專(zhuān)利名稱(chēng)：培養(yǎng)生長(zhǎng)的細(xì)胞組織的可反轉(zhuǎn)的隔板插入件的制作方法
引言本發(fā)明涉及在玻璃器皿內(nèi)生長(zhǎng)細(xì)胞或者細(xì)胞組織的裝置與方法。尤其涉及浸沒(méi)在細(xì)胞組織培養(yǎng)介質(zhì)內(nèi)和/或位于介質(zhì)/氣體界面上的、無(wú)菌的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的相對(duì)面上生長(zhǎng)細(xì)胞組織、細(xì)胞或者細(xì)胞系。
實(shí)驗(yàn)研究需要在具有由多孔隔板分隔的不同細(xì)胞數(shù)目的細(xì)胞組織培養(yǎng)中研究細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用。細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用被認(rèn)為在細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)與演變中極為重要。在胚胎決定過(guò)程中，細(xì)胞與細(xì)胞間的接觸對(duì)于多種的細(xì)胞種類(lèi)是必需的。除胚胎的生長(zhǎng)以外，許多其它細(xì)胞種類(lèi)的生長(zhǎng)與演變也被認(rèn)為是依賴(lài)于細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用。例如，成肌細(xì)胞演變成肌小管被認(rèn)為是取決于未演變細(xì)胞間的接觸。淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)和活化同樣也取決于細(xì)胞與細(xì)胞間的接觸。各種各樣的細(xì)胞種類(lèi)與細(xì)胞組織取決于這些細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用。
雖然不知道為什么細(xì)胞與細(xì)胞間的接觸能引起細(xì)胞生長(zhǎng)的變化，并且細(xì)胞演變研究者們正積極地檢驗(yàn)若干假說(shuō)，希望能夠回答這個(gè)問(wèn)題。已提出了一個(gè)假說(shuō)認(rèn)為作為表面受體或者其它信號(hào)機(jī)理的結(jié)果，其它的細(xì)胞在一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞表面上的接觸導(dǎo)致基因表現(xiàn)中的變化。已提出的另一種假說(shuō)認(rèn)為一個(gè)細(xì)胞在其表面上可能產(chǎn)生一層胞外基質(zhì)，并且該胞外基質(zhì)實(shí)際上接觸第二個(gè)細(xì)胞，這將引起在第二個(gè)細(xì)胞的基因表現(xiàn)中的接著發(fā)生的變化。另外，一些研究者假設(shè)細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用不是這么多地依賴(lài)于細(xì)胞間的實(shí)際接觸，而是依賴(lài)于與由細(xì)胞所產(chǎn)生并釋放給外界環(huán)境的因子的接觸。某些細(xì)胞產(chǎn)生能夠立即在周?chē)h(huán)境中作用的因子，而其它細(xì)胞產(chǎn)生長(zhǎng)期生存并可被傳送至機(jī)體中遠(yuǎn)距離位置上的因子。
近來(lái)，使用了各種研究細(xì)胞與細(xì)胞間相互作用的技術(shù)，其中沒(méi)有一個(gè)是令人完全滿意的，這是因?yàn)樗鼈冃枰罅康膸в形廴疚ｋU(xiǎn)的操作。在一種技術(shù)中，一多孔隔板飄浮在細(xì)胞組織培養(yǎng)介質(zhì)的液槽內(nèi)，并且在其一側(cè)表面上生長(zhǎng)出了第一細(xì)胞種類(lèi)。然后，反轉(zhuǎn)此隔板，于是在其另一側(cè)表面上生長(zhǎng)出了第二細(xì)胞種類(lèi)。但是這種技術(shù)在多種應(yīng)用場(chǎng)合中是不能被接受的，這是因?yàn)槭刮挥诟舭逡粋?cè)表面上的細(xì)胞培養(yǎng)和介質(zhì)與位于隔板另一側(cè)表面上的細(xì)胞培養(yǎng)和介質(zhì)完全隔離是極其重要的。
一種研究其中一組細(xì)胞所釋放的因子引起另一組細(xì)胞變化的細(xì)胞與細(xì)胞間相互作用的常用技術(shù)涉及使用有條件的介質(zhì)。有條件的介質(zhì)是指先潛伏(incubated)在第一組細(xì)胞中一段足夠長(zhǎng)的時(shí)期，以使細(xì)胞具有進(jìn)入介質(zhì)的隱藏因子。第二組細(xì)胞平鋪成低密度的單層，然后該稀少的平鋪的單層細(xì)胞與有條件的介質(zhì)潛伏在一起，以確定細(xì)胞上的因子的影響。此方法的一個(gè)問(wèn)題是由于過(guò)量的操作與延長(zhǎng)的潛伏期所帶來(lái)的污染的危險(xiǎn)。此方法的另一個(gè)問(wèn)題是某些因子只在短時(shí)期內(nèi)有效(一些僅僅只是幾分鐘的問(wèn)題)，于是為了任何的結(jié)果需要與效應(yīng)基因細(xì)胞立即接觸。倘若不可能通過(guò)使用傳統(tǒng)的有條件的介質(zhì)技術(shù)來(lái)研究的話，短時(shí)間存活并且不穩(wěn)定的因子是很困難的。
另一種過(guò)去使用的技術(shù)涉及在兩個(gè)塑料或者金屬環(huán)之間卡緊一隔板，并且將此單元浸沒(méi)在介質(zhì)內(nèi)，以使其浸沒(méi)的深度大于隔板的高度的技術(shù)。在其頂部表面上生長(zhǎng)出了第一細(xì)胞種類(lèi)，于是反轉(zhuǎn)此單元，并且在隔板的相對(duì)表面上生長(zhǎng)出了第二細(xì)胞種類(lèi)。這種技術(shù)時(shí)常碰到的困難是因?yàn)樯L(zhǎng)出的第一細(xì)胞種類(lèi)封閉了多孔隔板，當(dāng)反轉(zhuǎn)此單元以生長(zhǎng)第二細(xì)胞種類(lèi)時(shí)，將形成一氣體阻塞以及在隔板下和卡緊環(huán)內(nèi)部形成相應(yīng)的氣體氣泡。(氣體氣泡將扼殺隔板上的細(xì)胞培養(yǎng)，或者防礙來(lái)自適當(dāng)操作的傳送研究。)為了避免這個(gè)問(wèn)題，某些時(shí)候在卡緊件的側(cè)壁上提供有一個(gè)孔和一孔塞，以便可打開(kāi)該孔以使氣體逸出，然后再用該孔塞封閉該孔，以保持兩種細(xì)胞種類(lèi)間的隔離。這種解決方法仍是不令人滿意的，這是因?yàn)橐鹣潞椭匦卵b上孔塞，并且保持基本無(wú)菌的條件是很困難的，而且要確定是否已排出了所有的氣體也是很困難的。
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種方法與設(shè)備，供使用者在無(wú)菌的條件下、在隔板的兩側(cè)表面上生長(zhǎng)細(xì)胞，以便能夠測(cè)定細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用。
發(fā)明的概述本發(fā)明可簡(jiǎn)單地體現(xiàn)為一生產(chǎn)組件，該組件包括一管形支架，該管形支架在其每端上開(kāi)口，并可靠其任一端豎立在培養(yǎng)池內(nèi)。一其尺寸適于在管形支架內(nèi)滑動(dòng)的框架裝有一諸如多孔的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件之類(lèi)的穿過(guò)其內(nèi)徑的培養(yǎng)保存件，和一環(huán)繞其外徑的密封件。細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件包括一多孔隔板。密封件將框架與支架的內(nèi)表面之間密封，以防止介質(zhì)在框架圓環(huán)周?chē)鷱谋４婕囊粋?cè)流至另一側(cè)?？蚣鼙环胖迷谥Ъ軆?nèi)并靠近其一端，同時(shí)支架靠著那端豎立在池內(nèi)。池內(nèi)的介質(zhì)浸沒(méi)了支架的下方部分和細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的頂和底表面，并且細(xì)胞在其頂表面生長(zhǎng)。當(dāng)一單層細(xì)胞生長(zhǎng)出來(lái)時(shí)，反轉(zhuǎn)支架，并將框架移至支架的相對(duì)端(此時(shí)支架靠其豎立的另一端)。這將使細(xì)胞在細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的另一側(cè)上生長(zhǎng)。
在本發(fā)明的實(shí)施例中提供了一裝配塞規(guī)。該裝配塞規(guī)的尺寸適于將其位于支架內(nèi)并與框架接合，以便該裝配塞規(guī)可將具有細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的框架定位至距離支架靠其豎立的一端一段想要的距離的位置上。還提供一止動(dòng)件裝置以便框架通過(guò)裝配塞規(guī)只可移動(dòng)至一準(zhǔn)確的位置上。在一個(gè)實(shí)施例中，該止動(dòng)件裝置是所提供的呈圓柱形的裝配塞規(guī)，該裝配塞規(guī)在其大于管形支架的直徑的一端上具有一凸緣，而在其另一端上具有其尺寸適于位于管形支架內(nèi)的圓柱體。在另一個(gè)實(shí)施例中，支架在其朝著支架中心向內(nèi)延伸的一端上具有凸塊，框架?？吭谕箟K上。在這個(gè)實(shí)施例中，適合位于管形支架內(nèi)的裝配塞規(guī)能與框架接合，并移動(dòng)框架直至其與凸塊相接觸。提供這種止動(dòng)件裝置是為了使框架移至位于支架另一端的適當(dāng)位置上。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，在支架的每端上具有諸如缺口或者支架腳之類(lèi)的阻礙物(interruption)，該結(jié)構(gòu)能有效地使支架端高于含有介質(zhì)的池表面。這將使介質(zhì)流動(dòng)并使其在細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件下交換。
本發(fā)明的另一個(gè)特點(diǎn)在于支撐著細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的框架可滑出支架外，以便其可在諸如一灌注容器之類(lèi)的裝置中使用或者可作為永久性記錄保存。
本發(fā)明還可用于層狀細(xì)胞的培養(yǎng)以研究細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用。這可通過(guò)在第一細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件上培養(yǎng)細(xì)胞(或者在第一細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的兩側(cè)上培養(yǎng)不同的細(xì)胞)，將具有分離的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的附加框架放入支架內(nèi)，并在附加的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件上生長(zhǎng)單層的細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施例包括用于生長(zhǎng)細(xì)胞組織或者細(xì)胞以便研究細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用的一組件。
通過(guò)下面對(duì)由附圖所示實(shí)施例的詳細(xì)描述可更好的理解和體會(huì)本發(fā)明。
附圖簡(jiǎn)介

圖1是本發(fā)明的一種培養(yǎng)裝置的一個(gè)實(shí)施例的分解圖；圖2是支架座和具有其所裝載的構(gòu)成圖1所示裝置部分的框架的細(xì)胞保存隔板的截面圖；圖3是類(lèi)似于圖2的截面圖，但表示了與裝配零件一起使用的裝配塞規(guī)，以便將細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件定位至支架內(nèi)；圖4是裝配支架和具有安置在培養(yǎng)池內(nèi)的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的框架、以及提供了在細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的上表面的細(xì)胞培養(yǎng)的截面圖；圖5是類(lèi)似于圖4的截面圖，并表示了在培養(yǎng)池內(nèi)反轉(zhuǎn)的支架；圖6是類(lèi)似于圖5的截面圖，但表示了如何使用裝配塞規(guī)將框架和細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件定位至所需的位置，用于在細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的相對(duì)側(cè)面上生長(zhǎng)細(xì)胞。
圖7是一截面圖，表示了在細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的相反側(cè)面上生長(zhǎng)第二種細(xì)胞；圖8a是框架和細(xì)胞保存件的第二個(gè)實(shí)施例的放大的截面圖；圖8b是表示圖8a所示實(shí)施例所希望的優(yōu)越性的支架與支座的示意圖；圖9是本發(fā)明的支架與裝配塞規(guī)的另一個(gè)實(shí)施例的截面圖；圖10是支架內(nèi)具有多個(gè)框架的截面圖；以及圖11是支架內(nèi)具有位于另一個(gè)替換方向上的多個(gè)框架的截面圖。
詳細(xì)的描述圖1所示為本發(fā)明的細(xì)胞組織或者細(xì)胞培養(yǎng)裝置。圖1所示實(shí)施例的設(shè)備的三個(gè)主要零件包括管形支架10、具有呈多孔隔板形狀的細(xì)胞保存件的框架12、以及裝配塞規(guī)16。當(dāng)使用該裝置時(shí)，要將支架10和框架12裝配在一起，同時(shí)使用裝配塞規(guī)以使框架適當(dāng)?shù)囟ㄎ辉谥Ъ軆?nèi)，以便細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件位于培養(yǎng)池底部上方一段想要的距離上，為所敘述的非常低的位置上。
支架10由圓筒側(cè)壁18構(gòu)成，并可由任何具有足夠的強(qiáng)度來(lái)作為液體擋板的材料制成。這種可接受的材料的例子包括熱塑塑料(諸如苯乙烯、熱塑聚碳酸酯、聚酯)和鋁。當(dāng)使用熱塑塑料時(shí)，支架10可由常用的注模技術(shù)制成。支架的每端20和22各具有一支座，該支座包括由缺口26隔開(kāi)的分隔的支座腳24。在如圖所示的實(shí)施例中，雖然在圖中只看到兩個(gè)支座腳，但是每端具有三個(gè)支座腳24。如圖4所示，支座腳將支架支撐在培養(yǎng)池W內(nèi)，而缺口26則提供介質(zhì)流動(dòng)的通道，以便介質(zhì)經(jīng)過(guò)支架10的外部周?chē)鞯娇蚣?2和細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14的下方空間和池W的底壁58的上方，為以下結(jié)合裝置的使用將要詳細(xì)敘述的那樣。每端的支座腳24能夠?qū)⒅Ъ茉谄淙我欢讼蛳碌那闆r下垂直地支撐在池內(nèi)，并且在兩個(gè)位置上，缺口都可使介質(zhì)進(jìn)入到框架12和細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14的下方空間、以及池底壁的上方空間。
框架12也可由諸如苯乙烯之類(lèi)的熱塑塑料或者其它適于進(jìn)行試驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)的材料制成，該框架具有足夠小的外徑，以便其可以方便地滑入支架10內(nèi)?？蚣?2的外角落32可如圖中所建議的那樣倒角，以便于框架插入支架內(nèi)。在框架12的外表面36上具有O形環(huán)座34，該O形環(huán)座裝有一O形環(huán)38，該O形環(huán)在框架周?chē)峁┝嗣芊?，以防止培養(yǎng)介質(zhì)在支架10中從框架的底部向上流至其上表面，并防止給細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14設(shè)旁路。也可以采用其它的密封方式?？蚣艿囊贿?0帶有一小平臺(tái)42，細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件可以固定在該平臺(tái)上?？蚣茏鳛榭稍谥Ъ軆?nèi)軸向滑動(dòng)的支座。在如圖所示的實(shí)施例中，支架基本成圓筒形，而框架呈圓環(huán)形狀。
框架在其中心具有一孔43，該孔自框架的第一邊40延伸至框架的第二邊45。該孔基本成圓筒形。在如圖8a所示的另一個(gè)實(shí)施例中，框架12a的孔43a是傾斜的(beveled)，以至于框架的第一邊40a上的孔的內(nèi)徑小于框架的第二邊45a上的內(nèi)徑。傾斜的孔的好處將在后面描述。
由框架所裝載的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14由任何能支撐細(xì)胞或者細(xì)胞組織的材料制成，基本上與池內(nèi)的介質(zhì)不直接接觸，同時(shí)允許至少被選擇的材料能讓介質(zhì)通過(guò)并與細(xì)胞接觸。這種材料包括微孔隔板、水合凝膠(hydratedgel)、超濾隔板、或者諸如支撐在一個(gè)網(wǎng)(screen)上的凝膠之類(lèi)的層組合物。細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14可為微孔的、軌跡蝕刻的、或者澆注的隔板，并通過(guò)熱封閉、溶解膠合、超聲波焊接、夾緊連接、或者任何其它的方式與框架12相連，這些方式不會(huì)損害細(xì)胞或細(xì)胞組織保存件的性能或者在細(xì)胞或細(xì)胞組織保存件上的細(xì)胞的生長(zhǎng)。細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件可選擇地加工以形成各種各樣的用于細(xì)胞附著的表面。不同的細(xì)胞種類(lèi)優(yōu)先地附著于不同的表面。于是，通過(guò)提供用于細(xì)胞附著的不同表面，在利用不同的表面以研究特殊的細(xì)胞種類(lèi)的結(jié)合性能的情況下，可以操縱和研究細(xì)胞附著的過(guò)程。例如，一種特殊的細(xì)胞種類(lèi)可結(jié)合至一種類(lèi)型的整聯(lián)蛋白，而不會(huì)結(jié)合至另一種類(lèi)型的整聯(lián)蛋白。于是，通過(guò)加工具有不同類(lèi)型的整聯(lián)蛋白的細(xì)胞保存件的表面，在所研究的特殊的細(xì)胞種類(lèi)上表示出的整聯(lián)蛋白受體本體可通過(guò)鑒別與細(xì)胞相互作用的整聯(lián)蛋白的類(lèi)型來(lái)確定。
加工的細(xì)胞保存件的表面可與一特殊種類(lèi)的細(xì)胞相互作用，以便使細(xì)胞附著至表面，或者防止細(xì)胞附著。細(xì)胞保存件的表面可通過(guò)將其表面暴露至具有想要的細(xì)胞附著性能的合成物來(lái)進(jìn)行加工。當(dāng)在這里使用時(shí)，細(xì)胞附著性能術(shù)語(yǔ)(term)包括任何引起細(xì)胞附著至合成物或者防止細(xì)胞附著至該合成物的一合成物的特性。可以使用的合成物的例子包括細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)、整聯(lián)蛋白、以及抗體，但不受此限制。細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)可以是天然的或是合成的。天然的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)包括例如膠原蛋白、層粘連蛋白、以及纖聯(lián)蛋白。合成細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)包括合成模擬和確定的肽。
加工的表面在從含有混合細(xì)胞種類(lèi)的細(xì)胞組織試樣中分離一單細(xì)胞方面也是具有優(yōu)越性的。通常，最好的是從其它的處于混合細(xì)胞組織試樣中的細(xì)胞種類(lèi)中分離出一種細(xì)胞種類(lèi)。倘若想要的細(xì)胞種類(lèi)與那些與它混合的那些細(xì)胞種類(lèi)相比具有不同的結(jié)合性能，可以控制細(xì)胞保存件的表面，以便可選擇地結(jié)合想要的細(xì)胞種類(lèi)而不會(huì)與其它的細(xì)胞種類(lèi)結(jié)合。
也可加工細(xì)胞保存件的表面來(lái)總的提高細(xì)胞的結(jié)合，以便任何的細(xì)胞種類(lèi)可優(yōu)先地結(jié)合至細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件，而不是結(jié)合至裝置的其它部分。這可通過(guò)加工細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件以提供一親水表面，即，通過(guò)化學(xué)或者等離子體(plasma)處理來(lái)完成。
細(xì)胞保存件也可被分為幾個(gè)區(qū)域，每個(gè)區(qū)域由不同的復(fù)合物處理以便在細(xì)胞保存件上形成多種細(xì)胞附著表面，以至于每個(gè)區(qū)域吸引不同種類(lèi)的細(xì)胞。
裝配塞規(guī)16也可由諸如制成裝置其它部分的材料-苯乙烯之類(lèi)的熱塑塑料模制而成。在一個(gè)實(shí)施例中，裝配塞規(guī)包括一柱塞50和具有滾花的外表面53的把手或者凸緣52。把手或者凸緣的直徑大于支架10的內(nèi)徑，并且如圖所示，它還大于支架的外徑。把手52的底部形成一肩部倒角54，通過(guò)支架插入柱塞50，肩部倒角與支架的端部連接，而使框架12及其細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14定位在支架內(nèi)。柱塞50的外徑略小于支架10的內(nèi)徑，以便柱塞可插入支架內(nèi)，并接合框架12將其在支架內(nèi)軸向地推動(dòng)至想要的位置。柱塞的內(nèi)徑最好大于平臺(tái)42的直徑，以便當(dāng)將裝配塞規(guī)插入支架10內(nèi)以定位框架及其細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件時(shí)，柱塞的端頭56不與附著在框架上的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14接觸。如圖3所示，我們可以清楚地看到這種相互關(guān)系。
在圖9所示的另一個(gè)實(shí)施例中，設(shè)置一止動(dòng)件60，在止動(dòng)件中支架62在其一端具有朝著支架的中心向內(nèi)延伸的諸凸塊64，框架12放置在諸凸塊上。在這個(gè)實(shí)施例中，裝配塞規(guī)66具有適合于位于管形支架內(nèi)的形狀，以便其能與框架接合，使它運(yùn)動(dòng)，與支架62的另一端上的凸塊64相接觸。提供該止動(dòng)件裝置60是為了用裝配塞規(guī)將框架僅僅移動(dòng)至準(zhǔn)確的位置上。
在圖4-7中表示了用于在細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的兩側(cè)上培養(yǎng)細(xì)胞或者細(xì)胞組織的裝置的使用方式。在圖4中，由支架10、框架12和細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14組成的組件通過(guò)與池底壁58接觸的支架的端部20上的支座腳24豎放在池W內(nèi)。細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14定位在框架的上側(cè)面上(即位于上側(cè)面40上)，框架放置在靠近支架的下端20?？蚣艿木_位置可通過(guò)使用裝配塞規(guī)16來(lái)確立。細(xì)胞或者細(xì)胞組織試樣附著在細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14的上表面上，并且培養(yǎng)介質(zhì)被提供給位于支架外側(cè)的池W。要小心的是，只能將介質(zhì)提供在支架的外側(cè)上，以便最大程度的減小細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14的下方夾帶氣體的可能性。介質(zhì)將流過(guò)在支座腳24之間的缺口26，支架站立在支座腳上，介質(zhì)濕潤(rùn)細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的下側(cè)面。一旦細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件是濕的，附加的介質(zhì)與細(xì)胞將附著在保存件的上表面上。細(xì)胞將由通過(guò)細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14與其接觸的介質(zhì)以及細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件14的上方的介質(zhì)進(jìn)行培養(yǎng)。這些接近地模擬了在生物體中成長(zhǎng)的正常細(xì)胞和細(xì)胞組織的條件。
如圖8a所示，當(dāng)孔在43a和43b處成錐面時(shí)，細(xì)胞組織和細(xì)胞的培養(yǎng)裝置可放置在一夾帶最少氣體的培養(yǎng)介質(zhì)的池內(nèi)。倘若裝置以一個(gè)角度下降進(jìn)入培養(yǎng)介質(zhì)內(nèi)，這樣孔43b的傾斜的孔壁與培養(yǎng)介質(zhì)11的液面基本平行，于是氣體可逸出并避免被夾帶在細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的下面。如圖8b所示。
一旦細(xì)胞被培養(yǎng)起來(lái)了，具有框架和細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的支架10在池W內(nèi)反轉(zhuǎn)(或者可被放置在一新的池內(nèi))，并且將框架移動(dòng)至支架較低的一端上，如圖5和圖6所示。使用裝配塞規(guī)16可以準(zhǔn)確地確定框架12的位置?？梢赃x擇從肩部倒角54至端頭56所測(cè)的柱塞50的長(zhǎng)度，以達(dá)到想要的框架位置。在拆下裝配塞規(guī)之后，可將第二種試樣提供至細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的新的上表面，并且可向池提供附加的介質(zhì)。位于新的上表面上的試樣最初從細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件來(lái)培養(yǎng)。這種由細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件分隔的兩種細(xì)胞類(lèi)型的分層(layering)模擬了在體內(nèi)所見(jiàn)的條件。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)將細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件定位在框架的一側(cè)上來(lái)最大程度的減小在保存件下夾帶氣體氣泡的可能性。首先細(xì)胞應(yīng)被附著在遠(yuǎn)離框架的孔的細(xì)胞或者細(xì)胞保存件的一側(cè)上。當(dāng)保存件位于框架的孔上方的位置、并且在細(xì)胞增加之前將介質(zhì)從保存件的下方加入時(shí)，由于氣體通過(guò)干燥的保存件逸出，因此可以最大程度的減少夾帶的氣體氣泡。在第一組細(xì)胞在保存件上形成單層之后，可以反轉(zhuǎn)裝置以便朝著孔定位的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的表面朝上，并且能夠?qū)⒌诙M細(xì)胞放置在該表面上。在反向中，框架和細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的表面形成一無(wú)孔的平坦表面。當(dāng)細(xì)胞保存件的平坦表面被裝配塞規(guī)滑入至其與支架上的缺口等高的位置上時(shí)，由于氣體可以通過(guò)缺口逸出，所以防止氣體夾帶在細(xì)胞保存件下方。
當(dāng)在這里使用時(shí)，細(xì)胞術(shù)語(yǔ)包括任何類(lèi)型的細(xì)胞，例如，所建立的細(xì)胞系、原始的培養(yǎng)細(xì)胞、以及分離的細(xì)胞組織。于是，參考用于培養(yǎng)或者保持細(xì)胞的裝置或者部件表明一種與任何這些細(xì)胞或者細(xì)胞組織一起使用的裝置。
通過(guò)使用本發(fā)明的細(xì)胞組織或者細(xì)胞培養(yǎng)裝置和方法可以研究許多細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用。一種細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用是第一細(xì)胞與第二細(xì)胞間的接觸。細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用可以是直接或間接的。一種直接的細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用為第一細(xì)胞的表面與第二細(xì)胞的表面直接接觸。直接的細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用可包括細(xì)胞的遷移(transmigration)，即細(xì)胞的移動(dòng)。一種間接的細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用為第一細(xì)胞與由第二細(xì)胞所產(chǎn)生和釋放的因子相接觸。細(xì)胞的表面包括細(xì)胞膜、任何表面受體或者其它蛋白質(zhì)，以及由細(xì)胞所產(chǎn)生并在細(xì)胞的表面上形成層狀的任何細(xì)胞外基質(zhì)。
細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的細(xì)孔具有可使細(xì)胞與細(xì)胞間發(fā)生相互作用的直徑。細(xì)孔的直徑取決于所要研究的特殊的相互作用，并且通過(guò)本技術(shù)領(lǐng)域中的任一位普通技術(shù)人員即可很容易地確定其直徑。
一旦在隔板的相對(duì)兩側(cè)面上培養(yǎng)起不同種類(lèi)的細(xì)胞，就可以研究細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用的影響?？蚣芸蓮闹Ъ苌喜鹣?，并可按想要的方式來(lái)處理和儲(chǔ)存?？梢酝ㄟ^(guò)電子顯微鏡的觀察能夠研究細(xì)胞的機(jī)理。
本發(fā)明的裝置和方法也可用來(lái)研究細(xì)胞的遷移。一單層的細(xì)胞可以平鋪在隔板的一側(cè)上，然后，第二種的細(xì)胞平鋪在第一種細(xì)胞的頂上。于是，通過(guò)拆下細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件并確定細(xì)胞的位置來(lái)確定細(xì)胞的遷移。
本發(fā)明的細(xì)胞組織或者細(xì)胞培養(yǎng)方法與設(shè)備可使用上述的一單個(gè)框架12，或者可使用如圖10和圖11所示的多個(gè)框架67?？墒褂玫目蚣?7的最多數(shù)量為總高度等于或小于支架68的高度的數(shù)量，并取決于所使用的單個(gè)框架的高度?？蚣?7可以定位在支架68內(nèi)，這樣一個(gè)框架的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件可以相對(duì)其它框架的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件處于不同的取向。如圖10所示，第一框架69的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件70與第二框架72的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件可以相鄰，或者另外如圖11所示，第一框架69的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件70與第二框架72的另一端73可以相鄰，以便兩個(gè)框架上的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件70和71隔開(kāi)相當(dāng)于一個(gè)框架高度的距離。
在另一個(gè)實(shí)施例中提供了一組用于在培養(yǎng)池中培養(yǎng)細(xì)胞組織或者細(xì)胞的組件。該組件包括一管形支架，并至少包括適合位于支架之中并具有一其上具有大量細(xì)孔的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的第一框架。細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件的細(xì)孔具有可使細(xì)胞與細(xì)胞間發(fā)生相互作用的直徑。細(xì)孔的直徑取決于所要研究的具體的相互作用，并且通過(guò)本技術(shù)領(lǐng)域中的一位普通的技術(shù)人員即可很容易地確定其直徑。
該組件也可選擇地包括一電子顯微鏡緩沖檢測(cè)(assay)系統(tǒng)。電子顯微鏡緩沖檢測(cè)系統(tǒng)包括在一已培養(yǎng)出的細(xì)胞的細(xì)胞或者細(xì)胞組織保存件上工作所必需的緩沖劑，而具體的組成對(duì)于那些本技術(shù)領(lǐng)域的熟練人員而言是已知的。例如，試劑可包括磷酸緩沖鹽(PBS)、在二甲胂酸鹽緩沖劑中的仲甲醛/戊二醛、四氧化鋨、以及一系列不同等級(jí)的乙醇。
鑒于上述，那些本技術(shù)領(lǐng)域中的熟練人員將意識(shí)到本發(fā)明的許多優(yōu)點(diǎn)，并且同時(shí)將意識(shí)到在不脫離本發(fā)明的精神的情況下，可對(duì)本發(fā)明的所示實(shí)施例進(jìn)行修改。因此，本發(fā)明的范圍不受如圖所示或者所述內(nèi)容的限制，而是由附加的權(quán)項(xiàng)及其等效權(quán)項(xiàng)來(lái)確定其范圍。
權(quán)利要求
1.一種放置在一培養(yǎng)池內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，包括一具有一內(nèi)表面的支架，所述內(nèi)表面構(gòu)成了一至少部分地通過(guò)所述支架延伸的腔，所述支架具有連通所述腔的第一和第二開(kāi)口；至少一個(gè)具有一適合位于所述腔內(nèi)的外表面的框架，所述至少一個(gè)框架具有第一側(cè)面和第二側(cè)面，并且所述框架適于放置在第一和第二開(kāi)口之間；連接在所述至少一個(gè)框架和所述支架內(nèi)表面之間的密封件，所述密封件可以防止培養(yǎng)介質(zhì)在所述框架和所述支架內(nèi)表面之間流動(dòng)；以及一固定在用于保存細(xì)胞的所述框架的第一側(cè)面上的細(xì)胞保存件。
2.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述至少一個(gè)框架適于在腔內(nèi)、在靠近于所述支架的第一開(kāi)口的第一位置與靠近于所述支架的第二開(kāi)口的第二位置之間滑動(dòng)。
3.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述支架具有位于第一端上的第一支座和位于第二端上的第二支座，所述第一支座和第二支座都適于支撐所述細(xì)胞培養(yǎng)裝置，以便所述細(xì)胞培養(yǎng)裝置可以靠其第一端或者第二端豎立在所述培養(yǎng)池內(nèi)。
4.如權(quán)利要求3所述的裝置，其特征在于，所述第一和第二支座都具有至少一個(gè)用于連通所述腔的缺口。
5.如權(quán)利要求2所述的裝置，其特征在于，所述支架具有位于第一端上的第一支座和位于第二端上的第二支座，所述第一支座和第二支座都適于支撐所述細(xì)胞培養(yǎng)裝置，以便所述細(xì)胞培養(yǎng)裝置可以靠其第一端或者第二端豎立在所述培養(yǎng)池內(nèi)。
6.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，還包括一裝配塞規(guī)，所述裝配塞規(guī)具有一適于容納在所述腔內(nèi)、并接合所述框架以便所述框架可相對(duì)于所述支架的第一和第二開(kāi)口滑動(dòng)地定位的柱塞。
7.如權(quán)利要求6所述的裝置，其特征在于，還包括一止動(dòng)件，所述止動(dòng)件放置在支架的所述腔內(nèi)，并適于接合所述框架同時(shí)防止所述框架滑出所述止動(dòng)件。
8.如權(quán)利要求6所述的裝置，其特征在于，所述柱塞具有一內(nèi)腔，所述內(nèi)腔的直徑大于所述細(xì)胞保存件的直徑。
9.如權(quán)利要求2所述的裝置，其特征在于，還包括一裝配塞規(guī)，所述裝配塞規(guī)具有一適于容納在所述腔內(nèi)、并接合所述框架以便所述框架可相對(duì)于所述支架的第一和第二開(kāi)口滑動(dòng)地定位的柱塞。
10.如權(quán)利要求3所述的裝置，其特征在于，還包括一裝配塞規(guī)，所述裝配塞規(guī)具有一適于容納在所述腔內(nèi)、并接合所述框架以便所述框架可相對(duì)于所述支架的第一和第二開(kāi)口滑動(dòng)地定位的柱塞。
11.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述腔基本呈圓筒形，而所述框架呈圓環(huán)形。
12.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述框架、所述細(xì)胞保存件和所述密封件將所述腔分成兩個(gè)液室。
13.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述框架具有一內(nèi)表面，所述內(nèi)表面構(gòu)成一從位于所述框架第一側(cè)面上的第一開(kāi)口延伸至位于所述框架的第二側(cè)面上第二開(kāi)口的孔，以便所述細(xì)胞保存件可至少部分地越過(guò)所述第一開(kāi)口放置。
14.如權(quán)利要求13所述的裝置，其特征在于，所述孔是傾斜的。
15.如權(quán)利要求14所述的裝置，其特征在于，所述孔在所述框架第一側(cè)面上的直徑小于其在所述框架第二側(cè)面上的直徑。
16.如權(quán)利要求3所述的裝置，其特征在于，所述框架具有一內(nèi)表面，所述內(nèi)表面構(gòu)成一從位于所述框架第一側(cè)面上的第一開(kāi)口延伸至位于所述框架的第二側(cè)面上第二開(kāi)口的孔，在那里，所述細(xì)胞保存件可至少部分地越過(guò)所述第一開(kāi)口放置。
17.如權(quán)利要求12所述的裝置，其特征在于，所述密封件和所述細(xì)胞保存件防止細(xì)胞從兩個(gè)隔開(kāi)的液室中的一個(gè)液室進(jìn)入至另一個(gè)液室。
18.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述細(xì)胞保存件是親水性的。
19.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述框架的高度基本小于支架的高度。
20.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述至少一個(gè)框架包括第一和第二框架。
21.如權(quán)利要求20所述的裝置，其特征在于，定向所述第二框架，以便所述第二框架的第一側(cè)面靠近所述第一框架的第一側(cè)面。
22.如權(quán)利要求20所述的裝置，其特征在于，定向所述第二框架，以便所述第二框架的第一側(cè)面靠近所述第一框架的第二側(cè)面。
23.如權(quán)利要求20所述的裝置，其特征在于，定向所述第二框架，以便所述第二框架的第二側(cè)面靠近所述第一框架的第二側(cè)面。
24.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述至少一個(gè)框架包括至少三個(gè)框架。
25.一種在細(xì)胞保存件的至少一側(cè)面上培養(yǎng)細(xì)胞的方法，所述方法包括下列步驟(A)將所述細(xì)胞保存件固定至一支撐框架；(B)將所述支撐框架放置在支架腔內(nèi)的第一位置上；(C)將所述支架放入適于容納培養(yǎng)介質(zhì)的池內(nèi)，以便所述支架由其第一端支撐；(D)將所述支架從所述池中拆下；(E)將所述框架的位置調(diào)節(jié)至第二位置；以及(F)將所述支架放入所述池內(nèi)，以便所述支架由其第二端支撐。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于，步驟(C)包括下列步驟在將所述培養(yǎng)介質(zhì)加入至池內(nèi)之前，要先將所述支架放入所述池內(nèi)；將所述培養(yǎng)介質(zhì)加入至池內(nèi)；以及使位于所述細(xì)胞保存件下方的腔內(nèi)的氣體通過(guò)所述細(xì)胞保存件逸出。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，步驟(B)包括將所述支撐框架放置在支架的腔內(nèi)，所述支架具有至少一個(gè)連通所述腔的缺口，在那里，將所述培養(yǎng)介質(zhì)加入至池內(nèi)的步驟包括將所述培養(yǎng)介質(zhì)加入到所述池和所述支架之間。
28.如權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于，步驟(E)包括下列步驟使用一裝配塞規(guī)來(lái)將所述框架的位置調(diào)節(jié)至第二位置。
29.如權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于，步驟(E)包括下列步驟使用一具有一內(nèi)腔的裝配塞規(guī)來(lái)將所述框架的位置調(diào)節(jié)至第二位置，所述裝配塞規(guī)內(nèi)腔的直徑大于所述細(xì)胞保存件的直徑。
30.如權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于，步驟(A)包括將所述細(xì)胞保存件固定至一框架內(nèi)，所述框架具有一構(gòu)成一傾斜的孔的斜壁，以便所述細(xì)胞保存件至少部分地越過(guò)所述傾斜的孔，并且步驟(C)包括下列步驟將所述培養(yǎng)介質(zhì)加入至池內(nèi)；以及將所述支架以一角度放入所述培養(yǎng)介質(zhì)內(nèi)，以便所述框架的斜壁基本平行于所述培養(yǎng)介質(zhì)的液面。
31.如權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于，步驟(B)包括將所述框架放置在支架的腔內(nèi)的步驟，所述支架具有延伸進(jìn)入所述腔內(nèi)的止動(dòng)件，并且步驟(E)包括下列步驟在所述腔內(nèi)滑動(dòng)所述支撐框架，直到所述支撐框架接觸到止動(dòng)件。
32.一種在細(xì)胞保存件的至少一側(cè)面上培養(yǎng)細(xì)胞的方法，所述方法包括下列步驟(A)將所述細(xì)胞保存件固定至一支撐框架；(B)將所述支撐框架放置在一支架的腔內(nèi)；(C)在所述腔內(nèi)滑動(dòng)所述支撐框架，直到所述支撐框架被放置到所述腔內(nèi)的所要的第一位置上；以及(D)將所述支架放入能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)介質(zhì)內(nèi)。
33.如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，步驟(D)包括下列步驟在將所述培養(yǎng)介質(zhì)加入至池內(nèi)之前，要先將所述支架放入所述池內(nèi)，以便所述支架由第一端支撐；將所述培養(yǎng)介質(zhì)加入至池內(nèi)；以及使位于所述細(xì)胞保存件下方的腔內(nèi)的氣體通過(guò)所述細(xì)胞保存件逸出。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其特征在于，步驟(D)還包括下列步驟將所述支架從所述池內(nèi)拆下；將所述框架滑動(dòng)至位于所述支架的腔內(nèi)的所要的第二位置上；以及將所述支架放入所述池內(nèi)，以便所述支架由第二端支撐。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其特征在于，步驟(A)包括將所述支撐框架放置在支架的腔內(nèi)，所述支架具有至少一個(gè)連通所述腔的缺口的步驟，并且所述方法還包括下列步驟在所述腔內(nèi)滑動(dòng)所述框架，直到所述框架被放置到靠近至少一個(gè)缺口的所述支架的第二端上。
36.如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，步驟(C)包括下列步驟使用一裝配塞規(guī)來(lái)將所述框架滑動(dòng)至位于所述支架的腔內(nèi)的所要的第一位置上。
37.如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，步驟(C)包括下列步驟使用一具有一內(nèi)腔的裝配塞規(guī)來(lái)將所述框架滑動(dòng)至位于所述支架的腔內(nèi)的所要的第一位置上，所述裝配塞規(guī)內(nèi)腔的直徑大于所述細(xì)胞保存件的直徑。
38.如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，步驟(A)包括將所述細(xì)胞保存件固定至一框架，所述框架具有一構(gòu)成一傾斜的孔的斜壁，以便所述細(xì)胞保存件至少部分地越過(guò)所述傾斜的孔，并且步驟(D)包括下列步驟將所述培養(yǎng)介質(zhì)加入至池內(nèi)；以及將所述支架以一角度放入所述培養(yǎng)介質(zhì)內(nèi)，以便所述框架的斜壁基本平行于所述培養(yǎng)介質(zhì)的液面。
39.如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，步驟(B)包括將所述框架放置在支架的腔內(nèi)的步驟，所述支架具有延伸進(jìn)所述腔內(nèi)的止動(dòng)件，并且步驟(C)包括下列步驟在所述腔內(nèi)滑動(dòng)所述框架，直到所述框架接觸到止動(dòng)件。
40.一種在第一和第二細(xì)胞保存件上培養(yǎng)細(xì)胞的方法，所述方法包括下列步驟(A)將所述第一和第二細(xì)胞保存件分別由第一和第二支撐框架支撐；(B)將所述第一和第二支撐框架放置在一支架的腔內(nèi)；以及(C)將所述支架放入可促進(jìn)位于所述第一和第二細(xì)胞保存件上的細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)介質(zhì)內(nèi)。
41.如權(quán)利要求40所述的方法，其特征在于，步驟(B)包括下列步驟在所述腔內(nèi)滑動(dòng)所述第一和第二支撐框架，直到所述第一和第二支撐框架的每一個(gè)都被放置到相對(duì)于所述支架所要的位置上。
42.如權(quán)利要求41所述的方法，其特征在于，滑動(dòng)所述第一和第二支撐框架的步驟包括下列步驟使用一裝配塞規(guī)來(lái)將所述第一和第二支撐框架滑動(dòng)至位于所述支架的腔內(nèi)的所要的位置上。
43.如權(quán)利要求41所述的方法，其特征在于，滑動(dòng)所述第一和第二支撐框架的步驟包括下列步驟使用一具有一內(nèi)腔的裝配塞規(guī)來(lái)將所述第一和第二支撐框架滑動(dòng)至位于所述支架的腔內(nèi)的所要的位置上，所述裝配塞規(guī)內(nèi)腔的直徑大于所述第一細(xì)胞保存件的直徑。
44.如權(quán)利要求40所述的方法，其特征在于，步驟(C)包括下列步驟在將所述培養(yǎng)介質(zhì)加入至池內(nèi)之前，要先將所述支架放入所述池內(nèi)；將所述培養(yǎng)介質(zhì)加入至池內(nèi)；以及當(dāng)所述培養(yǎng)介質(zhì)流入所述腔內(nèi)時(shí)，位于所述第一和第二細(xì)胞保存件下方的腔內(nèi)的氣體通過(guò)所述第一和第二細(xì)胞保存件逸出。
45.如權(quán)利要求40所述的方法，其特征在于，步驟(B)包括下列步驟定位所述第一和第二框架，以便所述第一細(xì)胞保存件與所述第二細(xì)胞保存件相接觸。
46.一種在細(xì)胞保存件的至少一側(cè)面上培養(yǎng)細(xì)胞的方法，所述方法包括下列步驟(A)提供一具有一內(nèi)表面的支撐框架，所述框架的內(nèi)表面構(gòu)成一從位于所述支撐框架的第一表面上的第一開(kāi)口延伸至位于所述支撐框架的第二表面的第二開(kāi)口上的孔，所述支撐框架構(gòu)成所述孔至少具有一傾斜的側(cè)壁，以便所述第一開(kāi)口的直徑小于所述第二開(kāi)口的直徑；(B)將所述細(xì)胞保存件放置在所述支撐框架的第一表面上，以便所述細(xì)胞保存件至少部分地越過(guò)所述第一開(kāi)口放置；以及(C)在所述支撐框架的第二表面較其第一表面先進(jìn)入所述培養(yǎng)介質(zhì)、并且相對(duì)于所述培養(yǎng)介質(zhì)的液面以一大于零的角度放置所述第二開(kāi)口的情況下，將所述支撐框架插入至培養(yǎng)介質(zhì)的一池內(nèi)，以便氣體不會(huì)滯留在所述孔內(nèi)，從而所述培養(yǎng)介質(zhì)促進(jìn)位于所述細(xì)胞保存件上的細(xì)胞生長(zhǎng)。
47.如權(quán)利要求46所述的方法，其特征在于，步驟(C)包括下列步驟將所述支撐框架放置在支架的腔內(nèi)，并將所述支架插入至培養(yǎng)介質(zhì)的池內(nèi)以便所述支架由第一端支撐。
48.如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，步驟(C)包括下列步驟在所述腔內(nèi)滑動(dòng)所述支撐框架，直到所述支撐框架被放置到相對(duì)于所述支架所要的位置上。
49.如權(quán)利要求48所述的方法，其特征在于，步驟(C)包括下列步驟使用一裝配塞規(guī)來(lái)將所述框架滑動(dòng)至位于所述支架的腔內(nèi)的所要的位置上。
50.如權(quán)利要求48所述的方法，其特征在于，步驟(C)包括下列步驟使用一具有一內(nèi)腔的裝配塞規(guī)來(lái)將所述框架滑動(dòng)至位于所述支架的腔內(nèi)的所要的位置上，所述裝配塞規(guī)內(nèi)腔的直徑大于所述細(xì)胞保存件的直徑。
51.如權(quán)利要求48所述的方法，其特征在于，步驟(C)包括將所述框架放置在支架的腔內(nèi)，所述支架具有一延伸進(jìn)入所述腔內(nèi)的止動(dòng)件，并且所述方法還包括下列步驟在所述腔內(nèi)滑動(dòng)所述框架，直到所述框架接觸到所述止動(dòng)件。
52.如權(quán)利要求48所述的方法，其特征在于，步驟(C)還包括下列步驟將所述支架從池內(nèi)拆下；將所述框架滑動(dòng)至位于所述支架的腔內(nèi)的所要的第二位置上；以及將所述支架放入池內(nèi)，以便所述支架由第二端支撐。
53.一種在一培養(yǎng)池內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞的組件，包括一具有一內(nèi)表面的支架，所述內(nèi)表面構(gòu)成一至少部分地穿過(guò)所述支架延伸的腔，所述支架具有連通所述腔的第一和第二開(kāi)口；至少一個(gè)具有一適合位于所述腔內(nèi)的外表面的框架，所述至少一個(gè)框架具有第一側(cè)面和第二側(cè)面，并且所述框架適于放置在第一和第二開(kāi)口之間；一固定至所述框架的第一側(cè)面、用于保存細(xì)胞的細(xì)胞保存件；以及一裝配塞規(guī)，所述裝配塞規(guī)具有一適于容納在所述腔內(nèi)、并接合所述框架以便所述框架可相對(duì)于所述支架的第一和第二開(kāi)口滑動(dòng)地定位的柱塞。
54.如權(quán)利要求53所述的組件，其特征在于，所述至少一個(gè)框架和所述支架的內(nèi)表面通過(guò)一密封件相連，以防止培養(yǎng)介質(zhì)在所述框架和所述支架內(nèi)表面間流動(dòng)。
55.如權(quán)利要求53所述的組件，其特征在于，所述支架具有位于第一端上的第一支座和位于第二端上的第二支座，所述第一支座和第二支座都適于支撐所述支架，以便所述支架可以靠其第一端或者第二端豎立在所述培養(yǎng)池內(nèi)。
56.如權(quán)利要求53所述的組件，其特征在于，還包括一止動(dòng)件，所述止動(dòng)件放置在所述支架的腔內(nèi)，并適于接合所述框架，同時(shí)防止所述框架滑出所述止動(dòng)件。
57.如權(quán)利要求53所述的組件，其特征在于，所述柱塞具有一內(nèi)腔，所述內(nèi)腔的直徑大于所述細(xì)胞保存件的直徑。
58.如權(quán)利要求53所述的組件，其特征在于，所述框架具有一內(nèi)表面，所述內(nèi)表面構(gòu)成一從位于所述框架第一側(cè)面上的第一開(kāi)口延伸至位于所述框架的第二側(cè)面上第二開(kāi)口的孔，以便所述細(xì)胞保存件可至少部分地越過(guò)所述第一開(kāi)口放置。
59.如權(quán)利要求58所述的組件，其特征在于，所述孔是傾斜的。
60.如權(quán)利要求53所述的組件，其特征在于，所述細(xì)胞保存件具有細(xì)孔，所述細(xì)孔直徑的大小以便于位于第一表面上的第一細(xì)胞試樣可與位于第二表面上的第二細(xì)胞試樣相互作用，并產(chǎn)生細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用。
61.如權(quán)利要求53所述的組件，其特征在于，還包括一電子顯微鏡緩沖檢測(cè)系統(tǒng)。
62.一種在細(xì)胞保存件的至少一側(cè)面上培養(yǎng)細(xì)胞的方法，所述方法包括下列步驟(A)將所述細(xì)胞保存件固定至一支撐框架；(B)將所述支撐框架放置在一具有一開(kāi)口的支架的腔內(nèi)；(C)將所述支架放入一無(wú)培養(yǎng)介質(zhì)的池內(nèi)；以及(D)將所述培養(yǎng)介質(zhì)加入至所述池內(nèi)，以便所述培養(yǎng)介質(zhì)可通過(guò)所述支架內(nèi)的開(kāi)口流入所述腔內(nèi)，并接觸到所述細(xì)胞保存件的表面。
63.如權(quán)利要求62所述的方法，其特征在于，步驟(B)包括將所述框架放置到所述支架的腔內(nèi)，所述支架具有第一支座，所述第一支座具有至少一個(gè)構(gòu)成所述開(kāi)口的缺口，步驟(C)包括放入所述支架以便所述第一支座接合所述池，步驟(D)包括下列步驟將培養(yǎng)介質(zhì)加入到位于所述池與所述支架之間的池內(nèi)。
64.如權(quán)利要求63所述的方法，其特征在于，還包括下列步驟將細(xì)胞通過(guò)所述支架的腔加入至所述細(xì)胞保存件。
65.如權(quán)利要求63所述的方法，其特征在于，將所述框架滑動(dòng)至所述第二所要的位置上的步驟包括下列步驟使用一裝配塞規(guī)來(lái)將所述框架滑動(dòng)至位于所述支架的腔內(nèi)的第二所要的位置上。
66.如權(quán)利要求63所述的方法，其特征在于，將所述框架滑動(dòng)至所述第二所要的位置上的步驟包括下列步驟使用一具有一內(nèi)腔的裝配塞規(guī)來(lái)將所述框架滑動(dòng)至位于所述支架的腔內(nèi)的第二所要的位置上，所述裝配塞規(guī)內(nèi)腔的直徑大于所述細(xì)胞保存件的直徑。
全文摘要
在一隔板的兩側(cè)上培養(yǎng)細(xì)胞組織或者細(xì)胞的裝置與方法,該裝置包括一可靠其任一端豎立在培養(yǎng)池內(nèi)的圓筒形支架。一框架可滑動(dòng)地安裝在支架內(nèi),并帶有一隔板,細(xì)胞組織或者細(xì)胞生長(zhǎng)在該隔板的兩側(cè)面上。一種細(xì)胞組織或者細(xì)胞試樣被放置在隔板的上表面上,并且介質(zhì)被放入位于支架外側(cè)的池內(nèi)。位于支架底部的通道使介質(zhì)流至隔板,并培養(yǎng)試樣以使其生長(zhǎng)。當(dāng)?shù)谝粚蛹?xì)胞生長(zhǎng)時(shí),反轉(zhuǎn)隔板,并將框架推入至支架的另一端,最好是借助于一裝配塞規(guī)來(lái)達(dá)到此目的。將第二細(xì)胞試樣放置在隔板的另一側(cè)面,再放置在隔板的頂部,于是該第二細(xì)胞試樣由首先來(lái)自頂部池內(nèi)的并其次通過(guò)隔板的介質(zhì)來(lái)培養(yǎng)。
文檔編號(hào)C12N5/06GK1192233SQ96195999
公開(kāi)日1998年9月2日 申請(qǐng)日期1996年8月3日 優(yōu)先權(quán)日1995年8月3日
發(fā)明者格雷戈里·馬圖斯 申請(qǐng)人:康寧科斯塔有限公司