專利名稱:大量生產(chǎn)屬于桉樹屬木本植物的無性系植物幼苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種通過組織培養(yǎng)大量生產(chǎn)屬于桉樹屬木本植物的幼苗進(jìn)行造林的方法??蓱?yīng)用于林業(yè),生物,組織培養(yǎng),農(nóng)業(yè)等等。
桉樹如檸檬桉(下文簡稱“E.citriodora”)是起源于澳大利亞并屬于桃金娘科的木本植物。它們主要被用作紙漿原材,取火木材和建筑材料。已知有600多種桉樹屬木本植物品種,其中的一些價值很高,因為它們有極好的基本密度和紙漿產(chǎn)量,而這些是生產(chǎn)紙漿和紙的重要因素。也就是說,屬于桉樹屬的木本植物是很好的紙漿原材和森林資源,具有植樹造林價值。因此在歐洲,南美和東南亞,這些樹已被大量造林。
在那些屬于桉樹屬木本植物中,例如巨桉和赤桉,可容易地通過剪枝繁殖而不需任何設(shè)備。因此在巴西和泰國,通過剪枝、增大產(chǎn)量和改進(jìn)樹的質(zhì)量已生產(chǎn)了有極好特性的這些樹的無性系作為造林的植物幼苗,但是也有一些品種很難通過剪枝繁殖,這些品種的例子包括藍(lán)桉(下文簡單地稱作“E.globulus”),直桿藍(lán)桉,bi-costata桉和檸檬桉,它們是極好的紙漿原材。因此應(yīng)當(dāng)通過種子繁殖進(jìn)行增殖,應(yīng)用樹苗來造林。
在這種情況下,植物幼苗在遺傳上具有較少一致性,這導(dǎo)致個體間生長差異,作為結(jié)果引發(fā)出的問題是(1)總體上只能得到較低的產(chǎn)量,(2)很難估計產(chǎn)量,(3)在生長等方面有極好特性的無性繁殖系,如果有的話,不能繁殖。
因此在用剪枝很難繁殖的這些物種中,急需探索一種具有極好遺傳性并有同源特征的無性系繁殖方法。和剪枝方法一樣,一般都知道所謂的組織培養(yǎng)法可作為樹無性系繁殖的方法,其中植物由植物組織器官中再生。除上文提到的桉樹外,剪枝繁殖主要被廣泛用于針葉樹,如雪松,因為這種繁殖以低成本就易實現(xiàn)。
另一方面,組織培養(yǎng)方法具有優(yōu)點,因為在重復(fù)植物再生前,通過由植物組織器官得到的組織的繼代培養(yǎng),可在有限的地域內(nèi)實現(xiàn)大量繁殖。因此,最近幾年,該方法被積極地研究?,F(xiàn)在,通過組織培養(yǎng)的無性繁殖系的繁殖方法已被應(yīng)用到蘭花,蔬菜等,一些品種已經(jīng)投入實際應(yīng)用。近來也做了努力將這種方法應(yīng)用于樹,據(jù)報導(dǎo)有些植物,例如麻櫟(Quercus acutissima Carr)和白樺(Bet-ula platyphylla),Sukatchev Var.,白樺(japonica Hara.)由此成功再生(Propagation and Breeding of Arboreous Plant,Nogyo Tosho,pp.115-129,pp.157-165,1989)。
然而,在這些樹品種中,植物只能在現(xiàn)期由植物器官再生。也就是說,在實現(xiàn)大量生產(chǎn)體系之前還有很長的路要走。然而在這里應(yīng)該指出,除了通過組織培養(yǎng)的無性系繁殖方法外沒有方法能提供難以用剪枝繁殖的樹的造林用植物幼苗。
通過接著原代培養(yǎng)的組織培養(yǎng)生產(chǎn)植物幼苗的過程包括四個步驟,即芽的繁殖,芽的生長,生根,和水土適應(yīng)。除外情況是,對于一些植物(例如,煙草,胡羅卜,秋海棠,Saintpaulia)可以在一個步驟中簡單實現(xiàn)這些過程,其中繁殖,生長和生根在同種培養(yǎng)基中進(jìn)行,不需要移植。
另一方面,為生產(chǎn)許多其它植物的,特別是樹的植物幼苗,上面提到的每一步驟應(yīng)該完全實施。而且,每一步驟的條件(例如繁殖的條件),在品種和品種間經(jīng)常是不同的,這一點是公認(rèn)的。所有步驟中,大量生產(chǎn)植物幼苗中的最大障礙是由生根至水土適應(yīng)階段,其中生長的芽已經(jīng)生根,并且幼小植物使它們自身適應(yīng)外部的環(huán)境。這些步驟是復(fù)雜和繁瑣的并且需要特定設(shè)備。因此,實踐中通過組織培養(yǎng)大量生產(chǎn)用于造林的植物幼苗的關(guān)鍵點,在于怎樣容易且高效地使其生根并水土適應(yīng)。從這一點出發(fā),已經(jīng)討論了通過直接生根方法節(jié)省勞力和費用,其中生根和水土適應(yīng)作為一步來完成。但是,在植物組織培養(yǎng)基中使其生根,也作為各種細(xì)菌營養(yǎng)源的蔗糖通常被用作碳源。因此,培養(yǎng)物應(yīng)由熟練技術(shù)人員無菌制備。而且因此需要勞力和設(shè)備。偶爾當(dāng)這些組織是非無菌培養(yǎng),則產(chǎn)生問題植物由于細(xì)菌污染而枯萎至死。因此不能得到健壯的植物幼苗。
而且在生根培養(yǎng)物中使用了用瓊脂或gellan gum固化的培養(yǎng)基,生根步驟后需要通過沖洗去除這種固化劑。這一操作引起了其它問題,根須因此被損傷,導(dǎo)致成活植物幼苗的比例降低,同時需要更多的勞動(量)。特別是以紙漿原材為生產(chǎn)目的的造林,需要馬上提供幾萬至幾百萬植物幼苗,盡管植物幼苗數(shù)目根據(jù)要被種植的土地,造林規(guī)模等等需要大的改變。為了通過組織培養(yǎng)方法提供植物幼苗用于造林,因而希望迅速建立植物幼苗的大規(guī)模生產(chǎn)體系,它能實現(xiàn)極高的繁殖效率,涉及較少步驟并在此方法中不需要繁瑣程序。
在這些背景下,本發(fā)明人對屬于桉樹屬木本植物的無性系植物幼苗的大量生產(chǎn)方法進(jìn)行了深入細(xì)致的研究。作為結(jié)果,本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過由屬于桉樹屬木本植物的器官開始,培養(yǎng),誘生聚花芽(multiple shoots),并且重復(fù)繁殖,在一步中非無菌條件下使其生根并水土適應(yīng)而不加任何碳源如蔗糖,因而使植物(即組織培養(yǎng)產(chǎn)物)通過光合作用自己提供所需碳原子,而且使用了能使培養(yǎng)產(chǎn)物與培養(yǎng)基載體一起移植的多孔培養(yǎng)基載體(porous medium support),可實現(xiàn)想要實現(xiàn)的大量生產(chǎn)。本發(fā)明是以這一發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)完成的。
因此,本發(fā)明的一個目的是提供一種屬于桉樹屬木本植物無性系植物幼苗大量生產(chǎn)的方法,它可實現(xiàn)極高繁殖效率,包括較少步驟和不需要繁鎖程序。
本發(fā)明的另一目的是提供一種屬于桉樹屬木本植物無性系植物幼苗的簡便的大量生產(chǎn)法,而常規(guī)方法中要求的所有生根,生根后洗去培養(yǎng)基,水土適應(yīng),移植步驟和每一步驟的麻煩過程,在不需要任何特殊設(shè)備的情況下可被簡化或省略。
本發(fā)明的這些和其它目的可以通過屬桉樹屬木本植物的無性系植物幼苗的大量生產(chǎn)方法來實現(xiàn),其中所述方法包括以下步驟將通過無菌培養(yǎng)其器官產(chǎn)生的大量聚花芽的芽,或者由其種子進(jìn)行無菌培養(yǎng)的芽,移植到多孔培養(yǎng)基載體上,所述可滲透培養(yǎng)基載體用含有無機鹽且不含任何碳源如蔗糖的人工液體培養(yǎng)基浸潤,在存在濕度和二氧化碳?xì)怏w條件下照射,使其非無菌生根和水土適應(yīng)。
現(xiàn)在將更詳細(xì)地描述本發(fā)明。
首先將要說明怎樣由屬于桉樹屬木本植物的器官得到芽。在本發(fā)明中,可用常規(guī)方法得到芽。例如當(dāng)使用戶外培養(yǎng)或生長的桉樹屬木本植物個體為起始原料時,由其枝干得到含有腋生芽的組織用殺菌劑如安替佛民(antiformin)消毒。然后接種到固化培養(yǎng)基中(例如,Murashige-Skoog培養(yǎng)基(1962),T.Murashige和F.Skoog,Physiol.Plant,15431-497,下文中將稱為“MS培養(yǎng)基”),在照射條件下培養(yǎng)以使腋生芽生長。接著將如此生長的腋生芽移植到含有植物生長調(diào)節(jié)劑,例如0.1至1mg/l 6-芐基氨基嘌呤(一種細(xì)胞分裂素)的固體培養(yǎng)基中(例如,MS培養(yǎng)基),在其中培養(yǎng)誘導(dǎo)生成聚花芽?;蛘?,搖動下在液體培養(yǎng)基(例如,含有0.1至1mg/l 6-芐基氨基嘌呤的MS培養(yǎng)基)中培養(yǎng)如此生長的腋生芽以誘導(dǎo)形成大量分生組織(即芽原基),該組織通過移植到例如,含0.1至1mg/l 6-芐基氨基嘌呤的固體培養(yǎng)基中并靜態(tài)培養(yǎng),能分化并生成芽。當(dāng)使用種子為起始材料時,將其接種到合適的固體培養(yǎng)基上,如MS培養(yǎng)基,然后在照射的條件下培養(yǎng)使其萌芽而得到芽株。這樣得到的芽上取下芽尖或含芽尖的組織。通過使用這一組織,用上文描述的相同方法可以生成大量的聚花芽。
下面將詳細(xì)說明本發(fā)明的生根/水土適應(yīng)步驟。將如此得到的芽移植到多孔培養(yǎng)基載體上,該多孔培養(yǎng)基載體被含有無機鹽且不含任何碳源如蔗糖的人工液體培養(yǎng)基浸潤,然后可在其中進(jìn)行生根和水土適應(yīng)。
植物固有地不需要蔗糖作為碳源,因為它們獨立地光合成它。但是,培養(yǎng)組織或培養(yǎng)細(xì)胞一般具有較差的或不具有光合成能力。因此向培養(yǎng)基中加入蔗糖作為所需的碳源以生成在這種組織培養(yǎng)方法中細(xì)胞生長和代謝所必需的碳骨架和能量。然而在本發(fā)明中通過提供二氧化碳(CO2)氣體促進(jìn)了培養(yǎng)組織的光合成,因此不需要蔗糖作碳源。也就是說,本發(fā)明的生根/水土適應(yīng)步驟是在只含有無機鹽和優(yōu)選至少一種維生素的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行的。例如,用含主要基本元素(H,O,N,P,K,S,Ca和Mg)試劑和含7種微量元素(Fe,Mn,Cu,Zn,Mo,B和Cl)的試劑一起適當(dāng)制備人工液體培養(yǎng)基。在本發(fā)明中也能使用由已知成份(例如,MS培養(yǎng)基,Gamborg B5培養(yǎng)基)組成的培養(yǎng)基或?qū)⑦@些培養(yǎng)基稀釋2倍制得的培養(yǎng)基。
無機鹽的例子包括NH4NO3,(NH4)2SO4,KNO3,KCl,K2SO4,CaCl2·2H2O,Ca(NO3)2·4H2O,MgSO4·7H2O,KH2PO4,NaH2PO4·H2O,NaH2PO4·2H2O,F(xiàn)eSO4·7H2O,Na2-EDTA,F(xiàn)eNa-EDTA,F(xiàn)e-EDTA,MnSO4·H2O,MnSO4·4H2O,Na2SO4,ZnSO4·4H2O,ZnSO4·7H2O,CoCl2·6H2O,CuSO4·5H2O,Na2MoO4·2H2O,KI,H3BO3,和MoO3。(EDTA為乙二胺四乙酸)維生素的例子包括煙酸,鹽酸吡哆素,鹽酸硫胺素,肌醇,L-甘氨酸,L-谷氨酰胺,L-天冬酰胺,L-精氨酸,和L-蛋氨酸。
而且下面給出不含蔗糖的MS培養(yǎng)基和Gamborg B5培養(yǎng)基的組成。
培養(yǎng)基組成(mg/l)成份 MS培養(yǎng)基 Gamborg B5培養(yǎng)基NH4NO31,650 0(NH4)2SO40 134KNO31,900 3,000CaCl2·2H2O 440 150MgSO4·7H2O 370 250KH2PO4170 0NaH2PO4·2H2O 0 169.6FeSO4·7H2O 27.80Na2-EDTA 37.3 0FeNa-EDTA 0 40MnSO4·4H2O 22.3 13.2ZnSO4·4H2O 8.60ZnSO4·7H2O 0 2CoCl2·6H2O 0.025 0.025CuSO4·5H2O 0.025 0.025Na2MoO4·2H2O 0.25 0.25KI 0.83 0.75H3BO36.23煙酸0.51鹽酸吡哆素 0.51鹽酸硫胺素 0.110肌醇100100L-甘氨酸2 0在本發(fā)明中,由于不需要在培養(yǎng)基中有蔗糖為碳源,因此不向其中加入蔗糖。作為結(jié)果,有可能使用本領(lǐng)域通常使用的工具進(jìn)行非無菌生根和水土適應(yīng)。本發(fā)明生根步驟使用生長素作為植物生長調(diào)節(jié)劑的例子包括吲哚丁酸(IBA),萘乙酸,吲哚乙酸(IAA)和二氯吲哚乙酸。為了促使生根,以0.01至10mg/l的量向培養(yǎng)基中加入這種物質(zhì)。
用含有無機鹽的人工液體培養(yǎng)基浸潤的多孔培養(yǎng)基載體的例子包括渣棉,果肉,酚醛樹脂,泥炭苔蘚,蛭石和陶瓷纖維。
在植物的組織培養(yǎng)中,一般使用瓊脂,gellan gum等類似物固化的培養(yǎng)基。但在這些培養(yǎng)基中只能得到非常不理想的根生成比。而且由于這些培養(yǎng)基沒有中空,其中,屬于桉樹屬木本植物的小根的生成顯著低劣。而且,當(dāng)這樣生成的植物幼苗被移植入小盆或類似器皿中進(jìn)行水土適應(yīng)時,需要洗掉固化劑如瓊脂,而這一程序會損傷根莖。作為結(jié)果,在這一水土適應(yīng)過程中許多植物枯萎而死。而另一方面,本發(fā)明生根/水土適應(yīng)步驟中,在供有CO2氣體的多孔培養(yǎng)基載體上培養(yǎng)組織,不加入任何蔗糖,因此實現(xiàn)了光自養(yǎng)。所以生成了強健的根和葉上的正常氣孔。而且,這樣得到的植物幼苗可處理成所謂的插入式植物幼苗,它可與培養(yǎng)基載體一起被移植。因此這些植物幼苗可容易地移植到小盆或類似器皿中。而且這樣得到的無性系植物幼苗能極好生長,最后可得到堅硬的桉樹屬木本植物的無性繁殖系植物幼苗。
優(yōu)選生根/水土適應(yīng)步驟是在照明度為1000至6000勒克司的照射條件下進(jìn)行的。當(dāng)照明度小于1000勒克司時,光合成不能充分進(jìn)行,并且發(fā)現(xiàn)有胼胝體生成。另一方面,當(dāng)照明度超過6000勒克司時,生長受到抑制,另外增加了經(jīng)濟損失。另外照射優(yōu)選通過16小時光照期和8小時黑暗期重復(fù)進(jìn)行。因為光合成是在光照期進(jìn)行的,因此優(yōu)選只在光照期將CO2氣體濃度調(diào)節(jié)在下述水平上。因此可加速光合成,并經(jīng)濟地得到壯實的植物幼苗。也優(yōu)選控制溫度至22至26℃,因為桉樹屬木本植物喜好溫和氣候,并且在18至28℃溫度范圍內(nèi)生長良好。
優(yōu)選控制CO2氣體濃度至200至3500ppm。當(dāng)CO2氣體濃度低于200ppm時,沒有充分的光合作用進(jìn)行。另一方面,當(dāng)CO2氣體濃度超過3500ppm,不能再提高光合成水平。偶然,當(dāng)在生根一步中使用了密封培養(yǎng)容器,隨著培養(yǎng)組織生長,容器中CO2氣體濃度低于100ppm或更少,將導(dǎo)致降低光合成能力。因此,通常在稱為異養(yǎng)生物條件下進(jìn)行該步驟,如同時加入碳源如蔗糖。
在生根/水土適應(yīng)步驟中,優(yōu)選調(diào)節(jié)濕度至70至100%高水平。當(dāng)濕度低于70%時,由于旺盛的蒸騰作用,植物常??菸了馈K稍?0%或更高濕度下很好生長。
通過下面的實施例可更詳細(xì)地解釋本發(fā)明,但應(yīng)該認(rèn)為本發(fā)明并不局限于此。
實施例1從檸檬桉成樹(8年)上取當(dāng)年生成的枝,并由其制備含腋生芽的組織。用1%有效氯氣濃度進(jìn)行消毒處理15分鐘后,將這些組織接種到含0.1mg/l 6-芐基氨基嘌呤(BAP)的MS固體培養(yǎng)基中(ge-llan gum=0.25%)。大約一個月后,腋生芽長長,且在一些組織中,長出了新的腋生芽并長長。
將如此長長的這些腋生芽接種到含0.2mg/l BAP的MS固體培養(yǎng)基中(見上述),然后,大約一個月后,生成了聚花芽。以一個月的間期繼代培養(yǎng)繁殖這樣生成的聚花芽。同時這些聚花芽的每一芽繼續(xù)長長。接連剪下這些長長的芽,并種植到用液體培養(yǎng)基濕潤的渣棉塊上,所述液體培養(yǎng)基是用于生根和水土適應(yīng)的,通過將不含蔗糖的MS培養(yǎng)基稀釋2倍,并向其中加入0,0.01,0.02或0.2mg/lIBA而制得的。
在大約2000勒克司(光照期每天16小時)的照射,濕度為80±10%,溫度為24±1℃的條件下,同時調(diào)節(jié)CO2氣體濃度至300±100ppm,非無菌條件進(jìn)行生根和水土適應(yīng)。為了對照,使用含0.02mg/l IBA作為植物生長調(diào)節(jié)劑,除用培養(yǎng)基載體中的gellan gum代替渣棉,或除了不調(diào)節(jié)CO2氣體濃度外,用相同方法進(jìn)行了該過程。
大約2至3星期后,在其中使用了渣棉并調(diào)節(jié)了CO2氣體濃度的試驗地片,發(fā)現(xiàn)生根的比例至少為90%。特別是,在其中使用了含0.1至0.2mg/l IBA液體培養(yǎng)基的地片得到了形態(tài)極好的植物幼苗。大約4周后(從為生根和適應(yīng)水土而培植芽算起),出現(xiàn)根生成的植物幼苗與培養(yǎng)基載體一起移植到裝有土壤的苗圃小盆中,用常規(guī)方法使其在溫室中生長。大約1個月后,這些植物幼苗長至15cm高,可用于造林。
結(jié)果可見下面表1。
表1植物小苗成活比例IBA 培養(yǎng)基載體 被試驗外生根的植 成活的植物植體數(shù)目物幼苗數(shù) 幼苗比例**(mg/l)(%)0渣棉 50 36 720.01 渣棉 50 45 900.02 渣棉 50 49 980.2 渣棉 50 48 960.02*渣棉 50 000.02 gellan gum 50 612*沒有調(diào)節(jié)CO2氣體濃度 如表1所示,在其中調(diào)節(jié)CO2氣體濃度且使用渣棉的被試地塊中,無論加入IBA與否,都可得到超過70%的存活植物幼苗的最終比例。相反,在使用gellan gum培養(yǎng)基的對比地塊中,只能得到大約10%的低的成活植物幼苗比例。而且,在其中未調(diào)節(jié)CO2氣體濃度的對照地塊,發(fā)現(xiàn)沒有根生成,即成活植物幼苗比例為0%。這里所用的術(shù)語“成活植物幼苗比例”是指在生根/水土適應(yīng)這步中,在根生成后移植到苗圃小盆,并使其在溫室中正常生長的植物幼苗(表1中稱為“生根植物幼苗”)與用于生根/水土適應(yīng)步驟的芽(表1中稱為“被試驗外植體”)之間的比率。
當(dāng)如此再生用于造林的植物幼苗在戶外種植時,與籽苗相比,它們更均勻而茁壯地成長。
實施例2將長長的芽從按照實施例1相同的方法得到的聚花芽上剪切下來,并接種到用不含蔗糖的MS培養(yǎng)基浸潤的果肉上,所述MS培養(yǎng)基已被稀釋2倍,含有0.2mg/l IBA。
然后在大約2000勒克司的照射條件下(光照時間每天16小時),并且濕度80±10%,同時調(diào)節(jié)CO2氣體濃度為300±100ppm,在24±1℃溫度下非無菌進(jìn)行生根和水土適應(yīng)。作為結(jié)果,大約2至3周后發(fā)現(xiàn)根生成。生根/水土適應(yīng)步驟開始后大約4周,這些生根的植物幼苗和培養(yǎng)基載體一起移植到苗圃小盆中以常規(guī)方式生長。一個月后,得到15cm高用于造林的植物幼苗。在這種情況下,可得到高達(dá)95%的成活植物幼苗比例。
實施例3從藍(lán)桉成樹(6年)上取當(dāng)年生成的枝,并由其制備含腋生芽的組織。用有效氯氣濃度為1%進(jìn)行消毒處理20分鐘后,將這些組織接種到含0.1mg/l BAP的MS固體培養(yǎng)基中(瓊脂=0.85%)。然后大約一個月后,得到長長的腋生芽。
將這些腋生芽接種到含0.1mg/l BAP的MS固體培養(yǎng)基中(gell-an gum=0.25%)。大約一個月后,由這些芽的基部生出了新鮮的芽,因而形成聚花芽。然后將這樣生成的聚花芽移植到含0.2至1.0mg/l N6-呋喃甲基腺嘌呤的MS固體培養(yǎng)基中(見上文)。以一個月的間隔斷代培養(yǎng)繁殖,同時這些聚花芽的每一芽繼續(xù)長長。隨后,剪切下這些長長的芽,并在泡沫酚醛樹脂塊上(OASISTM,由Ni-ppon Soda Co.Ltd.制造)種植。所述酚醛樹脂塊被向用于生根和水土適應(yīng)的四倍稀釋的不含蔗糖的MS培養(yǎng)基中加入1.0mg/l IBA,0.2,0.5或1.0mg/l 5,6-二氯吲哚乙酸(Cl2-IAA);或10mg/l IAA而制得的液體培養(yǎng)基潤濕而成。
在大約5000勒克司照射下(光照期每天16小時),濕度為80%或更高,同時調(diào)節(jié)CO2氣體濃度至300,1000或3000±100ppm,在24±1℃溫度下非無菌進(jìn)行生根和水土適應(yīng)。為了對照,除不調(diào)節(jié)CO2氣體濃度外,用含有0.2或0.5mg/l Cl2-IAA作為植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基以相同方法進(jìn)行這些程序。
大約4周后,除對照地塊以外的植物芽都生了根。然后將這些植物幼苗與培養(yǎng)基載體一起被移植到含土壤的苗圃盒中并以常規(guī)方式在溫室中生長,一個半月后,其長至20cm高可用于造林。
下面的表2給出結(jié)果。成活植物幼苗比例的含義與實施例1相同。
表2成活植物幼苗比例植物生長調(diào) CO2 被試外 生根植 成活植物節(jié)劑 濃度 植體數(shù) 物幼苗數(shù)幼苗比例**(mg/l) (ppm) (%)IBA 1.0 300 36 13 36IBA 1.0 1000 36 18 50IBA 1.0 3000 36 15 42Cl2-IAA 0.2 300 36 19 53Cl2-IAA 0.2 1000 36 33 92Cl2-IAA 0.2 3000 36 28 78Cl2-IAA 0.5 300 36 18 50Cl2-IAA 0.5 1000 36 35 97Cl2-IAA 0.5 3000 36 26 72Cl2-IAA 1.0 300 36 14 39Cl2-IAA 1.0 1000 36 24 67Cl2-IAA 1.0 3000 36 20 56Cl2-IAA 0.2 * 36 0 0Cl2-IAA 0.5 * 36 0 0IAA 10 300 36 21 58IAA 10 1000 36 27 75IAA 10 3000 36 22 61*沒有調(diào)節(jié)CO2氣體濃度 從表2可清楚地看出,在CO2氣體濃度被調(diào)節(jié)的試驗地塊可得到超過35%的成活植物幼苗比例。與之相反,與上面提到的實施例1相似,在二氧化碳濃度未被調(diào)節(jié)的對照地塊,沒有發(fā)現(xiàn)出根(即成活植物幼苗比例=0%)。
當(dāng)在戶外種植這樣再生的用于造林的植物幼苗時,與籽苗相比,它們更均勻、茁壯地成長。
如上文所討論的,本發(fā)明提供了一種非常方便的桉樹屬樹無性繁殖系植物幼苗的生產(chǎn)方法,簡化或省略了常規(guī)方法中全部需要做的生根,生根后洗去培養(yǎng)基,水土適應(yīng),移植步驟和每一步驟中存在的繁鎖程序,而不需要任何特定設(shè)備。而且,在本發(fā)明中,出現(xiàn)根生成的植物幼苗可容易地與培養(yǎng)基載體一起被移植到苗圃小盆中,在合適的土壤中用與籽苗相同的方法(培養(yǎng))生長。因此,能大量提供具有極好性能的紙漿原材,使本發(fā)明方法從造林角度看具有很高價值。
權(quán)利要求
1.一種大量生產(chǎn)屬于桉樹屬木本植物無性繁植系植物幼苗的方法,其中所述方法包括下面步驟將由無菌培養(yǎng)其器官誘導(dǎo)的大量聚花芽中得到的芽,或由其種子無菌培養(yǎng)的芽,移植到用含有無機鹽而不含任何碳源的人工液體培養(yǎng)基浸潤的多孔培養(yǎng)基載體上,并且在存在濕度和二氧化碳?xì)怏w下照射,使其非無菌生根并水土適應(yīng)。
2.權(quán)利要求1的方法,其中所述多孔培養(yǎng)基載體選自渣棉,酚醛樹脂,果肉,炭碳苔蘚,蛭石和陶瓷纖維組成的組。
3.權(quán)利要求1或2的方法,其中所述生根和水土適應(yīng)是在濕度70至100%,二氧化碳?xì)怏w濃度為200至3500ppm下進(jìn)行的。
全文摘要
一種大量生產(chǎn)桉樹屬木本植物無性繁殖系植物幼苗的方法,該方法由幾步驟組成將由無菌培養(yǎng)其器官誘導(dǎo)出大量聚花芽中得到的芽或由其種子無菌培養(yǎng)的芽移植到用含有無機鹽而不含任何碳源的人工液體培養(yǎng)基浸潤的多孔培養(yǎng)基載體上,并在存在濕度和二氧化碳?xì)怏w的照射條件下,使其非無菌生根并水土適應(yīng)。
文檔編號C12N5/04GK1136390SQ9610145
公開日1996年11月27日 申請日期1996年1月20日 優(yōu)先權(quán)日1995年1月20日
發(fā)明者村上章, 田邊稔明, 清水卓也, 村上邦睦, 田中道男 申請人:日本制紙株式會社