專利名稱：用木聚糖酶處理植物材料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及木聚糖酶制劑用于減低植物材料的粘度和用于將植物材料(例如小麥)分成單個(gè)有用的成分，以及進(jìn)行所述粘度降低或分離的方法。
背景技術(shù)：
小麥含有谷蛋白和淀粉這些可在用濕磨法加工過程中回收的有價(jià)值成分。重要的谷蛋白是主要產(chǎn)物，而高質(zhì)A-淀粉和低質(zhì)B-淀粉是有價(jià)值的副產(chǎn)品。殘余的纖維和可溶性固體物質(zhì)是更進(jìn)一步的副產(chǎn)品。
通過商售途徑可得的Trichoderma reesei纖維素酶酶制劑SpezymeRCP(Genencor，USA)已被證明可以降低粘度和改善小麥和谷物淀粉的加工。
Weegels等人(1992)描述了酶類(纖維素酶、半纖維素酶、脂酶和蛋白酶/淀粉酶)在小麥的分離處理中的應(yīng)用。該文還得出結(jié)論纖維素酶和半纖維素酶能改善小麥的加工特性和提高谷蛋白和淀粉的產(chǎn)率。所用的半纖維素酶是一種木聚糖酶制劑，該制劑含有包括淀粉酶和蛋白酶活性的顯著附帶活性。
已知木聚糖酶能夠?qū)⑿←湻酆蛠碓从谄渌参锏牟牧辖到獬纱罅坎煌慕到猱a(chǎn)物。已有大量參考文獻(xiàn)描述了從真菌泡盛曲霉中純化的木聚糖酶，例如，可以參考公開了三株泡盛曲霉菌之內(nèi)木聚糖酶理化和動力學(xué)特征的Kormelink等人的文章(1993)。通過將這類泡盛曲霉木聚糖酶應(yīng)用于酶降解各種植物材料包括谷麩、燕麥裂殼、小麥粉、落葉松木和樺木所得的降解產(chǎn)物已在特別是下列文獻(xiàn)中描述Kormelink et al.，(1991)、kormelink et al.，(1992)、J.M.Kormelinkand A.G.J.Voragen(1993)、Gruppen at al.，(1992)和Grmppen etal.，Rymposium 1993，10。
Voragen等人(1992)和Gmippen等人(1993a和1993b)公開了用泡盛曲霉內(nèi)木聚糖酶降解從小麥粉分離的水可提取和水不可提取的阿拉伯糖基木聚糖部分。后一參考文獻(xiàn)描述了兩種泡盛曲霉木聚糖酶在小麥面包焙烤中的應(yīng)用。
Shei等人(1985)和Fournier等人(1985)描述了從黑曲霉中分離的內(nèi)木聚糖酶之純化和鑒定特征。
上述的參考文獻(xiàn)無一介紹過木聚糖酶可用于小麥的分離，也沒有說明如何選擇專門用于所述目的的木聚糖酶。
Dusterhoft等人(1993.10，研討會)描述了內(nèi)木聚糖酶在降解動物飼料中非淀粉多糖中的應(yīng)用；Vietor等人(1993)描述了內(nèi)木聚糖酶在啤酒釀造過程中用于降低麥芽汁的粘度。
本發(fā)明的目的在于提供改變植物材料粘度和將植物材料分成所需成分的改良方法。
附圖的簡要說明

圖1表示木聚糖酶II和其它酶一起的比粘度。
圖2表示濕磨小麥分離法的原理。
圖3表示小麥在Broiler中的AMEn。
BF+＝Bio-FeedRPlusXylII＝木聚糖酶II本發(fā)明的簡明公開本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，木聚糖酶分別對水溶性和水不溶性戊聚糖的活性似乎對木聚糖酶降低植物材料粘度和/或分離植物材料成分很重要。本發(fā)明正是基于這一發(fā)現(xiàn)。
據(jù)此，本發(fā)明的第一方面涉及木聚糖酶制劑用于改變植物材料的粘度，其中，木聚糖酶制劑表現(xiàn)為a.所加入的每毫克蛋白質(zhì)WSPS至少為0.06和/或b.所加入的每毫克蛋白質(zhì)WSPU至少為15和/或c.比活性至少0.053FVRU/mg蛋白質(zhì)。
本發(fā)明的第二重要方面涉及表現(xiàn)出上述特征a)-c)的木聚糖酶制劑。更進(jìn)一步，本發(fā)明涉及這類毒制劑的多種用途。
在本說明書中，WSPU(水溶性戊聚糖單位)定義為木聚糖酶制劑每毫克蛋白質(zhì)對水溶性戊聚糖的活性，而WIPU(水不溶性單位)定義為木聚糖酶制劑每毫克蛋白對水不溶性戊聚糖的活性，其中所述活性以還原糖檢測。有關(guān)水溶性和水不溶性戊聚糖各自的產(chǎn)生之描述見于下文的材料與方法部分。在實(shí)施例4中描述了確定WSPU和WIPU的測定方法。WSPS是每毫克所加入蛋白質(zhì)WSPU和WIPU間的比，其中的蛋白質(zhì)是根據(jù)Kjeldahl的描述(參見本文的材料與方法部分)確定。
在本發(fā)明說明書中，術(shù)語“所加入的蛋白質(zhì)”意指含有木聚糖裂解活性的一定量蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)是從已產(chǎn)生了所述酶的發(fā)酵肉湯中回收的，并且隨后用于本發(fā)明目的。因此，在評定如本文所定義的指定酶的WSPS、WSPU和FVRU值時(shí)，術(shù)語“毫克蛋白質(zhì)”是指在從發(fā)酵肉湯中回收時(shí)與所述酶相關(guān)的毫克蛋白質(zhì)，而并不是任何無活性的或非木聚糖裂解性的所加入蛋白質(zhì)。
可以理解到，用于本發(fā)明目的的木聚糖酶制劑與現(xiàn)有技術(shù)的木聚糖酶和纖維素酶相比而言，每毫克蛋白質(zhì)含有極高的木聚糖裂解活性。這就意味著利用出人預(yù)料低劑量(毫克量蛋白質(zhì))的本發(fā)明木聚糖酶制劑，即可分別獲得極大的粘度降低(表示為比粘度)和小麥的分離能力。欲用于本發(fā)明的酶最好基本上為單一成分的酶，典型情況下，可以借助重組DNA技術(shù)以高純度形式高效地產(chǎn)生(即，含有相對小量的、與木聚糖裂解活性相比所不需要的附帶活性)。
FVRU被定義為酶的比粘度，它是相對于如WO92/03540所述由短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)DSM 6124所產(chǎn)生的木聚糖酶標(biāo)準(zhǔn)酶制劑的比粘度。所述酶在下文的描述中被稱為短小芽孢桿菌木聚糖酶。該短小芽孢桿菌制劑之比粘度的檢測與所加入的毫克短小芽孢桿菌木聚糖酶蛋白相關(guān)。實(shí)施例1描述了比粘度的測定方法。
上文所定義的一類木聚糖酶被認(rèn)為在小麥的分離中具有特別的用途。因此，本發(fā)明人已觀察到，在小麥分離中具有良好作用的木聚糖酶能夠迅速地降解水溶性小麥戊聚糖，而只以非常低的速度降解水溶性小麥戊聚糖。無需局限于任何理論，現(xiàn)在就可以相信，這種在小麥分離中表現(xiàn)出來的良好作用是由于粘性水溶性戊聚糖的降解所致。對于不溶性戊聚糖的低降解作用對于用本文所定義的木聚糖酶獲得的粘度降低也是很重要的，因?yàn)樵鋈艿牟蝗苄晕炀厶强梢栽黾诱扯取?br> 本發(fā)明更進(jìn)一步涉及將植物材料分成所需成分的方法和改變植物材料粘度的方法，其中應(yīng)用了上文所定義的木聚糖酶制劑。本發(fā)明的詳細(xì)描述木聚糖酶制劑正如通過上文的描述可以理解的，用于本發(fā)明目的的木聚糖酶制劑的活性(用術(shù)語WSPS或WSPU定義)被認(rèn)是最關(guān)鍵的。最好是用于本發(fā)明目的的木聚糖酶制劑所具有的每毫克所加蛋白質(zhì)的WSPS大于0.06。優(yōu)選的是，所增加的WSPS為0.06-10.0/毫克蛋白質(zhì)，更優(yōu)選地為0.7-8.0/毫克蛋白質(zhì)，再優(yōu)選的是0.9-6.0/毫克蛋白質(zhì)，特別是至少1.5-4.0/毫克蛋白質(zhì)，和/或每毫克所加蛋白質(zhì)的WSPU大于15，如25或大于25。優(yōu)選的是每毫克所加蛋白質(zhì)的WSPU為至少100至至多150.000，更優(yōu)選的是130-120.000，如至少160-100.000，更優(yōu)選的是300-90.000，再優(yōu)選的是20.000-85.000，和/或比活性至少為0.053FVRU/mg蛋白質(zhì)。優(yōu)選的比活性范圍是0.053-3.0FVRU/mg蛋白質(zhì)，如0.4、0.5或0.6至3.0FVRU/mg蛋白質(zhì)，更優(yōu)選的是0.1-2.0FVRU/mg蛋白質(zhì)，再優(yōu)選的是0.4-1.0FVRU/mg蛋白質(zhì)。
用于本發(fā)明目的的木聚糖酶制劑可以是有包括哺乳動物、植物或動物在內(nèi)的任何來源，而目前優(yōu)選的還是木聚糖酶來源于微生物。特別是所述木聚糖酶制劑可以來源于絲狀真菌或酵母。
木聚糖酶已在許多種真菌中發(fā)現(xiàn)，所述真菌種特別是指曲霉，如黑曲霉、泡盛曲霉、A.acnleatus曲霉和米曲霉；木霉，如T.reesei或T.harzianum毒霉，如沙門柏干酪青霉；鐮孢菌，如尖鐮孢霉以及Hu-micola如H.lannginosa和H.insolens。也曾在細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)過木聚糖酶，例如，在芽胞桿菌屬，如短小芽孢桿菌中有木聚糖酶。
用于本發(fā)明目的的木聚糖酶制劑可以通過包括下列步驟的方法提供a.利用現(xiàn)有技術(shù)中已知方法從任何產(chǎn)木聚糖酶的微生物中分離木聚糖酶制劑，b.如本文所述測試該木聚糖酶制劑的WSPS、WSPU和/或FRVU活性，以評價(jià)該酶是否適合用于本發(fā)明目的。
步驟A中所指的產(chǎn)木聚糖酶微生物可以是天然產(chǎn)木聚糖酶的微生物，或者是已被編碼所述木聚糖酶DNA轉(zhuǎn)化的微生物。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)真菌A.aculeatus曲霉，特別是菌株CBS101.43可以產(chǎn)生特別適用于本發(fā)明目的的木聚糖酶。所述木聚糖酶在本發(fā)明的描述中被稱為木聚糖酶II(或XylII)。并且在WO94/21785中被進(jìn)一步描述，該文獻(xiàn)也包括在本申請中。
在實(shí)施例4中，分別列出了大量現(xiàn)有技術(shù)中已知的木聚糖酶和本發(fā)明木聚糖酶II的WSPS及WSPU值。而且，還顯示了這些酶用于小麥分離的效果(表示為FVRU)。很顯然，所述現(xiàn)有技術(shù)木聚酶中設(shè)有一種表現(xiàn)出能與本文所公開的木聚糖酶II相比的小麥分離效果。
編碼木聚糖酶II的DNA序列在WO94/21785的SEQ ID NO.2中示出，而且其相應(yīng)的氨基酸序列為SEQ ID NO.5?？梢赃@樣認(rèn)為，與木聚糖酶II顯示出同源性的木聚糖酶可以與木聚糖酶II一樣有類似的活性，因此而可用于本發(fā)明目的。據(jù)此，在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的木聚糖酶可以是i.由WO94/21785的SEQ ID NO.2所示DNA序列或其編碼木聚糖酶II同系物的類似物編碼；ii.含有WO94/21785的SEQ ID NO.5所示氨基酸序列或其同源序列；和/或iii.與抗純化的木聚糖酶之抗體有免疫反應(yīng)性，所述純化的木聚糖酶來源于A.aiuleatm曲霉CBS101.43。
本說明書中，術(shù)語“同系物”意指顯示木聚糖酶活性(根據(jù)本文所定義的WSPS、WSPU和/或FVRU)的多肽，由能與根據(jù)編碼木聚糖酶II的DNA序列制備的寡核苷酸探針在某特定條件下雜交的DNA序列編碼，所述雜交條件例如，在5XSSC中預(yù)浸泡，并于含5XSSC、5xDenhandt溶液、50mM磷酸鈉pH6.8和5Dug變性的超聲處理的小牛胸腺DNA的溶液中于-40℃預(yù)雜交1小時(shí)，隨后在補(bǔ)充了50μci32P-dCTP標(biāo)記探針的相同溶液中于-40℃雜交18小時(shí)，然后在2xSSC、0.2％SDS中于40℃漂洗3次，共30分鐘。更確切地說，術(shù)語“同系物”是指與WO94/21785的SEQ ID NO.2所示DNA序列或其實(shí)質(zhì)部分至少有70％同源性的DNA序列，例如，與WO94/21785的SEQ ID NO.2的DNA序列或其編碼具有木聚糖酶活性多肽之實(shí)質(zhì)部分有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或者甚至至少95％的同源性。該術(shù)語欲包括對WO94/21785的SEQ ID NO.2之DNA序列所進(jìn)行的各種修飾，例如核苷酸替換，它并不形成木聚糖酶的另一種氨基酸序列，但對應(yīng)于被導(dǎo)入DNA構(gòu)建體的宿主微生物中的密碼子用法，或者所述核苷酸替換確實(shí)產(chǎn)生不同的氨基酸序列，因而可能產(chǎn)生可以形成與天然酶具不同特性之木聚糖酶實(shí)變體的不同蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。其它可能的修飾作用實(shí)例為在序列中插入一個(gè)或多個(gè)密碼子，在序列的任一端增加一個(gè)或多個(gè)密碼子，或者在序列的任一端或在序列的內(nèi)部缺失一個(gè)或多個(gè)密碼子?？梢岳斫?，本文所定義的木聚糖酶II同系物包括許多不同的氨基酸殘基，只要木聚糖酶的活性如本文所定義。
有關(guān)木聚糖酶II的生產(chǎn)及其進(jìn)一步的特征鑒定可從已經(jīng)包括在本申請中的WO94/21785的公開中很容易得知。
用于本發(fā)明的木聚糖酶制劑可以借助任何適當(dāng)?shù)募夹g(shù)從所涉及的微生物中獲得。例如，木聚糖酶制劑可以借助現(xiàn)有技術(shù)已知的方法發(fā)酵微生物，繼而分離所述酶來獲取，但更優(yōu)選的是利用現(xiàn)有技術(shù)已知的重組DNA技術(shù)。這類方法通常包括在允許所述酶表達(dá)的條件下，在培養(yǎng)基中培養(yǎng)用重組DNA載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，該重組載體能夠表達(dá)并攜帶編碼所述木聚糖酶的DNA序列，然后從培養(yǎng)物中回收所述酶。
包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的可以是從微生物來源的單一成分酶(即基本不含任何其它活性)制備的、具有上述木聚糖酶特征a)-c)的任何酶制劑。本發(fā)明的木聚糖酶可以在分離所術(shù)成分酶后測定其WSPS、WSPU和FVRU值來鑒定。
所用編碼木聚糖酶的DNA序列可以具有任何來源，例如可以是cDNA序列、基因組序列、合成序列或其任何組合，適用于本發(fā)明目的的木聚糖酶的制備方法已在WO94/21785中有詳細(xì)的描述。
當(dāng)所述木聚糖酶用于本發(fā)明分離小麥的方法(或?qū)a(chǎn)生淀粉的其它方法)時(shí)，最好是所述木聚糖酶制劑基本不含淀粉酶，因?yàn)槿魏蔚矸勖富钚缘拇嬖跁到鈱a(chǎn)生的淀粉。相應(yīng)地，當(dāng)木聚糖酶將用于蛋白質(zhì)的產(chǎn)生時(shí)，例如用于產(chǎn)生谷蛋白的本發(fā)明小麥分離方法中時(shí)，最好所述木聚糖酶基本不含蛋白酶，因?yàn)榈鞍酌笇λa(chǎn)生的谷蛋白不利?？梢杂矛F(xiàn)有技術(shù)中已知的方法除去淀粉酶和蛋白酶活性。有關(guān)的一個(gè)例子是熱滅活法，該方法相對于米曲霉所產(chǎn)生的木聚糖酶II具有特別的優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)槟揪厶敲窱I通常比由所述宿主細(xì)胞產(chǎn)生的淀粉酶和蛋白酶具有更好的熱穩(wěn)定性。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)所述木聚糖酶與纖維素酶一起使用時(shí)，木聚糖酶在本發(fā)明的植物材料分離方法中產(chǎn)生的作用可以得到極大地改善。
據(jù)此，用于本發(fā)明的木聚糖酶制劑可以含有纖維素酶。該纖維素酶最好具有微生物來源，例如可以來源于絲狀真菌(如曲霉、木霉、腐質(zhì)霉、鐮孢菌)。適用于本發(fā)明目的之纖維素酶的具體例子包括可來自H.insolens并可由WO91/17244之圖14中的氨基酸序列進(jìn)一步定義的內(nèi)葡聚糖酶(內(nèi)葡聚糖酶I)和由WO91/17243描述的43KDH.indolens內(nèi)葡聚糖酶。
可與本文所描述的木聚糖酶結(jié)合使用的經(jīng)商售可得的纖維素酶制劑包括CelluclastR(可得自Novo Norelisk A/S)，SpezymeRCP(可得自Genencor，USA)和RohamentR7069W(可得自Rohm，德國)。植物材料的分離方法在含木聚糖的任何植物材料(如軟材和硬材)可用本發(fā)明進(jìn)行處理的同時(shí)，最好是植物材料來源于Poaceae科，并且特別是由谷類植物如小麥、黑麥、大麥或燕麥制備的植物材料。該植物材料另外還可以來源于蔬菜或水果，例如從玉米、大米、高梁豆或水果殼制得的植物材料。所述植物材料可以由上述植物之任何組合制得，并且可以另外含有非植物材料。
欲按照本發(fā)明進(jìn)行處理的植物材料可以為任何適宜的形式。如下文將進(jìn)一步解釋的那樣，所述植物材料可以方便地成為使得可以進(jìn)行連續(xù)加工的可抽吸分散液或溶液形式。該分散液通?？梢酝ㄟ^將干磨材料，尤其是顆粒平均大小為50-100μm的小麥和水混合制得。
根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行加工的優(yōu)選植物材料是小麥。借助本發(fā)明的方法，小麥將被分成谷蛋白、淀粉和纖維部分。如此產(chǎn)生的谷蛋白例如可以被加到面粉中，以改善其焙烤特性，或者可用于改善諸如肉類、早餐谷類和寵物食品等產(chǎn)品的營養(yǎng)值。所述淀粉例如可用于造紙工業(yè)中的制漿(如紙張涂層)和紡織工業(yè)中的制漿。所述纖維部分例如可用于動物飼料。
下面將參照小麥的分離來描述本方法分離植物材料的方法。然而，可以理解，借助相似類型的方法可以分離上述任何其它類型的植物材料，并且，本領(lǐng)域的技術(shù)人員知道應(yīng)該選擇哪類方法用于分離所給定的植物材料，例如可以參考題為“淀粉生產(chǎn)技術(shù)”(J.A.Radley著)的書籍，其中的圖2顯示了說明小麥分離過程的流程圖。
本發(fā)明的方法可以通過現(xiàn)有技術(shù)已知的任何工業(yè)小麥分離方法來完成，然而，本發(fā)明優(yōu)先使用所謂的粉碎法(或濕磨法)，其中的起始材料是待分離小麥的稀釋的可抽吸分散液。通常，該分散液由小麥粉和水構(gòu)成。分散液的干物質(zhì)含量范圍一般為35-50％。已知兩種主要類型的粉碎方法為水力旋流器法和潷析器法。這些方法的優(yōu)點(diǎn)在于水耗較低。
在水力旋流器法中，面粉首先與水混合制成生面，然后進(jìn)一步稀釋，并通過一個(gè)其中已附聚了谷蛋白的攪拌附聚罐，含小谷蛋白附聚物和淀粉的分散液被抽吸至一套水為旋流器中，在此進(jìn)行離心分離，作為最輕部分的谷蛋白和“B”—淀粉一起留在水力旋流器的頂部，再經(jīng)過濾將谷蛋白從“B”—淀粉中分開。來自水力旋流器的底流主要含有“A”—淀粉，而戊聚糖(或纖維)見于上下兩部分。所述部分將經(jīng)一系列的清洗/濃縮步驟得以進(jìn)一步的凈化。
潷析器法與水力旋流器法之區(qū)別至少在于一個(gè)主要問題，即當(dāng)谷蛋白被附聚時(shí)。在潷析器方法中，為了避免在兩級或三級潷析器中進(jìn)行分離前谷蛋白形成更大的團(tuán)塊，保持很低粉碎物濃度是非常重要的。在分離之前，將被混合的面粉/水分散液抽吸通過一個(gè)均質(zhì)器，這是一個(gè)具有高剪切力的特殊針狀碾機(jī)(pin miu)，可以啟動谷蛋白的附聚，就在分離開始之前，再次對分散液進(jìn)行稀釋。在兩級潷析器的情況下，底流含有相當(dāng)清潔的“A”淀粉，而溢流含谷蛋白、“B”淀粉和戊聚糖。對于三級筆析器而言，有兩級除了“A”淀粉外含谷蛋白和一些“B”淀粉，而還有一級含谷蛋白、“B”淀粉和戊聚糖。當(dāng)如本文所定義的木聚糖被用于小麥的分離時(shí)，有可能獲得改善的揉面和均化能力、改善的分離能力、戊聚糖部分降低的粘度(當(dāng)蒸發(fā)和干燥時(shí)降低能耗)和潷析器上降低的電流消耗。而且，可獲得高純度的終產(chǎn)物，由于降低粘度而增加了可流動性，所以加工時(shí)間也可縮短。
植物材料的分離法通常在pH3-8的范圍內(nèi)進(jìn)行，如PH4-7，特別是PH5.5-6.5。典型情況下，溫度范圍是15-50℃，如35-45℃。在小麥分離法中，根據(jù)本發(fā)明所進(jìn)行的分離一般于40℃進(jìn)行1-5分鐘完成。
對于有些目的而言，與木聚糖酶一起使用其它的酶是有利的。例如，已發(fā)現(xiàn)將本文所定義的木聚糖酶與纖維素酶結(jié)合使用具有協(xié)同作用。適宜類型的纖維素酶已在上文“木聚糖酶制劑”部分介紹過。所用纖維素酶的量相當(dāng)于0-30,000 EGU/kg面粉，優(yōu)選200-5000 EGU/kg面粉。粘度降低如上所述，本文所定義的木聚糖酶制劑可用于降低植物材料的粘度。粘度的降低對于例如本文所述的連續(xù)小麥分離法之重要在于可以得到增加的小麥粉流動性。而且，所述粘度降低的重要性還體現(xiàn)在食品或飼料的制備和釀造方面，參考Visser et al.，Xylans andXylanases，1991。釀造本文所述木聚糖酶被認(rèn)為特別適用于在釀造過程中降低麥芽汁的粘度。所述木聚糖酶可以由大麥和高梁制得的麥芽汁一起使用，并可以如戊聚糖酶用于釀造的相同方式使用，參考例如Vietor etal.，1993和EP227159。飼料要制備的飼料通常是基于上文所確定的植物材料，如谷類植物，尤其是小麥和/或大麥。所述木聚糖酶通過降解植物材料所含的阿拉伯基木聚糖來發(fā)揮其作用，籍此獲得動物飼料含能量成分及其它營養(yǎng)成分全面利用的改善。而且，特別是對于適合烤焙的小雞，可以降低食糜的粘度?？梢哉J(rèn)為，降低的粘度對于飼料的可消化性是重要的，這可能是由于內(nèi)源性酶可以更好地與底物接觸，或是由于消化產(chǎn)物獼散性增加的緣故。這些原因?qū)е铝宋康脑黾?。另外，降解作用通過使?fàn)I養(yǎng)物更容易被獲取，從而有助于穩(wěn)定小腸微生物菌群。所制備的飼料例如可用于飼喂適于烤焙的小雞、蛋雞和小豬。木聚糖酶可以任何適當(dāng)?shù)膭┝浚?-2000FXU/kg飼料的量摻入飼料中，優(yōu)選量的20-1000FXU/kg飼料。制備β-葡聚糖和其它谷類植物成分本文所公開的木聚糖酶制劑被認(rèn)為特別適用于通過降解存在于例如非淀粉多糖廢品中的阿拉伯糖基木聚糖來制備β-葡聚糖。所述β-葡聚糖可以用作樹膠或填充劑(以降解形式)。而且，由上文公開的內(nèi)容可以證明，所述木聚糖酶制劑可用于制備淀粉，尤其是小麥淀粉和谷蛋白。材料與方法由小麥粉生產(chǎn)可溶性戊聚糖(WSP)將100kg普通小麥粉懸浮于300kg冷水中。攪拌1小時(shí)后，用潷析器除去泥狀物。然后用酶處理所得的上清液以除去淀粉和蛋白質(zhì)。在將pH調(diào)至6.5和溫度調(diào)至90℃后，首先加入2％(干物質(zhì)，d.m.)TermamylR120L，同時(shí)攪拌90分鐘；隨后用3％(干物質(zhì))AMGR300L于pH4.6和60℃條件下進(jìn)行類似的處理共120分鐘，以水解淀粉部分。最后，在連續(xù)攪拌、pH8.0和55℃條件下用1％(干物質(zhì))AlcalaseR2.4L處理上清液120分鐘，水解淀粉和蛋白質(zhì)之后，用蔡氏濾器K250在壓濾機(jī)上過濾所得產(chǎn)物，以除去殘余的不溶性物質(zhì)。用10,000mw截留膜對上清液進(jìn)行超濾處理，以將產(chǎn)物從淀粉和蛋白質(zhì)水解物中分出。將截留物進(jìn)一步透濾直至達(dá)到0OBRIX。所述產(chǎn)物通過在Luwa蒸發(fā)器上蒸發(fā)而濃縮，并且最終被凍干。由小麥粉生產(chǎn)不溶性戊聚糖(WIP)將150kg普通小麥粉懸浮于450kg冷水中。該懸液被加熱至60℃，再加入600g TermamylR120L。當(dāng)加熱至95℃導(dǎo)致淀粉部分膠凝之后，將懸液冷卻至60℃繼續(xù)水解180分鐘。用NaOH調(diào)pH至8.0后加入300g AlcalaseR2.4L。在連續(xù)攪拌下水解蛋白質(zhì)的過程中，用NaOH滴定，使PH維持在7.5-8.0。水解反應(yīng)進(jìn)行120分鐘，離心后回收沉淀物，用水洗滌一次，然后用冷水在35μm篩上進(jìn)一步?jīng)_洗，以除去全部殘留的可溶性物質(zhì)。向所得的不溶性物質(zhì)中加入達(dá)20L的水，并加熱至60℃。在用NaOH調(diào)pH至8.0后，加入100g AlcalaseR2.4L。繼續(xù)進(jìn)行水解反應(yīng)和NaOH滴定，直至pH不再下降。然后將所述材料再次置于35μm篩洗滌，直至除去全部可溶性物質(zhì)，最好凍干。
用于本發(fā)明之木聚糖酶的活性檢測是借助還原糖從可溶性戊聚糖(保溫后稀釋25倍)和不溶性戊聚糖(保溫后稀釋5倍)中的釋放。
將如上所述生產(chǎn)的0.5％水溶性或水不溶性戊聚糖溶解或懸浮于0.1M檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液(pH6.0)中。每個(gè)樣品的0.9ml底物與0.1ml酶溶液混合。在酶與底物混合之前和混合過程中，底物被置于冰上。當(dāng)所述酶于100℃變性處理5分鐘后，于40℃保溫15分鐘。當(dāng)所述樣品被冷卻時(shí)，可溶性戊聚糖溶液被稀釋25倍，而不溶性戊聚糖溶液被稀釋5倍。然后，通過在微量滴定板上與PH-BAH試劑反應(yīng)測定還原糖，所述PHBAH試劑含有0.15g對羥基苯甲酸酰肼(Sigma H-9882)，0.50g酒石酸鉀一鈉(Merch 8087)和2％NaOH溶液，達(dá)10.0ml?？瞻椎慕Y(jié)果被減去。木糖用作標(biāo)準(zhǔn)物。還原糖可用于測定WSPU和WSPS。蛋白質(zhì)測定法-Kjeldahl利用Tecator浸煮器和1003型蒸餾裝置進(jìn)行所述測定。破壞作用(Tecator浸煮器)待分析樣品被轉(zhuǎn)置于Kjeldahl管中，對于液體樣品大約1.5g；凍干樣品為約0.1g。向樣品中加入a)3.0ml硫酸(濃H2SO4)b)1.5ml過氧化氫(32％H2O2)c)1Kjeltab(Se+K2SO4)如果樣品在加入化學(xué)物質(zhì)后起泡，則其將在第二天才被破壞。在正常情況下，樣品在10分鐘后被置于破壞部件中。該部件的溫度設(shè)置為370℃。當(dāng)樣品呈清亮或微黃時(shí)，將其取出。根據(jù)樣品的組成不同，破壞作用通常需要進(jìn)行0.5-1小時(shí)。將樣品冷卻至室溫約20分鐘。然后準(zhǔn)備進(jìn)行蒸餾。蒸餾(1003型蒸餾裝置)樣品在含Kjeldahl指示劑(A0.12g亞甲基蘭溶于100ml96％乙醇，B0.125g亞甲基紅溶于100ml96％乙醇，將A和B以1A∶2B的比例混合)的25ml2％硼酸中蒸餾。被破壞的樣品與32.5％NaOH混合。氨被蒸餾到2％硼酸中，然后用0.1 NHCl滴定，直到pH達(dá)4.85。測定內(nèi)葡聚糖酶活性(EGU)分析方法利用振動粘度測定法于CMC(pH6.0)分析發(fā)酵肉湯。更確切地說，制備含有溶于0.1M磷酸鹽(pH6.0)的34.0g/L CMC(Blanose Aqualon)的底物溶液。待分析的酶樣品也溶于相同的緩沖液中。將14ml底物溶液與0.5ml酶溶液混合，并轉(zhuǎn)置于振動粘度檢測計(jì)(例如MIVI 3000，可得自Sofraser，法國)于40℃恒溫。內(nèi)葡聚糖單位(EGU)測定為樣品粘度與標(biāo)準(zhǔn)酶溶液粘度之比。測定木聚糖酶活性(FXU)用一種測定法檢測內(nèi)木聚糖酶活性，在所述測定方法中，木聚糖酶樣品與remazol-木聚糖底物pH6.0(用Remazol亮蘭R染色的4-O-甲基-D-葡糖醛酸基(glucurono)-D-木聚糖，F(xiàn)luka)一起保溫。保溫過程于50℃進(jìn)行30分鐘。未被降解的染色底物之背景用乙醇沉淀。用分光光度計(jì)于585nm檢測上清液中所保留的蘭色，其與內(nèi)木聚糖酸活性成比例。
相對于酶標(biāo)準(zhǔn)測定樣品的內(nèi)木聚糖酶活性。
該測定法在出版物AF293.6/1-GB中有進(jìn)一步的描述。該出版一經(jīng)有需求即可從Novo Nordirk A/S，Denmark得到。測定內(nèi)葡聚糖酶單位(ECU)相對于一酶標(biāo)準(zhǔn)物測定ECU(內(nèi)纖維素單位)。
內(nèi)纖維素酶分解羥甲基纖維素(CMC)。用CMC-振動粘度測定計(jì)(例如MIVI3000，可得自Sofraser，法國)檢測所得到的降低的粘度。
所制備的底物溶液含有溶于0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.5)的35g/L CMC(Blanose Aqualon)。待分析的酶樣品溶解于相同緩沖液中。
將0.15ml標(biāo)準(zhǔn)酶液或末知酶樣品置于10ml試管中。加入預(yù)熱至40℃的5ml CMC-底物液。充分混合該溶液，保溫30分鐘，置于粘度計(jì)中。
該方法在AF302/1-GB中有進(jìn)一步的描述，在提出請求時(shí)即可從Novo Nordirk獲取AF302/1-GB。面粉在下面實(shí)施例中的所用面粉含有下列成分表1所用面粉的組分
Fakt粉非指定型商售面粉(“Lnksus Hvedemel”，prepared by Daglig-varegruppen，Dk-7100 Vejle)。
實(shí)施例實(shí)施例1降低小麥粉粘度測試不同的木聚糖酶在如上所定義的Fakta粉中降低粘度的能力。
所測試的木聚糖酶為—SpezymeRCP，可得自Genencor，USA—H.insolens木聚糖酶(其生產(chǎn)如WO92/17573之實(shí)施例2所述)—木聚糖酶I粉末(用WO94/21785所述木聚糖酶I作為起始材料，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法通過固相分離、濃縮和凍干等步驟生產(chǎn))—木聚糖酶II(如WO94/21785所述生產(chǎn))—木聚糖酶，如WO92/03540所述用B.pumilus菌株DSM6124生產(chǎn)(在下文稱為B.pumilus木聚糖酶)。
利用下述方法檢測粘度的降低精確稱量100g面粉。向置于35℃的120ml去離子水中加入上述酶。酶的劑量如下SpezymeRCP 8.5FXU(相當(dāng)于3.4mg蛋白質(zhì))木聚糖酶I粉末28.3FXU(相當(dāng)于0.19mg酶蛋白和0.24mg蛋白質(zhì))。
木聚糖酶II7.5FXU(相當(dāng)于0.19mg酶蛋白和0.25mg蛋白質(zhì))。
H.insolens木聚糖酶82.2FXU(相當(dāng)于2.2mg酶蛋白和22.3mg蛋白質(zhì))。
短小芽孢桿菌木聚糖酶21FXU(相當(dāng)于0.2mg蛋白質(zhì))空白樣品作為對照(未加酶)。用于攪拌面粉和水30秒，然后在混合器(Warring，Commercial Laboratoig blender，Struers，Adjust-ments OFF 1-7 rotor in bottom(4 blades))以7檔速度(最大速度)精確混合30秒?；?0秒將該液體倒入粘度計(jì)的測定管(Pro-grammable rheometer，model DV-111，Brookfield，Spindel 25，測定管于38℃恒溫)。每個(gè)第15秒測40rpm時(shí)的粘度，共測4分鐘。比粘度表示為樣品粘度的均數(shù)與空白粘度均數(shù)的百分比，其用作粘度降低的檢測。平均粘度為60秒后和直到檢測結(jié)束時(shí)所達(dá)水平的均數(shù)。
最低的比粘度見于在使用木聚糖酶II的情況下。其它的木聚糖酶也被發(fā)現(xiàn)可以降低比粘度(木聚糖酶I，SpezymeRCP)，盡管其降低的程度較小。還發(fā)現(xiàn)所述量的H.insolens木聚糖酶可以升高粘度。作為實(shí)例，上述量對于木聚糖酶II、木聚糖酶I、SpezymeRCP和H.insolens木聚糖酶而言，產(chǎn)生的比粘度分別為69％、78％、87％和128％(相當(dāng)于0.63FVRU/gm蛋白質(zhì)、0.044FVRU/mg蛋白質(zhì)、0.053FVRU/mg蛋白質(zhì)和0.012FVRU/mg蛋白質(zhì))。實(shí)施例2小麥的分離通過離心試驗(yàn)評估實(shí)施例1中所述酶的小麥分離能力。該試驗(yàn)用實(shí)施例1所述面粉進(jìn)行。
根據(jù)實(shí)施例1所述方法將面粉與水混合。在此之后將糊狀物以4332g離心(Megafuge 1.0 Heraeus Sepatech)5分鐘。在底層有淀粉，繼而是上部的谷蛋白、泥狀物和流出物層。該分離作用表示為流出物百分比。百分比越高，分離效果越好。
已經(jīng)證實(shí)，木聚糖酶II有最好的作用，作為實(shí)例，對于空白樣品、SpezymeRCP、木聚糖酶I和木聚糖酶II而言，面粉流出物的百分比分別為14％、21％、22％和23％。實(shí)施例3木聚糖酶II與其它酶相結(jié)合降低粘度測試不同的木聚糖酶在與木聚糖酶II相結(jié)合使用時(shí)降低粘度的能力。所用Fakta粉如上文所述。
測試的木聚糖酶有—CelluelastRCCN3035，可得自Novo Nordisk A/S—內(nèi)葡聚糖酶I，一種含有如WO91/17244圖14所示氨基酸序列的H.insolens纖維素酶，其生產(chǎn)方法如所述文獻(xiàn)所述。
—43KD內(nèi)葡聚糖酶，一種如WO91/17243所述的H.insolens纖維素酶，該文獻(xiàn)還描述了其生產(chǎn)方法。
—H.insolens木聚糖酶(如92/17573之實(shí)施例2所述生產(chǎn))。
—木聚糖酶I粉末(如上所鑒定)。
—B.pumulis木聚糖酶(如上所鑒定)。
每一種酶都與木聚糖酶II聯(lián)用，并與SpezymeRCP相比較。如實(shí)施例1所述檢測粘度的降低。
所用酶量如下CelluclastR16EGU(相當(dāng)于0.024ml)內(nèi)葡聚糖酶I26.5ECU(相當(dāng)于0.053ml)43KD內(nèi)葡聚糖酶101ECU(相當(dāng)于0.017ml)H.insolens木聚糖酶82.2FXU(相當(dāng)于2.2mg酶蛋白和22.3mg蛋白質(zhì))
木聚糖酶I粉末28.3FXU(相當(dāng)于0.19mg酶蛋白和0.24mg蛋白質(zhì))短小芽孢桿菌木聚糖酶21FXU(相當(dāng)于0.024ml和0.2mg蛋白質(zhì))木聚糖酶II7.5FXU(相當(dāng)于0.19mg酶蛋白和0.25mg蛋白質(zhì))SpezymeRCP8.5FXU(相當(dāng)于0.024ml和3.4mg蛋白質(zhì))由圖1可證明，沒有其它的酶可以將粘度降至和木聚糖酶II一樣能達(dá)到的水平。而且，當(dāng)木聚糖酶II尤其是與內(nèi)葡聚糖酶I和43KD纖維素酶聯(lián)用時(shí)可以顯著降低粘度。木聚糖酶II還可以與顯示出多成分酶的CelluclastR聯(lián)用。在圖1中，暗柱圖表示酶的單獨(dú)作用。亮柱圖表示所述酶與木聚糖酶II聯(lián)用所觀察到的效果1＝木聚糖酶II 2＝木聚糖酶II3＝SpezymeRCP 4＝43KD內(nèi)葡聚糖酶5＝H.insolens木聚糖酶 6＝內(nèi)葡聚糖酶I7＝木聚糖酶I粉末 8＝CelluclastR9＝短小芽孢桿菌實(shí)施例4測定WSPS和WSPU在測定WSPS和WSPU中，必須檢測據(jù)Kjeldahl所述確定的所加酶的蛋白含量，以及所述酶對如前所述生產(chǎn)的水不溶性(WIP)和水溶性戊聚糖(WSP)的，以還原糖來檢測的酶活性。所確定的許多制劑之WSPS和WSPU值如下
WSPU為優(yōu)選的每公斤面粉中的每毫克蛋白質(zhì)對WSP的活性，且WSPS為優(yōu)選的每公斤面粉中的每毫克蛋白質(zhì)的WSP/WIP比值。
由此可見，木聚糖酶II表現(xiàn)出極高的WSPU和WSPS，這反映出與蛋白質(zhì)的加入相比，以高速度降解水溶性戊聚糖都以低速度降解水不溶性戊聚糖實(shí)施例5木聚糖酶用于動物飼料以含和不含酶的實(shí)驗(yàn)性飲食喂養(yǎng)適于烤焙的小雞六周。該飲食在實(shí)驗(yàn)的頭三周含81％小麥，在后三周含84.5％小麥。將其分成3種處理。對于頭六周，每種處理包括以8小肉雞重復(fù)12次，后三周每種處理以5只小雞重復(fù)6次。
所述處理包括不含酶的對照和下列酶處理400FXU/Kg飼料Bio-FecdTMPlus(BF+)(可得自Noro Nordisk A/S)和400FXU/kg飼料木聚糖酶II。兩種酶都根據(jù)WO92/12645所述方法配成CT顆粒。測定體重增加和飼料消耗量，并計(jì)算0-3周和3-6周的飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)。而且，利用Brookfield LVTDV-II粘度計(jì)確定腸內(nèi)容物之上清液的Jejunal和ileal粘度。
所述結(jié)果從下表中可顯而易見。表1 0-3周生產(chǎn)的有關(guān)參數(shù)
表2 3-6周生產(chǎn)的有關(guān)參數(shù)
表3第3周和第6周的Jejunal粘度
表4第3周和第6周的Ileal粘度
從表1和2所見，在3周和6周后，接受酶的處理組之FCR均較低。在兩種情況下，木聚糖酶II好于BF+。這主要是因?yàn)樵摻M動物生長得更好。
關(guān)于Jejunal粘度，木聚糖酶與BF+和對照相比產(chǎn)生了較低的粘度。這也是ileal粘度的情況。對照和木聚糖酶兩者在6周之后比3周之后所產(chǎn)生的粘度要低，而對于BF+而言卻非如此。因此，似乎應(yīng)該是木聚糖酶II在后三周期間比BF+有更好的作用，這也由木聚糖酶II在第6周時(shí)相比于BF+有相對較低的FCR來證明。
因此，該實(shí)驗(yàn)表明，在同樣的基礎(chǔ)上，木聚糖酶比BF+能產(chǎn)生更好的飼料轉(zhuǎn)化率，即用木聚糖酶II可以得到更多的營養(yǎng)物，這部分原因是木聚糖酶II組中的ileal粘度較低。實(shí)施6木聚糖酶II在動物飼料中的可代謝能量利用歐洲的參考方法(Bourdillon et al.，1990)測定木聚糖酶II(100FXU/kg和200FXU/kg)對AME(表觀可代謝能)的影響，并與商售產(chǎn)品Bio-FeedTMPlus(400FXU/kg)(BF+，得自NoVo NordiskA/S)相比較。AMEn值表示飼料中考慮到N-殘留進(jìn)行校正了的可代謝能。
使用了來自商業(yè)孵化場的一天齡雄性RoSS適于烤焙的小雞。
從1-16天，給小雞喂商售的起始(Starter)飲食。第16天分別給小雞稱重。去掉高或低體重的雞，其余的分配至孵蛋箱中。從16-23天小雞適應(yīng)孵箱。根據(jù)Bourdillon等人(1990 supra)的方法在24-28天于體內(nèi)進(jìn)行平衡試驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)包括以每次重復(fù)均含4只小雞的總數(shù)為5次重復(fù)的9種處理。
基礎(chǔ)飲食含56％高梁、32.5％大豆粉、6％動物脂肪、1％豆油和5％礦物質(zhì)、維生素、微量元素和氨基酸。在實(shí)驗(yàn)飲食中，一半的基礎(chǔ)飲食被小麥替換。山雞飼喂的糊狀飼料占其隨意攝取量的90％。測定AMEn每天定量收案小雞的排泄物。分析飲食和凍干排泄物樣品中的脂肪、總能量(GE)和氮。
由各自的排泄物/飼料比以及相應(yīng)的總能量(GE)計(jì)算飲食的AME量。考慮到N殘留的校正至零是用34.36KJ/g殘留N的能量等式進(jìn)行的。
通過飲食和凍干排泄物的脂肪提取物確定脂肪消化率。
所測定的AMEn如圖3所示。
由圖3可見，補(bǔ)充了木聚糖酶II的基礎(chǔ)飲食與Bio-FeedTM(BF+)相比導(dǎo)致可代謝能的明顯改善。
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權(quán)利要求
1.降低植物材料粘度的方法，該方法包括用木聚糖酶處理所述植物材料，所述木聚糖酶具有I.所加入的每毫克蛋白質(zhì)的WSPS大于0.06，和/或II.所加入的每毫克蛋白質(zhì)的WSPU大于15，和/或III.比活性大于0.053FVRU/mg蛋白質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的木聚糖酶處理是在pH3-8和/或溫度15-50℃的條件下進(jìn)行。
3.將植物材料分成單個(gè)成分的方法，該方法包括用木聚糖酶處理所述植物材料，所述木聚糖酶具有I.所加入的每毫克蛋白質(zhì)的WSPS大于0.06，和/或II.所加入的每毫克蛋白質(zhì)的WSPU大于15，和/或III.比活性大于0.053FVRU/mg蛋白質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一個(gè)的方法，其中的植物是谷類植物，如小麥、大麥、黑麥、燕麥、大米和高梁。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中的谷類植物是小麥。
6.根據(jù)權(quán)利要求3-5中的任意一種方法，其中的谷類植物被分成含淀粉的和含蛋白質(zhì)的成分。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中的谷類植物是被分成“A”型淀粉、“B”型淀粉和/或谷蛋白的小麥。
8.根據(jù)任何一個(gè)在前權(quán)利要求的方法，其中的木聚糖酶來源于微生物。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中的木聚糖酶來源于絲狀真菌或酵母。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中的木聚糖酶來源于曲霉屬、木霉屬、青霉屬、鐮孢菌屬或腐質(zhì)霉屬的菌株。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中的木聚糖酶來源于曲霉屬菌株，特別是棘孢曲霉、泡盛曲霉、黑曲霉或米曲霉。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中的木聚糖酶由從棘孢曲霉CBS101.43的DNA文庫中分離的DNA序列編碼。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中的木聚糖酶I.由WO94/21785的SEQ ID NO.2所示DNA序列或其編碼木聚糖酶II之同系物的類似物編碼，和/或II.含有WO94/21785的SEQ ID NO.5所示氨基酸序列或其同源序列，和/或III.與抗來自棘孢曲霉CBS 101.43之純化木聚酶的抗體有免疫反應(yīng)性。
14.根據(jù)任何一個(gè)在前權(quán)利要求的方法，其中將比活性至少為10.000 EGU/FVRU的含纖維素酶制劑與木聚糖酶結(jié)合使用。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中含纖維素酶制劑來源于微生物。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中含纖維素酶的制劑來源于絲狀真菌或酵母菌。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中含纖維素酶的制劑來源于木霉屬、曲霉屬或腐質(zhì)霉屬。
18.含木聚糖酶的制劑，所述木聚糖酶具有I.所加入的每毫克蛋白質(zhì)的WSPS大于0.06，和/或II.所加入的每毫克蛋白質(zhì)的WSPU大于15，和/或III.比活性大于0.053FVRU/mg蛋白質(zhì)。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的制劑，其中的木聚糖酶來源于微生物。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的制劑，其中的木聚糖酶來源于絲狀真菌或酵母菌。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的制劑，其中的木聚糖酶來自曲霉屬、土霉屬、青霉屬、鐮孢菌屬或腐質(zhì)霉屬的菌株。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的制劑，其中的木聚糖酶來源于曲霉屬菌屬，特別是棘孢曲霉、黑曲霉或米曲霉。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的制劑，其中的木聚糖酶由自棘孢曲霉CBS101.43之DNA文庫分離的DNA序列編碼。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的制劑，其中的木聚糖酶I.由SEQ ID NO.2所示序列或其編碼木聚糖酶II之同系物的類似物編碼，II.含有SEQ ID NO.5所示氨基酸序列或其同源序列，和/或III.與抗來自棘孢曲霉CBS 101.43之純化木聚糖酶抗體有免疫反應(yīng)性。
25.根據(jù)權(quán)利要求18-24中任意的一種制劑，其中的木聚糖酶由分離的單一成分酶制得。
26.根據(jù)權(quán)利要求18-25中任意的一種制劑，其中的木聚糖酶為WO94/21785中的木聚糖酶II。
27.根據(jù)權(quán)利要求18-25中任意的一種制劑，其中的木聚糖酶為WO94/21785中的木聚糖酶I。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的制劑，其中的木聚糖酶是木聚糖酶I粉。
29.根據(jù)權(quán)利要求18-28中任意的一種制劑，含有比活性至少10.000EGU/FVRU的纖維素酶制劑。
30.權(quán)利要求18-29中任意一種制劑用于降低植物材料的粘度。
31.權(quán)利要求18-29中任意一種制劑用于分離谷類植物成分。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的用途，其中的谷類植物包括小麥、大麥、黑麥、燕麥、大米和高梁。
33.根據(jù)權(quán)利要求32的用途，其中的谷類植物是小麥。
34.根據(jù)權(quán)利要求31或33的用途，其中的谷類植物被分成含淀粉的和含蛋白質(zhì)的成分。
35.根據(jù)權(quán)利要求34的用途，其中的谷類植物是被分成“A”淀粉、“B”淀粉和谷蛋白的小麥。
36.根據(jù)權(quán)利要求18-29中的任意一種制劑用于制備β-葡聚糖。
37.權(quán)利要求18-29中的任意一種制劑用于釀酒。
38.權(quán)利要求18-29中的任意一種制劑用于制備動物飼料。
39.根據(jù)權(quán)利要求38的用途，是用于降低動物飼料的粘度。
40.根據(jù)權(quán)利要求38和39的用途，用于改善動物飼料的消化率。
41.根據(jù)權(quán)利要求38或39的用途，用于改善動物飼料的代謝能。
42.根據(jù)權(quán)利要求38-41的任一用途，其中的動物飼料是雞飼料。
43.根據(jù)權(quán)利要求38-41的任一用途，其中的動物飼料是豬飼料。
全文摘要
本發(fā)明涉及減低植物材料粘度的方法，該方法包括用木聚糖酶處理植物材料，所述木聚糖酶具有I.所加入的每毫克蛋白質(zhì)WSPS大于0.06，和/或II.所加入的每毫克蛋白質(zhì)WSPU大于15和/或III.比活性大于0.053FVRU/mg蛋白質(zhì)。而且，本發(fā)明還涉及木聚糖酶制劑用于將植物材料(如小麥)分成有用的成分以及所述粘度降低或分離的方法。
文檔編號A21D6/00GK1144457SQ9519229
公開日1997年3月5日 申請日期1995年2月24日 優(yōu)先權(quán)日1994年3月2日
發(fā)明者T·S·加克森, H·P·海德-哈森, L·V·考夫德, C·巴格爾, A·穆勒茲 申請人:諾沃挪第克公司