一種大豆肽生物鈣的制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及保健食品領域，具體涉及一種大豆肽生物鈣的制備方法。
【背景技術】
[0002]鈣是人體必須的常量元素，缺鈣影響兒童的正常成長發(fā)育，造成佝僂病，中老年人易患骨質疏松癥、骨質軟化等癥。為增加人體鈣的吸收，對各種無機、有機鈣的補給效果進行了比較研究，發(fā)現(xiàn)氨基酸、肽等化合物有很好的促進鈣吸收能力。許多體內外實驗證實酪蛋白磷酸肽(CPP)在小腸下段通過磷酸絲氨酸的磷酸基團與鈣離子結合形成可溶性復合物提高人體的鈣吸收率。目前還有研究表明:聚谷氨酸、檸檬酸鹽、海藻酸鈉等也能與鈣離子結合形成可溶性復合物，這些化合物的酸性功能基團是其結合鈣能力的主要影響因素，而大豆多肽是由大量的酸性氨基酸組成的多肽混合物，具備了能夠結合鈣離子的結構特征。Dong—HaoJin發(fā)現(xiàn)在體外大豆蛋白水解物對碳酸I丐晶體的生長具有抑制作用，Hitomi，K.等報道大豆球蛋白水解物可以促進大鼠小腸結扎環(huán)內鈣的吸收。以上研究表明，大豆蛋白水解物即大豆多肽能與鈣結合抑制鈣的沉淀，提高動物體內鈣的生物利用率。郭順堂等以低溫脫脂豆柏或大豆分離蛋白為原料，采用蛋白酶和脫酰胺酶酶解、螯合的方式制備了一種鈣結合量較高的大豆肽鈣復合物產(chǎn)品。但是該方法中采用的鈣源為氯化鈣，不是生物天然有機鈣源，因此制備產(chǎn)品作用僅為補鈣，較單一。
[0003]牦牛骨中的骨質主要由膠原蛋白網(wǎng)狀結構和黏附在其中的鈣鹽組成，并且鈣磷比例天然接近2:1，非常接近人體鈣吸收的最佳比例，同時由于其生長環(huán)境的原生態(tài)，骨骼中鉛含量極低，是理想的天然鈣源。
[0004]目前對牦牛骨的保健應用主要為普通牦牛骨粉為主，通常采用物理粉碎的方式加工。此種加工方式得到的牦牛骨鈣源主要以羥基磷酸鈣為主，鈣元素為固態(tài)，無法充分被人體吸收利用。同時目前市面上對豬骨、普通牛骨等利用較多，但對牦牛骨及牦牛骨髓等利用較少，且酶解利用的方法更少，大部分采用單一酶解法，如李帆等(牦牛骨蛋白的酶解條件研究[J].氨基酸和生物資源，2006，28(4):7?10。)采用單酶，用木瓜蛋白酶水解牦牛骨蛋白，在酶解溫度600C、酶解時間8h、酶用量3500U/g蛋白質和料液比1: 25(g:ml)條件下牦牛骨蛋白的水解度可達8.53 %，固形物溶出率達73.67%o但是這種單一酶的作用范圍小，水解度不高。陳丹等用保加利亞乳酸桿菌發(fā)酵超微粉碎牦牛骨泥，得到了游離鈣含量較高，但是該方法在產(chǎn)品制備存在僅針對鈣元素進行處理，未考慮牦牛骨中如蛋白質、活性肽、氨基酸等其他對人體有益的物質的提取，制得的產(chǎn)品功能較單一。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服上述問題，提供一種制備保健效果好、營養(yǎng)全面、能提高人體免疫力的大豆肽生物鈣方法。
[0006]本發(fā)明解決上述問題的技術方案如下:
[0007]—種大豆肽生物鈣的制備方法，包括以下步驟:
[0008](I)將底物即牦牛骨粉與牦牛骨髓粉分別過200目篩，稱重，牦牛骨粉與牦牛骨髓粉的重量比為(5?20): I，加入純化水，純化水的加入量為底物總重的5?10倍，然后在水浴條件下攪拌，轉速為3000r/min，溫度為30-50 °C ；
[0009](2)調節(jié)溶液pH為6?8，按照每克底物加入1000?3000活力單位的比例添加中性蛋白酶，然后在水浴條件下酶解40?60min，水浴溫度30?50 °C ；
[0010](3)再次調節(jié)溶液pH為4?7，按照每克底物加入1000?3000活力單位的比例添加木瓜蛋白酶，在水浴條件下酶解40?60min，水浴溫度50?70 °C ；
[0011](4)在步驟(3)的溶液中添加大豆肽，其添加量為底物總重的1/2?1/5倍，然后在30?50°C條件下保溫2?4h，其中，大豆肽中肽的含量為65%?80%;
[0012](5)取步驟(4)所得溶液過濾，將濾液真空冷凍干燥后即可制得大豆肽生物鈣。
[0013]優(yōu)選地，步驟(I)中所述牦牛骨粉與牦牛骨髓粉的重量比為12:1。
[0014]優(yōu)選地，步驟(2)中按照每克底物加入1600活力單位的比例添加中性蛋白酶。
[0015]優(yōu)選地，步驟(3)中按照每克底物加入1600活力單位的比例添加木瓜蛋白酶。
[0016]優(yōu)選地，步驟(4)中所述大豆肽的添加量為底物總重的1/3倍。
[0017]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是:
[0018]本發(fā)明以牦牛骨粉和骨髓粉的復合物作為天然鈣源，與大豆肽在酶的作用下，制成大豆肽生物鈣產(chǎn)品。本發(fā)明的大豆肽生物鈣，其有效鈣的含量高，該制備方法有效地將牦牛骨中不溶的羥基磷酸鈣轉化為可溶性的大豆肽生物鈣。按照每10g牦牛骨粉中含22g鈣含量計算，牦牛骨粉中的鈣元素提取率可達到27%。本發(fā)明的大豆肽生物鈣還保存了牦牛骨及骨髓中的蛋白質、活性肽、氨基酸等其他對人體有益的物質，牦牛骨髓粉的加入明顯提高可溶性鈣元素的酶解析出，同時其中的蛋白質、大分子肽等有益物質同時被酶解為小分子的多肽類物質，完整保存下來，具有提高人體免疫力的作用。
【具體實施方式】
[0019]下面對本發(fā)明的實施例作詳細說明，本實施例在以本發(fā)明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護范圍不限于下述的實施例。
[0020]實施例1
[0021 ] 一種大豆肽生物鈣的制備方法，包括以下步驟:
[0022](I)將底物即牦牛骨粉與牦牛骨髓粉分別過200目篩，稱重牦牛骨粉120g、牦牛骨髓粉10g，加入純化水1300mL，然后在水浴條件下攪拌，轉速為3000r/min，溫度為40°C;
[0023](2)調節(jié)溶液pH為7，按照每克底物加入1600活力單位的比例添加中性蛋白酶，然后在水浴條件下酶解45min，水浴溫度40 °C ；
[0024](3)再次調節(jié)溶液pH為6，按照每克底物加入1600活力單位的比例添加木瓜蛋白酶，在水浴條件下酶解50min，水浴溫度60 °C ；
[0025](4)在步驟(3)的溶液中添加43.3g大豆肽，然后在40°C條件下保溫2.5h，其中，大豆肽中肽的含量為75% ；
[0026](5)取步驟(4)所得溶液過濾，將濾液真空冷凍干燥后即可制得大豆肽生物鈣50.45g，牦牛骨中鈣的轉化率為27.1 %。
[0027]為了研究牦牛骨髓粉的作用，做對比試驗，將上述步驟(I)中的內容改為:將底物即牦牛骨粉過200目篩，稱重130g，加入純化水1300mL，然后在水浴條件下攪拌，轉速為3000r/min，溫度為40°C;以下步驟同上述一致，結果得大豆肽生物鈣45.15g，牦牛骨中鈣的轉化率為6.47%?？梢?，牦牛骨粉中需加入一定比例的骨髓粉配比，可明顯提高可溶性鈣的轉化率。
[0028]實施例2
[0029]—種大豆肽生物鈣的制備方法，包括以下步驟:
[0030](I)將底物即牦牛骨粉與牦牛骨髓粉分別過200目篩，稱重牦牛骨粉120g、牦牛骨髓粉10g，加入純化水1300mL，然后在水浴條件下攪拌，轉速為3000r/min，溫度為40°C;
[0031 ] (2)調節(jié)溶液pH為7，按照每克底物加入1600活力單位的比例添加中性蛋白酶，然后在水浴條件下酶解45min，水浴溫度40 °C ；
[0032](3)再次調節(jié)溶液pH為6，按照每克底物加入1600活力單位的比例添加木瓜蛋白酶，在水浴條件下酶解50min，水浴溫度60 °C ；
[0033](4)在步驟(3)的溶液中添加65g大豆肽，然后在40°C條件下保溫2.5h，其中，大豆肽中肽的含量為75% ；
[0034](5)取步驟(4)所得溶液過濾，將濾液真空冷凍干燥后即可制得大豆肽生物鈣72.26g，牦牛骨中鈣的轉化率為27.5%。
[0035]對比實施例1中的內容可知，將大豆肽的添加量由1/3改為1/2后，牦牛骨中鈣的轉化率并沒有明顯地提高。
[0036]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種大豆肽生物鈣的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將底物即牦牛骨粉與牦牛骨髓粉分別過200目篩，稱重，牦牛骨粉與牦牛骨髓粉的重量比為(5?20):1，加入純化水，純化水的加入量為底物總重的5?10倍，然后在水浴條件下攪拌，轉速為3000r/min，溫度為30-50°C ； (2)調節(jié)溶液pH為6?8，按照每克底物加入1000?3000活力單位的比例添加中性蛋白酶，然后在水浴條件下酶解40?60min，水浴溫度30?50 °C ； (3)再次調節(jié)溶液pH為4?7，按照每克底物加入1000?3000活力單位的比例添加木瓜蛋白酶，在水浴條件下酶解40?60min，水浴溫度50?70 °C ； (4)在步驟(3)的溶液中添加大豆肽，其添加量為底物總重的1/2?1/5倍，然后在30?50°C條件下保溫2?4h，其中，大豆肽中肽的含量為65%?80%; (5)取步驟(4)所得溶液過濾，將濾液真空冷凍干燥后即可制得大豆肽生物鈣。2.根據(jù)權利要求1所述的一種大豆肽生物鈣的制備方法，其特征在于，步驟(I)中所述牦牛骨粉與牦牛骨髓粉的重量比為12:1。3.根據(jù)權利要求1所述的一種大豆肽生物鈣的制備方法，其特征在于，步驟(2)中按照每克底物加入1600活力單位的比例添加中性蛋白酶。4.根據(jù)權利要求1所述的一種大豆肽生物鈣的制備方法，其特征在于，步驟(3)中按照每克底物加入1600活力單位的比例添加木瓜蛋白酶。5.根據(jù)權利要求1所述的一種大豆肽生物鈣的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述大豆肽的添加量為底物總重的1/3倍。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種大豆肽生物鈣的制備方法，以底物牦牛骨粉與牦牛骨髓粉作為天然鈣源，通過調節(jié)pH和控制水浴溫度，與大豆肽在酶的作用下，制成了一種大豆肽生物鈣產(chǎn)品。本發(fā)明的大豆肽生物鈣，有效鈣的含量高，該制備方法有效地將牦牛骨中不溶的羥基磷酸鈣轉化為可溶性的大豆肽生物鈣。按照每100g牦牛骨粉中含22g鈣含量計算，牦牛骨粉中的鈣元素提取率可達到27％。本發(fā)明的大豆肽生物鈣還保存了牦牛骨及骨髓中的蛋白質、活性肽、氨基酸等其他對人體有益的物質，牦牛骨髓粉的加入明顯提高可溶性鈣元素的轉化率，同時其中的蛋白質、大分子肽等有益物質同時被酶解為小分子的多肽類物質，完整保存下來，具有提高人體免疫力的作用。
【IPC分類】A23L33/10, A23L13/20, A23L33/18
【公開號】CN105707879
【申請?zhí)枴緾N201610070189
【發(fā)明人】張銘
【申請人】安徽中森生物技術有限公司