專利名稱：蚯蚓纖溶酶的制取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蚯蚓纖溶酶的制取方法。
已往制取蚯蚓纖溶酶的方法，如中國專利申請?zhí)枮?8101579.2的方法，均須采取冰凍干燥、凝膠電泳、離子交換、透析、層析等高成本的生物化學(xué)手段，生產(chǎn)設(shè)備投資昂貴，生產(chǎn)工藝復(fù)雜，從而使得蚯蚓纖溶酶很昂貴。市場上出現(xiàn)的藥品博洛克、普恩復(fù)口服膠囊，也是應(yīng)用蚯蚓纖溶酶制取的防治血栓疾病的藥品，雖效果較好，但價格昂貴、產(chǎn)量有限，難以滿足市場的需求。
本發(fā)明的目的在于提供一種制造工藝簡單、產(chǎn)品收率高、生產(chǎn)成本低的蚯蚓纖溶酶的制取方法。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的利用腸溶膠囊可進(jìn)入腸道吸收消化這一特點(diǎn)，避開已有技術(shù)為分離純化而采用的一系列高成本的生物化學(xué)手段，選用適用的常規(guī)生物化學(xué)手段，重點(diǎn)是突破了提取液的配制，能夠有效地提制蚯蚓體中的纖溶酶。
蚯蚓纖溶酶本身是一種活性較高的蛋白水解酶，能直接水解纖維蛋白，而人體血管內(nèi)的血栓就是纖維蛋白組成的，所以蚯蚓纖溶酶具有防治血栓的作用；同時，它還能將人體中的纖維蛋白溶酶原激活成纖維蛋白溶酶，從而進(jìn)一步增強(qiáng)了對纖維蛋白的水解作用。
本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)表明，不同的提取液對產(chǎn)品收率有顯著的影響，對產(chǎn)品的活性也有一定的影響，以往的提制方法往往是先將蚯蚓勻漿，加入提取液，提取液采用鹽液或緩沖液，提取時間長達(dá)2-3天，因勻漿過濾流失很多活性物質(zhì)，故產(chǎn)品收率低，活性也不夠高。本發(fā)明的要點(diǎn)在于以潔凈的水為提取液，既不需要除鹽，提取時間僅需一晝夜，活性物質(zhì)收率高，產(chǎn)品活性也高。酶粉的收率可達(dá)2-3％，溶纖活力大于12000國際單位/g，經(jīng)測定該酶的分子量在30000道爾頓左右。
本發(fā)明的具體制法如下1、蚓體凈化將蚯蚓備料洗凈。
2、提制用蒸餾水加防腐劑苯甲酸鈉，直接加入洗凈的5000g無毒餌飼料人工養(yǎng)殖的鮮蚯蚓或洗凈解凍的蚯蚓，其適量百分比為蚯蚓∶水∶苯甲酸鈉＝1∶0.2-1∶1‰-3‰，置于恒溫箱內(nèi)，在20-50℃下保溫提取，溫度過高則酶活性易遭破壞，溫度過低蚯蚓又難于自溶，約24小時后全部蚯蚓即可自溶，比以往的方法省工、省時、自溶更好、收率更高。防腐劑也可以使用山梨醇。
3、分離將蚯蚓自溶液過濾，除去殘?jiān)?、雜物、將濾液離心15-20分鐘，轉(zhuǎn)速為每分鐘3000-4000轉(zhuǎn)，保留上清液，棄去漿狀沉淀物。
4、沉淀將上述上清液加入95％的醫(yī)用酒精，用比重計(jì)測試，將濃度調(diào)整到50-85％，靜置沉淀12小時，虹吸出上清液(可回收其中灑精再用)，將沉淀物加丙酮脫水，攪勻后再離心，除去上清液(可回收其中丙酮再用)，將沉淀物加乙醚脫脂，乙醚揮發(fā)后，最后剩下的淺褐色沉淀物進(jìn)入下道工序。
5、干燥將上述脫水，脫脂后的漿狀沉淀物置于搪瓷盆中攤開，放入真空干燥箱中，在室溫條件下抽真空約35-45分鐘，盆中沉淀物顏色變淺、干燥、取出磨細(xì)，用80-100目篩網(wǎng)過篩，即獲得蚯蚓纖溶酶粉狀產(chǎn)品。經(jīng)檢測分子量約30000，溶纖活力大于10000IU/g。
6、配制膠囊用酶粉1Kg加可溶性淀粉8Kg，可裝制口服膠囊30000粒，每粒膠囊含纖溶酶300國際活性單位以上。
本發(fā)明的產(chǎn)品是易溶于水的淺褐色粉末或類白色粉末，適于配制腸溶片劑或腸溶膠囊，具有防治栓塞性心腦血管疾病的效果。采用本發(fā)明的方法，可以方便、經(jīng)濟(jì)、有效地從蚯蚓體內(nèi)分離出蚯蚓纖溶酶，使以往昂貴的防治血栓疾病藥品得以大批量生產(chǎn)，為人類造福。
下面提供提取液的三個實(shí)施例。
實(shí)施例1蚯蚓5000g，水1500ml，苯鉀酸鈉35g。
實(shí)施例2蚯蚓5000g，蒸餾水2000ml，苯鉀酸鈉45g。
實(shí)施例3蚯蚓5000g，溫開水3000ml，山梨醇50g。
權(quán)利要求
1.一種蚯蚓纖溶酶的制取方法，包括1、蚓體凈化，2、提制，3、分離，4、沉淀，5、干燥，6、配制膠囊，其特征在于提制程序中以水為提制溶劑，使蚯蚓在20-50℃自溶于溶劑中，提取液的配方重量比為蚯蚓∶水∶苯甲酸鈉＝1∶0.2-1∶1‰-3‰。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于提取液的配方重量比為蚯蚓∶水∶山梨醇＝1∶0.2-1∶1‰-3‰。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于將提制、分離后的上清液用乙醇調(diào)整比重至50-85％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制取蚯蚓纖溶酶的方法，采用常規(guī)的蚓體凈化、提制、分離、沉淀、分離、干燥工藝步驟。其特點(diǎn)在于采用純凈的水為提取液，利用蚓體自溶酶自溶于一定溫度范圍的水中，提取液的配方重量比為蚯蚓∶水∶苯甲酸鈉＝1∶0.2-1∶1‰-3‰。本發(fā)明的方法大幅度降低了蚯蚓纖溶酶的生產(chǎn)成本，簡化了生產(chǎn)工藝，同時產(chǎn)品收率高，活性高，分別可達(dá)2.5％以上和12000國際單位/g以上。用這種纖溶酶制取的防治血栓疾病的藥品，具有明顯地防治栓塞性心腦血管疾病的療效。
文檔編號C12N9/68GK1163932SQ9611753
公開日1997年11月5日 申請日期1996年4月26日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月26日
發(fā)明者夏洪萍 申請人:夏洪萍