉(zhuǎn)育法，即用穩(wěn)定的不育系作非輪回親本，選擇優(yōu)良自交系作 輪回親本，進(jìn)行多代回交，育成不育性穩(wěn)定的優(yōu)良不育自交系，而原輪回親本便是該不育系 的保持系。但僅僅利用傳統(tǒng)的回交轉(zhuǎn)育方法，一般需回交5-6代，轉(zhuǎn)育周期較長，延緩了不 育化制種技術(shù)在玉米雜交種上的應(yīng)用。利用回交轉(zhuǎn)育方法進(jìn)行恢復(fù)系的選育比不育系更為 復(fù)雜，在回交的同時要進(jìn)行測交，W測交結(jié)果作為恢復(fù)系的選擇標(biāo)準(zhǔn)；或在回交轉(zhuǎn)育中利用 不育細(xì)胞質(zhì)提供育性的指標(biāo)性狀。由于選育過程相對繁瑣，在恢復(fù)系尚未育成或只有部分 恢復(fù)性的情況下，須將不育化的雜交種子與正常雜交種種子按適當(dāng)比例慘合使用，該就給 種子生產(chǎn)在技術(shù)和管理上提出了更高的要求。因此，如何加快不育系的選育速度、簡化恢復(fù) 系的選育過程，是目前雄性不育化制種技術(shù)亟需解決的問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的一個目的是提供一種雜交制種的方法。
[0006] 本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟；W玉米不育系S 90110-2為不育系，玉米自交 系90110-2為保持系，玉米自交系京2437為恢復(fù)系，進(jìn)行H系配套制種，得到雜交種京科 528。
[0007] 上述方法中，所述不育系S 90110-2為按照包括如下步驟的方法轉(zhuǎn)育：
[0008] a)玉米不育系S京724做母本，90110-2做父本雜交，得到雄性不育雜交子代Fi ;
[000引 b) w所述雄性不育雜交子代Fi為母本、與90110-2回交，得到雄性不育BCi代群 體；
[0010] C) W所述雄性不育BCi代單株為母本、與90110-2繼續(xù)回交，得到雄性不育BC2代 群體；
[0011] d) W所述雄性不育BC2代單株為母本、與90110-2繼續(xù)回交，得到90110-2的雄性 不育系。
[0012] 上述方法中，在步驟b)和C)之間，還包括BCi代分子鑒定的步驟，所述BCi代分子 鑒定為利用40對SSR核也引物中在S京724和90110-2間存在差異的15對引物umc210化3、 phi053k2、bnlg2291k4、bnlg2305k4、bnlgl61k8、umcl545y2、umcll25y3、bnlg240kl、 phi065k9、phi96100yl、umc2115k3、umcl429y7、umc2160k3、umcl936k4 和 phi041y6 分別對 所述雄性不育BCi代群體單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，選擇與90110-2遺傳相似度在96-97. 5%的 BCi代單株；
[0013] 所述選擇與90110-2遺傳相似度在96-97. 5%的BCi代單株的方法包括如下步驟： 比對BCi代單株的SSR圖譜和采用同樣的引物擴(kuò)增90110-2的SSR圖譜，計算遺傳相似度；
[0014] 所述遺傳相似度計算公式；[1-差異等位基因數(shù)/(2X比較總位點數(shù)）]X 100%
[0015] 所述差異等位基因數(shù)為用SSR核也引物擴(kuò)增得到的所述雄性不育BCi代單株SSR 譜帶帶型與所述90110-2的SSR譜帶帶型不一致的等位基因數(shù)目；所述比較總位點數(shù)為 40。
[0016] 在步驟C)和d)之間，還包括BC2代分子鑒定的步驟，所述BC2代分子鑒定為用引 物A對所述雄性不育BC,代群體單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，選擇擴(kuò)增圖譜與用同樣引物A對所述 90110-2進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的圖譜相同的雄性不育BC2代單株；
[0017] 所述引物A為BC2代單株對應(yīng)的母本BCi代與90110-2相比擴(kuò)增帶型不同的SSR 引物；
[0018] 所述核也引物umc2105k3是由序列表中序列9所示的單鏈DNA分子和序列表中序 列10所示的單鏈DNA分子組成；
[0019] 所述核也引物地i〇53k2是由序列表中序列11所示的單鏈DNA分子和序列表中序 列12所示的單鏈DNA分子組成
[0020] 所述核也引物bnlg229化4是由序列表中序列15所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列16所示的單鏈DNA分子組成；
[0021] 所述核也引物bnlg2305k4是由序列表中序列19所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列20所示的單鏈DNA分子組成；
[002引所述核也引物bnlgl61k8是由序列表中序列21所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列22所示的單鏈DNA分子組成；
[0023] 所述核也引物umcl545y2是由序列表中序列25所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列26所示的單鏈DNA分子組成；
[0024] 所述核也引物umcll25y3是由序列表中序列27所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列28所示的單鏈DNA分子組成；
[00巧]所述核也引物bnlg240kl是由序列表中序列29所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列30所示的單鏈DNA分子組成；
[0026] 所述核也引物地i065k9是由序列表中序列33所示的單鏈DM分子和序列表中序 列34所示的單鏈DNA分子組成；
[0027] 所述核也引物地i96100yl是由序列表中序列45所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列46所示的單鏈DNA分子組成；
[0028] 所述核也引物umc2115k3是由序列表中序列57所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列58所示的單鏈DNA分子組成；
[0029] 所述核也引物umcl429y7是由序列表中序列59所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列60所示的單鏈DNA分子組成；
[0030] 所述核也引物umc2160k3是由序列表中序列65所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列66所示的單鏈DNA分子組成；
[0031] 所述核也引物umcl936k4是由序列表中序列67所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列68所示的單鏈DNA分子組成；
[0032] 所述核也引物地i041y6是由序列表中序列77所示的單鏈DNA分子和序列表中序 列78所示的單鏈DNA分子組成。
[0033] 上述方法中，為了減少工作量，在步驟b)和C)之間的BCi代分子鑒定前還包括BCi 代表型鑒定的步驟，所述BCi代表型鑒定為選取所述雄性不育BCi代群體中表型與90110-2 一致的BCi代單株；
[0034] 在步驟C)和d)之間的BC2代分子鑒定前還包括BC2代表型鑒定的步驟，所述BC2 代表型鑒定為選取所述雄性不育BC,代群體中表型與90110-2 -致的BC,代單株。
[00巧]上述表型與所述玉米90110-2 -致為表型與玉米90110-2完全相同或接近；表型 具體為株高、穗位高、株型、雄穗分枝數(shù)和/或果穗性狀等。
[0036] 上述方法中，所述不育系S京724為按照包括如下步驟的方法選育；W玉米S型細(xì) 胞質(zhì)雄性不育系MD32 CGMCC No. 8657為供體、玉米自交系京724為受體，進(jìn)行回交轉(zhuǎn)育，得 到京724的雄性不育系S京724。
[0037] 上述方法中，所述回交次數(shù)為3次。
[0038] 上述方法中，所述回交轉(zhuǎn)育包括如下步驟：
[0039] 1) W玉米雄性不育系MD32 CGMCC No. 8657為供體、玉米自交系京724為受體，雜 交，得到雄性不育雜交子代Fi;
[0040] 2) W雄性不育雜交子代Fi為母本與京724回交，得到雄性不育BCi代群體；
[0041] 3) W雄性不育BCi代單株為母本與京724繼續(xù)回交，得到雄性不育BC,代群體；
[0042] 4) W雄性不育BC2代單株為母本與京724繼續(xù)回交，得到京724的雄性不育系S 京 724。
[0043] 上述方法中，在步驟2)和步驟3)之間，還包括如下分子鑒定A的步驟：從所述雄 性不育BCi代群體中選取與所述玉米京724遺傳相似度在92. 5-95%的雄性不育BCi代單 株。
[0044] 上述方法中，所述從所述雄性不育BCi代群體中選取與所述玉米京724遺傳相似 度在92. 5-95 %的雄性不育BCi代單株的方法包括如下步驟：用40對SSR核也引物分別對 雄性不育BCi代單株和玉米自交系京724進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到SSR譜帶，通過比較BCi代單 株和玉米自交系京724的SSR圖譜，計算遺傳相似度；
[0045] 所述遺傳相似度計算公式；[1-差異等位基因數(shù)/(2X比較總位點數(shù)）]X 100%
[0046] 所述差異等位基因數(shù)為用SSR核也引物擴(kuò)增得到的所述雄性不育BCi代單株SSR 譜帶帶型與所述玉米自交系京724的SSR譜帶帶型不一致的等位基因數(shù)目；所述比較總位 點數(shù)為40。
[0047] 上述40對SSR核也引物中各個引物的序列分別為序列表中序列1-80所示，具體 見實施例的表1。
[0048] 上述方法中，為了減少工作量，在所述分子鑒定A前還包括如下步驟；從所述雄性 不育BCi代群體中選取表型與所述玉米京724 -致的雄性不育BCi代單株。
[0049] 上述方法中，在步驟3)和步驟4)之間，還具體包括如下分子鑒定B的步驟：從所 述雄性不育BC2代群體中選取與所述玉米京724遺傳相似度在98. 75% -100%的雄性不育 BC2代單株。
[0050] 所述從所述雄性不育BC2代群體中選取與所述玉米自交系京724遺傳相似度在 98. 75% -100%的雄性不育BC2代單株的方法包括如下步驟；用引物A分別對雄性不育BC2 代單株和玉米自交系京724進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到SSR譜帶，通過比較BC,代單株和玉米自交 系京724的SSR圖譜，計算遺傳相似度；
[0051] 所述引物A為BC2代單株對應(yīng)的母本BCi代與京724相比擴(kuò)增帶型不同的SSR引 物；
[0052] 所述遺傳相似度計算公式；[1-差異等位基因數(shù)/(2X比較總位點數(shù)）]X 100%
[0053] 所述差異等位基因數(shù)為用引物A擴(kuò)增得到的所述雄性不育BC,代單株SSR譜帶帶 型與所述玉米自交系京724的SSR譜帶帶型不一致的等位基因數(shù)目；
[0054] 所述比較總位點數(shù)為40。
[00巧]上述方法中，在所述分子鑒定B前還具體包括如下步驟：從所述雄性不育BC,代群 體中選取表型與所述玉米京724 -致的雄性不育BC2代單株。
[0056] 上述表型與所述玉米京724 -致為表型與玉米京724完全相同或接近；表型具體 為株高、穗位高、株型、雄穗分枝數(shù)和/或果穗性狀等。
[0057] 本發(fā)明的另一個目的是提供培育不育系S 90110-2的方法。
[0058] 本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟：
[0059] a)玉米不育系S京724做母本，90110-2做父本雜交，得到雄性不育雜交子代Fi ;
[0060] b) W所述雄性不育雜交子代Fi為母本、與90110-2回交，得到雄性不育BCi代群 體；
[006。 C) W所述雄性不育BCi代單株為母本、與90110-2繼續(xù)回交，得到雄性不育BC2代 群體；
[006引 d) W所述雄性不育BC2代單株為母本、與90110-2繼續(xù)回交，得到90110-2的雄性 不育系；
[0063] 在步驟b)和C)之間，還包括BCi代分子鑒定的步驟，所述BCi代分子鑒定為用上 述 SSR 核也引物 umc210化3、地i053k2、bnlg229化4、bnlg2305k4、bnlgl61k8、umcl545y2、 umcll25y3、bnlg240kl、phi065k9、phi96100yl、umc2115k3、umcl429y7、umc2160k3、 umcl936k4和地i041y6分別對所述雄性不育BCi代群體單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，選擇與90110-2 遺傳相似度在96-97. 5%的BCi代單株；
[0064] 在步驟c)和d)之間，還包括BC2代分子鑒定的步驟，所述BC2代分子鑒定為用引 物A對所述雄性不育BC,代群體單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，選擇擴(kuò)增圖譜與用同樣引物A對所述 90110-2進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的圖譜相同的雄性不育BC2代單株；
[006引所述引物A為BC2代單株對應(yīng)的母本BCi代與90110-2相比擴(kuò)增帶型不同的SSR 引物；
[0066] 在步驟b)和C)之間的BCi代分子鑒定前還具體包括BCi代表型鑒定的步驟，所述 BCi代表型鑒定為選取所述雄性不育BCi代群體中表型與90110-2 -致的BCi代單株；
[0067] 在步驟C)和d)之間的BC2代分子鑒定前還具體包括BC2代表型鑒定的步驟，所述 BC2代表型鑒定為選取所述雄性不育BC2代群體中表型與90110-2 -致的BC2代單株。
[0068] 上述玉米不育系S 90110-2在雜交制種中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0069] 本發(fā)明的實驗證明，本發(fā)明具體有如下優(yōu)勢：
[0070] 1、由于昌7-2等黃改材料是S型細(xì)胞質(zhì)雄性不育系的強(qiáng)恢復(fù)系，京科528父本京 2437為黃改種質(zhì)，因此選擇京2437具有強(qiáng)恢復(fù)性的S型不育系作為母本90110-2不育系轉(zhuǎn) 育的供體，節(jié)省了選育父本恢復(fù)系的繁瑣工作；
[0071] 2、選用已獲得的與母本90110-2親緣關(guān)系較近的不育系S京724為供體，結(jié)合分 子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)實現(xiàn)快速轉(zhuǎn)育，僅回交H代即可獲得玉米不育系S 90110-2,具有配合 力高、抗倒性好、耐密植等優(yōu)點；
[0072] 3、選用的S型不育系MD32不育性穩(wěn)定、花粉敗育徹底，在已報道的玉米雜交種雄 性不育化制種研究中未見使用；
[0073] 總之，本發(fā)明利用育成的不育系S 90110-2、保持系90110-2和恢復(fù)系京2437進(jìn)行 京科528 H系配套雜交種制種，配制的不育化雜交種京科528種子在產(chǎn)量、抗性及其他農(nóng)藝 性狀上與常規(guī)制種方法生產(chǎn)的京科528種子基本相同，且節(jié)省了常規(guī)制種中母本人工去雄 的時間和成本，消除了由于去雄不及時、影響種子質(zhì)量的潛在風(fēng)險。

【具體實施方式】
[0074] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[00巧]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0076] 實施例1、雄性不育系S京724的選育
[0077] -、不育系供體MD32細(xì)胞質(zhì)雄性不育類型的確定
[0078] 1、玉米不育系MD32
[0079] 玉米不育系MD32選育過程；利用構(gòu)建的X系群體（W XI132為基礎(chǔ)）進(jìn)行"高大 嚴(yán)"選系，從中選擇優(yōu)良S5高代系與外引雜交種構(gòu)建新的選系基礎(chǔ)群體。在自交后代中發(fā) 現(xiàn)不育株，雄穗花藥不外露，選擇同穗行表型相近的姊妹株對其進(jìn)行成對授粉。雜交后代全 部表現(xiàn)徹底不育，植株表型也趨向基本一致。遂將該材料命名為玉米雄性不育系MD32。
[0080] 玉米不育系MD32不育性徹底；花藥不外露；
[0081] 玉米不育系MD32不育性穩(wěn)定；在多種遺傳背景下，不育性表現(xiàn)徹底；
[0082] 玉米不育系MD32綜合性狀優(yōu)良；種子芽勢胚盛，出苗力強(qiáng)，幼苗葉銷色紫色，葉片 寬大，葉色濃綠，株型半緊湊，果穗筒型，粒型半硬粒型，綜合抗性好。
[0083] 玉米不育系MD32于2013年12月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普 通微生物中也（簡稱CGMCC，地址；北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物 研究所，郵編100101)，保藏號為CGMCC No. 8657,該植株分類命名為玉米狂ea mays)。
[0084] 2、不育系MD32細(xì)胞質(zhì)雄性不育類型的確定
[0085] 提取玉米不育系MD32幼苗的DNA作為模板，用如下表1的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得 到擴(kuò)增產(chǎn)物在Agarose凝膠上，90V電泳1小時30分鐘。根據(jù)擴(kuò)增片段圖譜鑒別玉米MD32 胞質(zhì)不育類型。
[0086] 結(jié)果，利用C、T型引物對MD32的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，均未檢測到擴(kuò)增產(chǎn)物；利 用S型引物對其進(jìn)行檢測時，PCR產(chǎn)物片段大小為88化P。因此確定MD32為S型細(xì)胞質(zhì)雄 性不育系。
[0087] 表1為鑒定胞質(zhì)類型的引物
[0088]

【權(quán)利要求】
1. 一種雜交制種的方法，包括如下步驟：以玉米不育系s 90110-2為不育系，玉米自交 系90110-2為保持系，玉米自交系京2437為恢復(fù)系，進(jìn)行三系配套制種，得到雜交種京科 528。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于： 所述不育系S 90110-2為按照包括如下步驟的方法轉(zhuǎn)育： a) 玉米不育系S京724做母本，90110-2做父本雜交，得到雄性不育雜交子代匕； b) 以所述雄性不育雜交子代匕為母本、與90110-2回交，得到雄性不育代群體； c) 以所述雄性不育代單株為母本、與90110-2繼續(xù)回交，得到雄性不育％代群體； d) 以所述雄性不育BC2代單株為母本、與90110-2繼續(xù)回交，得到90110-2的雄性不育 系。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于： 在步驟b)和c)之間，還包括代分子鑒定的步驟，所述代分子鑒定為利用40 對SSR核心引物中在S京724和90110-2間存在差異的15對引物umc2105k3、phi053k2、 bnlg2291k4、bnlg2305k4、bnlgl61k8、umcl545y2、umcll25y3、bnlg240kl、phi065k9、 phi96100yl、umc2115k3、umcl429y7、umc2160k3、umcl936k4 和 phi041y6 分別對所述雄性不 育BC；代群體單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，選擇與90110-2遺傳相似度在96-97. 5%的BQ代單株； 在步驟c)和d)之間，還包括BC2代分子鑒定的步驟，所述BC2代分子鑒定為用引物A對 所述雄性不育BC2代群體單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，選擇擴(kuò)增圖譜與用所述引物A對所述90110-2 進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的圖譜相同的雄性不育BC2代單株； 所述引物A為BC2代單株對應(yīng)的母本代與90110-2相比擴(kuò)增帶型不同的SSR引物； 所述核心引物umc2105k3是由序列表中序列9所示的單鏈DNA分子和序列表中序列10 所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物Phi053k2是由序列表中序列11所示的單鏈DNA分子和序列表中序列12 所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物bnlg2291k4是由序列表中序列15所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 16所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物bnlg2305k4是由序列表中序列19所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 20所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物bnlgl61k8是由序列表中序列21所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 22所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物umcl545y2是由序列表中序列25所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 26所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物umcll25y3是由序列表中序列27所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 28所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物bnlg240kl是由序列表中序列29所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 30所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物Phi065k9是由序列表中序列33所示的單鏈DNA分子和序列表中序列34 所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物phi96100yl是由序列表中序列45所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 46所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物umc2115k3是由序列表中序列57所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 58所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物umcl429y7是由序列表中序列59所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 60所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物umc2160k3是由序列表中序列65所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 66所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物umcl936k4是由序列表中序列67所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 68所示的單鏈DNA分子組成； 所述核心引物Phi041y6是由序列表中序列77所示的單鏈DNA分子和序列表中序列78 所示的單鏈DNA分子組成。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于： 在步驟b)和c)之間的代分子鑒定前還包括代表型鑒定的步驟，所述此"戈表 型鑒定為選取所述雄性不育代群體中表型與90110-2 -致的代單株； 在步驟c)和d)之間的BC2代分子鑒定前還包括BC2代表型鑒定的步驟，所述BC2代表 型鑒定為選取所述雄性不育BC2代群體中表型與90110-2 -致的BC2代單株。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2-4中任一所述的方法，其特征在于： 所述不育系S京724為按照包括如下步驟的方法選育：以玉米S型細(xì)胞質(zhì)雄性不育系 MD32 CGMCC No. 8657為供體、玉米自交系京724為受體，進(jìn)行回交轉(zhuǎn)育，得到京724的雄性 不育系S京724。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：所述回交次數(shù)為3次； 所述回交轉(zhuǎn)育具體包括如下步驟： 1) 以玉米雄性不育系MD32 CGMCC No. 8657為供體、玉米自交系京724為受體，雜交，得 到雄性不育雜交子代匕； 2) 以雄性不育雜交子代匕為母本與京724回交，得到雄性不育代群體； 3) 以雄性不育代單株為母本與京724繼續(xù)回交，得到雄性不育BC2代群體； 4) 以雄性不育BC2代單株為母本與京724繼續(xù)回交，得到京724的雄性不育系S京724。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：在步驟2)和步驟3)之間，還包括如下 分子鑒定A的步驟：從所述雄性不育代群體中選取與所述玉米京724遺傳相似度在 92. 5-95 %的雄性不育代單株。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：在所述分子鑒定A前還包括如下步驟：從 所述雄性不育代群體中選取表型與所述玉米京724 -致的雄性不育代單株； 在步驟3)和步驟4)之間，還具體包括如下分子鑒定B的步驟：從所述雄性不育BC2R 群體中選取與所述玉米京724遺傳相似度在98. 75% -100%的雄性不育BC2代單株； 在所述分子鑒定B前還具體包括如下步驟：從所述雄性不育BC2代群體中選取表型與 所述玉米京724 -致的雄性不育BC2代單株。
9. 一種培育不育系S 90110-2的方法，包括如下步驟： a) 玉米不育系S京724做母本，90110-2做父本雜交，得到雄性不育雜交子代匕； b) 以所述雄性不育雜交子代匕為母本與90110-2回交，得到雄性不育代群體； C)以所述雄性不育BCi代單株為母本與90110-2繼續(xù)回交，得到雄性不育BC2代群體； d)以所述雄性不育BC2代單株為母本與90110-2繼續(xù)回交，得到90110-2的雄性不育 系； 在步驟b)和c)之間，還包括代分子鑒定的步驟，所述代分子鑒定為用權(quán)利 要求 3 中的 SSR 核心引物 umc2105k3、phi053k2、bnlg2291k4、bnlg2305k4、bnlgl61k8、 umcl545y2、umcll25y3、bnlg240kl、phi065k9、phi96100yl、umc2115k3、umcl429y7、 umc2160k3、umcl936k4、phi041y6分別對所述雄性不育BCi代群體單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，選擇 與90110-2遺傳相似度在96-97. 5%的代單株； 在步驟c)和d)之間，還包括BC2代分子鑒定的步驟，所述BC2代分子鑒定為用引物A對 所述雄性不育BC2代群體單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，選擇擴(kuò)增圖譜與用同樣引物A對所述90110-2 進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的圖譜相同的雄性不育BC2代單株； 所述引物A為BC2代單株對應(yīng)的母本代與90110-2相比擴(kuò)增帶型不同的SSR引物； 在步驟b)和c)之間的代分子鑒定前還具體包括代表型鑒定的步驟，所述BQ 代表型鑒定為選取所述雄性不育代群體中表型與90110-2 -致的代單株； 在步驟c)和d)之間的BC2代分子鑒定前還具體包括BC2代表型鑒定的步驟，所述BC 2代表型鑒定為選取所述雄性不育BC2代群體中表型與90110-2 -致的BC2代單株。
10.權(quán)利要求1-9所述方法中的所述玉米不育系S 90110-2在雜交制種中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12Q1/68GK104396732SQ201410743446
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月8日
【發(fā)明者】趙久然, 宋偉, 邢錦豐, 王元東, 段民孝, 劉春閣, 馮培煜, 張如養(yǎng), 王鳳格, 毛振武, 李瑞媛, 王乃順, 王文廣, 張莎莎 申請人:北京市農(nóng)林科學(xué)院