本發(fā)明涉及發(fā)酵飲料技術(shù)領(lǐng)域，具體的說是一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料及其制備方法。
背景技術(shù)：
益生菌是定植于動(dòng)物的腸道系統(tǒng)內(nèi)，能夠?qū)闹鳟a(chǎn)生確切的作用，能夠促進(jìn)益于寄主健康的菌群的生長繁殖、抑制致病菌、平衡腸道菌群、促進(jìn)人類健康，在食品中益生菌主要用于發(fā)酵乳制品的生產(chǎn)，但它也正逐步被用于開發(fā)各種功能食品，如果汁、糖果、冰棋淋、冷凍酸奶等。到目前為止，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)的益生菌大體上可以分為三大類：包括乳桿菌類、雙歧桿菌類及革蘭氏陽性球菌。
凝結(jié)芽孢桿菌，屬于芽孢桿菌屬，兩端鈍圓，革蘭氏陽性菌。該菌株能夠產(chǎn)生l-乳酸，屬于同型乳酸發(fā)酵；能產(chǎn)生大量的代謝產(chǎn)物，如l-乳酸、凝固素，從而有效地調(diào)整腸道菌群的結(jié)構(gòu)，增加腸道細(xì)菌的數(shù)量。因此，近年來在益生菌研究領(lǐng)域?qū)儆跓狳c(diǎn)研究內(nèi)容。凝結(jié)芽孢桿菌除具有和乳酸菌及雙歧桿菌同樣的保健功效外，還具有耐酸、耐熱、耐鹽、容易培養(yǎng)和保存的特點(diǎn)。2013年，凝結(jié)芽孢桿菌正式錄入《中國飼料添加劑品種名錄》，2016年，國家衛(wèi)生計(jì)生委將凝結(jié)芽孢桿菌正式列入《可用于食品的菌種名單》。
南瓜，營養(yǎng)豐富且全面，含有果膠、戊聚糖、甘露醇、腺嘌呤、膳食纖維、纖維素、蛋白質(zhì)、多種氨基酸、脂肪等成分。在三大產(chǎn)熱營養(yǎng)素中，南瓜以碳水化合物為主，脂肪含量很低，為很好的低脂肪食品。同時(shí)，南瓜中還含有能夠促進(jìn)胰臟分泌胰島素的環(huán)丙基氨基酸，能夠增加葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體含量，防治糖尿病。南瓜中的微量礦物質(zhì)對(duì)糖尿病和血脂代謝有一定的調(diào)節(jié)作用?，F(xiàn)階段，南瓜的深加工產(chǎn)品主要為南瓜粉、南瓜醬、南瓜果脯等，本發(fā)明為南瓜的深加工開辟了一條新途徑。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料及其制備方法，將新列入可食用菌種名單的凝結(jié)芽孢桿菌作為發(fā)酵菌株發(fā)酵南瓜汁，在適宜比例的基礎(chǔ)上，優(yōu)化發(fā)酵工藝，所得到的常溫活菌飲料既保持了南瓜本身特有的香氣，還具有濃郁的發(fā)酵香氣，酸甜適中、風(fēng)味獨(dú)特。
本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用的技術(shù)方案為：一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料，該常溫活菌飲料由南瓜漿經(jīng)果膠酶、纖維素酶和糖化酶酶解后與凝結(jié)芽孢桿菌混合發(fā)酵并加入調(diào)味劑調(diào)和而成；其中，每100重量份的南瓜塊原料中，加入的果膠酶、纖維素酶、糖化酶和調(diào)味劑的重量份數(shù)依次為：果膠酶0.18-0.5份，纖維素酶0.5-1.8份，糖化酶0.25-1.5份，調(diào)味劑4.75-7.25份。
作為一種優(yōu)選方案，所述調(diào)味劑由以下重量份數(shù)的原料組成：蔗糖4-6份、檸檬酸0.4-0.6份、檸檬酸鈉0.3-0.5份和黃原膠0.05-0.15份。
作為一種優(yōu)選方案，所述凝結(jié)芽孢桿菌為凝結(jié)芽孢桿菌bc361。
作為一種優(yōu)選方案，所述的南瓜漿由南瓜塊原料煮熟后加水打漿而成，其中，打漿時(shí)，南瓜塊原料與水的重量比為1：1-5。
作為一種優(yōu)選方案，所述果膠酶的酶活力單位為1萬-4萬u/g，纖維素酶的酶活力單位為2萬-6萬u/g，糖化酶的酶活力單位是5萬-10萬u/g。
制備如上所述的一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料的方法，包括以下步驟：
步驟一、南瓜漿的制備
選擇無病蟲危害腐蝕的成熟南瓜，用水清洗干凈后，切去表皮、去籽瓤，然后切成0.5-2cm厚的片狀作為南瓜塊原料；將南瓜塊原料放入沸水中煮2-10min，向煮熟的南瓜塊原料中加入水倒入打漿機(jī)中打漿，再通過膠體磨細(xì)磨2-3次，得到南瓜漿；
步驟二、稱取原料
按照如上所述的重量份數(shù)分別稱取果膠酶、纖維素酶、糖化酶、凝結(jié)芽孢桿菌、調(diào)味劑以及步驟一制備的南瓜漿，備用；
步驟三、酶解
將步驟二稱取好的果膠酶，纖維素酶和糖化酶加入到步驟一制得的南瓜漿中，在35-60℃條件下酶解1-4h，得酶解后的南瓜漿，備用；
步驟四、過濾、滅菌
將步驟三酶解后的南瓜漿置于濾網(wǎng)中過濾得到南瓜發(fā)酵液，在100-115℃下，高溫滅菌10-30min，得滅菌后的南瓜汁；
步驟五、菌種活化
從試管斜面中挑取1-2環(huán)菌落置于ypd培養(yǎng)基中，在30-38℃培養(yǎng)16-20h，活化兩次，得到富集的凝結(jié)芽孢桿菌；
步驟六、接種發(fā)酵
將步驟四制得的滅菌后的南瓜汁作為發(fā)酵液接種，接入步驟五制得的富集的凝結(jié)芽孢桿菌，在30-38℃條件下培養(yǎng)12-48h，得發(fā)酵后的南瓜汁；
步驟七、調(diào)配
往步驟六制得的發(fā)酵后的南瓜汁中分別加入步驟二稱取的調(diào)味劑，經(jīng)過濾、均質(zhì)、灌裝，得一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料。
作為一種優(yōu)選方案，步驟一所述打漿時(shí)，南瓜塊原料與水的重量比為1：1-5。
作為一種優(yōu)選方案，步驟六所述凝結(jié)芽孢桿菌的接種量為步驟四制得的滅菌后的南瓜汁總重量的1-3%。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
（1）本發(fā)明提供了一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料及其制備方法，使用凝結(jié)芽孢桿菌作為發(fā)酵菌株，凝結(jié)芽孢桿菌除具有和乳酸菌及雙歧桿菌同樣的保健功效外，還具有耐酸、耐熱、耐鹽、容易培養(yǎng)和保存的特點(diǎn)；南瓜營養(yǎng)全面且豐富，主要為淀粉、果膠和纖維素，通過加入糖化酶、果膠酶和纖維素酶，可將南瓜中的大分子物質(zhì)酶解為小分子，提高還原糖含量，同時(shí)能迅速降解南瓜果肉細(xì)胞壁的胞間層和初生壁中的果膠和纖維素、半纖維素，使得細(xì)胞壁破碎，內(nèi)容物溶出；通過在酶解后的南瓜汁中接種凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行發(fā)酵，優(yōu)化發(fā)酵工藝，制成新型益生菌常溫活菌發(fā)酵南瓜汁，工藝獨(dú)特，操作簡單，該產(chǎn)品營養(yǎng)豐富，為凝結(jié)芽孢桿菌作為可食用菌株產(chǎn)品的開發(fā)提供一定的參考；
（2）本發(fā)明提供了一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料及其制備方法，既保持了南瓜本身特有的香氣，還具有濃郁的發(fā)酵香氣，酸甜適中、風(fēng)味協(xié)調(diào)，并且含有易于常溫保存的益生凝結(jié)芽孢桿菌，易于常溫保存；且利用本發(fā)明制備方法制備的凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料菌落總數(shù)達(dá)到5×108-1.51×109cfu/g，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于國家對(duì)活菌飲料的菌落總數(shù)的要求106cfu/g；
（3）本發(fā)明提供了一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料及其制備方法，使用凝結(jié)芽孢桿菌作為發(fā)酵菌株，經(jīng)過發(fā)酵后，南瓜中的β-胡蘿卜素和維生素c等一些營養(yǎng)成分流失較小，營養(yǎng)物質(zhì)得到較大程度地保留。
生物材料的保藏
本發(fā)明所述凝結(jié)芽孢桿菌bc361作為發(fā)酵菌株時(shí)，感官評(píng)價(jià)較優(yōu)，且菌落總數(shù)、可滴定酸度較高，因此，作為一種優(yōu)選方案，選用凝結(jié)芽孢桿菌bc361作為發(fā)酵菌株；該菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為：cgmccno.9951，保藏日期為2014年11月13日。
附圖說明
圖1為候選菌株16srdna基因序列的系統(tǒng)發(fā)育樹。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說明，本實(shí)施例以本發(fā)明技術(shù)方案為前提，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程。
一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料，該常溫活菌飲料由南瓜漿經(jīng)果膠酶、纖維素酶和糖化酶酶解后與凝結(jié)芽孢桿菌混合發(fā)酵并加入調(diào)味劑調(diào)和而成；其中，每100重量份的南瓜塊原料中，加入的果膠酶、纖維素酶、糖化酶和調(diào)味劑的重量份數(shù)依次為：果膠酶0.18-0.5份，纖維素酶0.5-1.8份，糖化酶0.25-1.5份，調(diào)味劑4.75-7.25份。
作為一種優(yōu)選方案，所述調(diào)味劑由以下重量份數(shù)的原料組成：蔗糖4-6份、檸檬酸0.4-0.6份、檸檬酸鈉0.3-0.5份和黃原膠0.05-0.15份。
作為一種優(yōu)選方案，所述的南瓜漿由南瓜塊原料煮熟后加水打漿而成，其中，打漿時(shí)，南瓜塊原料與水的重量比為1：1-5。
作為一種優(yōu)選方案，所述凝結(jié)芽孢桿菌為凝結(jié)芽孢桿菌bc361。
作為一種優(yōu)選方案，所述果膠酶的酶活力單位為1萬-4萬u/g，纖維素酶的酶活力單位為2萬-6萬u/g，糖化酶的酶活力單位是5萬-10萬u/g。
制備如上所述的一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料的方法，包括以下步驟：
步驟一、南瓜漿的制備
選擇無病蟲危害腐蝕的成熟南瓜，用水清洗干凈后，切去表皮、去籽瓤，然后切成0.5-2cm厚的片狀作為南瓜塊原料；將南瓜塊原料放入沸水中煮2-10min，作為優(yōu)選的，南瓜塊原料煮至熟透為止，以破壞酶的活性，防止酶促褐變，使組織充分軟化，更利于打漿，向煮熟的南瓜塊原料中加入水倒入打漿機(jī)中打漿，作為優(yōu)選的，打漿時(shí)，南瓜塊原料與水的重量比為1：1-5，再通過膠體磨細(xì)磨2-3次，得到南瓜漿；
步驟二、稱取原料
按照如上所述的重量份數(shù)分別稱取果膠酶、纖維素酶、糖化酶、凝結(jié)芽孢桿菌、調(diào)味劑以及步驟一制備的南瓜漿，備用；
步驟三、酶解
將步驟二稱取好的果膠酶，纖維素酶和糖化酶加入到步驟一制得的南瓜漿中，在35-60℃條件下酶解1-4h，使南瓜漿中的果膠質(zhì)、纖維素及淀粉充分酶解，提高還原糖含量，同時(shí)能迅速降解南瓜果肉細(xì)胞壁的胞間層和初生壁中的果膠和纖維素、半纖維素，使得細(xì)胞壁破碎，內(nèi)容物溶出，得酶解后的南瓜漿，備用；
步驟四、過濾、滅菌
將步驟三酶解后的南瓜漿置于濾網(wǎng)中過濾得到南瓜發(fā)酵液，在100-115℃下，高溫滅菌10-30min，得滅菌后的南瓜汁；
步驟五、菌種活化
從置于冰箱中冷藏，冷藏溫度為4℃的試管斜面中挑取1-2環(huán)菌落置于ypd培養(yǎng)基中，在30-38℃培養(yǎng)16-20h，活化兩次，得到富集的凝結(jié)芽孢桿菌；
步驟六、接種發(fā)酵
將步驟四制得的滅菌后的南瓜汁作為發(fā)酵液接種，接入步驟五制得的富集的凝結(jié)芽孢桿菌，在30-38℃條件下培養(yǎng)12-48h，得發(fā)酵后的南瓜汁，作為優(yōu)選的，凝結(jié)芽孢桿菌的接種量為步驟四制得的滅菌后的南瓜汁總重量的1-3%；
步驟七、調(diào)配
往步驟六制得的發(fā)酵后的南瓜汁中分別加入步驟二稱取的調(diào)味劑，經(jīng)過濾、均質(zhì)、灌裝，得一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料。
實(shí)施例一
一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料，該常溫活菌飲料由南瓜漿經(jīng)果膠酶、纖維素酶和糖化酶酶解后與凝結(jié)芽孢桿菌bc361混合發(fā)酵并加入調(diào)味劑調(diào)和而成，所述的南瓜漿由南瓜塊原料煮熟后加水打漿而成，所述調(diào)味劑由蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉和黃原膠組成；其中，每100重量份的南瓜塊原料中，加入的果膠酶、纖維素酶、糖化酶、蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉和黃原膠的重量份數(shù)依次為：果膠酶0.18份，纖維素酶0.5份，糖化酶0.25份，蔗糖4份，檸檬酸0.4份，檸檬酸鈉0.3份，黃原膠0.05份；其中，打漿時(shí)，南瓜塊原料與水的重量比為1：1，作為一種優(yōu)選方案，所述果膠酶的酶活力單位為1萬-4萬u/g，纖維素酶的酶活力單位為2萬-6萬u/g，糖化酶的酶活力單位是5萬-10萬u/g。
制備如上所述的一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料的方法，包括以下步驟：
步驟一、南瓜漿的制備
選擇無病蟲危害腐蝕的成熟南瓜，用水清洗干凈后，切去表皮、去籽瓤，然后切成0.5cm厚的片狀作為南瓜塊原料；將南瓜塊原料放入沸水中煮2min，向煮熟的南瓜塊原料中加入水倒入打漿機(jī)中打漿，再通過膠體磨細(xì)磨2次，得到南瓜漿；
步驟二、稱取原料
按照如上所述的重量份數(shù)分別稱取果膠酶、纖維素酶、糖化酶、凝結(jié)芽孢桿菌bc361、蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉、黃原膠以及步驟一制備的南瓜漿，備用；
步驟三、酶解
將步驟二稱取好的果膠酶，纖維素酶和糖化酶加入到步驟一制得的南瓜漿中，在35℃條件下酶解1h，得酶解后的南瓜漿，備用；
步驟四、過濾、滅菌
將步驟三酶解后的南瓜漿置于濾網(wǎng)中過濾得到南瓜發(fā)酵液，在100℃下，高溫滅菌10min，得滅菌后的南瓜汁；
步驟五、菌種活化
從試管斜面中挑取1環(huán)菌落置于ypd培養(yǎng)基中，在30℃培養(yǎng)16h，活化兩次，得到富集的凝結(jié)芽孢桿菌bc361；
步驟六、接種發(fā)酵
將步驟四制得的滅菌后的南瓜汁作為發(fā)酵液接種，接入步驟五制得的富集的凝結(jié)芽孢桿菌bc361，在30℃條件下培養(yǎng)12h，得發(fā)酵后的南瓜汁，作為優(yōu)選的，凝結(jié)芽孢桿菌的接種量為步驟四制得的滅菌后的南瓜汁總重量的1%，此時(shí)產(chǎn)品酸度為0.27％，ph為4.10，菌落總數(shù)為5.07×108cfu/g；
步驟七、調(diào)配
往步驟六制得的發(fā)酵后的南瓜汁中分別加入步驟二稱取的蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉和黃原膠，經(jīng)過濾、均質(zhì)、灌裝，得一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料。
實(shí)施例二
一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料，該常溫活菌飲料由南瓜漿經(jīng)果膠酶、纖維素酶和糖化酶酶解后與凝結(jié)芽孢桿菌混合發(fā)酵并加入調(diào)味劑調(diào)和而成，所述的南瓜漿由南瓜塊原料煮熟后加水打漿而成，所述調(diào)味劑由蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉和黃原膠組成；其中，每100重量份的南瓜塊原料中，加入的果膠酶、纖維素酶、糖化酶、蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉和黃原膠的重量份數(shù)依次為：果膠酶0.5份，纖維素酶1.8份，糖化酶1.5份，蔗糖6份，檸檬酸0.6份，檸檬酸鈉0.5份，黃原膠0.15份；其中，打漿時(shí)，南瓜塊原料與水的重量比為1：5，作為一種優(yōu)選方案，所述果膠酶的酶活力單位為1萬-4萬u/g，纖維素酶的酶活力單位為2萬-6萬u/g，糖化酶的酶活力單位是5萬-10萬u/g。
制備如上所述的一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料的方法，包括以下步驟：
步驟一、南瓜漿的制備
選擇無病蟲危害腐蝕的成熟南瓜，用水清洗干凈后，切去表皮、去籽瓤，然后切成2cm厚的片狀作為南瓜塊原料；將南瓜塊原料放入沸水中煮10min，向煮熟的南瓜塊原料中加入水倒入打漿機(jī)中打漿，再通過膠體磨細(xì)磨3次，得到南瓜漿；
步驟二、稱取原料
按照如上所述的重量份數(shù)分別稱取果膠酶、纖維素酶、糖化酶、凝結(jié)芽孢桿菌、蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉、黃原膠以及步驟一制備的南瓜漿，備用；
步驟三、酶解
將步驟二稱取好的果膠酶，纖維素酶和糖化酶加入到步驟一制得的南瓜漿中，在60℃條件下酶解4h，得酶解后的南瓜漿，備用；
步驟四、過濾、滅菌
將步驟三酶解后的南瓜漿置于濾網(wǎng)中過濾得到南瓜發(fā)酵液，在115℃下，高溫滅菌30min，得滅菌后的南瓜汁；
步驟五、菌種活化
從試管斜面中挑取2環(huán)菌落置于ypd培養(yǎng)基中，在38℃培養(yǎng)20h，活化兩次，得到富集的凝結(jié)芽孢桿菌；
步驟六、接種發(fā)酵
將步驟四制得的滅菌后的南瓜汁作為發(fā)酵液接種，接入步驟五制得的富集的凝結(jié)芽孢桿菌，在38℃條件下培養(yǎng)48h，得發(fā)酵后的南瓜汁，作為優(yōu)選的，凝結(jié)芽孢桿菌的接種量為步驟四制得的滅菌后的南瓜汁總重量的3%，此時(shí)產(chǎn)品酸度為0.45％，ph為3.95，菌落總數(shù)為1.1×109cfu/g；
步驟七、調(diào)配
往步驟六制得的發(fā)酵后的南瓜汁中分別加入步驟二稱取的蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉和黃原膠，經(jīng)過濾、均質(zhì)、灌裝，得一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料。
實(shí)施例三
一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料，該常溫活菌飲料由南瓜漿經(jīng)果膠酶、纖維素酶和糖化酶酶解后與凝結(jié)芽孢桿菌混合發(fā)酵并加入調(diào)味劑調(diào)和而成，所述的南瓜漿由南瓜塊原料煮熟后加水打漿而成，所述調(diào)味劑由蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉和黃原膠組成；其中，每100重量份的南瓜塊原料中，加入的果膠酶、纖維素酶、糖化酶、蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉和黃原膠的重量份數(shù)依次為：果膠酶0.3份，纖維素酶1.2份，糖化酶0.9份，蔗糖5份，檸檬酸0.5份，檸檬酸鈉0.4份，黃原膠0.1份；其中，打漿時(shí)，南瓜塊原料與水的重量比為1：3，作為一種優(yōu)選方案，所述果膠酶的酶活力單位為1萬-4萬u/g，纖維素酶的酶活力單位為2萬-6萬u/g，糖化酶的酶活力單位是5萬-10萬u/g。
制備如上所述的一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料的方法，包括以下步驟：
步驟一、南瓜漿的制備
選擇無病蟲危害腐蝕的成熟南瓜，用水清洗干凈后，切去表皮、去籽瓤，然后切成1.2cm厚的片狀作為南瓜塊原料；將南瓜塊原料放入沸水中煮6min，向煮熟的南瓜塊原料中加入水倒入打漿機(jī)中打漿，再通過膠體磨細(xì)磨2次，得到南瓜漿；
步驟二、稱取原料
按照如上所述的重量份數(shù)分別稱取果膠酶、纖維素酶、糖化酶、凝結(jié)芽孢桿菌、蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉、黃原膠以及步驟一制備的南瓜漿，備用；
步驟三、酶解
將步驟二稱取好的果膠酶，纖維素酶和糖化酶加入到步驟一制得的南瓜漿中，在48℃條件下酶解3h，得酶解后的南瓜漿，備用；
步驟四、過濾、滅菌
將步驟三酶解后的南瓜漿置于濾網(wǎng)中過濾得到南瓜發(fā)酵液，在108℃下，高溫滅菌20min，得滅菌后的南瓜汁；
步驟五、菌種活化
從試管斜面中挑取2環(huán)菌落置于ypd培養(yǎng)基中，在34℃培養(yǎng)18h，活化兩次，得到富集的凝結(jié)芽孢桿菌；
步驟六、接種發(fā)酵
將步驟四制得的滅菌后的南瓜汁作為發(fā)酵液接種，接入步驟五制得的富集的凝結(jié)芽孢桿菌，在34℃條件下培養(yǎng)30h，得發(fā)酵后的南瓜汁，作為優(yōu)選的，凝結(jié)芽孢桿菌的接種量為步驟四制得的滅菌后的南瓜汁總重量的2%，此時(shí)產(chǎn)品酸度為0.405％，ph為3.96，菌落總數(shù)為1.51×109cfu/g；
步驟七、調(diào)配
往步驟六制得的發(fā)酵后的南瓜汁中分別加入步驟二稱取的蔗糖、檸檬酸、檸檬酸鈉和黃原膠，經(jīng)過濾、均質(zhì)、灌裝，得一種凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料。
試驗(yàn)研究數(shù)據(jù)
一、bc361分離篩選與鑒定
分離篩選：從生態(tài)養(yǎng)殖場健康仔豬盲腸及糞便樣品中分離篩選凝結(jié)芽孢桿菌，稱取1g樣品添加到9ml無菌生理鹽水中，渦旋儀混勻；80℃水浴，10min除去非芽孢細(xì)菌體；按照1％的接種量接種于改良lb培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)20h后于改良碳酸鈣鑒定平板上進(jìn)行稀釋涂布；挑選有溶鈣圈且生長良好的單菌落進(jìn)行革蘭氏染色、芽孢染色、和接觸酶試驗(yàn)，選取革蘭氏陽性、產(chǎn)芽孢且接觸酶為陽性的桿狀細(xì)菌作為候選凝結(jié)芽孢桿菌，繼續(xù)純化培養(yǎng)，保藏備用。
鑒定：
1.生理生化鑒定（參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》、《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》和《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》進(jìn)行生理生化鑒定相關(guān)試驗(yàn)）
由表1可看出候選菌株與標(biāo)準(zhǔn)凝結(jié)芽孢桿菌的生理生化特征基本一致，初步鑒定為凝結(jié)芽孢桿菌。
2.16srdna分子生物學(xué)鑒定
如圖1所示，通過細(xì)菌基因組dna提取試劑盒提取bc361基因組dna，以p0和pc3為上下游引物進(jìn)行pcr擴(kuò)增，擴(kuò)增出約750bp的特異條帶并進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果提交到eztaxon數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)。采用mega5.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，從進(jìn)化距離分析發(fā)現(xiàn)bc361與b.coagulansiam12463標(biāo)準(zhǔn)模式菌株接近。這與生理生化鑒定結(jié)果一致，因此，將它們鑒定為凝結(jié)芽孢桿菌。
二、成品凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料品質(zhì)分析
目前，市場上的益生菌產(chǎn)品通常以發(fā)酵乳和酸奶的形式。然而，隨著素食主義消費(fèi)者以及乳糖不耐癥患者的增加，對(duì)非乳益生菌產(chǎn)品的需求也不斷突顯出來。水果和蔬菜分布廣泛、且其營養(yǎng)價(jià)值豐富，可作為非乳益生菌產(chǎn)品的理想發(fā)酵底物，為目前的益生菌乳制產(chǎn)品提供健康的替代品。產(chǎn)品以當(dāng)?shù)厥a(chǎn)的南瓜為原料，以新型益生菌凝結(jié)芽孢桿菌為發(fā)酵菌株，提高南瓜附加利用值的同時(shí)開發(fā)出新型益生菌活菌飲料。
相關(guān)指標(biāo)結(jié)果
菌落總數(shù)：5×108-1.51×109cfu/g，菌落總數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于國家對(duì)活菌飲料的菌落總數(shù)的要求106cfu/g；
ph：3.95-4.1；
酸度：0.27%-0.45%；
其中，對(duì)南瓜漿中β-胡蘿卜素和維生素c含量進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見表2：
由表2可以看出，經(jīng)過發(fā)酵后，不同菌種發(fā)酵南瓜后β-胡蘿卜素和維生素c含量都有一定程度的損失，但利用本發(fā)明制備方法接種凝結(jié)芽孢桿菌損失程度遠(yuǎn)低于由保加利亞乳桿菌：嗜熱鏈球菌=1:1，因此，利用本發(fā)明制備方法制備的凝結(jié)芽孢桿菌益生菌常溫活菌飲料，營養(yǎng)成分得到較大程度地保留。
上述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，但本發(fā)明的工藝并不局限于此，凡利用此工藝方法對(duì)本發(fā)明進(jìn)行非實(shí)質(zhì)性的改動(dòng),均應(yīng)屬于侵犯本發(fā)明保護(hù)范圍的行為。