一種MMP2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】一種MMP2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，包括盒體和覆蓋在盒體上的盒蓋，所述盒體具有容置腔，還包括固定座和海綿墊，所述固定座容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個容置孔和1個容置槽，6個所述容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有MMP2-R引物試劑管、MMP2-C引物試劑管、MMP2-F1引物試劑管、MMP2-F2引物試劑管、MMP2-Taqman管和陽性對照質(zhì)粒管；所述容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶；6個所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè)有所述的海綿墊；所述盒蓋的下端面分別對應(yīng)6個容置孔處設(shè)有6個能固定試劑管位置的第一限位槽，所述盒蓋的下端面對應(yīng)容置槽處設(shè)有能固定PCR緩沖液試劑瓶位置的第二限位槽。本ARMS-qPCR檢測試劑盒結(jié)構(gòu)簡單、合理，而且具有良好的密封性和安全性。
【專利說明】-種圓P2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實用新型涉及一種檢測試劑盒，尤其涉及一種用于MMP2基因分型的ARMS-qPCR 檢測試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 服胖癥是一種慢性病，據(jù)世界衛(wèi)生組織估計，是人類目前面臨最容易被忽視，但發(fā) 病率卻在急劇上升的一種疾病。服胖癥能導(dǎo)致多種生理和也理疾病，比如糖尿病、癌癥、也 血管疾病W及社交障礙等。造成服胖癥的原因很多，比如過量的能量攝入和靜止型的生活 方式等。越來越多的研究表明，遺傳因素在服胖癥發(fā)病過程中扮演著重要的角色（化ayling et al. 2007, Gerken et al. 2007, Dina et al. 2007, Qiu et al. 2008)。
[0003] MMP2基因位于第16號染色體，編碼一個基質(zhì)金屬蛋白酶，主要功能為剪切細胞外 基質(zhì)。最近，有研究發(fā)現(xiàn)MMP化S1132896基因型與女性服胖癥緊密關(guān)聯(lián)炬ouwan和Boer 2013)。rsll32896CC型相對于rsll32896CT型及TT型具有很高的服胖癥發(fā)生概率。因此 rsl 132896不同的基因型是一個極好的女性服胖癥風險預(yù)測指標，對于服胖癥的預(yù)防W及 其后期的治療具有重要的指導(dǎo)意義。
[0004] 可用于MMP化si 132896分型的技術(shù)很多，包括如DNA直接測序法、雜交芯片法、焦 磯酸測序法W及變性高效液相色譜法等。其中，DNA測序法為基因分型的金標準，該方法存 在如下缺點；檢測的靈敏度不高，只有大于15%的突變才能檢測到；費時，操作復(fù)雜，對操 作人員要求高；非閉管操作，涉及PCR擴增后的操作，因此易被污染，造成結(jié)果的不理想；通 量太小，一次最多只能做24個，很難大規(guī)模開展。 實用新型內(nèi)容
[0005] 本實用新型所要解決的技術(shù)問題是提供一種結(jié)構(gòu)簡單且能運輸牢固、安全的MMP2 基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒。
[0006] 本實用新型解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為；一種MMP2基因分型的 ARMS-qPCR檢測試劑盒，包括盒體和覆蓋在盒體上的盒蓋，所述盒體具有容置腔，還包括固 定座和海綿墊，所述固定座容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個容置孔和1個容置槽，6 個所述容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有MMP2-R引物試劑管、MMP2-C引物試劑管、MMP2-F1引物 試劑管、MMP2-巧引物試劑管、匪?2-化9111311管和陽性對照質(zhì)粒管；所述容置槽的槽腔內(nèi)容 置有PCR緩沖液試劑瓶；6個所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè) 有所述的海綿墊；所述盒蓋的下端面分別對應(yīng)6個容置孔處設(shè)有6個能固定試劑管位置的 第一限位槽，所述盒蓋的下端面對應(yīng)容置槽處設(shè)有能固定PCR緩沖液試劑瓶位置的第二限 位槽。
[0007] MMP2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒還包括備用容置槽，所述備用容置槽的 槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶，所述備用容置槽的槽腔底部鋪設(shè)有海綿墊，所述備 用容置槽與容置槽并列排布在固定座上，所述盒蓋的下端面對應(yīng)備用容置槽處設(shè)有能固定 PCR緩沖液備用試劑瓶位置的第H限位槽。
[0008] 其中，6個所述容置孔在固定座上分兩排平行排列，對應(yīng)的，6個所述第一限位槽 在盒蓋上分兩排平行排列。
[0009] 其中，6個所述容置孔分別為能容納1. 5m化P管的孔洞，相應(yīng)的，所述MMP2-R引物 試劑管、MMP2-C引物試劑管、MMP2-F1引物試劑管、MMP2-巧引物試劑管、匪?2-化9111311管和 陽性對照質(zhì)粒管分別采用1. 5m化P管。
[0010] 其中，所述盒蓋的一側(cè)與盒體的開口處轉(zhuǎn)動連接，另一側(cè)通過卡鎖機構(gòu)與盒體連 接，所述卡鎖機構(gòu)包括卡合部和卡槽，所述卡合部設(shè)置于盒體的側(cè)壁，所述盒蓋對應(yīng)于上述 卡合部設(shè)置有所述的卡槽，所述卡合部能卡合于該卡槽內(nèi)。
[0011] 作為改進，所述盒蓋與盒體之間設(shè)有密封條，所述密封條緊固設(shè)置在盒蓋與盒體 開口端相接觸的端面并與盒體的容置腔的上端面相匹配。
[001引與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實用新型的優(yōu)點在于；本ARMS-qPCR檢測試劑盒在盒蓋的下 端面開設(shè)了能分別限定試劑管、試劑瓶的限位槽，使得在搬運本檢測試劑盒時，盒體內(nèi)的容 器會穩(wěn)固地容置在各自的空間內(nèi)，從而避免了碰撞從而破損；另外，本ARMS-qPCR檢測試劑 盒在MMP化S1132896位基因分型時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優(yōu)點；此外，容置孔 的孔槽與容置槽的槽腔底部都鋪設(shè)有海綿墊，可W避免試劑管與試劑瓶的底部磕碰破損； 而且，盒蓋與盒體之間設(shè)置了密封條，其可W保證在盒蓋與盒體閉合時，保持密封狀態(tài)，方 便移動和運輸。
[0013] 本ARMS-qPCR檢測試劑盒適用于MMP2基因分型，其結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計合理、使用方 便、容易制造，且檢測過程不易受污染其即保證了試劑盒密封性、安全性，又方便運輸，可W 在給MMP2基因分型時方便實驗人員操作，提高了工作效率。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0014] 圖1為本實用新型實施例ARMS-qPCR檢巧IJ試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。

【具體實施方式】
[0015] W下結(jié)合附圖實施例對本實用新型作進一步詳細描述。
[0016] 本實施例的MMP2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，如圖1所示，包括盒體1和 位于盒體1上方的盒蓋2,盒體1為上端開口的中空的立方體盒體1，其具有容置腔。盒蓋 2的一側(cè)邊與盒體1的開口端的一側(cè)壁的頂端轉(zhuǎn)動連接，例如較接或者通過一層膜連接，而 盒蓋2的相對的一側(cè)通過卡鎖機構(gòu)與盒體1連接，卡鎖機構(gòu)包括卡合部13和卡槽11，卡合 部13設(shè)置于盒體1的與盒蓋2轉(zhuǎn)動連接處相對的側(cè)壁上，而盒蓋2對應(yīng)于卡合部13設(shè)置 有卡槽11，卡合部13能卡合于該卡槽11內(nèi)。本實施例的卡鎖機構(gòu)為現(xiàn)有技術(shù)，故其結(jié)構(gòu)并 沒有在圖中標示。
[0017] 本實施例的盒蓋2與盒體1的連接方式可W保證在盒蓋2與盒體1閉合時，保持 密封狀態(tài)。為了進一步增強本實施例檢測試劑盒的密封性，盒蓋2與盒體1之間設(shè)有密封 條14,密封條14緊固設(shè)置在盒蓋2與盒體1開口端相接觸的端面并與盒體1的容置腔的上 端面相匹配，即密封條14固定（例如粘貼）在盒蓋2的下端面，當盒蓋2與盒體1閉合時， 密封條14恰好位于盒體1容置腔的上端面上，密封條14的形狀為與容置腔相匹配的四邊 形。
[001引本實施例的MMP2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒還包括固定座12和海綿墊， 固定座12容置在盒體1容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個容置孔、1個容置槽和1個備用容置槽， 6個容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有MMP2-R引物試劑管4、MMP2-C引物試劑管3、MMP2-F1引物 試劑管5、MMP2-巧引物試劑管6、MMP2-化qman管8和陽性對照質(zhì)粒管7 ;容置槽的槽腔內(nèi) 容置有PCR緩沖液試劑瓶10,備用容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶9。
[0019] 為了使得本實施例的ARMS-qPCR檢測試劑盒結(jié)構(gòu)更加整齊，6個容置孔在固定座 12上分兩排平行排列，而備用容置槽與容置槽并列排布在固定座12上并位于容置孔的右 偵U，其中容置槽位于上方。位于上排的3個容置孔內(nèi)從左至右分別放置MMP2-C引物試劑管 3、MMP2-巧引物試劑管6和陽性對照質(zhì)粒管7,位于下排的3個容置孔內(nèi)從左至右分別放置 MMP2-R引物試劑管4、MMP2-F1引物試劑管5和匪口2-化9111311管8。該種排布格局是根據(jù)使 用本檢測試劑盒來進行MMP2基因分型時的操作步驟來設(shè)計的，可W使得檢測時，操作人員 能有條理、有規(guī)律地選擇相應(yīng)的試劑。
[0020] 6個容置孔分別為能容納1. 5m化P管（即離也管）的孔洞，相應(yīng)的，MMP2-R引物試 劑管4、MMP2-C引物試劑管3、MMP2-F1引物試劑管5、MMP2-F2引物試劑管6、匪?2-化9111311 管8和陽性對照質(zhì)粒管7分別采用1. 5m化P管。
[0021] 為了能進一步固定住6個試劑管、2個試劑瓶的位置，盒蓋2的下端面分別對應(yīng)6 個容置孔處設(shè)有6個能固定試劑管位置的第一限位槽15,盒蓋2的下端面對應(yīng)容置槽處設(shè) 有能固定PCR緩沖液試劑瓶10位置的第二限位槽17,同時，盒蓋2的下端面對應(yīng)備用容置 槽處設(shè)有能固定PCR緩沖液備用試劑瓶9位置的第H限位槽16。當然，6個第一限位槽15 也在盒蓋2上分兩排平行排列，同時，第二限位槽17和第H限位槽16并列排布在第一限位 槽15的右側(cè)。
[0022] 為了防止在運輸過程中，試劑管、試劑瓶與盒體1或固定座12碰撞而破損，6個 容置孔的孔腔的底部、容置槽的槽腔的底部W及備用容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè)有海綿 墊。在本實施例中，容置孔、容置槽和備用容置槽都是具有底部的空腔式結(jié)構(gòu)，每個孔腔、槽 腔底部分別鋪設(shè)有海綿墊，該樣可W防止發(fā)生碰撞，對試劑管、試劑瓶能起到更好的保護和 緩沖作用，W保證各個容器的安全。
[0023] 當然，容置孔、容置槽和備用容置槽可W設(shè)計成沒底的穿孔式結(jié)構(gòu)，此時海綿墊可 W為一整塊，其具體鋪設(shè)在盒體1內(nèi)固定座12下方的容置腔內(nèi)。
[0024] 6個容置孔中放置的EP管中分別裝有濃度為10 y mol/L的如下引物：
[00巧]MMP2-R ;5, -TCTTGGGGACTAGAGTGGAT-3，
[0026] MMP2-C ;5, -TCCAACCTCCCCCTTCCATG-3'
[0027] MMP2-F1 ;5' -TGGTCCGTGTGAAGTATCAC-3'
[0028] MMP2-F2 ;5, -TGGTCCGTGTGAAGTATCAG-3'
[0029] 另外，PCR緩沖液試劑瓶10、PCR緩沖液備用試劑瓶9中盛裝的PCR反應(yīng)緩沖 酶液混合物包括濃度為 0. 4mmol/L 的 dNTPs，5mmol/L 的 Mg", 2xPCR Buffer, 1U/25 y L Goldstar Best "Tag。匪?2-化911腳1管8中裝有通用"Tagman探針，序列為；匪?2-化91\13]1 : 5' -TGCACTGATACCGGCCGCAG-3'，陽性對照質(zhì)粒管7中裝有陽性對照質(zhì)粒。
[0030] 使用本實施例的ARMS-qPCR檢測試劑盒進行MMP2基因分型的操作方法如下：
[00引]1)取模板DM
[0032] 取病人全血1血，常規(guī)提取DM,取1 y LDNA作為模板。
[0033] 2)反應(yīng)體系
[0034] 將各反應(yīng)物質(zhì)按照如下反應(yīng)體系進行配比；
[003引反應(yīng)體系為20y 1，包括qPCR混合液lOy 1，參照引物或者ARMS引物各0. 5y 1(終 濃度0. 5 y M/L)，模板1 y 1 (lOOng)，其余用d地20補齊。
[0036]

【權(quán)利要求】
1. 一種MMP2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，包括盒體（1)和覆蓋在盒體（1)上 的盒蓋（2)，所述盒體（1)具有容置腔，其特征在于：還包括固定座（12)和海綿墊，所述固 定座（12)容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個容置孔和1個容置槽，6個所述容置孔的 孔腔內(nèi)分別容置有MMP2-R引物試劑管（4)、MMP2-C引物試劑管（3)、MMP2-F1引物試劑管 (5)、MMP2-F2引物試劑管（6)、MMP2-Taqman管（8)和陽性對照質(zhì)粒管（7);所述容置槽的 槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶（10) ;6個所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的 底部分別鋪設(shè)有所述的海綿墊；所述盒蓋（2)的下端面分別對應(yīng)6個容置孔處設(shè)有6個能 固定試劑管位置的第一限位槽（15)，所述盒蓋（2)的下端面對應(yīng)容置槽處設(shè)有能固定PCR 緩沖液試劑瓶（10)位置的第二限位槽（17)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特征在于：還包 括備用容置槽，所述備用容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶（9)，所述備用容置 槽的槽腔底部鋪設(shè)有海綿墊，所述備用容置槽與容置槽并列排布在固定座（12)上，所述盒 蓋（2)的下端面對應(yīng)備用容置槽處設(shè)有能固定PCR緩沖液備用試劑瓶（9)位置的第三限位 槽（16)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特征在于：6個所 述容置孔在固定座（12)上分兩排平行排列，對應(yīng)的，6個所述第一限位槽（15)在盒蓋（2) 上分兩排平行排列。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特征在于：6個 所述容置孔分別為能容納1. 5mlEP管的孔洞，相應(yīng)的，所述MMP2-R引物試劑管（4)、MMP2-C 引物試劑管（3)、MMP2-F1引物試劑管（5)、MMP2-F2引物試劑管（6)、MMP2-Taqman管（8)和 陽性對照質(zhì)粒管（7)分別采用1. 5mlEP管。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特征在于：所述 盒蓋（2)的一側(cè)與盒體（1)的開口處轉(zhuǎn)動連接，另一側(cè)通過卡鎖機構(gòu)與盒體（1)連接，所述 卡鎖機構(gòu)包括卡合部（13)和卡槽（11)，所述卡合部（13)設(shè)置于盒體（1)的側(cè)壁，所述盒 蓋（2)對應(yīng)于上述卡合部（13)設(shè)置有所述的卡槽（11)，所述卡合部（13)能卡合于該卡槽 (11)內(nèi)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP2基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特征在于：所述 盒蓋（2)與盒體（1)之間設(shè)有密封條（14)，所述密封條（14)緊固設(shè)置在盒蓋（2)與盒體 (1)開口端相接觸的端面并與盒體（1)的容置腔的上端面相匹配。
【文檔編號】C12Q1/68GK204185491SQ201420642730
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】張道允, 鞏子英, 張恒, 羅堅誠, 賈寧 申請人:江蘇所羅門兄弟醫(yī)學(xué)科技有限公司