利用囊胚腔液游離dna檢測胚胎染色體異常的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及利用囊胚腔液游離DNA檢測胚胎染色體異常的方法，包括以下步驟：囊胚腔液游離DNA的獲取、囊胚腔液DNA的檢測、游離DNA全基因組擴增、全基因組擴增產(chǎn)物分析、基因組DNA進行片段化處理、片段化目的DNA進行定量分析和片段大小分析、文庫構(gòu)建、上機測序、生物信息分析。本發(fā)明采用的高通量測序法避免了傳統(tǒng)的DNA分析方法只能對單細胞基因組的部分區(qū)域進行研究的不足，能完整地分析單細胞基因組的遺傳信息，操作簡便，省時高效；同時，使用囊胚腔液游離DNA作為檢測樣本，取材方便、安全，導(dǎo)致后期胚胎發(fā)育出現(xiàn)異常的概率小，能保證胚胎在后續(xù)發(fā)育中不會受到影響。
【專利說明】利用囊胚腔液游離DNA檢測胚胎染色體異常的方法 【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001] 本發(fā)明涉及分子細胞生物學(xué)領(lǐng)域，具體地說，是利用囊胚腔液游離DNA檢測胚胎 染色體異常的方法。 【【背景技術(shù)】】
[0002] 生物體內(nèi)產(chǎn)生的某些特定生物標志物，諸如蛋白質(zhì)、肽、脂質(zhì)、RNA、DNA和他們的變 體與修飾，可應(yīng)用于疾病的診斷、預(yù)后和治療。這些生物標志物可存在于多種體液中，包括 血液、血漿、血清、母乳、腹水和尿液等，已被應(yīng)用于癌癥（前列腺癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、 卵巢癌、食道癌、結(jié)腸癌等）、類似癌癥、B細胞淋巴瘤、帕金森氏病、阿爾茲海默氏病、性朊 病毒疾病等相關(guān)疾病和遺傳病檢測。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在孕婦外周血含有胎兒的循環(huán)游離DNA， 并通過胎兒游離DNA來檢測胎兒的染色體是否存在異常，此項技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于臨床。 而在腫瘤患者的血液中發(fā)現(xiàn)的腫瘤細胞游離DNA(ctDNA)目前也正在進行深入研究，有望 被應(yīng)用于腫瘤的臨床檢測和預(yù)后治療。
[0003] 基于以往的研究，用囊胚腔液游離DNA代替胚胎單個細胞進行胚胎植入前的檢測 成為可能，胚胎植入前遺傳學(xué)檢測是指胚胎植入著床之前，對體外受精的胚胎進行染色體 數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常的檢測，通過一次性檢測胚胎染色體的結(jié)構(gòu)和數(shù)目，分析胚胎是否有遺傳 物質(zhì)異常的一種早期產(chǎn)前篩查方法。傳統(tǒng)的胚胎植入前遺傳學(xué)篩查主要采用的樣本是卵裂 期單卵裂球1-2個或囊胚期滋養(yǎng)外胚層細胞5-10個。這種通過取卵裂期或囊胚期單細胞 進行胚胎植入前染色體篩查在臨床應(yīng)用較多，但是沒有大量的臨床數(shù)據(jù)證明，卵裂期或者 囊胚期的單細胞取材對胚胎后期發(fā)育是否存在影響，因此在臨床上尋找一種更安全的、對 胚胎沒有任何影響的檢測標志物非常有必要。
[0004] 目前，相對于Array-CGH，高通量測序技術(shù)在胚胎植入前檢測上的應(yīng)用已被證實更 加準確、高效，因此利用囊胚腔游離DNA結(jié)合高通量測序技術(shù)進行胚胎植入前檢測在取材 和檢測方式上更具優(yōu)勢。而這首先需要建立通過囊胚腔液游離DNA高通量測序進行染色體 異常檢測的流程。本發(fā)明通過對小鼠囊胚腔液的檢測，發(fā)現(xiàn)在小鼠囊胚腔液中也存在游離 的DNA，并對DNA進行基因組擴增，利用高通量測序技術(shù)，對擴增產(chǎn)物基因組DNA進行測序并 進行生物信息學(xué)分析，與單細胞測序結(jié)果進行比較分析，結(jié)果無明顯差異。這使得應(yīng)用二代 測序技術(shù)對人的囊胚腔液DNA進行胚胎植入前染色體檢測邁出了一大步。 【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0005] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供基于非治療目的的利用胚囊腔液游 離DNA檢測胚胎染色體異常的方法。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
[0007] 基于非治療目的利用胚囊腔液游離DNA檢測胚胎染色體異常的方法，包括以下步 驟：
[0008] (1)囊胚腔液游離DNA的獲?。菏褂梦⒋┐碳夹g(shù)，利用無菌的針頭吸取，得到囊胚 腔液游離DNA。
[0009] ⑵囊胚腔液DNA的檢測：使用實時熒光定量PCR的方法，檢測囊胚腔液微量DNA 的存在。
[0010] (3)游離DNA全基因組擴增：對分離得到的囊胚腔液游離DNA，使用D0P-PCR法，利 用3'端ATGTGG這6個在人體中分布頻率極高的堿基作為引導(dǎo)，以6個堿基的隨機序列來 決定特異的擴增起始位點，進行全基因組DNA擴增，以達到二代測序技術(shù)所要求的DNA起始 量。
[0011] (4)全基因組擴增產(chǎn)物分析：對擴增的基因組DNA進行定量分析，分析檢測結(jié)果顯 示無降解、無污染、符合二代測序技術(shù)所要求的DNA起始量的樣品才可以進行下一步實驗； 所述定量分析方法為瓊脂糖凝膠電泳、Agilent2100Bioanalyzer檢測或QubitdsDNAHS AssayKit。
[0012] (5)基因組DNA進行片段化處理：使用酶切處理方法，將基因組DNA處理為適合 Ion Proton測序系統(tǒng)上機需要的片段大小，所述基因組DNA為囊胚腔液游離DNA使用Sigma 基因組擴增試劑盒擴增后的DNA產(chǎn)物。
[0013] (6)片段化目的DNA進行定量分析和片段大小分析：對于片段化后的DNA，使用 Qubit dsDNA HS Assay Kit 進行定量分析，使用 Agilent 2100Bioanalyzer 檢測進行片段 大小分析。
[0014] (7)文庫構(gòu)建：采用常規(guī)的全基因組DNA文庫構(gòu)建方法進行上機測序前文庫構(gòu)建 處理；具體文庫構(gòu)建流程參考Life Tech的Ion Proton Library Protocol進行文庫構(gòu)建。
[0015] (8)上機測序：文庫質(zhì)檢合格后，采用二代測序技術(shù)進行DNA測序，所述測序技 術(shù)為 Illumina Hiseq 2000 測序系統(tǒng)、AB Solid 4.0 測序系統(tǒng)、Roche GSFLX Titanium System 系統(tǒng)或 Life Technologies Ion Proton。
[0016] (9)生物信息分析：對測序結(jié)果進行生物信息分析，通過對囊胚腔液游離DNA和正 常胚胎的測序數(shù)據(jù)進行分析、研究和比較來檢測胚胎染色體是否異常。
[0017] 注：本發(fā)明的方法為應(yīng)用于實驗室科研及篩選，為非診斷或治療目的發(fā)明。
[0018] 本發(fā)明的目的是利用囊胚腔液游離DNA建立囊胚腔液高通量測序流程，以取代胚 胎單細胞測序，作為胚胎植入前檢測的新方法。
[0019] 本發(fā)明提取了小鼠囊胚腔液體，用熒光定量PCR進行目的片段的檢測，證實了小 鼠囊胚腔液中存在游離的基因組DNA。
[0020] 本發(fā)明進一步將囊胚腔液游離DNA測序與囊胚腔細胞測序結(jié)果進行比較分析，證 實了囊胚腔液DNA測序結(jié)果與單細胞測序結(jié)果無明顯差異，操作流程如下：
[0021] a、分離小鼠囊胚單細胞并進行裂解，得到完整的細胞基因組DNA;在顯微操作條 件下進行小鼠囊胚腔液游離DNA的抽取，獲得微量基因組DNA。
[0022] b、進行單細胞和囊胚腔液DNA進行全基因組擴增
[0023] 高通量測序技術(shù)要求起始DNA量為微克級別水平，需要經(jīng)過全基因組擴增技術(shù) (WGA)，使DNA量達到能夠進行上機測序的要求。已知的全基因組擴增技術(shù)包括兩大類：基 于PCR基礎(chǔ)的WGA技術(shù)和基于等溫反應(yīng)基礎(chǔ)的WGA技術(shù)，基于PCR基礎(chǔ)的WGA技術(shù)包括： PEP、D0P-PCR、LM-PCR和MALBAC，基于等溫反應(yīng)基礎(chǔ)的WGA技術(shù)如：PWGA、多重鏈置換擴增 (MDA，MultipleDisplancementAmplification)，本發(fā)明使用的D0P-PCR擴增技術(shù)，在全基 因組擴增后進行質(zhì)檢和篩選，保證擴增后的產(chǎn)物可以進行基因組測序。
[0024] c、對擴增產(chǎn)物進行定量檢測及定性檢測
[0025] 擴增產(chǎn)物定量檢測和定性分析的方法主要有瓊脂糖凝膠電泳法，Agilent2100生 物分析法，熒光定量PCR等等。
[0026] d、檢測合格的樣品進行片段化處理
[0027] 全基因組DNA進行片段化處理的方法有霧化、超聲片段化法以及酶切處理法等， 這些方法可以將基因組DNA處理成175bp左右的片段。
[0028] e、片段化DNA文庫構(gòu)建并測序
[0029] 片段化的DNA經(jīng)過末端修飾，使用末端修復(fù)酶進行修復(fù)處理，以產(chǎn)生平端化的 DNA，然后使用該試劑盒的連接酶，在DNA兩端加上接頭，以此為模板進行PCR擴增。將擴增 產(chǎn)物進行高通量測序，通過數(shù)據(jù)分析比較囊胚腔液DNA測序與囊胚細胞測序的區(qū)別。
[0030] 在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明還公布了一種利用小鼠囊胚腔液進行測序分析從而檢測小鼠 胚胎染色體異常的方法。
[0031] 本發(fā)明優(yōu)點在于：利用本發(fā)明能高效地利用小鼠囊胚腔液DNA基因組進行分析和 研究。一方面，采用的高通量測序法避免了傳統(tǒng)的DNA分析方法只能對單細胞基因組的部 分區(qū)域進行研究的不足，完整地分析單細胞基因組的遺傳信息，操作簡便，省時高效；另一 方面，使用囊胚腔液游離DNA作為檢測樣本，取材方便、安全，導(dǎo)致后期胚胎發(fā)育出現(xiàn)異常 的概率小，能夠保證胚胎在后續(xù)發(fā)育過程中不會受到影響。 【【專利附圖】

【附圖說明】】
[0032] 附圖1是本發(fā)明的小鼠囊胚腔液DNA取樣過程。
[0033] 附圖2是本發(fā)明實施例2中的小鼠胚胎單細胞基因組測序數(shù)據(jù)在每條染色體的覆 蓋率情況。（15x)
[0034] 附圖3是本發(fā)明實施例2中的小鼠胚囊腔液DNA基因組測序數(shù)據(jù)在每條常染色體 的覆蓋率情況。（15x)
[0035] 附圖4是本發(fā)明實施例2中的小鼠胚胎單細胞基因組測序數(shù)據(jù)在每條染色體的平 均測序深度情況。
[0036] 附圖5是本發(fā)明實施例2中小鼠胚囊腔液DNA基因組測序數(shù)據(jù)在每條常染色體的 平均測序深度情況。
[0037] 附圖6是小鼠胚胎單細胞測序和小鼠囊胚腔液DNA測序進行9號染色體缺失分 析。
[0038] 附圖7是小鼠胚胎單細胞測序和小鼠囊胚腔液DNA測序進行5號染色體重復(fù)分 析。 【【具體實施方式】】
[0039] 本發(fā)明公開了一種能夠利用囊胚腔液游離DNA進行全基因組DNA擴增并進行高通 量測序的方法，本發(fā)明的方法如下：
[0040] 1.小鼠囊胚腔液游離DNA的獲取
[0041] 囊胚腔液游離DNA的獲取：在顯微操作儀下，使用微穿刺技術(shù)，利用無菌的針頭吸 取，得到囊胚腔液游離DNA。
[0042] 2.小鼠囊胚腔液DNA的檢測
[0043] 小鼠囊胚腔液DNA的檢測方法，采用實時熒光定量PCR的方法，熒光定量PCR可以 用來檢測微量DNA的存在，檢測方法靈敏、準確。
[0044] 3.游離DNA全基因組擴增
[0045] 對分離得到的胚胎單細胞和囊胚腔液游離DNA，進行全基因組DNA擴增，以達到二 代測序技術(shù)所要求的DNA起始量。本發(fā)明主要使用D0P-PCR法，此方法對主要是利用3'端 ATGTGG這6個在人體中分布頻率極高的堿基作為引導(dǎo)，以6個堿基的隨機序列來決定特異 的擴增起始位點，從而達到擴增整個基因組的目的。
[0046] 4?全基因組擴增產(chǎn)物分析
[0047] 可以采用瓊脂糖凝膠電泳、Agilent2100Bioanalyzer檢測、QubitdsDNAHS AssayKit等方法對擴增的基因組DNA進行定量分析，檢測結(jié)果顯示無降解、無污染、符合 二代測序技術(shù)所要求的DNA起始量的樣品才可以進行下一步實驗。
[0048] 5.基因組DNA進行片段化處理
[0049] 本發(fā)明主要使用酶切處理方法，將基因組DNA處理為適合IonProton測序系統(tǒng)上 機需要的片段大小，基因組DNA主要為小鼠胚胎單細胞和小鼠囊胚腔液游離DNA使用Sigma 基因組擴增試劑盒擴增后的DNA產(chǎn)物。
[0050] 6.片段化目的DNA進行分析和定量
[0051] 對于片段化后的DNA，主要采用瓊脂糖凝膠電泳、Agilent2100Bioanalyzer檢 測、QubitdsDNAHSAssayKit等方法進行片段大小分析和定量分析。本發(fā)明使用Qubit dsDNAHSAssayKit進行定量分析、Agilent2100Bioanalyzer檢測進行片段大小分析。
[0052] 7?文庫構(gòu)建
[0053] 采用常規(guī)的全基因組DNA文庫構(gòu)建方法進行上機測序前文庫構(gòu)建處理，具體文庫 構(gòu)建流程參考LifeTech的IonProtonLibraryProtocol進行文庫構(gòu)建。
[0054] 8?上機測序
[0055] 文庫質(zhì)檢合格后，采用二代測序技術(shù)進行基因組DNA測序，如IlluminaHiseq 2000 測序系統(tǒng)、ABSolid4.0 測序系統(tǒng)化、RocheGSFLXTitaniumSystem系統(tǒng)和Life TechnologiesIonProton等測序儀，本發(fā)明使用IonProton測序系統(tǒng)。
[0056] 9.生物信息分析
[0057] 對測序結(jié)果進行生物信息分析，通過對小鼠囊胚腔液游離DNA和小鼠單細胞基因 組的測序數(shù)據(jù)進行分析、研究和比較。
[0058] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明提供的【具體實施方式】作詳細說明。
[0059] 實施例1小鼠囊胚腔液游離DNA檢測
[0060] (1)囊胚腔液收集
[0061] 小鼠囊胚腔液的獲得及處理：小鼠囊胚腔液DNA的獲取和小鼠單細胞的獲得是同 一個小鼠胚胎，以便于進行試驗結(jié)果比較。在顯微操作實驗室內(nèi)，室溫條件下，采用微穿刺 技術(shù)取樣。在吸取囊胚腔液DNA過程中，避免細胞質(zhì)污染和滋養(yǎng)層細胞受損。小鼠囊胚腔 液DNA取樣過程如圖1所示。
[0062] (2)目標基因和引物設(shè)計
[0063] 使用GAPH和TBCD兩個基因作為檢測基因，設(shè)計引物進行定量分析檢測。GAPDH和 TBCD兩個基因的擴增片段大小為100bp和120bp。
[0064] 擴增引物序列如下。
[0065] GAPDH：
[0066] PITGTCTCACCTTATTAGCC
[0067] P2 CCGCAAAGATTTTCAGAG
[0068] TBCD:
[0069] P3 CTGCGAGCGCCGCCGAGG
[0070] P4 TGTGCACCGCCGGCAAGC
[0071] (3)Real-timePCR檢測
[0072] 熒光定量PCR的反應(yīng)體系：
[0073] 含有 PBS 的囊胚腔液（?)，PI、P2、P3、P4 各 0? l(10iimol)，SYBRGreen 10iil，PCR TagMIX 15iU，總的體系為30iU。輕彈管底將溶液混勻，短暫離心。反應(yīng)體系 配置操作時不要碰到PCR管，整個反應(yīng)體系配置在冰上進行。熒光定量PCR的反應(yīng)條件： 94°C lmin，{94°C 30s，50°C 30s，72°C 30s(40cycles)}。
[0074] (4) PCR產(chǎn)物檢測分析
[0075] 溶解曲線顯示結(jié)果均有單峰存在，配置2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物，以電 壓100V電泳30min，檢測結(jié)果顯示在100bp和120bp處有目的條帶出現(xiàn)，說明囊胚液存在游 離 DNA。
[0076] 實施例2
[0077] 小鼠基因組測序覆蓋度比較（小鼠胚胎單細胞和小鼠囊胚腔液DNA)
[0078] (1)單細胞分離和囊胚腔液DNA獲得及處理：
[0079] 挑取10個小鼠胚胎單細胞樣本和10個小鼠囊胚腔液樣本，每個小鼠胚胎單細胞 樣本和小鼠囊胚腔液樣本分別 對應(yīng)，來自同一個小鼠胚胎。
[0080] a.小鼠胚胎單細胞分離及處理：在顯微鏡下，通過激光打孔技術(shù)分離出單個細 胞，分離的單個細胞放入含有不到2 yl PBS的200 yl PCR管中，加水至終體積為9 yl。 向PCR管中加入lyl新鮮配置好的細胞裂解緩沖液，混勻。將得到的混合液進行孵育： 50°C lh，99°C 4min，15°C hold，置于冰上冷卻，離心。
[0081] b.小鼠囊胚腔液的獲得及處理：小鼠囊胚腔液DNA的獲取和小鼠單細胞的獲得是 同一個胚胎，以便進行試驗結(jié)果比較，在顯微操作實驗室內(nèi)，室溫條件下，采用微穿刺技術(shù) 進行取樣。在吸取囊胚腔液DNA的過程中，避免細胞質(zhì)污染和滋養(yǎng)層細胞受損。
[0082] (2)D0P-PCR全基因擴增
[0083] a :使用 Sigma公司的GenomePlex Single Cell Whole Genome Amplification Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒。在含有單細胞DNA的PCR管中（步驟1的產(chǎn)物）加入2 ill lx Single Cell Library Preparation Buffer,再力口入 1 y 1 Library Stabilization Solution,混勻，95°C2min，15°C hold。置冰上冷卻，離心，再置冰上。加入1 ul Library Preparation Enzyme，混勻并短暫離心。加熱樣品：16°C 20min，24°C 20min，37°C 20min， 75〇C 5min, 15°C hold〇
[0084] b :向產(chǎn)物加入 7. 5 u 1 lOx Amplification Master Mix、48. 5 u 1 水、5 u 1 的 DNA Polymerase,混合均勻，離心，進行擴增，條件如下：
[0085] 95°C 3min，{94°C 30s，65°C 5min (25cycle) }，15°C hold。
[0086] c :擴增產(chǎn)物進行純化，去掉離子和雜質(zhì)等。
[0087] (3)擴增產(chǎn)物質(zhì)檢：
[0088] 使用QubitdsDNA HS AssayKit檢測擴增產(chǎn)物濃度，按照試劑盒說明書進行操 作。檢測合格的產(chǎn)物，即總量超過1 U 1的產(chǎn)物，進行DNA文庫構(gòu)建及上機測序。經(jīng)檢測，本 發(fā)明中單細胞樣本擴增產(chǎn)物均大于1U 1，囊胚腔液樣本有9個擴增成功，其中1個樣本濃度 低于500ng，該樣本我們也進行了后續(xù)的建庫和測序。
[0089] (4)片段化處理：
[0090] 按照NEB Next dsDNA Fragmentase試劑盒說明書進行試驗操作，片段化處理結(jié) 束，使用 Qubit dsDNA HS Assay Kit 和 Agilent 2100 Bioanalyzer 進行結(jié)構(gòu)分析。
[0091] (5)文庫構(gòu)建及上機測序
[0092] 處理好的DNA樣品，采用IonProtonLibraryProtocol文庫構(gòu)建方法進行上機 測序前文庫構(gòu)建處理，文庫構(gòu)建流程包括末端補平、連接反應(yīng)和PCR擴增反應(yīng)，文庫構(gòu)建產(chǎn) 物進行質(zhì)檢，質(zhì)檢合格后，采用IonProton測序系統(tǒng)進行小鼠胚胎單細胞和小鼠囊胚腔液 DNA測序分析。
[0093] (6)生物信息分析
[0094] 用15x的測序數(shù)據(jù)量進行統(tǒng)計分析，將測序所得序列與小鼠基因組進行比對分 析，統(tǒng)計各樣本的覆蓋率以及測序深度。圖2為小鼠胚胎單細胞基因組測序覆蓋率；圖3為 小鼠囊胚腔液游離DNA基因組測序覆蓋率；圖4為小鼠胚胎單細胞基因組測序平均深度； 圖5為小鼠囊胚腔液游離DNA基因組測序平均深度。結(jié)果顯示1個囊胚腔液樣本的覆蓋率 明顯偏低，可能是由于單細胞擴增失敗導(dǎo)致，其余囊胚腔液樣本與單細胞樣本分析結(jié)果無 明顯區(qū)別，說明囊胚腔液樣本可取代單細胞樣本進行染色體分析。10例小鼠囊胚單細胞及 小鼠囊胚腔液DNA測序覆蓋率和平均深度見表1。
[0095] 表1 10例小鼠囊胚單細胞及小鼠囊胚腔液DNA測序覆蓋率和平均深度統(tǒng)計表
[0096]
【權(quán)利要求】
1.基于非治療目的利用胚囊腔液游離DNA檢測胚胎染色體異常的方法，其特征在于， 包括以下步驟： (1) 囊胚腔液游離DNA的獲?。菏褂梦⒋┐碳夹g(shù)，利用無菌的針頭吸取，得到囊胚腔液 游離DNA ; (2) 囊胚腔液DNA的檢測：使用實時熒光定量PCR的方法，檢測囊胚腔液微量DNA的存 在； (3) 游離DNA全基因組擴增：對分離得到的囊胚腔液游離DNA，使用DOP-PCR法，利用3' 端ATGTGG這6個在人體中分布頻率極高的堿基作為引導(dǎo)，以6個堿基的隨機序列來決定特 異的擴增起始位點，進行全基因組DNA擴增，以達到二代測序技術(shù)所要求的DNA起始量； (4) 全基因組擴增產(chǎn)物分析：對擴增的基因組DNA進行定量分析，分析檢測結(jié)果顯示 無降解、無污染、符合二代測序技術(shù)所要求的DNA起始量的樣品才可以進行下一步實驗；所 述定量分析方法為瓊脂糖凝膠電泳、Agilent 2100Bioanalyzer檢測或Qubit dsDNA HS Assay Kit ； (5) 基因組DNA進行片段化處理：使用酶切處理方法，將基因組DNA處理為適合Ion Proton測序系統(tǒng)上機需要的片段大小，所述基因組DNA為囊胚腔液游離DNA使用Sigma基 因組擴增試劑盒擴增后的DNA產(chǎn)物； (6) 片段化目的DNA進行定量分析和片段大小分析：對于片段化后的DNA，使用Qubit dsDNA HS Assay Kit進行定量分析，使用Agilent 2100Bioanalyzer檢測進行片段大小分 析； (7) 文庫構(gòu)建：采用常規(guī)的全基因組DNA文庫構(gòu)建方法進行上機測序前文庫構(gòu)建處 理； (8) 上機測序：文庫質(zhì)檢合格后，采用二代測序技術(shù)進行DNA測序，所述測序技術(shù)為 Illumina Hiseq 2000 測序系統(tǒng)、AB Solid 4. 0 測序系統(tǒng)、RocheGSFLX Titanium System 系統(tǒng)或 Life Technologies Ion Proton ； (9) 生物信息分析：對測序結(jié)果進行生物信息分析，通過對囊胚腔液游離DNA和正常胚 胎的測序數(shù)據(jù)進行分析、研究和比較來檢測胚胎染色體是否異常。
【文檔編號】C12Q1/68GK104450923SQ201410771006
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月15日
【發(fā)明者】梁波, 孔令印, 冒艷, 楊晴, 吳小娟 申請人:賽業(yè)健康研究中心（太倉）有限公司