專利名稱：蟲草菌絲發(fā)酵生產(chǎn)工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種采用人工分離培養(yǎng)方法得到的冬蟲夏草菌絲進行深層發(fā)酵培養(yǎng)的生產(chǎn)工藝，具體指蝙蝠蛾擬青霉新種Paecilomyces Hepiai Chen et Dai，sp.nov.的深層發(fā)酵工藝。
冬蟲夏草為名貴中藥材，性味甘溫，具有滋肺補腎功能。因為它生長在高塞地區(qū)，受到氣候、地理位置的限制，產(chǎn)量低，采集困難，資源奇缺，價格昂貴，不便于推廣應用。近年國內對冬蟲夏草菌絲發(fā)酵工藝進行了大量的研究，并以發(fā)酵工程方法生產(chǎn)蟲草菌絲代替天然蟲草。從1985年開始廣東省微生物研究所、青海省畜牧獸醫(yī)科學院、浙江省中藥研究所先后就冬蟲夏草人工培養(yǎng)方法及發(fā)酵工藝申請了專利，如中國專利CN85102231A，CN85101971A，CN1031393A。以上專利的不足之處在于藥理活性不夠廣泛，療效欠佳。
本發(fā)明的目的在于提供一種冬蟲夏草菌絲深層發(fā)酵培養(yǎng)的生產(chǎn)工藝，為研制新藥提供一種新的原料藥，解決冬蟲夏草資源不足問題。
本工藝方法為1.將新鮮的蟲草清洗干凈后用抗菌素消毒，在滅菌條件下切取薄片置斜面或平板培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)，獲得菌絲后經(jīng)多次純化培養(yǎng)，直到獲得純菌種。將分離得到的純菌種在冰箱內保存?zhèn)溆?。為擴大菌種供液體培養(yǎng)使用，采用滅菌操作將菌種接入茄子瓶斜面培養(yǎng)基上，置培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。斜面培養(yǎng)基配方重量百分比為葡萄糖1～3%，蛋白胨0.5～2%，蠶蛹0.5～2%，奶粉0.5～2%，磷酸氫二鉀0.1～0.2%，磷酸氫二鈉0.05～0.15%，瓊脂2～4%，水85～95%。
2.一級發(fā)酵或一級種子制備將菌種接入三角瓶內豐富液體培養(yǎng)基中，置往返式搖床振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)基成分為葡萄糖、蠶蛹、蛋白胨、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉。
3.二級發(fā)酵或二級種子制備一級種子經(jīng)質檢合格后，將其接入種子罐內培養(yǎng)，培養(yǎng)基同上。
4.三級發(fā)酵或深層發(fā)酵二級種子經(jīng)質量檢查合格后，將其接入三級發(fā)酵罐內發(fā)酵，接種量5～10%，培養(yǎng)基同上。
5.發(fā)酵終止，放罐。當三級發(fā)酵到達發(fā)酵時間時取樣檢查，符合發(fā)酵終止標準后放罐，過濾將菌絲切片烘干貯存?zhèn)溆谩?br> 本發(fā)明的特點是1.使用的菌種為蝙蝠蛾擬青霉新種。2.發(fā)酵產(chǎn)品的藥理活性廣泛，藥理實驗證明使用本工藝生產(chǎn)的菌絲原料藥制成口服液經(jīng)臨床實驗證明對慢性乙型肝炎、艾滋病等均有較好的療效。3.培養(yǎng)基中加入蠶蛹，菌絲生長茂盛，不加蠶蛹則不長。
實施例本發(fā)明發(fā)酵工藝為三級發(fā)酵工藝，其流程是1.斜面菌種制備取葡萄糖20克，蠶蛹10克，蛋白胨10克、奶粉10克，瓊脂20克，水1000毫升，配制成斜面培養(yǎng)基再接入菌種，在培養(yǎng)箱內于26℃下培養(yǎng)15天制成斜面菌種。
2.搖床培養(yǎng)按上述培養(yǎng)基配方(除牛奶、瓊脂外)，制成液體培養(yǎng)基裝入500ml三角瓶內，接入菌種，在搖床上振蕩培養(yǎng)。
3.發(fā)酵培養(yǎng)培養(yǎng)基同搖床，接種量8%，發(fā)酵條件溫度26℃，罐壓0.4kg/cm，空氣流量1∶0.5～1，攪拌速度220轉/分。發(fā)酵時間種子罐50小時，深層發(fā)酵罐84小時，經(jīng)檢查達到終止發(fā)酵標準時出罐。
4.發(fā)酵物的處理將出罐的菌絲體發(fā)酵液通過板框過濾，將濾出的菌絲塊切片烘干。經(jīng)檢查合格后的干菌絲可作天然蟲草代用品。這種發(fā)酵蟲草菌絲可作營養(yǎng)保健品及藥品的原料。
成品的主要化學成分與天然早草基本一致，菌絲為灰褐色或棕褐色干燥薄片，味微苦有香味，PH值4.5～5.5，含水量不超過6.5%，灰分不超過6%，水溶性浸出物不低于30%，尿苷不低于0.06%，腺嘌呤不低于0.003%，尿嘧啶不低于0.02%，甘露醇不低于5%。
權利要求
1.一種采用人工培養(yǎng)的冬蟲夏草菌絲蝙蝠蛾擬青霉新種深層發(fā)酵的生產(chǎn)工藝，其特征在于菌種發(fā)酵培養(yǎng)基中加入了蠶蛹0.5～2%，經(jīng)搖床培養(yǎng)、種子罐、大罐共三級發(fā)酵完成，二、三級發(fā)酵接種量為5～10%，質量控制指標為PH值、水分、灰分、尿苷、腺嘌呤、尿嘧啶、甘露醇、水溶性浸出物。
2.根據(jù)權利要求1所述的發(fā)酵工藝，其特征在于菌種培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方重量百分比為葡萄糖1～3%，蛋白胨0.5～2%，蠶蛹0.5～2%，奶粉0.5～2%，Na2HPO40.05～0.15%，K2HPO40.1～0.2%，瓊脂2～4%，水85～95%。
3.根據(jù)權利要求1所述的發(fā)酵工藝，其特征在于一級發(fā)酵搖床培養(yǎng)溫度為24～28℃，培養(yǎng)時間為60～72小時，搖床轉速為110～250轉/分。
4.根據(jù)權利要求1所述的發(fā)酵工藝，其特征在于罐溫為24～28℃，罐壓為0.5～1kg/cm，空氣流量為1∶0.5～1，攪拌速度為200～220轉/分，二級發(fā)酵時間為48～60小時，三級發(fā)酵時間為72～96小時。
5.根據(jù)權利要求1所述的發(fā)酵工藝，其特征在于發(fā)酵菌絲主要化學成分與天然蟲草一致，PH值4.5～5.5，含水量小于6.5%，灰分小于6%，水溶性浸出物含量大于30%，尿苷含量大于0.6%，腺嘌呤大于0.003%，尿嘧啶大于0.02%，甘露醇大于5%。
全文摘要
本發(fā)明是一種采用人工培養(yǎng)方法對冬蟲夏草菌絲進行深層三級發(fā)酵的生產(chǎn)工藝。它使用的菌種為蝙蝠娥擬青霉新種Paecilomyees hepiai Chen etDai，sp.nov.發(fā)酵工藝為從蟲草蝙蝠娥幼蟲體上分離得到擬青霉新種的菌絲進行斜面培養(yǎng)→搖床培養(yǎng)(一級發(fā)酵)→種子罐培養(yǎng)(二級培養(yǎng))→大罐三級發(fā)酵。發(fā)酵條件為罐壓0.3～0.5kg/cm
文檔編號C12N1/14GK1095103SQ93104709
公開日1994年11月16日 申請日期1993年5月7日 優(yōu)先權日1993年5月7日
發(fā)明者戴如琴, 蘭江麗, 李曉明, 邵愛娟, 陳敏, 吳志剛 申請人:中國中醫(yī)研究院