專利名稱：深層發(fā)酵法生產(chǎn)的冬蟲(chóng)夏草保健營(yíng)養(yǎng)液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開(kāi)了一種深層發(fā)酵法生產(chǎn)的冬蟲(chóng)夏草保健營(yíng)養(yǎng)液，它屬于醫(yī)藥工業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，也屬于保健食品技術(shù)領(lǐng)域，也屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明菌種在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號(hào)為S—W229 CCTCC M94052。
冬蟲(chóng)夏草是一種藥用真菌，屬子囊菌綱，麥角菌科，蟲(chóng)草屬，蟲(chóng)草菌[Cordycepssinensis(Berk)Sacc]，它是一種名貴中藥材，可與人參、鹿茸相媲美。是三大補(bǔ)品之一。冬蟲(chóng)夏草具有藥用功效的最早文字記載是1757年(清乾隆二十二年)吳儀洛所撰寫(xiě)的《本草從新》，它明確指出冬蟲(chóng)夏草具有“保肺益腎，止血化痰已癆嗽”的功效。事實(shí)上，人們?cè)谏顚?shí)踐中將冬蟲(chóng)夏草作為藥用藥材，要比文字記載早得多。藏族同胞早已用它入藥，稱之為“雅扎貢布”，直譯就是冬蟲(chóng)夏草。
冬蟲(chóng)夏草是滋補(bǔ)藥，這早已為人們所知，《本草綱目拾遺》、《文房肆考》中確有關(guān)于冬蟲(chóng)夏草治虛損的記載。冬蟲(chóng)夏草能作為滋補(bǔ)佳品，經(jīng)我國(guó)多年研究證明，它含有18種氨基酸，其中包括人體必需的8種氨基酸，還含有人體造血所必需的維生素B12。這些成份既能治病，也能滋補(bǔ)身體。但是，冬蟲(chóng)夏草真正能治病的有效成份，是經(jīng)現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)鑒定了的冬蟲(chóng)夏草中所含的蟲(chóng)草酸及蟲(chóng)草素等成份，這些成份具有擴(kuò)張氣管、鎮(zhèn)靜、抗多種細(xì)菌、降血壓的功效。據(jù)有關(guān)民間醫(yī)療資料冬蟲(chóng)夏草多用于治療肺結(jié)核、老人畏寒、咳嗽、衰弱、貧血虛弱、遺精陽(yáng)萎、自汗盜汗、腰膝酸痛、神經(jīng)衰弱、病后久虛、咯血吐血、慢性腎炎等癥都獲得很好的效果。
在1960年代初曾有人報(bào)告蛹蟲(chóng)[Cordyceps militaris(L.)Link]的菌絲體培養(yǎng)液中有一種代謝產(chǎn)物——冬蟲(chóng)夏草素(Cordycepin)對(duì)小鼠艾氏腹水癌(EC)及人鼻咽癌細(xì)胞有抑制作用，1979年有人用天然冬蟲(chóng)夏草的提取物對(duì)小鼠艾氏腹水癌進(jìn)行了抗癌試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)此提取物對(duì)EC有明顯的抑制作用。近年，不少人用冬蟲(chóng)夏草的人工培養(yǎng)菌絲體提取物作抗癌作用研究，發(fā)現(xiàn)其具有一定的抗腫瘤作用。
由于冬蟲(chóng)夏草具有多種醫(yī)療和滋補(bǔ)功能，近年來(lái)，人們對(duì)它的需求量越來(lái)越大，且已暢銷世界各地。鑒于野生冬蟲(chóng)夏草分布在海撥3500～4000米的高山草甸的山坡上，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，加之近年來(lái)冬蟲(chóng)夏草資源受到很大的破壞，造成野生冬蟲(chóng)夏草資源嚴(yán)重短缺。據(jù)1941年日本國(guó)小林統(tǒng)計(jì)，冬蟲(chóng)夏草全屬共137種，中國(guó)有26種，全屬中90％以上寄生于昆蟲(chóng)。而這種鱗翅目昆蟲(chóng)要求的生態(tài)環(huán)境苛刻，很難進(jìn)行人工培養(yǎng)，因此，我國(guó)科學(xué)工作者從1960年代起，就開(kāi)始進(jìn)行人工發(fā)酵法培養(yǎng)冬蟲(chóng)夏草的研究工作。有的采用把菌種接種到蝙蝠蛾幼蟲(chóng)上；有的采用動(dòng)物性蛋白朊作培養(yǎng)基的組份，且生產(chǎn)規(guī)模尚小，口服液的口感不理想。
本發(fā)明的目的是為克服冬蟲(chóng)夏草寄生于鱗翅目昆蟲(chóng)要求生態(tài)環(huán)境的苛刻，本發(fā)明擬提出一種人工培養(yǎng)方法，在投料、接種后經(jīng)深層發(fā)酵之產(chǎn)物，其發(fā)酵液即可制成冬蟲(chóng)夏草保健口服液，其菌絲體則能直接加工成高效滋補(bǔ)成品，且在生物工程生產(chǎn)中無(wú)廢物排泄出來(lái)，不污染環(huán)境。在培養(yǎng)基中，擬去掉動(dòng)物性蛋白，用農(nóng)副產(chǎn)品代替動(dòng)物性蛋白。此外，制成的冬蟲(chóng)夏草保健口服液應(yīng)是氣味清香、口感好、包澤乳白的口服液。
為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所采取的技術(shù)措施是發(fā)酵法培養(yǎng)冬蟲(chóng)夏草菌絲體工藝流程包括培養(yǎng)、提取、滅菌、封裝。(1)培養(yǎng)以植物性蛋白朊、黃豆芽汁、葡萄糖、淀粉、復(fù)合氨基酸配制成菌絲體菌種培養(yǎng)基的斜面培養(yǎng)，經(jīng)兩次菌種搖瓶菌種種子培養(yǎng)，再經(jīng)一級(jí)、二級(jí)菌種種子培養(yǎng)，然后在發(fā)酵罐作深層發(fā)酵培養(yǎng)，深層發(fā)酵完畢后實(shí)行放罐，液體和菌絲體可混作為保健營(yíng)養(yǎng)液。(2)提取采用高速冷凍離心，離心速率14000rps/M，離心20分鐘，將發(fā)酵液進(jìn)行過(guò)濾，分別收集冬蟲(chóng)夏草菌絲體和濾液。(3)配制制劑3.1冬蟲(chóng)夏草菌絲體粉劑對(duì)冬蟲(chóng)夏草菌絲體減壓低溫干燥，然后粉碎，獲得粉劑。3.2菌絲體抽取物用包括乙醇的溶劑將活性物質(zhì)腺嘌呤核苷、尿嘧啶等提取出來(lái)。3.3培養(yǎng)基的組成配方其配方為植物性蛋白朊占≥2到7％；黃豆芽汁液占≥0.5到1.2％；淀粉占≥4到6％；葡萄糖占≥4到6％；復(fù)合氨基酸占≥0.1到0.3％；其余為水?？诜＝I(yíng)養(yǎng)液制劑裝入制劑并中經(jīng)滅菌后即封閉而成產(chǎn)品。
與已有技術(shù)相比較，本發(fā)明已達(dá)到的技術(shù)效果本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草保健營(yíng)養(yǎng)液的感觀指標(biāo)為乳白色液體，內(nèi)含有乳白色珠狀菌絲球，呈微甜酸味，無(wú)異味，無(wú)臭味，無(wú)雜質(zhì)。理化指標(biāo)發(fā)酵罐發(fā)酵后離心分離出的上清液，它含腺嘌呤核苷10.09μg/ml，尿嘧啶1.5μg/ml。菌絲體含腺嘌呤核苷7.3μg/g，尿嘧啶3.5μg/g。離心后，上清液含氨基多糖0.47mg/ml，菌絲體含氨基多糖29mg/g。微生物指標(biāo)細(xì)菌總數(shù)(個(gè)/ml)≤100；大腸菌群(個(gè)/100ml)＜3；致病菌，未檢出。質(zhì)量指標(biāo)還原糖≥10mg/ml；氨基酸＞100mg/100ml。理化檢驗(yàn)、微生物檢驗(yàn)按國(guó)家GB標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，還原糖按國(guó)家GB標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)；氨基酸含量為按日立835—50型氨基酸系列分析儀測(cè)定的數(shù)據(jù)。
本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草保健營(yíng)養(yǎng)液，富含多糖、氨基酸，還含有人體造血所需的維生素B12。經(jīng)測(cè)定，本發(fā)明的產(chǎn)品含有組成蛋白質(zhì)成份的18種氨基酸。其中，人體不能自身合成的8種必需的氨基酸含量較高，特別是與兒童智力及體格發(fā)育有關(guān)的平時(shí)被稱為“半必需”的精氨酸及組氨酸，其含量也很高。氨基多糖作為增強(qiáng)免疫能力的物質(zhì)是為試驗(yàn)所證明了的。本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)液含有的多糖中就具有氨基多糖，它是一種理想的溫性緩補(bǔ)劑。
本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草保健營(yíng)養(yǎng)液經(jīng)“食品安全性毒理學(xué)試驗(yàn)”急性毒性試驗(yàn)屬無(wú)毒級(jí)；三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)均為陰性，表明該受試物無(wú)明顯遺傳毒性。經(jīng)“骨髓微核試驗(yàn)”，與對(duì)照組結(jié)果一致為陰性，與陽(yáng)性對(duì)照組比較，差異極顯著(P＜0.01)。經(jīng)“沙門(mén)氏菌/微粒體測(cè)試致突變?cè)囼?yàn)”，評(píng)價(jià)方法為自發(fā)回變數(shù)超過(guò)1倍以上為陽(yáng)性，測(cè)試結(jié)果本受試物菌落回變數(shù)與陰性對(duì)照組比較未超過(guò)1倍，結(jié)果為陰性。“精子畸形試驗(yàn)”結(jié)果與陰性對(duì)照組比較，結(jié)果基本一致。
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說(shuō)明菌種斜面培養(yǎng)基以植物蛋白朊、葡萄糖、淀粉配成斜面培養(yǎng)基。將與保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏的一樣的冬蟲(chóng)夏草菌體進(jìn)行斜面菌種培養(yǎng)，然后經(jīng)500ml和5000ml三角瓶?jī)?nèi)兩次該菌絲體培養(yǎng)，再經(jīng)1001、5001一級(jí)、二級(jí)種子罐內(nèi)，兩次該菌絲體種子培養(yǎng)，接著在5噸發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)該菌絲體，經(jīng)在25—30℃、PH值自然發(fā)酵4～6天，發(fā)酵完畢后，放罐，過(guò)濾，分別收集過(guò)濾液和菌絲體，制成保健營(yíng)養(yǎng)液，經(jīng)滅菌、封裝而成產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.保藏號(hào)為S—W229 CCTCC M94052的深層發(fā)酵法的冬蟲(chóng)夏草菌種，其特征在于它屬于囊菌綱，麥角菌科，冬蟲(chóng)夏草屬，冬蟲(chóng)夏草菌，其拉丁名為Cordyceps Sinensis(Berk)Sacc。
2.一種深層發(fā)酵法生產(chǎn)的冬蟲(chóng)夏草保健營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于本發(fā)明的工藝流程包括培養(yǎng)、提取、滅菌、封裝，先用斜面培養(yǎng)基對(duì)菌絲體斜面培養(yǎng)，經(jīng)兩次菌種搖瓶菌種種子培養(yǎng)，再經(jīng)一級(jí)、二級(jí)菌種罐種子培養(yǎng)，然后在發(fā)酵罐中作深層發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵完畢后，進(jìn)行過(guò)濾、提取，分別收集冬蟲(chóng)夏草菌絲體和濾液，經(jīng)滅菌、封裝而成產(chǎn)品。
3.按權(quán)利要求2所述的冬蟲(chóng)夏草保健營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于菌絲體培養(yǎng)的溫度為≥25到30℃；培養(yǎng)時(shí)間為≥4到6天。
4.按權(quán)利要求2或3所述的冬蟲(chóng)夏草保健營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于本發(fā)明的培養(yǎng)基的配方為植物性蛋白朊占≥2到7％；黃豆芽汁液占≥0.5到1.2％；淀粉占≥4到6％；葡萄糖占≥4到6％；復(fù)合氨基酸占≥0.1到0.3％；其余為水。
5.按權(quán)利要求2所述的冬蟲(chóng)夏草保健營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于a.冷凍離心過(guò)濾的離心轉(zhuǎn)速為14000rps/分，離心時(shí)間20分鐘；b.分離出的冬蟲(chóng)夏草菌絲體，減壓低溫干燥，粉碎后得冬蟲(chóng)夏草菌絲體粉劑；c.菌絲體抽取物，用包括乙醇的溶劑將腺嘌呤核苷和尿嘧啶活性物質(zhì)抽??；d.發(fā)酵完畢后放罐出的液體和菌絲體混制成保健營(yíng)養(yǎng)液。
全文摘要
本發(fā)明涉及了一種經(jīng)國(guó)家典型培養(yǎng)物保藏中心保藏菌種的深層發(fā)酵法生產(chǎn)的冬蟲(chóng)夏草保健營(yíng)養(yǎng)液，它的工藝流程包括培養(yǎng)、提取、滅菌、封裝；冬蟲(chóng)夏草菌絲體經(jīng)斜面培養(yǎng)，經(jīng)兩次菌種搖瓶菌種培養(yǎng)，再經(jīng)一級(jí)、二級(jí)菌種罐培養(yǎng)，然后在發(fā)酵罐中作深層發(fā)酵培養(yǎng)，完畢后進(jìn)行過(guò)濾、提取，分別收集過(guò)濾液和菌絲體，制成冬蟲(chóng)夏草保健營(yíng)養(yǎng)液，滅菌、封裝成產(chǎn)品。它是滋補(bǔ)佳品，含有18種氨基酸，包括人體必需的8種氨基酸。
文檔編號(hào)C12N1/14GK1164571SQ9611970
公開(kāi)日1997年11月12日 申請(qǐng)日期1996年12月13日 優(yōu)先權(quán)日1996年12月13日
發(fā)明者張世偉 申請(qǐng)人:張世偉