一種FTO基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】一種FTO基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，包括盒體和覆蓋在盒體上的盒蓋，所述盒體具有容置腔，還包括固定座和海綿墊，所述固定座容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個(gè)容置孔和1個(gè)容置槽，6個(gè)所述容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有FTO-R引物試劑管、FTO-C引物試劑管、FTO-F1引物試劑管、FTO-F2引物試劑管、FTO-Taqman管和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管；所述容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶；6個(gè)所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè)有所述的海綿墊；所述盒蓋與盒體之間設(shè)有密封條，所述密封條緊固設(shè)置在盒蓋與盒體開口端相接觸的端面并與盒體的容置腔的上端面相匹配。本ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理，且具有優(yōu)良的密封性。
【專利說明】-種FTO基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[OOOU 本實(shí)用新型設(shè)及一種檢測(cè)試劑盒，尤其設(shè)及一種用于FTO基因分型的ARMS-qPCR 檢測(cè)試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 肥胖癥是一種慢性病，據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，是人類目前面臨最容易被忽視，但發(fā) 病率卻在急劇上升的一種疾病。肥胖癥能導(dǎo)致多種生理和屯、理疾病，比如糖尿病、癌癥、屯、 血管疾病W及社交障礙等。造成肥胖癥的原因很多，比如過量的能量攝入和靜止型的生活 方式等。越來越多的研究表明，遺傳因素在肥胖癥發(fā)病過程中扮演著重要的角色（化ayling et al. 2007, Gerken et al. 2007, Dina et al. 2007, Qiu et al. 2008)。
[000引 FTO基因位于人第16號(hào)染色體，編碼3'mT的去甲基化酶（Jia et al. 2011)。有 研究表明，F(xiàn)TO的不同基因型與肥胖癥的發(fā)病率緊密相關(guān)（化ayling et al. 2007，）。FTO rs9939609AT和AA基因型的人比rs9939609TT基因型的人具有顯著地肥胖癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn) (Speakman et al.2008)。更有趣的是，F(xiàn)T0基因不同基因型與肥胖癥之間顯著地相關(guān)性具 有性別差異，男性rs9939609AT和AA基因型肥胖癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著地高于rs9939609TT基因 型的人，而在女性中卻沒有差異。因此rs9939609不同的基因型是一個(gè)極好的男性肥胖癥 風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)指標(biāo)，對(duì)于肥胖癥的預(yù)防W及其后的治療具有重要的指導(dǎo)意義。
[0004] 可用于FT0 rs9939609分型的技術(shù)很多，包括如DNA直接測(cè)序法、雜交巧片法、焦 磯酸測(cè)序法W及變性高效液相色譜法等。其中，DNA測(cè)序法為基因分型的金標(biāo)準(zhǔn)，該方法存 在如下缺點(diǎn)；檢測(cè)的靈敏度不高，只有大于15%的突變才能檢測(cè)到；費(fèi)時(shí)，操作復(fù)雜，對(duì)操 作人員要求高；非閉管操作，設(shè)及PCR擴(kuò)增后的操作，因此易被污染，造成結(jié)果的不理想；通 量太小，一次最多只能做24個(gè)，很難大規(guī)模開展。 實(shí)用新型內(nèi)容
[0005] 本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問題是提供一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、密封性好的FT0基因分型 的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒。
[0006] 本實(shí)用新型解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為；一種FT0基因分型的 ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，包括盒體和覆蓋在盒體上的盒蓋，所述盒體具有容置腔，還包括固 定座和海綿墊，所述固定座容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個(gè)容置孔和1個(gè)容置槽，6 個(gè)所述容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有FT0-R引物試劑管、FT0-C引物試劑管、FT0-F1引物試 劑管、FT0-F2引物試劑管、FTCKTaqman管和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管；所述容置槽的槽腔內(nèi)容置有 PCR緩沖液試劑瓶；6個(gè)所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè)有所 述的海綿墊；所述盒蓋與盒體之間設(shè)有密封條，所述密封條緊固設(shè)置在盒蓋與盒體開口端 相接觸的端面并與盒體的容置腔的上端面相匹配。
[0007] 其中，F(xiàn)T0基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，還包括備用容置槽，所述備用容置 槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶，所述備用容置槽的槽腔底部鋪設(shè)有海綿墊，所 述備用容置槽與容置槽并列排布在固定座上。
[000引其中，6個(gè)所述容置孔在固定座上分兩排平行排列。
[0009] 其中，6個(gè)所述容置孔分別為能容納1. 5m化P管的孔洞，相應(yīng)的，所述FTO-R引物試 劑管、FTO-C引物試劑管、FTO-F1引物試劑管、FTO-巧引物試劑管、FTO-Taqman管和陽(yáng)性對(duì) 照質(zhì)粒管分別采用1. 5m化P管。
[0010] 其中，所述盒蓋的一側(cè)與盒體的開口處轉(zhuǎn)動(dòng)連接，另一側(cè)通過卡鎖機(jī)構(gòu)與盒體連 接，所述卡鎖機(jī)構(gòu)包括卡合部和卡槽，所述卡合部設(shè)置于盒體的側(cè)壁，所述盒蓋對(duì)應(yīng)于上述 卡合部設(shè)置有所述的卡槽，所述卡合部能卡合于該卡槽內(nèi)。
[0011] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)在于；本ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒適用于FT0 基因分型，其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理、使用方便、容易制造，且檢測(cè)過程不易受污染；另外，本 ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒在FT0 rs9939609基因分型時(shí)具有敏感性高、特異性強(qiáng)、耗時(shí)短等優(yōu) 點(diǎn)；此外，容置孔的孔槽與容置槽的槽腔底部都鋪設(shè)有海綿墊，可W避免試劑管與試劑瓶的 底部磕碰破損；盒蓋與盒體之間設(shè)置了密封條，其可W保證在盒蓋與盒體閉合時(shí)，保持密封 狀態(tài)，方面移動(dòng)和運(yùn)輸。本ARMS-qPCR檢測(cè)盒即保證了試劑盒密封性、安全性，又方便運(yùn)輸。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 圖1為本實(shí)用新型實(shí)施例ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0013] W下結(jié)合附圖實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0014] 本實(shí)施例的FT0基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，如圖1所示，包括盒體1和 位于盒體1上方的盒蓋2,盒體1為上端開口的中空的立方體盒體1，其具有容置腔。盒蓋 2的一側(cè)邊與盒體1的開口端的一側(cè)壁的頂端轉(zhuǎn)動(dòng)連接，例如較接或者通過一層膜連接，而 盒蓋2的相對(duì)的一側(cè)通過卡鎖機(jī)構(gòu)與盒體1連接，卡鎖機(jī)構(gòu)包括卡合部13和卡槽11，卡合 部13設(shè)置于盒體1的與盒蓋2轉(zhuǎn)動(dòng)連接處相對(duì)的側(cè)壁上，而盒蓋2對(duì)應(yīng)于卡合部13設(shè)置 有卡槽11，卡合部13能卡合于該卡槽11內(nèi)。本實(shí)施例的卡鎖機(jī)構(gòu)為現(xiàn)有技術(shù)，故其結(jié)構(gòu)并 沒有在圖中標(biāo)示。
[0015] 本實(shí)施例的盒蓋2與盒體1的連接方式可W保證在盒蓋2與盒體1閉合時(shí)，保持 密封狀態(tài)。為了進(jìn)一步增強(qiáng)本實(shí)施例檢測(cè)試劑盒的密封性，盒蓋2與盒體1之間設(shè)有密封 條12,密封條12緊固設(shè)置在盒蓋2與盒體1開口端相接觸的端面并與盒體1的容置腔的上 端面相匹配，即密封條12固定（例如粘貼）在盒蓋2的下端面，當(dāng)盒蓋2與盒體1閉合時(shí)， 密封條12恰好位于盒體1容置腔的上端面上，密封條12的形狀為與容置腔相匹配的四邊 形。
[0016] 本實(shí)施例的FT0基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒還包括固定座14和海綿墊，固 定座14容置在盒體1容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個(gè)容置孔、1個(gè)容置槽和1個(gè)備用容置槽，6 個(gè)容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有FT0-R引物試劑管4、FT0-C引物試劑管3、FT0-F1引物試劑 管5、FT0-F2引物試劑管6、FTCKTaqman管8和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管7 ;容置槽的槽腔內(nèi)容置有 PCR緩沖液試劑瓶10,備用容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶9。
[0017] 為了防止在運(yùn)輸過程中，試劑管、試劑瓶與盒體1或固定座14碰撞而破損，6個(gè) 容置孔的孔腔的底部、容置槽的槽腔的底部w及備用容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè)有海綿 墊。在本實(shí)施例中，容置孔、容置槽和備用容置槽都是具有底部的空腔式結(jié)構(gòu)，每個(gè)孔腔、槽 腔底部分別鋪設(shè)有海綿墊，該樣可W防止發(fā)生碰撞，對(duì)試劑管、試劑瓶能起到更好的保護(hù)和 緩沖作用，W保證各個(gè)容器的安全。
[0018] 當(dāng)然，容置孔、容置槽和備用容置槽可W設(shè)計(jì)成沒底的穿孔式結(jié)構(gòu)，此時(shí)海綿墊可 W為一整塊，其具體鋪設(shè)在盒體1內(nèi)固定座14下方的容置腔內(nèi)。
[0019] 為了使得本實(shí)施例的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒結(jié)構(gòu)更加整齊，6個(gè)容置孔在固定座 14上分兩排平行排列，而備用容置槽與容置槽并列排布在固定座14上并位于容置孔的右 偵U，其中容置槽位于上方。位于上排的3個(gè)容置孔內(nèi)從左至右分別放置FTO-C引物試劑管 3、FTO-F2引物試劑管6和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管7,位于下排的3個(gè)容置孔內(nèi)從左至右分別放置 FTO-R引物試劑管4、FTO-F1引物試劑管5和FTCKTaqman管8。該種排布格局是根據(jù)使用 本檢測(cè)試劑盒來進(jìn)行FTO基因分型時(shí)的操作步驟來設(shè)計(jì)的，可W使得檢測(cè)時(shí)，操作人員能 有條理、有規(guī)律地選擇相應(yīng)的試劑。
[0020] 6個(gè)容置孔分別為能容納1. 5m化P管（即離屯、管）的孔洞，相應(yīng)的，F(xiàn)TO-R引物試 劑管4、FTO-C引物試劑管3、FTO-F1引物試劑管5、FTO-巧引物試劑管6、FTCKTaqman管8 和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管7分別采用1. Sm化P管。
[0021] 6個(gè)容置孔中放置的EP管中分別裝有濃度為10 ymol/L的如下引物；
[0022] FT0-R ;5, -ATCTTATGTCCAAACAGTAG-3'
[0023] FT0-C ;5, -AGTTATGCATTTAGAATGTC-3'
[0024] FT0-F1 ;5' -TTGCGACTGCTGTGAATGCT-3'
[00巧]FT0-F2 ;5' -TTGCGACTGCTGTGAATGCA-3'
[0026] 另外，PCR緩沖液試劑瓶10、PCR緩沖液備用試劑瓶9中盛裝的PCR反應(yīng)緩沖 酶液混合物包括濃度為 0. 4mmol/L 的 dNTPs，5mmol/L 的 Mg"2xPCR Buffer, 1U/25 y L Goldstar Best "Tag。FTCKTaqiiian 管 8 中裝有通用"Tagman 探針，序列為；FTO-Taqman 5' -FAM-TAGGTAACAGTCAGAAATGG-3'，陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管7中裝有陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒。
[0027] 使用本實(shí)施例的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)行FT0基因分型的操作方法如下；
[00測(cè) 1)取模板DNA
[0029] 取病人全血1血，常規(guī)提取DNA，取1 y LDNA作為模板。
[0030] 。反應(yīng)體系
[0031] 將各反應(yīng)物質(zhì)按照如下反應(yīng)體系進(jìn)行配比；
[003引反應(yīng)體系為20 y 1，包括qPCR混合液10 y 1，參照引物或者ARMS引物各0. 5 y 1 (終 濃度0. 5 y M/L)，模板1 y 1 (10化g)，其余用(1化0補(bǔ)齊。
[0033]

【權(quán)利要求】
1. 一種FTO基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，包括盒體（1)和覆蓋在盒體（1)上的 盒蓋（2)，所述盒體（1)具有容置腔，其特征在于：還包括固定座（14)和海綿墊，所述固定 座（14)容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個(gè)容置孔和1個(gè)容置槽，6個(gè)所述容置孔的孔 腔內(nèi)分別容置有FT0-R引物試劑管（4)、FT0-C引物試劑管（3)、FT0-F1引物試劑管（5)、 FT0-F2引物試劑管（6)、FT0_Taqman管（8)和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管（7);所述容置槽的槽腔內(nèi) 容置有PCR緩沖液試劑瓶（10) ;6個(gè)所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分 別鋪設(shè)有所述的海綿墊；所述盒蓋（2)與盒體（1)之間設(shè)有密封條（12)，所述密封條（12) 緊固設(shè)置在盒蓋（2)與盒體（1)開口端相接觸的端面并與盒體（1)的容置腔的上端面相匹 配。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的FT0基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：還包 括備用容置槽，所述備用容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶（9)，所述備用容置 槽的槽腔底部鋪設(shè)有海綿墊，所述備用容置槽與容置槽并列排布在固定座（14)上。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的FT0基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：6個(gè)所 述容置孔在固定座（14)上分兩排平行排列。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的FT0基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：6個(gè)所 述容置孔分別為能容納1. 5mlEP管的孔洞，相應(yīng)的，所述FT0-R引物試劑管（4)、FT〇-C引物 試劑管（3)、FT0-F1引物試劑管（5)、FT0-F2引物試劑管（6)、FT0-Taqman管（8)和陽(yáng)性對(duì) 照質(zhì)粒管（7)分別采用1. 5mlEP管。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的FT0基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述 盒蓋（2)的一側(cè)與盒體（1)的開口處轉(zhuǎn)動(dòng)連接，另一側(cè)通過卡鎖機(jī)構(gòu)與盒體（1)連接，所述 卡鎖機(jī)構(gòu)包括卡合部（13)和卡槽（11)，所述卡合部（13)設(shè)置于盒體（1)的側(cè)壁，所述盒 蓋（2)對(duì)應(yīng)于上述卡合部（13)設(shè)置有所述的卡槽（11)，所述卡合部（13)能卡合于該卡槽 (11)內(nèi)。
【文檔編號(hào)】C12M1/00GK204185474SQ201420642728
【公開日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】張道允, 張恒, 鞏子英, 羅堅(jiān)誠(chéng), 賈寧 申請(qǐng)人:江蘇所羅門兄弟醫(yī)學(xué)科技有限公司