清真食品中常見禁忌成分的多重pcr快速檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種清真食品中常見禁忌成分的多重PCR快速檢測方法，該方法包括以下步驟：⑴制備豬、羊、雞、老鼠、牛5種混合肉的對照肉品DNA模板；⑵根據(jù)豬、羊、雞、老鼠、牛的線粒體細胞色素b基因序列，設(shè)計通用的正向引物和反向特異性引物；⑶將通用引物豬、羊、雞、老鼠、牛按比例混合均勻后，得到多重PCR引物；⑷提取待測肉品DNA，得到待測肉品DNA模板；⑸建立對照肉品DNA的PCR反應(yīng)體系；⑹建立待測肉品DNA的PCR反應(yīng)體系；⑺分別對對照肉品DNA、待測肉品DNA進行PCR反應(yīng)，分別得到PCR產(chǎn)物；⑻分別將PCR產(chǎn)物用瓊脂凝膠電泳檢測擴增結(jié)果，繼而判定該待測肉品是否含有豬、羊、雞、牛和老鼠五種肉類成分中的一種或多種。本發(fā)明操作簡便、經(jīng)濟省時。
【專利說明】清真食品中常見禁忌成分的多重PCR快速檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食品質(zhì)量安全檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及清真食品中常見禁忌成分的多重PCR快速檢測方法。

【背景技術(shù)】
[0002]目前，食品安全已受到全社會的關(guān)注。由于經(jīng)濟利益驅(qū)動，一些不法商家在食品的加工過程中，常常以價格相對低廉的肉冒充高價優(yōu)質(zhì)的肉，尤以豬肉、雞肉為原料替代高價格的牛肉、羊肉，這不僅關(guān)系到經(jīng)濟和食品安全問題，更直接影響著消費者的健康。還有清真食品摻假的案例在全國時有發(fā)生(例如，在清真食品中摻雜進豬肉等)，嚴重危害了穆斯林群眾的民族感情和身體健康。甚至，一些犯罪分子從各地購入狐貍、水貂、老鼠等未經(jīng)檢驗檢疫的動物肉制品，添加明膠、胭脂紅、硝鹽等冒充羊肉銷售到農(nóng)貿(mào)市場。因此，對清真及摻雜食品動物源性成分的檢驗顯得十分必要，其重點就是快速、準(zhǔn)確的鑒定肉的品種來源。
[0003]隨著生物技術(shù)的發(fā)展，以物種間基因差異為基礎(chǔ)的分子學(xué)鑒定方法成為研究的熱點，因為DNA的熱穩(wěn)定性與酸堿穩(wěn)定性均比蛋白質(zhì)強，高溫、強酸強堿處理過的食品中仍能提取出小片段的DNA ；DNA比蛋白質(zhì)具有更高的動物種屬間遺傳信息差異性，有利于物種鑒另O。因此，PCR方法由于特異性高、方法便捷、不受組織類別限制等諸多優(yōu)勢，已成為動物源性成分鑒別最常用的方法。但是在國內(nèi)針對肉摻假現(xiàn)狀，并未出現(xiàn)應(yīng)用多重PCR技術(shù)對老鼠肉、豬肉和雞肉等檢測的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種操作簡便、經(jīng)濟省時的清真食品中常見禁忌成分的多重PCR快速檢測方法。
[0005]為解決上述問題，本發(fā)明所述的清真食品中常見禁忌成分的多重PCR快速檢測方法，包括以下步驟:
(I)將生鮮的豬肉、羊肉、雞肉、牛肉和老鼠肉分別用液氮研磨后混合，得到混合肉，使用DNeasy? Blood and Tissue Kit動物組織的基因組DNA提取試劑盒提取混合肉中的DNA,測定其在260nm和280nm處的吸光度值，計算DNA的濃度，即得到豬、羊、雞、老鼠、牛5種混合肉的DNA作為對照肉品DNA模板；
⑵根據(jù)豬、羊、雞、老鼠、牛的線粒體細胞色素b基因序列，設(shè)計通用的正向引物和反向特異性引物；其中
所述正向引物序列為5’ -CAAAGCTACCCTCACCCG-3’ ；
所述反向特異性引物序列如下所示:
豬 5’ -CTATGTCTGATGAGATTCCGGTA-3’，片段大小為 138bp ；
羊 5’ -TGAGGATTAGTAGGATAGCACC-3’，片段大小為 199bp ；
雞 5’ -GATGGCATAGGCGAATAGAA-3’，片段大小為 327bp ；
老鼠 5’ -AGATAAGATTAAGGCTAGAACACC-3’，片段大小為 378bp ； 牛 5’ -TTCATGTGAGTGTCAGTAGGTCT-3’，片段大小為 499bp ；
⑶將所述通用引物豬、羊、雞、老鼠、牛按10pmol/30uL:5pmol/30uL:lpmol/30uL:6pmol/30uL:10pmol/30uL:12pmol/30uL的比例混合均勻后，得到多重PCR引物；
⑷提取待測肉品DNA:
將待測肉品1g用液氮研磨后，使用DNeasy? Blood and Tissue Kit動物組織的基因組DNA提取試劑盒提取DNA，并測定DNA濃度，得到待測肉品DNA模板；
(5)建立對照肉品DNA的PCR反應(yīng)體系:
2XTaq PCR StarMix 15uL
多重PCR引物6.7uL
對照肉品DNA模板 2.0uL 滅菌蒸餾水補足至30uL ；
(6)建立待測肉品DNA的PCR反應(yīng)體系:
2XTaq PCR StarMix 15uL
多重PCR引物6.7uL
待測肉品DNA模板 2.0uL 滅菌蒸餾水補足至30uL ；
(7)分別對對照肉品DNA、待測肉品DNA進行PCR反應(yīng)，程序如下:
95°C預(yù)變性3min ;95°C變性30s，58 °C退火30s，72。。延伸20s，32個循環(huán)；72°C延伸3min,分別得到對照肉品DNA的PCR產(chǎn)物、待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物；
⑶分別將1uL所述對照肉品DNA的PCR產(chǎn)物、所述待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物用質(zhì)量濃度為2%的瓊脂凝膠電泳檢測擴增結(jié)果，當(dāng)所述待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物的電泳圖中的一個泳道上出現(xiàn)片段大小為138bp、199bp、327bp、378bp、499bp五個條帶中的一個或多個時，即判定該待測肉品含有豬、羊、雞、牛和老鼠五種肉類成分中的一種或多種。
[0006]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點:
1、本發(fā)明根據(jù)動物線粒體細胞色素b基因序列(引物在線粒體基因組中的結(jié)合位置見圖1)，建立豬、羊、雞、老鼠、牛5種肉類成分快速鑒別的通用引物多重PCR方法，可一次性快速檢測食品及其制品中是否參雜豬、羊、雞、老鼠、牛五種肉類成分。
[0007]2、對本發(fā)明進行特異性檢測:
分別對豬、羊、雞、老鼠和牛5種肉類等比例混合，以滅菌雙蒸水為陰性對照進行單重、2重、3重和4重的特異性檢測，瓊脂糖凝膠電泳圖譜見圖2~圖5。由圖2~5可知，對5種目標(biāo)肉類DNA和混合肉類的DNA進行檢測，均在設(shè)計位置觀察到特異性條帶，未見明顯非特異性擴增，且陰性對照未檢出。將擴增產(chǎn)物純化，取1uLPCR產(chǎn)物經(jīng)2%的瓊脂糖凝膠電泳，對各條帶回收并委托測序，將測序結(jié)果與GenBank中的已知序列進行比對。比對結(jié)果顯示豬、羊、雞、老鼠和牛的同源性均在99%以上，與預(yù)期基本一致，確定分別為豬、羊、雞、老鼠和牛源性成分。
[0008]3、對本發(fā)明進行靈敏度檢測:
針對提取的動物基因組總DNA進行多重PCR檢測，將30ng/μ L豬、羊、雞、老鼠、牛來源的DNA模板原液1uL進行10倍梯度稀釋至10Λ取每個稀釋度的混合模板2ul，進行多重PCR,并進行電泳分析，結(jié)果見圖6。由圖6可見，目標(biāo)DNA稀釋13倍后，使用多重PCR法進行檢測，均仍可觀察到5條明顯的條帶，因此，檢測的靈敏度0.3ng/ul。
[0009]4、對本發(fā)明進行重復(fù)性試驗:
重復(fù)進行10次，每次均獨立制備混合模板，進行多重PCR擴增，滅菌雙蒸水為陰性對照。結(jié)果表明，本試驗的重復(fù)性很強，優(yōu)化的條件適合進行多重PCR的檢測，對混合肉的檢測具有很好的穩(wěn)定性。
[0010]5、本發(fā)明特異性好，敏感性強，快速且操作簡便，極大程度的提高了檢測量，彌補了行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的不足。和已有的方法比較，本發(fā)明一次性檢測的動物源性成分更多，更經(jīng)濟、省時，這對國內(nèi)肉摻假的檢測研究具有重要意義和實用價值，可推廣應(yīng)用于檢測部門。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步詳細的說明。
[0012]圖1為本發(fā)明細胞色素b基因中多重PCR引物結(jié)合位點。其中P:豬；G:羊；C:雞；M:老鼠；B:牛。方框內(nèi)部分為引物結(jié)合位置，黃色部分表示為各物種在引物結(jié)合位置上的差異堿基，點表示各物種在引物結(jié)合位置上的相同堿基。
[0013]圖2為本發(fā)明單重PCR電泳圖譜。其中M:DL 1000 DNA marker ；1:豬肉；2:羊肉；3:雞肉；4:老鼠肉；5:牛肉；6:水陰性對照。
[0014]圖3為本發(fā)明二重PCR電泳圖譜。其中M:DL 1000 DNA marker ； 1:豬肉和羊肉；2:豬肉和雞肉；3:豬肉和老鼠肉；4:豬肉和牛肉；5:羊肉和雞肉；6:羊肉和牛肉；7:羊肉和老鼠肉；8:雞肉和老鼠肉；9雞肉和牛肉；10:老鼠肉和牛肉；11:水陰性對照。
[0015]圖4為本發(fā)明三重PCR電泳圖譜。其中M:DL 1000 DNA marker。1:豬肉、羊肉和雞肉；2:豬肉、羊肉和雞肉；3:豬肉、羊肉和牛肉；4:豬肉、雞肉和老鼠肉；5:羊肉、雞肉和牛肉；6:豬肉、老鼠肉和牛肉；7:羊肉、雞肉和老鼠肉；8:羊肉、雞肉和老鼠肉；9:羊肉、老鼠肉和牛肉；10:雞肉、老鼠肉和牛肉；11:水陰性對照。
[0016]圖5為本發(fā)明四重PCR電泳圖譜。其中M:DL 1000 DNA marker。1:豬肉、羊肉、雞肉和老鼠肉；2:豬肉、羊肉、雞肉和牛肉；3:豬肉、雞肉、老鼠肉和牛肉；4:豬肉、羊肉、老鼠肉和牛肉；5:羊肉、雞肉、老鼠肉和牛肉；6:水陰性對照。
[0017]圖6為本發(fā)明多重PCR的敏感性試驗。其中M:DL 1000 DNA marker ；1~5分別為五種肉的混合模板量30,3,0.3,0.03和0.003ng ；6:水陰性對照。
[0018]圖7為本發(fā)明實施例1~3的擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果。

【具體實施方式】
[0019]實施例1清真食品中常見禁忌成分的多重PCR快速檢測方法，包括以下步驟:
(I)將生鮮的豬肉、羊肉、雞肉、牛肉和老鼠肉分別用液氮研磨后混合，得到混合肉，使用
DNeasy? Blood and Tissue Kit動物組織的基因組DNA提取試劑盒提取混合肉中的DNA,測定其在260nm和280nm處的吸光度值，計算DNA的濃度，即得到豬、羊、雞、老鼠、牛5種混合肉的DNA作為對照肉品DNA模板。
[0020]⑵根據(jù)豬、羊、雞、老鼠、牛的線粒體細胞色素b基因序列，設(shè)計通用的正向引物和反向特異性引物。其中
正向引物序列為 5，-CAAAGCTACCCTCACCCG-3，； 反向特異性引物序列如下所示:
豬 5’ -CTATGTCTGATGAGATTCCGGTA-3’，片段大小為 138bp ；
羊 5’ -TGAGGATTAGTAGGATAGCACC-3’，片段大小為 199bp ；
雞 5’ -GATGGCATAGGCGAATAGAA-3’，片段大小為 327bp ；
老鼠 5’ -AGATAAGATTAAGGCTAGAACACC-3’，片段大小為 378bp ；
牛 5’ -TTCATGTGAGTGTCAGTAGGTCT-3’，片段大小為 499bp。
[0021](3)將通用引物豬、羊、雞、老鼠、牛按 10pmol/30uL:5pmol/30uL:lpmol/30uL:6pmol/30uL:10pmol/30uL:12pmol/30uL的比例混合均勻后，得到多重PCR引物。
[0022]⑷提取待測肉品DNA:
將待測肉品-羊肉1g用液氮研磨后,使用DNeasy? Blood and Tissue Kit動物組織的基因組DNA提取試劑盒提取DNA，并測定DNA濃度，得到待測肉品DNA模板。
[0023](5)建立對照肉品DNA的PCR反應(yīng)體系:
2XTaq PCR StarMix (購自北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司) 15uL 多重PCR引物6.7uL
對照肉品DNA模板 2.0uL 滅菌蒸懼水補足至30uL。
[0024](6)建立待測肉品DNA的PCR反應(yīng)體系:
2XTaq PCR StarMix (購自北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司) 15uL 多重PCR引物6.7uL
待測肉品DNA模板 2.0uL 滅菌蒸懼水補足至30uL。
[0025](7)分別對對照肉品DNA、待測肉品DNA進行PCR反應(yīng)，程序如下:
95°C預(yù)變性3min ;95°C變性30s，58 °C退火30s，72。。延伸20s，32個循環(huán)；72°C延伸3min,分別得到對照肉品DNA的PCR產(chǎn)物、待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物。
[0026](8)分別將1uL對照肉品DNA的PCR產(chǎn)物、待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物用質(zhì)量濃度為2%的瓊脂凝膠電泳檢測擴增結(jié)果，當(dāng)待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物的電泳圖中的泳道I上出現(xiàn)片段大小為327bp的一個條帶時(參見圖7)，即判定該待測肉品含有雞肉成分。
[0027]實施例2清真食品中常見禁忌成分的多重PCR快速檢測方法，包括以下步驟:
(I)將生鮮的豬肉、羊肉、雞肉、牛肉和老鼠肉分別用液氮研磨后混合，得到混合肉，使用
DNeasy? Blood and Tissue Kit動物組織的基因組DNA提取試劑盒提取混合肉中的DNA,測定其在260nm和280nm處的吸光度值，計算DNA的濃度，即得到豬、羊、雞、老鼠、牛5種混合肉的DNA作為對照肉品DNA模板。
[0028]⑵根據(jù)豬、羊、雞、老鼠、牛的線粒體細胞色素b基因序列，設(shè)計通用的正向引物和反向特異性引物。其中
正向引物序列為 5，-CAAAGCTACCCTCACCCG-3，；
反向特異性引物序列如下所示:
豬 5’ -CTATGTCTGATGAGATTCCGGTA-3’，片段大小為 138bp ；
羊 5’ -TGAGGATTAGTAGGATAGCACC-3’，片段大小為 199bp ；
雞 5’ -GATGGCATAGGCGAATAGAA-3’，片段大小為 327bp ； 老鼠 5’ -AGATAAGATTAAGGCTAGAACACC-3’，片段大小為 378bp ；
牛 5’ -TTCATGTGAGTGTCAGTAGGTCT-3’，片段大小為 499bp。
[0029](3)將通用引物豬、羊、雞、老鼠、牛按 10pmol/30uL:5pmol/30uL:lpmol/30uL:6pmol/30uL:10pmol/30uL:12pmol/30uL的比例混合均勻后，得到多重PCR引物。
[0030]⑷提取待測肉品DNA:
將待測肉品-牛肉丸1g用液氮研磨后,使用DNeasy? Blood and Tissue Kit動物組織的基因組DNA提取試劑盒提取DNA，并測定DNA濃度，得到待測肉品DNA模板。
[0031 ] (5)建立對照肉品DNA的PCR反應(yīng)體系:
2XTaq PCR StarMix (購自北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司) 15uL 多重PCR引物6.7uL
對照肉品DNA模板 2.0uL 滅菌蒸懼水補足至30uL。
[0032](6)建立待測肉品DNA的PCR反應(yīng)體系:
2XTaq PCR StarMix (購自北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司) 15uL 多重PCR引物6.7uL
待測肉品DNA模板 2.0uL 滅菌蒸懼水補足至30uL。
[0033](7)分別對對照肉品DNA、待測肉品DNA進行PCR反應(yīng)，程序如下:
95°C預(yù)變性3min ;95°C變性30s，58 °C退火30s，72。。延伸20s，32個循環(huán)；72°C延伸3min,分別得到對照肉品DNA的PCR產(chǎn)物、待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物。
[0034](8)分別將1uL對照肉品DNA的PCR產(chǎn)物、待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物用質(zhì)量濃度為2%的瓊脂凝膠電泳檢測擴增結(jié)果，當(dāng)待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物的電泳圖中的泳道2上出現(xiàn)片段大小為、199bp的一個條帶時(參見圖7)，即判定該待測肉品含有羊肉成分。
[0035]實施例3清真食品中常見禁忌成分的多重PCR快速檢測方法，包括以下步驟:
(I)將生鮮的豬肉、羊肉、雞肉、牛肉和老鼠肉分別用液氮研磨后混合，得到混合肉，使用
DNeasy? Blood and Tissue Kit動物組織的基因組DNA提取試劑盒提取混合肉中的DNA,測定其在260nm和280nm處的吸光度值，計算DNA的濃度，即得到豬、羊、雞、老鼠、牛5種混合肉的DNA作為對照肉品DNA模板。
[0036]⑵根據(jù)豬、羊、雞、老鼠、牛的線粒體細胞色素b基因序列，設(shè)計通用的正向引物和反向特異性引物。其中
正向引物序列為 5，-CAAAGCTACCCTCACCCG-3，；
反向特異性引物序列如下所示:
豬 5’ -CTATGTCTGATGAGATTCCGGTA-3’，片段大小為 138bp ；
羊 5’ -TGAGGATTAGTAGGATAGCACC-3’，片段大小為 199bp ；
雞 5’ -GATGGCATAGGCGAATAGAA-3’，片段大小為 327bp ；
老鼠 5’ -AGATAAGATTAAGGCTAGAACACC-3’，片段大小為 378bp ；
牛 5’ -TTCATGTGAGTGTCAGTAGGTCT-3’，片段大小為 499bp。
[0037](3)將通用引物豬、羊、雞、老鼠、牛按 10pmol/30uL:5pmol/30uL:lpmol/30uL:6pmol/30uL:10pmol/30uL:12pmol/30uL的比例混合均勻后，得到多重PCR引物。
[0038]⑷提取待測肉品DNA:
將待測肉品-羊肉片1g用液氮研磨后,使用DNeasy? Blood and Tissue Kit動物組織的基因組DNA提取試劑盒提取DNA，并測定DNA濃度，得到待測肉品DNA模板。
[0039](5)建立對照肉品DNA的PCR反應(yīng)體系:
2XTaq PCR StarMix (購自北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司) 15uL 多重PCR引物6.7uL
對照肉品DNA模板 2.0uL 滅菌蒸懼水補足至30uL。
[0040](6)建立待測肉品DNA的PCR反應(yīng)體系:
2XTaq PCR StarMix (購自北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司) 15uL 多重PCR引物6.7uL
待測肉品DNA模板 2.0uL 滅菌蒸懼水補足至30uL。
[0041 ] (7)分別對對照肉品DNA、待測肉品DNA進行PCR反應(yīng)，程序如下:
95°C預(yù)變性3min ;95°C變性30s，58 °C退火30s，72。。延伸20s，32個循環(huán)；72°C延伸3min,分別得到對照肉品DNA的PCR產(chǎn)物、待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物。
[0042] (8)分別將1uL對照肉品DNA的PCR產(chǎn)物、待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物用質(zhì)量濃度為2%的瓊脂凝膠電泳檢測擴增結(jié)果，當(dāng)待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物的電泳圖中的泳道3上出現(xiàn)片段大小為199bp的一個條帶時(參見圖7)，即判定該待測肉品含有羊肉成分，沒有摻有其他肉類物質(zhì)。
【權(quán)利要求】
1.清真食品中常見禁忌成分的多重PCR快速檢測方法，包括以下步驟: (I)將生鮮的豬肉、羊肉、雞肉、牛肉和老鼠肉分別用液氮研磨后混合，得到混合肉，使用DNeasy? Blood and Tissue Kit動物組織的基因組DNA提取試劑盒提取混合肉中的DNA,測定其在260nm和280nm處的吸光度值，計算DNA的濃度，即得到豬、羊、雞、老鼠、牛5種混合肉的DNA作為對照肉品DNA模板； ⑵根據(jù)豬、羊、雞、老鼠、牛的線粒體細胞色素b基因序列，設(shè)計通用的正向引物和反向特異性引物；其中 所述正向引物序列為5’ -CAAAGCTACCCTCACCCG-3’ ； 所述反向特異性引物序列如下所示: 豬 5’ -CTATGTCTGATGAGATTCCGGTA-3’，片段大小為 138bp ； 羊 5’ -TGAGGATTAGTAGGATAGCACC-3’，片段大小為 199bp ； 雞 5’ -GATGGCATAGGCGAATAGAA-3’，片段大小為 327bp ； 老鼠 5’ -AGATAAGATTAAGGCTAGAACACC-3’，片段大小為 378bp ； 牛 5’ -TTCATGTGAGTGTCAGTAGGTCT-3’，片段大小為 499bp ； ⑶將所述通用引物豬、羊、雞、老鼠、牛按10pmol/30uL:5pmol/30uL:lpmol/30uL:6pmol/30uL:10pmol/30uL:12pmol/30uL的比例混合均勻后，得到多重PCR引物； ⑷提取待測肉品DNA: 將待測肉品1g用液氮研磨后，使用DNeasy? Blood and Tissue Kit動物組織的基因組DNA提取試劑盒提取DNA，并測定DNA濃度，得到待測肉品DNA模板； (5)建立對照肉品DNA的PCR反應(yīng)體系: 2XTaq PCR StarMix 15uL 多重PCR引物6.7uL 對照肉品DNA模板 2.0uL 滅菌蒸餾水補足至30uL ； (6)建立待測肉品DNA的PCR反應(yīng)體系: 2XTaq PCR StarMix 15uL 多重PCR引物6.7uL 待測肉品DNA模板 2.0uL 滅菌蒸餾水補足至30uL ； (7)分別對對照肉品DNA、待測肉品DNA進行PCR反應(yīng)，程序如下: 95°C預(yù)變性3min ;95°C變性30s，58 °C退火30s，72。。延伸20s，32個循環(huán)；72°C延伸3min,分別得到對照肉品DNA的PCR產(chǎn)物、待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物； ⑶分別將1uL所述對照肉品DNA的PCR產(chǎn)物、所述待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物用質(zhì)量濃度為2%的瓊脂凝膠電泳檢測擴增結(jié)果，當(dāng)所述待測肉品DNA的PCR產(chǎn)物的電泳圖中的一個泳道上出現(xiàn)片段大小為138bp、199bp、327bp、378bp、499bp五個條帶中的一個或多個時，即判定該待測肉品含有豬、羊、雞、牛和老鼠五種肉類成分中的一種或多種。
【文檔編號】C12Q1/68GK104498597SQ201410748957
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月10日
【發(fā)明者】李儒 , 曾巧英, 武鑫, 周小平, 周圍, 張宇霞 申請人:甘肅出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫綜合技術(shù)中心