專利名稱：麥迪霉素的制造方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入丙酰胺生產麥迪霉素的發(fā)酵方法。
麥迪霉素屬于大環(huán)內酯類多組分抗生素，計有A1、A2、A3、A4四個組分，作為藥用的主要是其中的A1組分。我國衛(wèi)生部規(guī)定，單組分全生物合成抗生素的主組分含量應不低于80%。國外麥迪霉素同品種中的A1含量多數都在80%以上。我國菌株生產的“麥迪霉素”，長期都是多組分產品，除含有一定量的A1外，還有相當量的柱晶白霉素A6等組分。多年來未解決這個問題，致使我國只能生產多組分產品，并將此產品改名為“麥白霉素”(meleumycin)，規(guī)定其中A1的含量(外標法)在35%、效價在850μg/mg以上。柱晶白霉素A6對金葡菌15、肺炎雙球菌31103等病原菌的抗菌活力比麥迪霉素A1小2-4倍。因而麥白霉素的療效受到影響。
麥迪霉素是十六元環(huán)大環(huán)內酯抗生素，其分子結構中含有苷元、碳霉氨基糖、碳霉糖三個部分。由于苷元C3-OH和碳霉糖C4″-OH上?；〈煌尚纬刹煌慕M分。麥迪霉素A1和柱晶白霉素A6的化學結構式為
麥迪霉素A1組份 R＝COCH2CH3柱晶白霉素A6組份 R＝COCH3麥迪霉素A1的C3-OH上的取代基為丙酰基，而柱晶白霉素A6是乙?；?br> 要獲得單組分全生物合成抗生素，可以采用改變抗生素產生菌的遺傳基因，提高前體產量的方法;也可采用在發(fā)酵培養(yǎng)基中直接加前體物質的方法。迄今尚未見到生產單組分麥迪霉素的生物學或生產工藝方法的報導。
本發(fā)明的目的在于提供一種生產麥迪霉素的方法，以丙酰胺作為前體物質合成麥迪霉素A1的新工藝。
本發(fā)明根據麥迪(白)霉素的生物合成原理，設計出的提高麥迪霉素A1產量的這個方法。在產生菌變株的發(fā)酵培養(yǎng)基中添加丙酰胺，發(fā)酵液中的麥迪霉素A1含量就比不添加丙酰胺的對照品提高10-40%(面積歸一法)，A1的增加量與丙酰胺的加入量和加入時間有關。
如表1所示，生米卡鏈霉菌1748變株在搖瓶振蕩培養(yǎng)中，在不同的發(fā)酵時間，加入100-300mg%的無菌丙酰胺溶液到發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵液中的麥迪霉素A1的含量都顯示不同程度的增加，特別在12小時加入，增加最為明顯。
注實驗所用的發(fā)酵培養(yǎng)基為淀粉1.0%、蔗糖4.0%、黃豆粉3.0%、魚粉0.2%、酵母粉0.2%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.1%、碳酸鈣0.15%。250ml三角瓶，裝量20ml，接入生米卡鏈霉菌的種子，于28℃，振蕩培養(yǎng)2天，在不同的培養(yǎng)時間加入不同量的丙酰胺滅菌液。培養(yǎng)后，經離心分離，上清液送高壓液相分析組分。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的將生米卡鏈霉菌1748變株(Streptomycesmycarofaciensvar.1748)先在滅菌、冷卻后的種子培養(yǎng)基(組成為葡萄糖、淀粉、黃豆粉、硫酸銨、磷酸二氫鉀、碳酸鈣)中，28℃培養(yǎng)48小時，即得產生菌的種子液;
將所得的種子液，按15%接種量轉入滅菌、冷卻后的發(fā)酵培養(yǎng)基(組成為葡萄糖、淀粉、黃豆粉、酵母粉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、碳酸鈣)中，28℃通氣攪拌培養(yǎng)，在發(fā)酵24小時內，分次加入其總量為0.1-0.8%的無菌丙酰胺溶液，培養(yǎng)48小時，即得發(fā)酵液。
將所得發(fā)酵液按常規(guī)處理，過濾、萃取、結晶、干燥，即得麥迪霉素成品。
本發(fā)明的優(yōu)點是利用所述的方法生產的麥迪霉素產品的組分，幾乎主要是麥迪霉素A1，含量達到80%(外標法)以上，而不加丙酰胺的試驗對照品的A1含量僅為50%左右。這從工業(yè)生產角度上看是非常有利的。該方法的特點是工藝簡單、效果可靠。
實施例1生米卡鏈霉菌1748變株，先在種子罐的無菌種子培養(yǎng)基中，28℃培養(yǎng)48小時。種子培養(yǎng)基的組成為葡萄糖3.0%、淀粉1.0%、黃豆粉2.0%、硫酸銨0.5%、磷酸二氫鉀0.05%、碳酸鈣0.3%。所得種子培養(yǎng)液按15%接種量轉入裝在500l發(fā)酵罐中的300l無菌發(fā)酵培養(yǎng)基中。發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為葡萄糖1.0%、淀粉3.0%、黃豆粉3.0%、酵母粉0.2%、硫酸鎂0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、碳酸鈣0.1%。在28℃進行通氣攪拌培養(yǎng)，通氣量為1vvm，攪拌轉速為250r.p.m，培養(yǎng)48小時，就制得麥迪霉素發(fā)酵液。
在培養(yǎng)過程中，于發(fā)酵起始和12小時時，分別加入滅過菌的0.1%、0.2%的丙酰胺溶液。發(fā)酵終點的發(fā)酵單位為不加丙酰胺的對照發(fā)酵液的發(fā)酵單位的90%。
所得的發(fā)酵液，經常規(guī)處理，過濾、萃取、結晶、干燥，即得麥迪霉素產品。產品中的麥迪霉素A1含量達84%(外標法)，效價達980μg/mg(以枯草桿菌為試驗菌)，而不加丙酰胺的試驗對照品的A1含量僅為53.8%，效價為910μg/mg。
實施例2種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的組成同實施例1。500l發(fā)酵罐中，裝入300l發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌冷卻后，接入生米卡鏈霉菌1748變株的種子培養(yǎng)液，攪拌轉速為250r.p.m.，通氣量為1vvm，于28℃通氣攪拌培養(yǎng)48小時，即得麥迪霉素發(fā)酵液。
在培養(yǎng)過程中，于發(fā)酵起始和12小時時，分別加入滅過菌的0.05%、0.1%的丙酰胺溶液。其結果是，發(fā)酵單位為不加丙酰胺的對照的95%，產品中的麥迪霉素A1含量達81%，效價達950μg/mg，而不加丙酰胺的試驗對照品的A1含量為51.9%，效價為905μg/mg。
實施例3種子培養(yǎng)基和發(fā)醇培養(yǎng)基的組成同實施例1。500l發(fā)酵罐中，裝入300l發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌冷卻后，接入生米卡鏈霉菌1748變株的種子培養(yǎng)液，攪拌轉速為250r.p.m.，通氣量為1vvm，于28℃通氣攪拌培養(yǎng)48小時，即得麥迪霉素發(fā)酵液。
在培養(yǎng)過程中，于發(fā)酵起始和20小時時，分別加入滅過菌的0.1%、0.3%的丙酰胺溶液。其結果是，發(fā)酵單位為不加丙酰胺的對照的96%，產品中的麥迪霉素A1含量達82%，效價達955μg/mg，而不加丙酰胺的試驗對照品的A1含量為52.4%，效價為910μg/mg。
權利要求
1.一種生產化學結構式為
麥迪霉素的方法，其特征在于a.將生米卡鏈霉菌1748變株(Streptomycesmycarofaciensvar.1748)在種子培養(yǎng)基中，28℃培養(yǎng)48小時，即得產生菌的種子液；b.將所得的種子液，按15%接種量轉入發(fā)酵培養(yǎng)基中，28℃通氣攪拌培養(yǎng)，在發(fā)酵24小時內，分次加入其總量為0.1-0.8%的無菌丙酰胺溶液，培養(yǎng)48小時，即得發(fā)酵液；c.將所得發(fā)酵液按常規(guī)處理，過濾、萃取、結晶、干燥，即為成品。
全文摘要
本發(fā)明提供生產單組分麥迪霉素的一種方法。在產生菌變株的發(fā)酵培養(yǎng)基中添加丙酰胺，就可使產品中的麥迪霉素A
文檔編號C12P19/62GK1075167SQ93110080
公開日1993年8月11日 申請日期1993年2月12日 優(yōu)先權日1993年2月12日
發(fā)明者熊宗貴 申請人:沈陽藥學院