專利名稱：幾丁聚糖－幾丁質(zhì)保健食品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及保健食品，具體地說是指幾丁聚糖-幾丁質(zhì)在機(jī)能性保健食品上的應(yīng)用，即提供幾丁聚糖-幾丁質(zhì)保健食品。
目前市面上保健食品種類繁多，概括起來主要有五大類第一類為一般性健康食品，如綠藻、蜂王漿、人參、豆乳、健康茶、蜂蜜、小麥胚牙油、燕麥片等。第二類為自然食品，如粗糧、有機(jī)蔬菜、海草類、水果類、礦物質(zhì)。第三類為降糖降脂類食品，如低鹽食品、低糖食品、低膽固醇食品、新減肥甜味料、孵磷脂。第四類為營養(yǎng)強(qiáng)化食品，如維生素E、Ca及多種維生素、微量元素強(qiáng)化食品。第五類為新型健康食品，如運(yùn)動(dòng)飲料、雙叉桿菌飲料、乳酸菌飲料。以上產(chǎn)品大部分用于補(bǔ)充人體對(duì)某種營養(yǎng)的缺乏，只有少數(shù)保健食品屬于功能性食品，如人參蜂王漿及雙叉桿菌乳菌飲料等。蜂王漿具有延緩衰老的功能，但是含有一定的雌性激素，不適合兒童食用，且活性物質(zhì)需在-18℃的冰箱中保存，否則易變性。以雙叉桿菌、乳酸菌為原料的三株口服液等飲料，有調(diào)節(jié)人體機(jī)能，改善人體內(nèi)部環(huán)境的功能，但主要活性物質(zhì)雙叉桿菌，其活性很難保持，由于以上原因，使其功效受到很大影響。因此急需開發(fā)新的機(jī)能性健康食品資源，對(duì)于此類產(chǎn)品，要求其活性物質(zhì)的理化性狀要穩(wěn)定，不含或盡量少含激素物質(zhì)，沒有極端化學(xué)反應(yīng)，是純天然、多功能的保健食品。幾丁聚糖-幾丁質(zhì)可以說是一種理想的保健食品資源，它的特性符合上述的條件。
本發(fā)明目的在于提供幾丁聚糖-幾丁質(zhì)在機(jī)能性保健食品上的應(yīng)用，即提供幾丁聚糖-幾丁質(zhì)保健食品。
本發(fā)明所提供的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)保健食品可以是采用本發(fā)明的方法所生產(chǎn)的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)粉末。
本發(fā)明所提供的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)保健食品也可以是將本發(fā)明的方法所生產(chǎn)的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)粉末與南瓜粉苦蕎晶的組合物，具體各成份所占比例為(重量百分比表示)幾丁聚糖-幾丁質(zhì)30％南瓜粉 10％苦蕎晶 60％其中苦蕎晶原料為海拔1800米以上的苦蕎麥，磨成粉，去殼并將種胚分離出來，再將種胚磨成粉。
本發(fā)明所提供的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)保健食品還可以是將本發(fā)明的方法所生產(chǎn)的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)粉末與卵磷脂，植質(zhì)末，胡蘿卜素的組合物，具體各成份所占比例為(重量百分比表示)幾丁聚糖-幾丁質(zhì)90％卵磷脂 5％植質(zhì)未 3％胡蘿卜素 2％本發(fā)明所提供的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)粉末的生產(chǎn)方法包括挑選無惡臭，無腐爛紅色深海中的蟹腿清洗干凈，烘干。然后以4％HCl溶液在室溫下處理22小時(shí)，使所含碳酸鈣和磷酸鈣等無機(jī)鹽轉(zhuǎn)化為氯化鈣除去。過濾后，用軟水洗滌直至殘液用酸，堿試紙檢測(cè)呈中性。用過量的10％的NaOH溶液處理4小時(shí)，溫度控制在93±2℃，除去蛋白質(zhì)，脂肪。過濾用軟水洗滌至中性，之后以適量無水乙醇洗滌，干燥即得精品幾丁質(zhì)。用50％NaOH在143℃±2℃加熱15小時(shí)，通過酸堿滴定法測(cè)其脫乙酰度看是否達(dá)到80％以上，一般控制在90％，反應(yīng)終止過濾，用軟水洗至中性，干燥后可得幾丁聚糖-幾丁質(zhì)。粉碎(在不銹鋼磨上)過篩使其100％通過80目，粘度控制在70±5mpa.s，消毒。
幾丁質(zhì)及脫乙酰幾丁質(zhì)即幾丁聚糖是屬多糖類動(dòng)物纖維，是一種很有發(fā)展前途的天然高分子多糖，應(yīng)用甚廣，在醫(yī)、農(nóng)、輕工、化工、紡織、環(huán)保等領(lǐng)域展示了廣闊的應(yīng)用前景。目前我國也取得了一些成果，如青島海洋大學(xué)研制的“海膚康”人工皮膚獲得了37屆尤利卡世界發(fā)明金獎(jiǎng)，國家91年度發(fā)明三等獎(jiǎng)。中國科學(xué)院與解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)合作，成功地從蠶蛹中提取出這種物質(zhì)，開發(fā)出醫(yī)用縫紉線，創(chuàng)傷止血膜等。中國紡織科學(xué)院的“甲殼質(zhì)人工皮膚”獲國家發(fā)明專利。但是將幾丁聚糖-幾丁質(zhì)直接加工成保健食品仍屬空白。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，該物質(zhì)無毒副作用，與人體組織相溶性好，理化性質(zhì)穩(wěn)定，有較好的藥用價(jià)值，具有提高機(jī)體免疫力，廣普抑菌，促進(jìn)組織愈合，止血鎮(zhèn)痛，抑制腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散，延緩衰老等多種保健功能。因此本發(fā)明中通過動(dòng)物和人體反復(fù)試驗(yàn)，確定幾丁聚糖-幾丁質(zhì)作為機(jī)能性保健食品的最佳理化指標(biāo)范圍，并在此基礎(chǔ)上研制開發(fā)系列幾丁聚糖-幾丁質(zhì)保健食品。
1、幾丁質(zhì)-幾丁聚糖的主要理化性質(zhì)為①粘度純幾丁聚糖是一種白色或灰白色半透明片狀或粉末狀固體，無嗅、無毒性，生物體中幾丁質(zhì)分子量約為100萬-200萬，提純后幾丁質(zhì)分子量約為30萬-70萬，由幾丁質(zhì)脫乙?；蟮膸锥【厶欠肿恿縿t更低，約為20-50萬。幾丁質(zhì)和幾丁聚糖的分子量大小往往用它們的粘度高低的數(shù)值來表示。
②脫乙?；扔捎趲锥≠|(zhì)大分子中具有穩(wěn)定的環(huán)狀結(jié)構(gòu)和大分子之間存在強(qiáng)的氫鍵作用，使它們具有穩(wěn)定的物理、化學(xué)性質(zhì)。不熔融(200℃分解)又不溶于水，稀酸、稀堿和一般有機(jī)溶劑中，幾丁質(zhì)在強(qiáng)酸(濃硫酸、鹽酸、硝酸、85％磷酸等)中能溶解，但同時(shí)發(fā)生鏈的降解使分子量明顯降低。幾丁聚糖大分子由于乙?；摮写罅?NH2存在，使其溶解性能大大優(yōu)于幾丁質(zhì)。它能溶于大多數(shù)的稀酸，(如甲酸、乙酸、環(huán)烷酸、苯甲酸等)中而制得均勻的幾丁聚糖溶液。也因幾丁聚糖的活性大，故它的稀酸溶液在室溫下粘度逐漸降低，最后完全水解成氨基葡萄糖。
從幾丁質(zhì)和幾丁聚糖大分子結(jié)構(gòu)上來看，它們具有與植物纖維相似的結(jié)構(gòu)，在它們大分子的每一個(gè)重復(fù)單元上都有一個(gè)乙酰胺基或氨基使幾丁質(zhì)一幾丁聚糖具有類似人體骨膠原組織的結(jié)構(gòu)。它們的這種雙重結(jié)構(gòu)賦予了它們極好的生物醫(yī)藥特性。使它們與人體具有極好的生物相溶性?？杀簧矬w內(nèi)的溶菌酶分解而吸收，因此說幾丁聚糖幾丁質(zhì)中的脫乙?；?即氨基含量)是決定其保健功效的主要依據(jù)。
③粒度提純后的幾丁聚糖一幾丁質(zhì)呈纖維狀應(yīng)粉碎研磨成一定細(xì)小的顆粒，經(jīng)我們反復(fù)實(shí)驗(yàn)證明，粒度越小越有利于人體吸收。
2、幾丁聚糖-幾丁質(zhì)的提取工藝幾丁質(zhì)(Chitine)是一種類似纖維素的直鏈聚合物、由類似葡萄糖的N-乙酰葡萄糖胺單體聚合而成的一種多糖。N-乙酰葡萄糖胺，幾丁質(zhì)，幾丁聚糖，纖維素，葡萄糖的分子構(gòu)造如下。從分子結(jié)構(gòu)可知幾丁聚糖為幾丁質(zhì)經(jīng)去乙?；饔煤笫ヒ阴；蟮漠a(chǎn)物，其去乙酰程度為65％-99％，由于至今在世界上尚沒有辦法完全脫乙?；?，所以將幾丁質(zhì)脫乙?；蟮漠a(chǎn)物通常稱為幾丁聚糖-幾丁質(zhì)(Chitosan-Chitin)(因產(chǎn)物同時(shí)存在二種成分)。
幾丁質(zhì)俗稱甲殼質(zhì)、甲殼素，是甲殼動(dòng)物(如蟹、蝦)外殼、昆蟲(如蟑螂、獨(dú)角仙)表皮、軟體動(dòng)物(如烏賊、貝)器官、菌類(如蘑菇，地衣)細(xì)胞壁的重要組成，在自然界中大約有1000億噸，
資源之豐富僅次于陸地上的纖維素。一般來講幾丁質(zhì)從蝦、蟹殼中提取比較方便，它們的甲殼中主要含有三種成分，碳酸鈣和磷酸鈣等無機(jī)鹽約占45％，粗蛋白和脂肪約占27％，幾丁質(zhì)約占20％左右，各類甲殼中幾丁質(zhì)的含量，在蝦殼中約占15-30％，蟹殼中約占15-20％，由蝦、蟹殼中制取幾丁質(zhì)主要由兩部分工藝組成，用稀鹽酸脫除碳酸鈣和用熱稀堿脫除蛋白質(zhì)，制成的幾丁質(zhì)再經(jīng)濃堿脫乙酰后便制成了幾丁聚糖。目前常規(guī)的提取方法是蟹殼中加入稀NaOH以除去蛋白質(zhì)，磨碎，加入亞硫酸以除鈣，過濾，水洗，干燥。但是，這種制備方法的產(chǎn)品均為工業(yè)級(jí)產(chǎn)品粗加工制備方法，不能作為食品級(jí)產(chǎn)品食用，因?yàn)檫@樣制備出的產(chǎn)品灰分含量高(一般灰分含量均＞5％)，且重金屬含量也較高，根據(jù)以上存在的問題，本發(fā)明中作了大量研究工作，從設(shè)備到制備工藝，都進(jìn)行了改進(jìn)，多次試驗(yàn)終于摸索到制備食品級(jí)的品質(zhì)優(yōu)良的幾丁質(zhì)，幾丁聚糖最佳設(shè)備和工藝，我們制備幾丁質(zhì)、幾丁聚糖原料主要是深海蟹殼，其工藝流程如下所示挑選蟹殼，加入軟水進(jìn)行水洗，加入HCl進(jìn)行酸處理，加入軟水進(jìn)行水洗，加入NaOH堿煮，加入KMnO4及草酸脫色，干燥，加入濃NaOH煮以脫乙酰，加入軟水進(jìn)行水洗，干燥，得到幾丁聚糖及幾丁質(zhì)混合物。
具體方法為將蟹殼挑選清洗干凈，烘干，與過量的2mol的HCl(試劑極)溶液反應(yīng)4-5小時(shí)，過濾，再以2mol的HCl溶液在室溫下處理20-24小時(shí)，使所含碳酸鈣轉(zhuǎn)化為氯化鈣，除去，過濾，軟水洗滌至中性，用過量的5-10％的NaOH溶液處理3-4小時(shí)，溫度90-95℃，除去蛋白質(zhì)，反復(fù)數(shù)次即可除去殘余的碳酸鈣等無機(jī)鹽和蛋白質(zhì)，再在0.5％，高錳酸鉀中攪拌浸漬一小時(shí)，軟水洗后在1％的草酸中于60-70℃攪拌30-40分鐘脫色，經(jīng)充分水洗，最后以適量無水乙醇洗滌，干燥，便可以制得黃色精品幾丁質(zhì)，上法制得的幾丁質(zhì)用50％的NaOH于140℃加熱10-18小時(shí)兩次，然后過濾，以軟水洗滌至中性，經(jīng)干燥后可得白色固體幾丁聚糖。用上述方法制備的幾丁聚糖質(zhì)量?jī)?yōu)良，完全符合食品級(jí)，經(jīng)小白鼠毒理實(shí)驗(yàn)活性物質(zhì)穩(wěn)定性測(cè)試，衛(wèi)生學(xué)檢測(cè)及保健功能測(cè)試，都符合衛(wèi)生部制定的新的保健食品的標(biāo)準(zhǔn)。
在以上基礎(chǔ)上，我們?cè)趲锥【厶?幾丁質(zhì)中添加其它純天然物質(zhì)，如南瓜粉、卵磷脂、苦薺麥等，配制幾丁聚糖幾丁質(zhì)保健食品。
3、幾丁聚糖-幾丁質(zhì)的主要理化指標(biāo)與調(diào)節(jié)免疫功能的關(guān)系1960年Nowell發(fā)現(xiàn)植物血凝素(Phytohemagylutin，PHA)和淋巴細(xì)胞混合，進(jìn)行體外培養(yǎng)，數(shù)日后可看到明顯的大型的母細(xì)胞出現(xiàn)分裂旺盛的現(xiàn)象，其后又發(fā)現(xiàn)，伴隨形態(tài)學(xué)變化的同時(shí)淋巴細(xì)胞的蛋白質(zhì)與核酸的合成也增加了。這就是PHA刺激的淋巴轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。后又相繼證明結(jié)核菌素，反應(yīng)陽性機(jī)體為淋巴細(xì)胞在加入結(jié)核菌素，體外培養(yǎng)時(shí)也出現(xiàn)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。在器官移植研究工作中發(fā)現(xiàn)供體和受體的淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時(shí)，轉(zhuǎn)化率低的組合，則移植的臟器存活期長(zhǎng)。從結(jié)核菌素反應(yīng)和移植免疫反應(yīng)均可在體外出現(xiàn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化現(xiàn)象，故認(rèn)為淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化反應(yīng)與機(jī)體的細(xì)胞免疫性有密切關(guān)系。目前淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)已廣泛應(yīng)用于機(jī)體細(xì)胞免疫功能的測(cè)定。本試驗(yàn)用該方法進(jìn)行測(cè)試(1)材料①肝素?zé)o防腐劑肝素注射液50μg/ml血，或0.4％粗制肝粉浸液0.1ml/ml血。
②199營養(yǎng)液，含胎牛血清15％，青霉素100μg/ml，鏈霉素100μg/ml。
③幾丁聚糖-幾丁質(zhì)0.5％醋酸溶液。
a.粘度為200mpa.s，180mpa.s，160mpa.s，140mpa.s，120mpa.s，100mpa.s，80mpa.s，60mpa.s，40mpa.s，(0.5％)20℃b.脫乙酰化度為60％ 70％ 80％ 90％c.粒度為60目 70目 80目 90目④Hanks液2、方法①白細(xì)胞培養(yǎng)法，取靜脈血1ml放入肝素管內(nèi)沉勻，放37℃溫箱內(nèi)靜置半小時(shí)，待紅細(xì)胞下沉，吸出上層富含白細(xì)胞的血漿部分約0.5ml，放入裝有3ml199營養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中，再加入相應(yīng)的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)溶液。搖勻后塞緊橡皮塞，放37℃溫箱，培養(yǎng)72小時(shí)。
②涂片染色法培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，將細(xì)胞懸起，移入試管中，離心1000rpm 10min，將細(xì)胞沉至管底，倒盡上清液，待管壁殘留少量液體回流至管底，用尖吸管吸取細(xì)胞制成推片。干燥后甲醇固定，用瑞化染色法染色。
③判讀結(jié)果方法判讀母細(xì)胞的形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)懸細(xì)胞的大小，核與胞體的比例，胞裝的染色性，核的構(gòu)造及核仁的有無，共分下述四種細(xì)胞。
a.成熟的小淋巴細(xì)胞與未培養(yǎng)時(shí)的淋巴細(xì)胞一樣6-8μ，核的染色體致密，核與胞體的比例大，胞漿染色為輕度嗜堿性。
b.過濾型的淋巴細(xì)胞比小淋巴細(xì)胞大，約8-12μ，核質(zhì)也一樣致密，核仁出現(xiàn)，胞漿染色性與上述細(xì)胞一樣。
c.淋巴母細(xì)胞細(xì)胞個(gè)體增大，約12-20μ，形態(tài)不整齊，常有小突起，核變大，染色質(zhì)疏松，明顯出現(xiàn)核仁，胞漿變寬，核與胞體比例變小，胞漿呈明顯強(qiáng)嗜堿性，常出現(xiàn)胞漿空泡。
d.其它細(xì)胞中性粒細(xì)胞在培養(yǎng)72小時(shí)后，絕大部分衰變或死亡呈碎片，然而嗜酸粒細(xì)胞在培養(yǎng)72小時(shí)后，絕大部分衰變成死亡呈碎片。
上述a、b項(xiàng)是未轉(zhuǎn)化細(xì)胞，c項(xiàng)是轉(zhuǎn)化細(xì)胞，分類上鑒別要點(diǎn)是核的構(gòu)造，特別是核仁的有無。
④淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的計(jì)算在高倍或油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞
(3)結(jié)果①粘度對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響(見表1)表1幾丁聚糖-幾丁質(zhì)的粘度對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化變的影響
注①表中數(shù)據(jù)為三次重復(fù)試驗(yàn)平均數(shù)據(jù)②表中幾丁聚糖-幾丁質(zhì)的脫乙酰度為91％，粒度為80目。
(2)脫乙?；葘?duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響見表2表2幾丁聚糖-幾丁質(zhì)脫乙酰度對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響
注①表中數(shù)據(jù)為三次重復(fù)平均數(shù)據(jù)
②表中幾丁聚糖幾丁質(zhì)的粘度為75mpa.s粒度為80目(3)粒度對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率影響(見表3)表3粒度對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率影響
注①表中數(shù)據(jù)為三次重復(fù)試驗(yàn)平均數(shù)據(jù)②表中幾丁聚糖-幾丁質(zhì)的脫乙酰度為91％，粘度為75mpa.s以上三個(gè)表中CK均為空白對(duì)照，即末加幾丁聚糖-幾丁質(zhì)。
從以上數(shù)據(jù)表明(1)幾丁聚糖-幾丁質(zhì)的粘度在小于100mpa.s時(shí)轉(zhuǎn)化率明顯提高，這是說明受試物分子量越小，其調(diào)節(jié)免疫機(jī)能的效果越好。
(2)幾丁聚糖-幾丁質(zhì)的脫乙酰度在80％以上時(shí)，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率有明顯的提高，說明游離氨基在調(diào)節(jié)免疫機(jī)能上起重要作用。
(3)幾丁聚糖-幾丁質(zhì)的粒度在80目以上時(shí)，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率提高，說明粒度越小，便于動(dòng)物體吸收，其免疫調(diào)節(jié)效果越好。
4、幾丁聚糖-幾丁質(zhì)與巨噬細(xì)胞吞噬功能之間的關(guān)系巨噬細(xì)胞和機(jī)體內(nèi)的小淋巴細(xì)胞都是參與免疫反應(yīng)的主要細(xì)胞成份，巨噬細(xì)胞在處理抗原及在特異抗體和淋巴細(xì)胞協(xié)同下發(fā)揮重要的抗感染，抗腫瘤作用。另外某些免疫增強(qiáng)劑，免疫佐劑特異的刺激巨噬細(xì)胞的功能，觀察在各種疾病特別是惡性腫瘤病人的變化，對(duì)治療反應(yīng)的客觀指標(biāo)，在人體試驗(yàn)中，不易獲得足量的供試驗(yàn)的巨噬細(xì)胞，目前采用中藥斑蝥酒精浸出液發(fā)泡可獲得較好的結(jié)果，皮包液和來源方便、易于觀察的雞血細(xì)胞在體外孵育，取細(xì)胞作涂片，鏡檢計(jì)算吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)與正常值相比，即可估計(jì)病人巨噬細(xì)胞的吞噬功能。
(1)材料①10％斑蝥浸出液，10g中藥斑蝥浸于100ml 95％酒精磨口瓶塞緊放冰箱備用。
②雞細(xì)胞懸液，翅靜脈取血，肝素50ug/ml抗凝，以1/10比例放入Alsere′保存液中保存一個(gè)月，用前用生理鹽水洗三次，配成5％濃度備用。
③受試物幾丁聚糖-幾丁質(zhì)(為本案提取，粘度75mpa.s，脫乙酰度91％，粒度80目)。
④受試動(dòng)物小白鼠分四組I組使其患皮癌，飼喂加幾丁聚糖的飼料(T+)II組使其患皮癌，飼喂加幾丁聚糖的飼料(T-)III組正常鼠，飼喂加幾丁聚糖的飼料(CK+)IV組正常鼠，飼喂不加幾丁聚糖的飼料(CK-)(2)方法取受試動(dòng)物腹腔內(nèi)的巨噬細(xì)胞，加入經(jīng)洗滌的5％雞紅細(xì)胞0.02ml輕輕振蕩混勻，放入37℃水浴中。溫育30分鐘，其間每10分鐘搖動(dòng)一次，離心，取沉渣涂片固定，也可在溫育過程中加入蓋片條，兩張合并，放入上述雞紅細(xì)胞和發(fā)泡液混合液試管中，使巨噬細(xì)胞沿玻片上爬，溫育結(jié)束后，將小蓋玻片取出固定，將涂片或附著有巨噬細(xì)胞的蓋片用姬姆薩染色(姬姆薩染液用PH6或9，磷酸緩沖液作1/10稀釋)，染4-5分鐘即可沖洗封片，用高倍或油鏡檢查吞噬結(jié)果，以下述兩項(xiàng)指標(biāo)表示吞噬活性a.吞噬百分比即每一百個(gè)巨噬細(xì)胞中吞有雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)。
b.每個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的數(shù)目不同(從零到十幾個(gè))將一百個(gè)巨噬細(xì)胞作吞的雞紅細(xì)胞的總和除以100，即得巨噬細(xì)胞指數(shù)，即每個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的平均數(shù)。根據(jù)中圍醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤防治研究所試驗(yàn)結(jié)果認(rèn)為，上述二項(xiàng)指標(biāo)常是平行的，故只用吞噬百分比即可反映其吞噬活性。
(3)結(jié)果(見表4)表4幾丁聚糖與巨噬細(xì)胞吞噬功能的關(guān)系
注T+患瘤鼠喂幾丁聚糖T-患瘤鼠不喂幾丁聚糖CK+正常鼠喂幾丁聚糖CK-正常鼠不喂幾丁聚糖從結(jié)果分析，患癌鼠的巨噬的細(xì)胞吞噬活性最低為39.3％。但是患癌鼠飼喂了幾丁聚糖后吞噬活性提高到56.3％，正常鼠飼喂幾丁聚糖后也比不喂幾丁聚糖的正常鼠提高了。說明幾丁聚糖-幾丁質(zhì)對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬能力有激活的作用。從而推斷，幾丁聚糖幾丁質(zhì)可以調(diào)節(jié)免疫機(jī)能，同時(shí)具有抑制腫瘤的功能。研究結(jié)果可以推斷DAC-70經(jīng)由T-細(xì)胞系統(tǒng)活化巨噬細(xì)胞(Mφ)，而由CM-幾丁質(zhì)可能由B-細(xì)胞系統(tǒng)。
本發(fā)明所提供的保健食品確定了幾丁聚糖幾丁質(zhì)作為新的機(jī)能性食品的最佳技術(shù)指標(biāo)范圍，將使其保健效果得到增強(qiáng)。除了上述的調(diào)節(jié)免疫機(jī)能的功能外，還將在降低脂固醇、降血壓、降血糖，改善人的腸胃功能，清除人體內(nèi)有害毒素，如重金屬、農(nóng)藥等，將有一定的功效。下面我們將組成部分逐一加以分析1、調(diào)節(jié)免疫功能(上畫已有詳述)(1)材料①受試物幾丁聚糖-幾丁質(zhì)②受試動(dòng)物免子分兩組I飼喂高膽固醇飼料，飼料中不加幾丁聚糖II飼喂高膽固醇飼料，飼料中加以幾丁聚糖(2％)(2)方法飼喂一個(gè)月后，測(cè)試血液中膽固醇的含量。
(3)結(jié)果與分析組I血清膽固醇值高達(dá)629mg；組II血清膽固醇值為287mg。
此結(jié)果，說明幾丁聚糖-幾丁質(zhì)有抑制膽固醇的功能。我們知道膽固醇是構(gòu)成人體中腦、神經(jīng)、性激素、細(xì)胞膜等的主要物質(zhì)，用于消化吸收脂肪的膽汁酸也是膽固醇轉(zhuǎn)化而來的，但是當(dāng)膽固醇超過正常值時(shí)，會(huì)囤積在血管壁中，使血液循環(huán)惡化，引起冠心病，心肌梗塞等動(dòng)脈硬化性疾病。幾丁聚糖-幾丁質(zhì)對(duì)膽固醇抑制作用的機(jī)理，初步推斷為①可防止膽固醇在體內(nèi)吸收，幾丁聚糖很容易和膽汁酸結(jié)合并全部排出體外，由于缺少膽汗酸就抑制了酶的作用，于是膽固醇無法轉(zhuǎn)變成易被腸管吸收的膽固醇脂，從而降低了膽固醇；②防礙脂肪的吸收，幾丁聚糖含有帶正電的陽離子，在體內(nèi)聚集在帶負(fù)電的油滴周圍，形成屏障而防礙吸收，血液中的脂肪存在于膽固醇和蛋白質(zhì)的粒子中，所以隨著血脂肪的減少，膽固醇含量也會(huì)隨之減少。③促使膽固醇轉(zhuǎn)化，膽固醇是肝臟內(nèi)膽固醇所生成的消化液中的一個(gè)重要成分，在膽囊中有一定的儲(chǔ)量，膽汁酸通常在完成體內(nèi)消化，吸收脂肪的任務(wù)后，由小腸再吸收而回到膽囊中，因幾丁聚糖容易和膽汁酸結(jié)合并全都排出體外，為了保持膽囊中有一定量膽汁酸儲(chǔ)備，就必須在肝臟中將膽固醇轉(zhuǎn)化成膽汁酸從而血液中膽固醇含量必然下降。
2、降血壓血管收縮轉(zhuǎn)換酶(ACE)是造成高血壓的主要原因，本發(fā)明以含高氯化鈉，高鈉鹽及高氯飼料喂正常老鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，只有飼喂高氯化鈉的飼料的老鼠血壓上升，然后在飼料加入我們制備的幾丁聚糖(脫乙酰度91％，粒度80目，粘度70mpa.s)，由于幾丁聚糖中游離NH2+的作用，促使Cl離子的排泄，由于ACE的活性與Cl離子關(guān)系密切。所以Cl離子的減少使ACE活性降低，抑制了血壓的上升。
3、降血糖人體內(nèi)具有使血糖值保持一定的自控系統(tǒng)，這是因?yàn)橛懈鞣N激素的參與，許多激素都可使血糖值上升，但是只有胰島素可使血糖值下降。因此如果胰腺分泌胰島素能力下降，或身體細(xì)胞的狀況惡化，無法充分利用胰島素時(shí)，血糖值都會(huì)逐漸升高。眾所周知，對(duì)于糖尿病的預(yù)防及治療上，食物纖維非常有效。而幾丁聚糖-幾丁質(zhì)是聚陽離子纖維，同樣有降血糖的功能，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了這一點(diǎn)。
分別用含有幾丁聚糖-幾丁質(zhì)的飼料，一般植物纖維的飼料以及不含任何纖維的飼料，喂已患有糖尿病的老鼠，結(jié)果食用含幾丁聚糖-幾丁質(zhì)飼料的老鼠的尿糖值和空腹時(shí)血糖值均比其它兩組要低。說明我們制備的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)對(duì)血糖有抑制上升的作用。
4、改善胃腸功能、改善便秘食物纖維有促進(jìn)腸胃蠕動(dòng)，改善消化系統(tǒng)的作用，作為聚陽離子纖維的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)同樣具有一般食物纖維的功能，實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，幾丁聚糖還可促進(jìn)腸內(nèi)有益細(xì)菌的增殖，這是一般食物纖維所沒有的。事實(shí)證明，很多人食用了我們制備的幾丁聚糖幾丁質(zhì)后，腸胃系統(tǒng)大大改善，長(zhǎng)期腹泄的大便成形，便秘的排便通暢，患有各種慢性胃病的人，都得到了不同程度的改善，普遍感覺比現(xiàn)在市面上銷售的三株口服液要好。這主要是幾丁聚糖的活性成份穩(wěn)定性很好，而三株口服液中的主要活性物質(zhì)-雙叉桿菌的活性很難維持。
5、吸附重金屬等有害物質(zhì)并排出體處隨著科技的進(jìn)步，也帶來很多公害，導(dǎo)致人類發(fā)生很多疾病，其中最廣為人知的是重金屬公害。實(shí)驗(yàn)表明，幾丁聚糖-幾丁質(zhì)由于其特殊的分子結(jié)構(gòu)，可吸附重金屬在填滿幾丁聚糖的管中加入氯化汞溶液(流速0.5ml/min)。經(jīng)由SP-9原子吸收光譜測(cè)試，發(fā)現(xiàn)開始吸咐速率較高，大約2小時(shí)后，達(dá)到一個(gè)平衡值，幾丁聚糖-幾丁質(zhì)可以被考慮成微孔材料，當(dāng)非均質(zhì)聚合物低于T8時(shí)，鍵段的熱運(yùn)動(dòng)會(huì)受到限制而形成分子不規(guī)則堆積，故形成微孔使小分子或離子通過，吸附過程大致分成三步。即被吸附物移動(dòng)至吸附體上，進(jìn)而擴(kuò)散，最終達(dá)到吸附。另外發(fā)現(xiàn)，脫乙酰程度愈高，則吸附能力愈強(qiáng)，這是金屬離子螯合過程動(dòng)力學(xué)決定的。這一功能對(duì)于現(xiàn)今生活在環(huán)境污染嚴(yán)重條件下的人類來說是非常重要的。
6、改善腰酸背痛中醫(yī)很注重末梢循環(huán)的生理。所以有瘀血，水毒的概念。瘀血就是氣、血、水不暢的病態(tài)，瘀血時(shí)末梢循環(huán)不好，身體表面溫度降低，而成為怕冷癥，因?yàn)閷?duì)細(xì)胞，肌肉氧氣，養(yǎng)分供應(yīng)不足，所以會(huì)引起腰酸背痛。只要能擴(kuò)張細(xì)動(dòng)脈的血流量就可改善腰酸背痛的癥狀。幾丁聚糖在體內(nèi)分解產(chǎn)物可刺激迷走神經(jīng)，經(jīng)由自律神經(jīng)中樞的興奮使細(xì)動(dòng)脈擴(kuò)張，從而改善腰酸背痛。
實(shí)施例1挑選無惡臭，無腐爛紅色深海中的蟹腿清洗干凈，烘干。然后以4％HCl溶液在室溫下處理22小時(shí)，使所含碳酸鈣和磷酸鈣等無機(jī)鹽轉(zhuǎn)化為氯化鈣除去。過濾后，用軟水洗滌直至殘液用酸，堿試紙檢測(cè)呈中性。用過量的10％的NaOH溶液處理4小時(shí)，溫度控制在93±2℃，除去蛋白質(zhì)，脂肪。過濾用軟水洗滌至中性，之后以適量無水乙醇洗滌，干燥即得精品幾丁質(zhì)。用50％NaOH在143℃±2℃加熱15小時(shí)，通過酸堿滴定法測(cè)其脫乙酰度是否達(dá)到80％以上，一般控制在90％，反應(yīng)終止過濾，用軟水洗至中性，干燥后可得幾丁聚糖-幾丁質(zhì)。粉碎(在不銹鋼磨上)過篩使其100％通過80目，粘度控制在70±5mpa.s。消毒。
用該品對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)及人體試食。都顯示出很好的保健功能。
實(shí)施例2用實(shí)施例1中制備的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)粉末，配上南瓜粉苦蕎晶，具體各成份所占比例為(重量百分比表示)幾丁聚糖-幾丁質(zhì)30％南瓜粉 10％苦蕎晶 60％*苦蕎晶原料為海拔1800米以上的苦蕎麥，磨成粉，去殼并將種胚分離出來，再將種胚磨成粉。
以上配方制成的機(jī)能性食品主要功能為降血糖，降血脂，為糖尿病人專用機(jī)能性食品。
實(shí)施例3用實(shí)施例1中制備的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)粉，附加卵磷脂，植質(zhì)未，胡蘿卜素。具體各成份所占比例為(重量百分比表示)幾丁聚糖-幾丁質(zhì)90％卵磷脂 5％植質(zhì)末 3％胡蘿卜素 2％此配方配制的機(jī)能性食品將對(duì)高血壓、高血脂、高膽固醇、動(dòng)脈硬化、血栓等心腦血管病人有很好的療效。
用所制幾丁聚糖-幾丁質(zhì)給近50人試食，普遍反映良好，下面舉幾例①某女35歲，患卵巢束腫，食用幾丁聚糖-幾丁質(zhì)粉，每日6g，兩個(gè)月后，出現(xiàn)便秘。繼續(xù)食用，一周后便秘消失，到醫(yī)院檢查卵巢腫塊減小了約1cm。
②某女47歲，長(zhǎng)期患慢性胃炎，每天食用幾丁聚糖幾丁質(zhì)粉2g，兩個(gè)月后，胃不再脹氣，疼痛，且食欲增加。
③某男57歲，患高血壓、高血脂，服用幾丁聚糖-幾丁質(zhì)，每日6g，三個(gè)月后，血壓基本穩(wěn)定，膽固醇由238mg％，降至195mg％，β-脂蛋白由928mg％，降至728mg％，三酸甘油脂由445mg％降至269mg％。
④某男71歲，患晚期胃癌，未手式，醫(yī)生說最多活3個(gè)月。食用幾丁聚糖-幾丁質(zhì)，每日6g-10g/日，兩個(gè)月后，精神好，食欲增加，能干輕微家務(wù)這期間有反復(fù)，但病人不感到疼痛，已存活半年。
⑤另外，有5位試食者發(fā)現(xiàn)自己身上，臉部，腑下的痣和猴子之類的突起物，先是變硬，縮小，然后脫落。
⑥某男，51歲，患有糖尿病，食用幾丁聚糖幾丁質(zhì)每日6g，兩個(gè)月后，空腹血糖由146.2mg％下降至104mg％，尿由+1變成(-)，尿糖由+4變成+2，四個(gè)月后，精神明顯好轉(zhuǎn)，連續(xù)三個(gè)月空腹血糖在74-86mg％，尿糖(-)。
權(quán)利要求
1.幾丁聚糖-幾丁質(zhì)保健食品，其中包括采用下述方法所生產(chǎn)的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)粉末；幾丁聚糖-幾丁質(zhì)粉末的生產(chǎn)方法包括挑選無惡臭，無腐爛紅色深海中的蟹腿清洗干凈，烘干。然后以4％HCl溶液在室溫下處理22小時(shí)，使所含碳酸鈣和磷酸鈣等無機(jī)鹽轉(zhuǎn)化為氯化鈣除去。過濾后，用軟水洗滌直至殘液用酸，堿試紙檢測(cè)呈中性。用過量的10％的NaOH溶液處理4小時(shí)，溫度控制在93±2℃，除去蛋白質(zhì)，脂肪。過濾用軟水洗滌至中性，之后以適量無水乙醇洗滌，干燥即得精品幾丁質(zhì)。用50％NaOH在143℃±2℃加熱15小時(shí)，通過酸堿滴定法測(cè)其脫乙酰度看是否達(dá)到80％以上，一般控制在90％，反應(yīng)終止過濾，用軟水洗至中性，干燥后可得幾丁聚糖-幾丁質(zhì)。粉碎(在不銹鋼磨上)過篩使其100％通過80目，粘度控制在70±5mpa.s。消毒。
2.權(quán)利要求1所述的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)保健食品，其中包括按權(quán)利要求1所述的方法生產(chǎn)的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)粉末與南瓜粉苦蕎晶的組合物，具體各成份所占比例為(重量百分比表示)幾丁聚糖-幾丁質(zhì)30％南瓜粉 10％苦蕎晶 60％其中苦蕎晶原料為海拔1800米以上的苦蕎麥，磨成粉，去殼并將種胚分離出來，再將種胚磨成粉。
3.權(quán)利要求1所述的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)保健食品，其中包括按權(quán)利要求1所述的方法生產(chǎn)的幾丁聚糖-幾丁質(zhì)粉末與卵磷脂，植質(zhì)末，胡蘿卜素的組合物，具體各成份所占比例為(重量百分比表示)幾丁聚糖-幾丁質(zhì)90％卵磷脂 5％植質(zhì)末 3％胡蘿卜素 2％。
全文摘要
本發(fā)明涉及保健食品,具體地說是指幾丁聚糖－幾丁質(zhì)在機(jī)能性保健食品上的應(yīng)用,即提供幾丁聚糖－幾丁質(zhì)保健食品。幾丁聚糖－幾丁質(zhì)保健食品包括采用本發(fā)明所提供的方法所生產(chǎn)的幾丁聚糖－幾丁質(zhì)粉末;也包括幾丁聚糖－幾丁質(zhì)粉末與南瓜粉苦蕎晶的組合物,還包括幾丁聚糖－幾丁質(zhì)粉末與卵磷脂,植質(zhì)末,胡蘿卜素的組合物。
文檔編號(hào)A23L1/09GK1187948SQ9710024
公開日1998年7月22日 申請(qǐng)日期1997年1月13日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月13日
發(fā)明者陳樂玫 申請(qǐng)人:陳樂玫