可視化檢測(cè)核酸恒溫?cái)U(kuò)增的反應(yīng)裝置制造方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開(kāi)了一種可視化檢測(cè)核酸恒溫?cái)U(kuò)增的反應(yīng)裝置，包括：多個(gè)相互獨(dú)立但是連通的儲(chǔ)液區(qū)域，其中一個(gè)區(qū)域用于進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)，盛放核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑，其它區(qū)域的全部或部分用于盛放用于核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物可視化檢測(cè)的試劑，所述反應(yīng)裝置具有所述反應(yīng)容器的蓋。在核酸恒溫?cái)U(kuò)增過(guò)程中，核酸擴(kuò)增副產(chǎn)物焦磷酸根被分解為磷酸根，擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，在依舊封閉反應(yīng)器的情況下，將反應(yīng)器內(nèi)的所有液體混勻，觀察反應(yīng)器內(nèi)是否發(fā)生顏色變化，根據(jù)反應(yīng)器內(nèi)的液體顏色是否符合顯色試劑與磷酸根發(fā)生反應(yīng)后應(yīng)當(dāng)體現(xiàn)的顏色來(lái)對(duì)核酸恒溫?cái)U(kuò)增進(jìn)行可視化檢測(cè)。
【專利說(shuō)明】可視化檢測(cè)核酸恒溫?cái)U(kuò)增的反應(yīng)裝置

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬化學(xué)分析、核酸分析領(lǐng)域，尤其涉及一種可視化檢測(cè)核酸等溫?cái)U(kuò)增產(chǎn)物的反應(yīng)裝置。

【背景技術(shù)】
[0002]隨著生物技術(shù)的發(fā)展，核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)作為新型的核酸擴(kuò)增技術(shù)被廣泛應(yīng)用在農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué)及食品工業(yè)領(lǐng)域。目前常用的恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)有交叉引物恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(CPA)、環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)、鏈置換擴(kuò)增(SDA)、依賴解旋酶的擴(kuò)增(HDA)。由于該類新型擴(kuò)增技術(shù)能夠在較低的恒定溫度條件下實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增(大部分恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)所需反應(yīng)溫度在60°C或者37°C左右)，因此擺脫了傳統(tǒng)PCR所需要的精密的溫控設(shè)備，大大縮小成本，受到廣泛關(guān)注。
[0003]用于核酸恒溫?cái)U(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)的方法，目前主要有電泳、熒光染料、濁度、免疫試紙條等。其中，凝膠電泳法需要有開(kāi)蓋的操作，因此容易造成氣溶膠污染，并且需要用到高致癌性的熒光染料危害人體健康；熒光法檢測(cè)需要特殊、龐大、昂貴的光學(xué)儀器；而濁度法雖然能能夠使用肉眼觀測(cè)，但是對(duì)核酸擴(kuò)增效率要求較高，要求核酸擴(kuò)增產(chǎn)量達(dá)到最低肉眼可見(jiàn)濁度并且容易受到主觀因素的影響，并不適用于所有的恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)。因此，該領(lǐng)域需要開(kāi)發(fā)新的核酸擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)方法?？梢暬瘷z測(cè)具有簡(jiǎn)單、直接、便于大通量篩查的特點(diǎn)，可以擺脫復(fù)雜的儀器設(shè)施，對(duì)檢測(cè)結(jié)果做出判斷。目前有鈣黃綠素?zé)晒饽恳暦?，HNB法。這兩種方法是利用金屬指示劑間接或是直接地檢測(cè)反應(yīng)體系中的金屬離子濃度，從而發(fā)生顏色變化，具體來(lái)講，分別是從橘色變?yōu)榫G色或是從紫色變?yōu)樘焖{(lán)色。因此，目前可視化檢測(cè)核酸擴(kuò)增的方法具有不可避免的缺點(diǎn):1.金屬指示劑容易受到樣品中其他金屬離子的影響，造成誤差；2.陽(yáng)性反應(yīng)結(jié)果是從一種顏色到另外一種顏色，不利于肉眼觀察；3.檢測(cè)對(duì)象是反應(yīng)液中初始濃度較高的金屬離子，因此會(huì)具有較高的背景信號(hào)降低檢測(cè)靈敏度。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本實(shí)用新型第一個(gè)目的是提供一種可視化檢測(cè)核酸恒溫?cái)U(kuò)增的反應(yīng)裝置，可實(shí)現(xiàn)在不打開(kāi)蓋的情況下，使得核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)能夠不受干擾地進(jìn)行，之后進(jìn)行的檢測(cè)反應(yīng)能夠按序正常進(jìn)行，從而為可視化檢測(cè)核酸恒溫?cái)U(kuò)增提供器材基礎(chǔ)。為此，本實(shí)用新型采用以下技術(shù)方案:
[0005]一種用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的反應(yīng)裝置，包括反應(yīng)容器，其特征在于所述反應(yīng)容器具備多個(gè)相互獨(dú)立但是連通的儲(chǔ)液區(qū)域，其中一個(gè)區(qū)域用于進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)，盛放核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑，其它區(qū)域的全部或部分用于盛放用于核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物可視化檢測(cè)的試劑(以下簡(jiǎn)稱為產(chǎn)物檢測(cè)試劑)，所述反應(yīng)裝置具有所述反應(yīng)容器的蓋。本實(shí)用新型反應(yīng)裝置的獨(dú)立、分隔但連通的儲(chǔ)液區(qū)域保證核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液和產(chǎn)物檢測(cè)試劑在反應(yīng)前相互獨(dú)立、互不干擾地盛放在裝置的不同區(qū)域；在不開(kāi)蓋的情況下，通過(guò)劇烈搖晃或是震動(dòng)、顛倒等操作下，不同區(qū)域預(yù)存儲(chǔ)的液體才混合均勻用于可視化檢測(cè)。
[0006]進(jìn)一步地，所述反應(yīng)容器為多個(gè)試管并列連為一體的試管組，試管組中試管的上部連通；試管在連通部位以下的區(qū)域?yàn)樗鰞?chǔ)液區(qū)域。
[0007]所述用于進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的儲(chǔ)液區(qū)域的容積小于等于SOul大于等于1ul。
[0008]所述用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的試劑中的不同試劑在檢測(cè)反應(yīng)前放在不同的儲(chǔ)液區(qū)域中，所述用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的試劑總體積優(yōu)選地在9(T450ul之間，更優(yōu)選地在，9(T270ul之間。
[0009]所述多個(gè)能區(qū)分但是連通的儲(chǔ)液區(qū)域的數(shù)量，優(yōu)選為2-5個(gè)，更優(yōu)選地為2-4個(gè)。
[0010]利用本實(shí)用新型的反應(yīng)裝置，能實(shí)現(xiàn)通過(guò)間接檢測(cè)磷酸根來(lái)檢測(cè)核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)，具體方法如下
[0011]利用所述反應(yīng)裝置提供的封閉的反應(yīng)器中用于核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的儲(chǔ)液空間進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)，并將進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物可視化檢測(cè)的試劑一一預(yù)先儲(chǔ)放在所述反應(yīng)器中的其它儲(chǔ)液區(qū)域中，進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的反應(yīng)液中含有將焦磷酸根分解為磷酸根的試劑，所述進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物可視化檢測(cè)的試劑是指能與磷酸根進(jìn)行反應(yīng)的顯色試劑；
[0012]在核酸恒溫?cái)U(kuò)增過(guò)程中，核酸擴(kuò)增副產(chǎn)物焦磷酸根被分解為磷酸根，核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，在依舊封閉反應(yīng)器的情況下，將反應(yīng)器內(nèi)的所有液體混勻，觀察反應(yīng)器內(nèi)是否發(fā)生顏色變化根據(jù)反應(yīng)器內(nèi)的液體顏色是否符合顯色試劑與磷酸根發(fā)生反應(yīng)后應(yīng)當(dāng)體現(xiàn)的顏色來(lái)對(duì)核酸恒溫?cái)U(kuò)增進(jìn)行可視化檢測(cè)。
[0013]所述核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑包含核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)混合液和無(wú)機(jī)焦磷酸酶；其中核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)混合液可以來(lái)自于商業(yè)化核酸恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒，例如廣州迪澳PAlOlNos基因核酸檢測(cè)試劑盒；無(wú)機(jī)焦磷酸酶是可以將焦磷酸水解生成磷酸根的酶，優(yōu)選為耐熱型的無(wú)機(jī)焦磷酸酶。
[0014]所述核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)可以為擴(kuò)增溫度低于90° C的擴(kuò)增反應(yīng)，可以為交叉引物恒溫?cái)U(kuò)增(CPA)，也可以是環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)。所述恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)可以在水浴、金屬浴或其他加熱條件下進(jìn)行。
[0015]所述用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的試劑中的不同試劑在反應(yīng)前放在不同的儲(chǔ)液區(qū)域中，總體積優(yōu)選地在9(T450ul之間，更優(yōu)選地在，9(T270ul之間。所述用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的試劑可以是還原劑溶液和鑰酸鹽-酒石酸銻鉀溶液組合(組合一)，或者鑰酸鹽酸溶液和孔雀石綠溶液組合(組合二)，總的體積在上述體積范圍之內(nèi)，有需要可以用水或是Tris-HCl緩沖液補(bǔ)充。
[0016]所述用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的試劑組合中，鑰酸鹽溶液的配置可使用鑰酸銨或鑰酸鈉，優(yōu)選鑰酸銨。
[0017]所述用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的試劑組合中，酸為純硫酸、硝酸，優(yōu)選地為濃硫fe。
[0018]所述用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的試劑組合中，還原劑溶液是由抗壞血酸或氯化亞錫配置，優(yōu)選為抗壞血酸。
[0019]本實(shí)用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型提供了一種既能符合核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)條件又能符合生產(chǎn)磷酸根反應(yīng)和磷酸根檢測(cè)反應(yīng)條件的反應(yīng)裝置，可以實(shí)現(xiàn)在不打開(kāi)反應(yīng)容器的條件下，通過(guò)對(duì)不同溶液混合，檢測(cè)核酸擴(kuò)增反應(yīng)過(guò)程中磷酸根的產(chǎn)生，間接可視化檢測(cè)核酸恒溫?cái)U(kuò)增:對(duì)于陰性樣本，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中不產(chǎn)生磷酸根，因此反應(yīng)液呈無(wú)色，而對(duì)于陽(yáng)性樣本，隨著擴(kuò)增反應(yīng)的進(jìn)行，焦磷酸根作為副產(chǎn)物不斷產(chǎn)生，并在無(wú)機(jī)焦磷酸酶的作用下被分解為磷酸根，從而與顯色試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化，反應(yīng)液呈藍(lán)色。因此本實(shí)用新型具有以下特點(diǎn)，首先，核酸擴(kuò)增的檢測(cè)不存在開(kāi)蓋操作，不會(huì)造成交叉污染；其次，使得基于該反應(yīng)裝置核酸恒溫?cái)U(kuò)增的檢測(cè)方法，能夠?qū)崿F(xiàn)從無(wú)色到有色的檢測(cè)判斷，靈敏度高，很容易用肉眼分辨，且這種檢測(cè)是通過(guò)檢測(cè)核酸擴(kuò)增過(guò)程中磷酸根的生成判斷核酸擴(kuò)增反應(yīng)的進(jìn)行，具有較低的背景干擾，有利于對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確判定。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0020]圖1a為用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的反應(yīng)裝置實(shí)施例1的示意圖
[0021]圖1b為用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的反應(yīng)裝置實(shí)施例1的立體圖。
[0022]圖2a為用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的反應(yīng)裝置實(shí)施例2的示意圖。
[0023]圖2b為用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的反應(yīng)裝置實(shí)施例2的立體圖。
[0024]圖3a為用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的反應(yīng)裝置實(shí)施例3的示意圖。
[0025]圖3b為用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的反應(yīng)裝置實(shí)施例3的立體圖。
[0026]圖4a為實(shí)例I的CPA恒溫?cái)U(kuò)增體系陽(yáng)性樣品和陰性樣品可視化檢測(cè)結(jié)果對(duì)照?qǐng)D。
[0027]圖4b為實(shí)例5的LAMP恒溫?cái)U(kuò)增體系陽(yáng)性樣品和陰性樣品可視化檢測(cè)結(jié)果對(duì)照?qǐng)D。

【具體實(shí)施方式】
[0028]如圖la、lb、2a、2b、3a和3b所示，本實(shí)用新型所提供的用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的反應(yīng)裝置包括反應(yīng)容器1，所述反應(yīng)容器I具備多個(gè)相互獨(dú)立但是連通的儲(chǔ)液區(qū)域，圖1a和Ib所顯示的實(shí)施例1中具有三個(gè)儲(chǔ)液區(qū)域分別為a、b、c，圖2a和2b所顯示的實(shí)施例2中具有四個(gè)儲(chǔ)液區(qū)域分別為a、b、C、d，圖3a和3b所顯示的實(shí)施例3中具有五個(gè)儲(chǔ)液區(qū)域分別為a、b、c、d、e，其中一個(gè)區(qū)域(比如區(qū)域a)用于進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)，盛放核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑，其它區(qū)域的全部或部分用于盛放用于核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物可視化檢測(cè)的試劑，所述反應(yīng)裝置具有所述反應(yīng)容器的蓋10。
[0029]在實(shí)施中，所述反應(yīng)容器I為多個(gè)試管并列連為一體的試管組，試管組中試管的上部連通；試管在連通部位20以下的區(qū)域?yàn)樗鰞?chǔ)液區(qū)域。
[0030]下面將結(jié)合上述反應(yīng)裝置實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作詳細(xì)的介紹，但并不局限于此。
[0031]實(shí)例1:本實(shí)用新型用于可視化交叉引物恒溫?cái)U(kuò)增(CPA)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因終止子T-Nos基因。
[0032]反應(yīng)前試劑準(zhǔn)備:在實(shí)施例1反應(yīng)器的a區(qū)域，添加9ul反應(yīng)擴(kuò)增液(包含有引物、dNTP、Tris-HCl緩沖液、Mg2+、NH4+、模板，來(lái)自杭州優(yōu)思達(dá)生物技術(shù)公司轉(zhuǎn)基因NOS序列恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒，貨號(hào)1016-01),和Iul 0.lU/ul的耐熱無(wú)機(jī)焦磷酸酶(來(lái)自New EnglandB1labs,貨號(hào)M0296s) ；b區(qū)域添加2ul 10%的抗壞血酸溶液和8ul水；c區(qū)域添加4ul鑰酸銨-酒石酸鉀銻溶液(包含2ImM鑰酸銨，2mM酒石酸鉀銻，5M硫酸)和76ul水。
[0033]核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行:將上述裝置置于63° C水浴加熱lh。
[0034]可視化檢測(cè)恒溫?cái)U(kuò)增:反應(yīng)完成后，顛倒裝置一，使得3個(gè)區(qū)域的液體充分混合，1min后判斷結(jié)果:陽(yáng)性為藍(lán)色(圖4a，4)，陰性為無(wú)色(圖4a，3)。
[0035]實(shí)例2:本實(shí)用新型用于可視化交叉引物恒溫?cái)U(kuò)增(CPA)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因終止子T-Nos基因。
[0036]核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行:將上述裝置置于63° C金屬浴加熱lh。其他同實(shí)施例1。
[0037]實(shí)例3:本實(shí)用新型用于可視化交叉引物恒溫?cái)U(kuò)增(CPA)檢測(cè)金黃色葡萄球菌。
[0038]反應(yīng)擴(kuò)增液(包含有引物、dNTP、Tris-HCl緩沖液、Mg2+、NH4+、模板，來(lái)自杭州優(yōu)思達(dá)生物技術(shù)有限公司金黃色葡萄球菌恒溫?cái)U(kuò)增核酸試劑盒，貨號(hào)1011-01)。其他同實(shí)施例1o
[0039]實(shí)例4:本實(shí)用新型用于可視化交叉引物恒溫?cái)U(kuò)增(CPA)檢測(cè)沙門氏菌。
[0040]反應(yīng)擴(kuò)增液(包含有引物、dNTP、Tris-HCl緩沖液、Mg2+、NH4+、模板，來(lái)自杭州優(yōu)思達(dá)生物技術(shù)有限公司沙門氏菌恒溫?cái)U(kuò)增核酸試劑盒，貨號(hào)1047-01)。其他同實(shí)施例1。
[0041]實(shí)例5:本實(shí)用新型用于可視化環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因終止子T-Nos基因。
[0042]在實(shí)施例1反應(yīng)器的a區(qū)域，添加9ul反應(yīng)擴(kuò)增液(包含有引物、dNTP、Tris_HCl緩沖液、Mg2+、NH4+、模板，來(lái)自廣州迪澳NOS基因核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?，貨號(hào)PA 1IS )，和Iul 0.lU/ul的耐熱無(wú)機(jī)焦磷酸酶(來(lái)自New England B1labs,貨號(hào)M0296s) ;b區(qū)域添加2ul 10%的抗壞血酸溶液和8ul水；c區(qū)域添加4ul鑰酸銨-酒石酸鉀銻溶液(包含2ImM鑰酸銨，2mM酒石酸鉀銻，5M硫酸)和76ul水。其他同實(shí)施例1。
[0043]可視化檢測(cè)恒溫?cái)U(kuò)增:反應(yīng)完成后，顛倒實(shí)施例1反應(yīng)器，使得3個(gè)區(qū)域的液體充分混合，1min后判斷結(jié)果:陽(yáng)性為藍(lán)色(圖4b，4)，陰性為無(wú)色(圖4b，3)。
[0044]實(shí)例6:本實(shí)用新型用于可視化環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)沙門氏菌。
[0045]在實(shí)施例1反應(yīng)器的a區(qū)域，添加19ul反應(yīng)擴(kuò)增液(包含有引物、dNTP、Tris-HCl緩沖液、Mg2+、NH4+、模板，來(lái)自廣州迪澳沙門氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?，貨號(hào)FA105S)，和 Iul 0.lU/ul 的耐熱無(wú)機(jī)焦磷酸酶(來(lái)自 New England B1labs，貨號(hào) M0296s);b區(qū)域添加4ul 10%的抗壞血酸溶液和16ul水；c區(qū)域添加8ul鑰酸銨-酒石酸鉀銻溶液(包含2ImM鑰酸銨，2mM酒石酸鉀銻，5M硫酸)和152ul水。其他同實(shí)施例1。
[0046]實(shí)例7:本實(shí)用新型用于可視化環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)金黃色葡萄球菌。
[0047]在實(shí)施例2反應(yīng)器的a區(qū)域，添加29ul反應(yīng)擴(kuò)增液(包含有引物、dNTP、Tris-HCl緩沖液、Mg2+、Ml/、模板，來(lái)自廣州迪澳金黃色葡萄球菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?，貨號(hào)FA109S)，和 Iul 0.lU/ul 的耐熱無(wú)機(jī)焦磷酸酶(來(lái)自 New England B1labs，貨號(hào) M0296s);b區(qū)域添加6ul 10%的抗壞血酸溶液和24ul水；c區(qū)域添加12ul鑰酸銨-酒石酸鉀銻溶液(包含21mM鑰酸銨，2mM酒石酸鉀銻，5M硫酸)和108ul水；d區(qū)域添加120ul水。其他同實(shí)施例1。
[0048]實(shí)例8:本實(shí)用新型用于可視化環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)銅綠假單胞菌。
[0049]在實(shí)施例2反應(yīng)器的a區(qū)域，添加39ul反應(yīng)擴(kuò)增液(包含有引物、dNTP、Tris-HCl緩沖液、Mg2+、NH4+、模板，來(lái)自廣州迪澳銅綠假單細(xì)胞菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?，貨號(hào)FA112S)，和 Iul 0.lU/ul 的耐熱無(wú)機(jī)焦磷酸酶(來(lái)自 New England B1labs，貨號(hào) M0296s);b區(qū)域添加8ul 10%的抗壞血酸溶液和32ul水；c區(qū)域添加16ul鑰酸銨-酒石酸鉀銻溶液(包含21mM鑰酸銨，2mM酒石酸鉀銻，5M硫酸)和144ul水；d區(qū)域添加160ul水。其他同實(shí)施例1。
[0050]實(shí)例9:本實(shí)用新型用于可視化環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)銅綠假單胞菌。
[0051]在實(shí)施例3反應(yīng)器的a區(qū)域，添加49ul反應(yīng)擴(kuò)增液(包含有引物、dNTP、Tris-HCl緩沖液、Mg2+、NH4+、模板，來(lái)自廣州迪澳銅綠假單細(xì)胞菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?，貨號(hào)FA112S)，和 Iul 0.lU/ul 的耐熱無(wú)機(jī)焦磷酸酶(來(lái)自 New England B1labs，貨號(hào) M0296s);b區(qū)域添加1ul 10%的抗壞血酸溶液和40ul水；c區(qū)域添加16ul鑰酸銨-酒石酸鉀銻溶液(包含21mM鑰酸銨，2mM酒石酸鉀銻，5M硫酸)和144ul水；d區(qū)域添加130ul水；e區(qū)域添加130ul水。其他同實(shí)施例1。
[0052]實(shí)例10:本實(shí)用新型用于可視化環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因終止子T-Nos基因。
[0053]在實(shí)施例1反應(yīng)器的a區(qū)域，添加9ul反應(yīng)擴(kuò)增液(包含有引物、dNTP、Tris_HCl緩沖液、Mg2+、NH4+、模板，來(lái)自廣州迪澳NOS基因核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?，貨號(hào)PA 1IS )，和Iul 0.lU/ul的耐熱無(wú)機(jī)焦磷酸酶(來(lái)自New England B1labs,貨號(hào)M0296s) ;b區(qū)域添加5.875ul 80mM鑰酸銨水溶液、2.5ul濃硫酸、2ul 5mM孔雀石綠溶液以及29.625ul水；c區(qū)域添加50ul水。其他同實(shí)施例1。
[0054]實(shí)例11:本實(shí)用新型用于可視化環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因終止子T-Nos基因。
[0055]在實(shí)施例1反應(yīng)器的a區(qū)域，添加19ul反應(yīng)擴(kuò)增液(包含有引物、dNTP、Tris-HCl緩沖液、Mg2+、NH4\模板，來(lái)自廣州迪澳NOS基因核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?，貨號(hào)PA101S)，和 Iul 0.lU/ul 的耐熱無(wú)機(jī)焦磷酸酶(來(lái)自 New England B1labs，貨號(hào) M0296s);b區(qū)域添加11.75ul 80mM鑰酸銨水溶液、5ul濃硫酸、4ul 5mM孔雀石綠溶液以及19.25ul水；c區(qū)域添加140ul水。其他同實(shí)施例1。
[0056]實(shí)例12:本實(shí)用新型用于可視化環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因終止子T-Nos基因。
[0057]在實(shí)施例2反應(yīng)器的a區(qū)域，添加29ul反應(yīng)擴(kuò)增液(包含有引物、dNTP、Tris-HCl緩沖液、Mg2+、NH4\模板，來(lái)自廣州迪澳NOS基因核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?，貨號(hào)PA101S)，和 Iul 0.lU/ul 的耐熱無(wú)機(jī)焦磷酸酶(來(lái)自 New England B1labs，貨號(hào) M0296s);b區(qū)域添加35.25ul 80mM鑰酸銨水溶液、7.5ul濃硫酸、6ul 5mM孔雀石綠溶液以及1.25ul水；c區(qū)域添加IlOul水；d區(qū)域添加IlOul水。其他同實(shí)施例1。
【權(quán)利要求】
1.一種用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的反應(yīng)裝置，包括反應(yīng)容器，其特征在于所述反應(yīng)容器具備多個(gè)相互獨(dú)立但是連通的儲(chǔ)液區(qū)域，其中一個(gè)區(qū)域用于進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)，盛放核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑，其它區(qū)域的全部或部分用于盛放用于核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物可視化檢測(cè)的試劑，所述反應(yīng)裝置具有所述反應(yīng)容器的蓋，以保持密封性。
2.如權(quán)利要求1所述的反應(yīng)裝置，其特征在于所述反應(yīng)容器為多個(gè)試管并列連為一體的試管組，試管組中試管的上部連通；試管在連通部位以下的區(qū)域?yàn)樗鰞?chǔ)液區(qū)域。
3.如權(quán)利要求1所述的反應(yīng)裝置，其特征在于所述用于進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的儲(chǔ)液區(qū)域的容積小于等于80ul大于等于1ul。
4.如權(quán)利要求1所述的反應(yīng)裝置，其特征在于所述用于可視化核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的試劑的儲(chǔ)液區(qū)域的總體適配9(T450ul的儲(chǔ)液量。
【文檔編號(hào)】C12M1/34GK204162712SQ201420491668
【公開(kāi)日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2014年8月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月28日
【發(fā)明者】吳堅(jiān), 張芳 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)