專利名稱:新菌株橙色紅曲及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種新菌株及其應(yīng)用,屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。
己酸乙酯是濃香型大曲酒的主體呈香物質(zhì)。在本發(fā)明作出以前,主要靠延長發(fā)酵期來提高曲酒中的己酸乙酯含量。這種方法所得己酸乙脂含量甚微,且影響出酒率,夏季常常出現(xiàn)曲酒掉排現(xiàn)象。
本發(fā)明的目的就是要克服上述缺陷,提取并獲得新菌株橙色紅曲來制取高己酸乙脂。
本發(fā)明的技術(shù)方案是新菌株橙色紅曲N8Monascusaurntiacus(AS3.4693)1-1.在麥芽汁培養(yǎng)基和MEN培養(yǎng)基上生長時(shí),菌落黃色,蔓延擴(kuò)展,有少量褶皺;氣生菌絲豐富呈絲絨狀;菌絲體最初為淺黃色,老熟后呈橙色,背部淺赭石色。1-2.在G25N培養(yǎng)基上生長時(shí),菌落蔓延擴(kuò)展,氣生菌絲極為豐富,呈密實(shí)地毯狀,杏黃至杏紅色,背面鐵棕色,有紅色素分泌于培養(yǎng)基中。1-3.在土豆培養(yǎng)基上,氣生菌絲玉粉紅色。1-4.鏡檢形態(tài)為菌絲體分隔、分枝,壁較光滑,直徑3-7微米,內(nèi)含紅色油滴;被子器橙紅色、球形,直徑40-75微米,子囊孢子光滑無色,橢圓形5×7×4.5-5微米,卵形4.5×7微米。2.高己酸乙酯調(diào)味酒的生產(chǎn)方法,其特征在于采用新菌株,斜面培養(yǎng)接種后,在溫度30-32℃條件下,培養(yǎng)72-96小時(shí)后,轉(zhuǎn)接茄形瓶培養(yǎng),在30-32℃條件下培養(yǎng)72-96小時(shí)后,轉(zhuǎn)接三角瓶麩皮培養(yǎng)基培養(yǎng),在32-36℃條件下培養(yǎng)96-120小時(shí)后,轉(zhuǎn)接通風(fēng)曲或簾子曲培養(yǎng)基,在35-38℃條件下培養(yǎng)72小時(shí),即為生產(chǎn)用曲。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和效果在于菌株生化、理化特性穩(wěn)定,適應(yīng)性好,冰箱即可貯存,對(duì)培養(yǎng)基要求不高;其脂化力強(qiáng),發(fā)酵條件選擇性大,工藝簡(jiǎn)單且無污染;解決了夏季掉排現(xiàn)象,也解決了曲酒成本高、質(zhì)量差的難題,并且有利于人體健康,節(jié)約糧食。
實(shí)施例1新菌株橙色紅曲菌N8Monascus aurntiacus(AS3.4693)為真菌,已于1996年8月8日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,登記入冊(cè)的編號(hào)為CGMCC No.0285。
菌種來源本發(fā)明菌株來源于江蘇省軍區(qū)運(yùn)西農(nóng)場(chǎng)華威保健品廠帶有紅曲霉菌的曲粉。取6份曲粉,經(jīng)分別純化擴(kuò)大培養(yǎng)后,在試驗(yàn)室作應(yīng)用試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)具有產(chǎn)酯(己酸乙酯)能力最高的菌株,再經(jīng)純化篩選、生產(chǎn)試驗(yàn),最后獲得N8(AS3.4693)菌株。
原菌種制備與純化取帶有紅曲霉菌的大曲粉一小勺,加入盛有10毫升含乳酸0.7%、酒精10%的飴糖液(10Be)的試管中,30℃靜置培養(yǎng)288-302小時(shí),于無菌條件下將浮于液面菌團(tuán)挑入盛有30毫升無菌水的三角瓶中,瓶?jī)?nèi)放有若干滅菌玻璃珠,搖動(dòng)5分鐘,打碎菌團(tuán),用鋪有一薄層棉花的滅菌斗過濾,將濾液稀釋至適當(dāng)濃度,涂平板,于35℃培養(yǎng)5天。挑選菌落較大、中等、較小且顏色較一致的菌落分別移入飴糖斜面供篩選用。
初篩將以上分離菌株36株,與生產(chǎn)大曲作發(fā)酵對(duì)比試驗(yàn),初篩步驟
結(jié)果顯示,產(chǎn)己酸乙酯300mg/100ml以上的6株,其中產(chǎn)己酸乙酯低于100mg/100ml的12株,其余均在200mg/100ml左右。
復(fù)篩將酯化力在300以上的菌株進(jìn)一步純化,并仍進(jìn)行發(fā)酵對(duì)比試驗(yàn),酯化力在400以上的3株。
原種選定將已復(fù)篩后的3株菌種分別培養(yǎng)后,生產(chǎn)簾子曲。進(jìn)入生產(chǎn)對(duì)比發(fā)酵試驗(yàn),經(jīng)近三年反復(fù)在不同培養(yǎng)基中和不同發(fā)酵期條件下試驗(yàn),最后選定適應(yīng)性強(qiáng)、穩(wěn)定性好,產(chǎn)酯率高的菌種1株,送交到中國科學(xué)院經(jīng)過鑒定并定命為N8Monascus aurntiacus橙色紅曲菌AS3.4693。
生產(chǎn)高己酸乙酯調(diào)味酒的方法基本培養(yǎng)基(%)(1)麥芽提取物2,蛋白胨0.1,葡萄糖2,瓊脂1.5,定溶100毫升,PH值5.1-5.4。
(2)NaNO30.3,K2HPO40.1,KCL0.05,MgSO4.7H2O0.05,F(xiàn)eSO4.7H2O0.01,酵母提取物0.5,瓊脂1.5,甘油23,定溶100毫升,PH值6.5-6.7。
二級(jí)種子培養(yǎng)基優(yōu)質(zhì)麩皮100克,自來水600毫升,葡萄糖10克,將上述物質(zhì)充分拌勻后,分裝于帶棉塞的500毫升三角瓶中,每瓶50克,經(jīng)高壓滅菌鍋1.5磅滅菌40分鐘后,取出冷卻至40℃以下在無菌條件下接種,然后置于32-36℃培養(yǎng)基中培養(yǎng)96-120小時(shí),待菌絲長滿后可作二級(jí)種使用。
固體曲培養(yǎng)取10kg麩皮分裝于曲盤,厚度為2cm,分層通風(fēng)發(fā)酵,發(fā)酵溫度為35-38℃,培養(yǎng)96小時(shí)后,麩皮曲長滿菌絲并出現(xiàn)淡紅色,發(fā)酵即可終止,并干燥(溫度應(yīng)在40℃以下)粉碎,為粗酶制劑。
將橙色紅曲菌的斜面試管菌在無菌條件下轉(zhuǎn)接茄型瓶斜面30-32℃下培養(yǎng)72-96小時(shí)后,培養(yǎng)基與菌苔出現(xiàn)杏紅色,再轉(zhuǎn)接三角瓶麩皮培養(yǎng)基培養(yǎng),在32-36℃條件下培養(yǎng)96-120小時(shí)后,轉(zhuǎn)通風(fēng)制曲或簾子曲培養(yǎng),培養(yǎng)溫度為35℃±3,通風(fēng)量視曲溫而定,培養(yǎng)72小時(shí)后,麩皮出現(xiàn)淡紅色即可低溫干燥、粉碎。
交粉碎后的粗酶制劑按5%的比例加入調(diào)至20-25度尾酒與黃水的混合液中,混合液中的酸度為1%,攪勻密封后置于35℃±3條件下酯化7天即發(fā)酵結(jié)束。
將發(fā)酵液蒸餾,收集60度以上的酒液即為高己酸乙酯調(diào)味酒,酯含量達(dá)400mg/100ml以上。60度以下的余酒可作下輪發(fā)酵酯化母液(培養(yǎng)基)。
實(shí)施例2為了簡(jiǎn)化工藝,可利用發(fā)酵池進(jìn)行固體發(fā)酵高酯調(diào)味酒,具體方法是將池底糟加入投糧量的3%粗酶制劑與生產(chǎn)大曲粉同時(shí)投入拌勻入池,待發(fā)酵結(jié)束(通常為45-60天),起糟單獨(dú)蒸餾,可得含酯300mg/100ml以上的高酯調(diào)味酒。按投糧量的5%加入粗酶制劑,可提高己酸乙酯含量,降低乳酸乙酯的含量,從而提高酒的產(chǎn)量和質(zhì)量。
工藝流程(如圖)。
權(quán)利要求
1.新菌株橙色紅曲N8Monascus aurntiacus(AS3.4693),其特征在于1-1.在麥芽汁培養(yǎng)基和MEN培養(yǎng)基上生長時(shí),菌落黃色,蔓延擴(kuò)展,有少量褶皺;氣生菌絲豐富呈絲絨狀;菌絲體最初為淺黃色,老熟后呈橙色,背部淺赭石色。1-2.在G25N培養(yǎng)基上生長時(shí),菌落蔓延擴(kuò)展,氣生菌絲極為豐富,呈密實(shí)地毯狀,杏黃至杏紅色,背面鐵棕色,有紅色素分泌于培養(yǎng)基中。1-3.在土豆培養(yǎng)基上,氣生菌絲玉粉紅色。1-4.鏡檢形態(tài)為菌絲體分隔、分枝,壁較光滑,直徑3-7微米,內(nèi)含紅色油滴;被子器橙紅色、球形,直徑40-75微米,子囊孢子光滑無色,橢圓形5×7×4.5-5微米,卵形4.5×7微米。
2.高己酸乙酯調(diào)味酒的生產(chǎn)方法,其特征在于采用權(quán)利要求1所述的新菌株,斜面培養(yǎng)接種后,在溫度30-32℃條件下,培養(yǎng)72-96小時(shí)后,轉(zhuǎn)接茄形瓶培養(yǎng),在30-32℃條件下培養(yǎng)72-96小時(shí)后,轉(zhuǎn)接三角瓶麩皮培養(yǎng)基培養(yǎng),在32-36℃條件下培養(yǎng)96-120小時(shí)后,轉(zhuǎn)接通風(fēng)曲或簾子曲培養(yǎng)基,在35-38℃條件下培養(yǎng)72小時(shí),即為生產(chǎn)用曲。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高己酸乙酯調(diào)味酒的生產(chǎn)方法,其特征在于斜面培養(yǎng)基包括3-1. MEA(%)麥芽提取物2,蛋白胨0.1,葡萄糖2,瓊脂1.5,PH值5.1-5.4。3-2. G25N(%)NaNO30.3,K2HPO40.1,KCL0.05,MgSO4.7H2O0.05,F(xiàn)eSO47H2O0.01,酵母提取物0.5,瓊脂1.5,甘油23,PH值6.5-6.7。3-3.酵母膏0.5,葡萄糖1,瓊脂2,蔗糖1,麩皮浸出準(zhǔn)定溶100毫升,PH自然值。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域的新菌株及其應(yīng)用。本發(fā)明從江蘇省軍區(qū)運(yùn)西農(nóng)場(chǎng)所屬江蘇華威保健品廠紅曲霉菌的曲粉中經(jīng)選育出N
文檔編號(hào)C12G3/02GK1160764SQ9710024
公開日1997年10月1日 申請(qǐng)日期1997年1月13日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月13日
發(fā)明者丁前勝 申請(qǐng)人:丁前勝