專利名稱：乙肝病毒基因擴(kuò)增檢測前的樣本處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物化學(xué)、酶學(xué)、突變或遺傳過程，是在變異或遺傳工程中涉及基因工程的DNA或其分離、制備或純化，其宿主的應(yīng)用;進(jìn)一步說，是涉及由二個或二個以上細(xì)胞融合、DNA片段、編碼性微生物蛋白質(zhì)，如內(nèi)毒素的基因，具體地說，是涉及編碼病毒蛋白質(zhì)的基因，如肝炎病毒。
據(jù)統(tǒng)計，全世界約有2億以上人攜帶HBV(乙肝病毒)，而我國受HBV感染的人至少有1億以上。大量證據(jù)表明HBV持續(xù)感染和肝癌發(fā)生有相關(guān)關(guān)系，據(jù)報道，HBV感染人群中發(fā)生肝癌的相對危險性為非感染人群的200倍以上，肝癌患者中血清HBV標(biāo)志流行率也較高，用放免法檢測HBeAg，在對照人群中低于6%，而肝癌患者的血清中HBeAg陽性率達(dá)45%至80%，如果包括將抗HBe也作為HBV感染的標(biāo)志，則對照人群與肝癌人群在HBV標(biāo)志方面的這種差異更大，因此，HBV的準(zhǔn)確迅速檢測就顯得十分重要，但是傳統(tǒng)檢測法存在敏感性比較差、費時、假陰性多等問題，而PCR高度敏感，因而可檢出潛在的低水平HBV感染。
已有的PCR直接檢測HBVDNA，通常比較復(fù)雜、使用不便、且需花費較多時間。關(guān)鍵在于PCR檢測前的血清樣本處理存在一些缺陷。
本發(fā)明的目的是提供一種簡單、快速、不加任何試劑的乙肝病毒基因擴(kuò)增檢測(HBVDNAPCR)前的樣本處理方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種乙肝病毒基因擴(kuò)增檢測前的樣本處理方法首先將血清樣本在90℃-99℃下加熱5-25分鐘，再經(jīng)離心后，吸取上清液作為血清中靶DNA。
本發(fā)明中的加熱溫度以94℃-95℃為佳，當(dāng)然，也可采用其他合適的溫度值。
本發(fā)明中的加熱時間以10-15分鐘為佳。
當(dāng)然，也可采用其他合適的時間值。
本發(fā)明中離心時的離心速度1萬轉(zhuǎn)，離心時間2-5分鐘，當(dāng)然，也可采用其他合適的離心速度和離心時間。
本發(fā)明的優(yōu)點是快速、穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好。而且在處理血清時(PCR之前)無需加入任何試劑，除了簡化操作、節(jié)約試劑、節(jié)省時間外，還使PCR操作人員不必接觸有損健康的苯酚/氯仿等有機(jī)溶劑，可在沒有防護(hù)設(shè)施的普通實驗室內(nèi)開展PCR操作，可避免經(jīng)典法經(jīng)常遇到的操作誤差。更有利于普及推廣應(yīng)用。
下表即為本發(fā)明方法與其他方法的比較
以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明例1取50μl血清樣品于94℃下加熱15分鐘，再12000rpm離心2分鐘，吸取5μl上清液作為血清中靶DNA。
例2取50μl血清樣品于97℃下加熱5分鐘，再9800rpm離心3分鐘，吸取5μl上清液作為血清中靶DNA。
例3取50μl血清樣品于95℃下加熱10分鐘，再10000rpm離心5分鐘，吸取5μl上清液作為血清中靶DNA。
本發(fā)明中所取血清樣品的量、加熱溫度、加熱時間、離心速度、離心時間、及吸取上清液的量均可作合適的變化。以符合要求為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.一種乙肝病毒基因擴(kuò)增檢測前的樣本處理方法，其特征在于首先將血清樣本在90℃-99℃下加熱5-25分鐘，再經(jīng)離心后，吸取上清液作為血清中靶DNA。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乙肝病毒基因擴(kuò)增檢測前的樣本處理方法，其特征在于加熱溫度以94℃-95℃為佳。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的乙肝病毒基因擴(kuò)增檢測前的樣本處理方法，其特征在于加熱時間以10-15分鐘為佳。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的乙肝病毒基因擴(kuò)增檢測前的樣本處理方法，其特征在于離心速度1萬轉(zhuǎn)，離心時間2-5分鐘。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種乙肝病毒基因擴(kuò)增檢測前的樣本處理方法。其特點首先將血清樣本在90℃—99℃下加熱5—25分鐘，再經(jīng)離心后吸取上清液作為血清中靶DNA。優(yōu)點血清用量少，無需加入任何試劑，簡化操作，節(jié)省時間，有利于普及推廣。
文檔編號C12N15/10GK1072453SQ9210784
公開日1993年5月26日 申請日期1992年12月6日 優(yōu)先權(quán)日1992年12月6日
發(fā)明者余竹元, 周銘, 湯釗猷, 劉建寧, 杜菁, 陳建華 申請人:上海醫(yī)科大學(xué)附屬中山醫(yī)院, 南勇宏達(dá)生物技術(shù)有限公司