專利名稱：富含配基異黃酮的植物蛋白乳清及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及富含配基異黃酮的植物蛋白乳清，富含配基異黃酮的乳清蛋白材料，配基異黃酮材料，染料木黃酮含量高的材料，黃豆苷原含量高的材料以及從植物蛋白乳清中生產(chǎn)它們的方法。
異黃酮存在于多種豆科植物(包括植物蛋白材料如大豆)中。這些化合物包括黃豆苷，6”-氧乙?；S豆苷，6”-氧丙二酸單?；S豆苷，黃豆苷原，染料木苷，6”-氧乙?；玖夏拒?，6”-氧丙二酸單?；玖夏拒眨玖夏军S酮，黃豆黃素苷(glycitin)，6”-氧乙?；S豆黃素苷，6”-氧丙二酸單?；S豆黃素苷，黃豆黃素，鷹嘴豆芽素A，剌芒柄花素和擬雌內(nèi)酯。一般地，這些化合物與大豆本身的苦味有關(guān)。
在生產(chǎn)象植物蛋白分離物和濃縮液這類商品時(shí)，中心問(wèn)題是除去這些物質(zhì)。例如，在常規(guī)的生產(chǎn)大豆蛋白質(zhì)分離物的方法中，豆片用堿性水介質(zhì)萃取，許多異黃酮與豆蛋白一起溶解于萃取液中。通過(guò)酸化萃取液，蛋白質(zhì)從萃取液中沉淀并分離出來(lái)，形成一種分離物，留下保留了許多溶解的異黃酮的乳清，留在酸沉淀的蛋白質(zhì)分離物中的殘余異黃酮通常通過(guò)徹底洗滌分離物而除去。乳清和洗滌液一般就扔掉了。植物蛋白乳清中的異黃酮包括異黃酮葡糖苷，異黃酮共軛物和配基異黃酮。異黃酮葡糖苷有一個(gè)葡萄糖分子連在該化合物的異黃酮部分上。異黃酮共軛物有另外的基團(tuán)連在葡萄糖分子上，例如，6”-氧乙?；玖夏拒沼幸粋€(gè)乙酸基連在葡萄糖分子的6-位上。配基異黃酮由未連接葡萄糖分子的異黃酮部分所組成。
大豆乳清含有三“族”分別為葡糖苷，共軛物和配基的異黃酮化合物染料木黃酮族，黃豆苷原族和黃豆黃素族。染料木黃酮族包括葡糖苷染料木苷，共軛物6”-氧丙二酸單?；玖夏拒?染料木苷的6’-丙二酸酯)和6”-氧乙?；玖夏拒?染料木苷的6”-乙酸酯)以及配基染料木黃酮。黃豆苷原族包括葡糖苷黃豆苷，共軛物6”-氧丙二酸單?；S豆苷和6”-氧乙酰基黃豆苷以及配基黃豆苷原。黃豆黃素族包括葡糖苷黃豆黃素苷，共軛物6”-氧丙二酸單?；S豆黃素苷和配基黃豆黃素。
雖然在醫(yī)療評(píng)價(jià)中對(duì)所有的異黃酮感興趣，但是最讓人感興趣的是具體的異黃酮的配基化合物。染料木黃酮和黃豆苷原能顯著減少心血管危險(xiǎn)因素，“植物和哺乳動(dòng)物雌激素對(duì)雌性猴子血漿脂質(zhì)的影響”，循環(huán)(Circulation)，第90卷，第1259頁(yè)(1994年10月)。染料木黃酮和黃豆苷原也被認(rèn)為是能夠減輕由婦女內(nèi)源性雌激素水平的降低或改變引起的疾病的癥狀如絕經(jīng)或經(jīng)前綜合癥。而且，近來(lái)認(rèn)識(shí)到，植物材料如大豆中所含的配基異黃酮可能會(huì)抑制人類癌細(xì)胞如乳腺癌細(xì)胞和前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，如下列文章中所描述的“染料木黃酮抑制人類乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，不依賴于雌激素受體和多藥物抗性基因”，皮特森(Peterson)和巴尼斯(Barnes)著，發(fā)表在生物化學(xué)和生物物理研究通訊(Biochemical and Biophysical ResearchCommunications)第179卷第1期，第661-667頁(yè)(1991年8月30日)上；“染料木黃酮和鷹嘴豆芽素A抑制人類前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，但不抑制表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸的自磷酸化”，皮特森和巴尼斯著，發(fā)表在前列腺(Prostate)第22卷第335-345(1993)頁(yè)上；以及巴尼斯等人寫的發(fā)表在膳食中的誘變劑和致癌劑(Mutagens andCarcinogens in the Diet)第239-253(1990)頁(yè)上的“大豆對(duì)乳腺癌模型中哺乳動(dòng)物腫瘤的抑制?！闭缟鲜鲇涊d的，配基異黃酮包括黃豆苷原，染料木黃酮和黃豆黃素。這些配基異黃酮具有下列通式
其中R1,R2,R3和R4可以選自H,OH和OCH3。具有上式結(jié)構(gòu)的染料木黃酮其中R1=OH,R2=H,R3=OH和R4=OH；具有上式結(jié)構(gòu)的黃豆苷原其中R1=OH,R2=H,R3=H和R4=OH；具有上式結(jié)構(gòu)的黃豆黃素其中R1=OH,R2=OCH3,R3=H和R4=OH。
因此，本發(fā)明的目的是提供配基異黃酮和植物蛋白乳清的濃縮液；提供一種含有這些化合物的蛋白乳清材料，特別是高含量的染料木黃酮材料，高含量黃豆苷原材料和含有配基異黃酮的材料。本發(fā)明也提供制備富含配基的植物蛋白乳清，富含配基的植物乳清蛋白材料，染料木黃酮含量高的材料，黃豆苷原含量高的材料和含有配基異黃酮的材料的制備方法。
已知一種把植物蛋白異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為配基異黃酮的方法，該方法由1995年6月7日申請(qǐng)、本申請(qǐng)的受讓人所有的正在審查中的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?8/477,102提供。把異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮的方法也是已知的。一種把植物蛋白乳清中異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮的方法由本申請(qǐng)的受讓人所有的、正在審查中的PCT/US/94/10699提供。
本領(lǐng)域中，把異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮的其它方法也已經(jīng)知道，如Obata等人的日本專利申請(qǐng)258,669中所述的方法。這些方法并未提供將異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為配基異黃酮，也未提供染料木黃酮含量高的材料，未提供黃豆苷原含量高的材料，未提供配基異黃酮材料。而且，這些方法中，糖苷轉(zhuǎn)化為配基的轉(zhuǎn)化程度中等，并需要長(zhǎng)時(shí)間來(lái)達(dá)到這種中等程度的轉(zhuǎn)化。因此，這些方法不適于大規(guī)模的商業(yè)生產(chǎn)。
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種富含配基異黃酮的植物蛋白乳清及從植物蛋白乳清制備富含配基異黃酮的植物蛋白乳清的方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種配基異黃酮乳清蛋白材料以及從植物蛋白乳清制備該材料的方法。
本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種染料木黃酮含量高的材料及從植物蛋白乳清制備該材料的方法。
本發(fā)明的另外一個(gè)目的是提供一種黃豆苷原含量高的材料及從植物蛋白乳清制備該材料的方法。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種配基異黃酮材料以及從植物蛋白乳清制備該材料的方法。
這些目的以及其它目的將在下面提供的對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)描述中一一達(dá)到。
本發(fā)明是一種富含配基異黃酮的植物蛋白乳清以及從含有異黃酮共軛物的植物蛋白乳清生產(chǎn)富含配基異黃酮的植物蛋白乳清的方法。該方法包括在一定溫度和pH值下，處理含有異黃酮共軛物的植物蛋白乳清，經(jīng)足夠長(zhǎng)的時(shí)間使異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷；在一定溫度和pH值下，使一種酶與植物蛋白乳清中的異黃酮葡糖苷接觸足夠長(zhǎng)的時(shí)間以使至少大部分異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)在大約2℃-121℃的溫度和大約6-13.7的pH值下，處理植物蛋白乳清，使異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，讓異黃酮葡糖苷與植物蛋白乳清中的一種酶在大約5℃-75℃的溫度和大約3-9的pH值下接觸，使異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮。
異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷以及異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮都達(dá)到了高的轉(zhuǎn)化率。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少80％的異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷，至少80％的異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮。
另一方面，本發(fā)明是一種配基異黃酮乳清蛋白材料以及從含有異黃酮共軛物的植物蛋白乳清生產(chǎn)配基異黃酮乳清蛋白材料的方法。一種含有蛋白質(zhì)和配基異黃酮的配基異黃酮乳清蛋白材料是從富含配基的植物蛋白乳清中回收得到的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，配基異黃酮乳清蛋白材料通過(guò)超濾，熱凝集和脫水中的至少一種方法回收得到。
另外一個(gè)方面，本發(fā)明是一種染料木黃酮含量高的材料以及從含有異黃酮共軛物的植物蛋白乳清生產(chǎn)染料木黃酮含量高的材料的方法。一種來(lái)源于植物蛋白乳清的配基異黃酮乳清蛋白材料用含水醇萃取劑萃取來(lái)生產(chǎn)富含配基異黃酮的萃取液。該萃取液與一種吸附材料接觸一段足夠長(zhǎng)的時(shí)間以從萃取液中分離出染料木黃酮含量高的材料。
還有一個(gè)方面，本發(fā)明是一種黃豆苷原含量高的材料以及從含有異黃酮共軛物的植物蛋白乳清生產(chǎn)黃豆苷原含量高的材料的方法，一種來(lái)源于植物蛋白乳清的配基異黃酮乳清蛋白材料用含水醇萃取劑萃取來(lái)生產(chǎn)富含配基異黃酮的萃取液。該萃取液與吸附材料接觸一段足夠長(zhǎng)的時(shí)間以從萃取液中分離出黃豆苷原含量高的材料。
還有另外一個(gè)方面，本發(fā)明是一種配基異黃酮材料以及從包含異黃酮共軛物的植物蛋白乳清生產(chǎn)配基異黃酮材料的方法。來(lái)源于植物蛋白乳清的配基異黃酮乳清蛋白材料用含水醇萃取劑萃取來(lái)生產(chǎn)富含配基異黃酮的萃取液。該萃取液濃縮到大約為其原體積的15％-30％，然后通過(guò)向萃取液中加水而把配基異黃酮材料從萃取液中沉淀出來(lái)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，染料木黃酮含量高的材料從配基異黃酮材料中分離出來(lái)。將配基異黃酮材料溶于含水醇溶液中，然后讓含水醇溶液與吸附材料接觸足夠長(zhǎng)的時(shí)間以分離出染料木黃酮含量高的材料。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，把黃豆苷原含量高的材料從配基異黃酮材料中分離出來(lái)。將配基異黃酮材料溶于含水醇溶液中，然后讓含水醇溶液與吸附材料接觸一段足夠長(zhǎng)的時(shí)間以分離出黃豆苷原含量高的材料。
本方法的起始原料是一種植物蛋白乳清，其中植物蛋白乳清定義為可溶性蛋白質(zhì)、異黃酮和其它從植物蛋白萃取液中除去植物蛋白凝乳后留下的水溶性化合物的水溶液。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，起始原料為大豆乳清，因?yàn)楸痉椒ㄌ貏e適合于從大豆材料生產(chǎn)富含配基異黃酮的乳清，配基異黃酮乳清蛋白材料，染料木黃酮含量高的材料，黃豆苷原含量高的材料，以及配基異黃酮材料。
植物蛋白乳清起始原料含有異黃酮共軛物，異黃酮葡糖苷和配基異黃酮。例如，大豆乳清含有異黃酮葡糖苷-染料木苷，黃豆苷和黃豆黃素苷；異黃酮共軛物-染料木苷，黃豆苷和黃豆黃素苷的6”-丙二酸酯和染料木苷和黃豆苷的6”-乙酸酯；和配基異黃酮-染料木黃酮，黃豆苷原和黃豆黃素。大豆乳清原料中的異黃酮主要是異黃酮共軛物。
植物蛋白乳清原料一般作為常規(guī)植物蛋白分離物生產(chǎn)方法中的副產(chǎn)物而得到。植物蛋白原料如豆片(其中的油已經(jīng)通過(guò)溶劑萃取除去)可以用高于植物蛋白原料中的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的pH的含水萃取劑萃取來(lái)生產(chǎn)含有蛋白質(zhì)、異黃酮和其它通過(guò)萃取從植物蛋白原料溶解下來(lái)的化合物的萃取液。把該萃取液與不溶于萃取液的植物材料分開(kāi)，然后將產(chǎn)生的含有可溶性蛋白質(zhì)和異黃酮的萃取液的pH值調(diào)節(jié)到大約為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)值(對(duì)大豆蛋白質(zhì)為約pH4.4-4.6)，以便將蛋白質(zhì)從萃取液中沉淀出來(lái)。分離沉淀的蛋白質(zhì)來(lái)生產(chǎn)植物蛋白分離物，留下植物蛋白乳清原料。異黃酮的絕大部分還溶解在乳清中。為了最大限度地回收乳清中的異黃酮，最好另外再洗滌沉淀的蛋白質(zhì)，將每次的洗液添加到乳清中。
植物蛋白乳清原料可以是混合在水中的經(jīng)噴霧干燥的植物蛋白乳清。為方便操作，植物蛋白乳清可以經(jīng)噴霧干燥以回收作為固體材料的乳清蛋白(在沉淀出蛋白分離物后，仍然溶于乳清中的蛋白質(zhì))，異黃酮和其它化合物?？梢栽趪婌F干燥材料中加入水而重新組成植物蛋白乳清原料。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，淤漿中每100g水含有約2-10g噴霧干燥的材料以確保乳清不太粘，同時(shí)又保證提供足夠的異黃酮以生產(chǎn)所要的富含配基異黃酮的乳清，配基異黃酮乳清蛋白材料，染料木黃酮含量高的材料，黃豆苷原含量高的材料和配基異黃酮材料。
在第一步轉(zhuǎn)化或操作中，將植物蛋白乳清原料中的異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷以生產(chǎn)富含異黃酮葡糖苷的植物蛋白乳清。已發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化依賴于乳清的pH值和溫度。
異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷的pH值范圍約為6-13.5。必要時(shí)，應(yīng)將植物蛋白乳清的pH值調(diào)節(jié)到所要的pH值。大豆蛋白乳清的pH值一般約為4.4-4.6，應(yīng)當(dāng)用堿或堿性試劑將其調(diào)節(jié)到所要的pH范圍。pH值可以用任何能增大體系的pH值的合適的堿，苛性試劑，或堿性試劑，包括氫氧化鈉，氫氧化鉀，和氫氧化鈣。已發(fā)現(xiàn)在相對(duì)較強(qiáng)的堿性條件下，轉(zhuǎn)化進(jìn)行得更容易，優(yōu)選pH9-11。pH值應(yīng)當(dāng)維持在pH12以下，因?yàn)楫慄S酮葡糖苷-染料木苷，黃豆苷和黃豆黃素苷，特別是黃豆苷在pH12或以上時(shí)容易降解。在低的pH值條件下，例如約pH6時(shí)，反應(yīng)不易進(jìn)行，但是，在較高溫度和/或壓力下，反應(yīng)將進(jìn)行。
異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷的溫度范圍為大約2℃-121℃。轉(zhuǎn)化容易發(fā)生的溫度范圍依賴于乳清的pH值。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)pH相對(duì)較高時(shí)，轉(zhuǎn)化在較低溫度容易進(jìn)行。例如，當(dāng)乳清的pH值大約為11時(shí)，轉(zhuǎn)化在大約5℃-約50℃的溫度范圍能迅速而有效地發(fā)生；當(dāng)乳清的pH值大約為9時(shí)，轉(zhuǎn)化在大約45℃-73℃的溫度范圍能有效地發(fā)生。當(dāng)乳清的pH值相對(duì)較低時(shí)，轉(zhuǎn)化在較高溫度下發(fā)生。例如，當(dāng)乳清的pH值為6時(shí)，轉(zhuǎn)化發(fā)生在大約80℃-121℃的溫度范圍。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在乳清的pH值為約11，約35℃的溫度下轉(zhuǎn)化能有效地發(fā)生。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在乳清pH值為約9、大約73℃的溫度下，轉(zhuǎn)化能有效地發(fā)生。
異黃酮共軛物基本上完全轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷所需的時(shí)間取決于植物蛋白乳清的pH值和溫度。時(shí)間范圍從15分鐘到24小時(shí)，在較高的pH值和較高的溫度下，轉(zhuǎn)化進(jìn)行得更為迅速。在大約9-10的pH值和，73℃的溫度下，轉(zhuǎn)化在約4-6小時(shí)內(nèi)基本完成；在大約10-11的pH值和35℃的溫度下，轉(zhuǎn)化在約30分鐘到1小時(shí)內(nèi)基本完成。在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，在大約11的pH值和大約35℃的溫度下，異黃酮共軛物能在約45分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷。
第一步轉(zhuǎn)化的效率顯著地高，可將大約80％-100％的異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷。一般地，可看到至少95％的轉(zhuǎn)化率。這樣高的轉(zhuǎn)化率對(duì)用于大規(guī)模的商業(yè)生產(chǎn)是特別有吸引力的。
在第二步轉(zhuǎn)化或操作中，第一步轉(zhuǎn)化中生產(chǎn)的異黃酮葡糖苷，以及以前留在乳清中的異黃酮葡糖苷，通過(guò)酶催化反應(yīng)轉(zhuǎn)化為配基異黃酮。該轉(zhuǎn)化從富含異黃酮葡糖苷的乳清生產(chǎn)富含配基異黃酮的植物蛋白乳清。
發(fā)現(xiàn)，第二步轉(zhuǎn)化取決于存在于乳清中的酶的濃度和特性。進(jìn)行轉(zhuǎn)化所需要的酶是能夠切斷異黃酮葡糖苷中的異黃酮部分與葡萄糖分子之間的糖苷鍵的酶。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這樣的酶為能切斷1,4-糖苷鍵的糖酶。將異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮所需的酶濃度依賴于多種因素，包括乳清中存在的酶的種類，酶濃度的分布，酶的活性，異黃酮葡糖苷的濃度，以及轉(zhuǎn)化過(guò)程中乳清的pH值和溫度。
這些酶可以是天然存在于植物蛋白乳清中的，來(lái)自乳清中的微生物生長(zhǎng)的，或者是作為添加劑加到乳清中的。天然存在的或來(lái)自乳清中生長(zhǎng)的微生物的酶，在這里被稱為“殘余”酶，而添加到乳清中的酶在這里被稱為“補(bǔ)充”酶。
乳清中應(yīng)當(dāng)有足量的酶以使至少大部分，優(yōu)選地，基本上所有的異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮。一般地，如果乳清中的殘余酶不足以進(jìn)行轉(zhuǎn)化，應(yīng)向乳清中添加補(bǔ)充酶。如上所述，多種因素決定了酶濃度是否足以進(jìn)行這種轉(zhuǎn)化。
如果添加了補(bǔ)充酶，添加的補(bǔ)充酶應(yīng)當(dāng)使乳清中酶的總濃度約占乳清固體干重的約0.1％-10％。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，不論乳清中是否存在足量的殘余酶，都向乳清中加入補(bǔ)充酶，因?yàn)樘砑友a(bǔ)充酶極大地減少了基本上使糖苷完全轉(zhuǎn)化為配基所需要的時(shí)間。
補(bǔ)充酶的選擇依賴于在選定的pH值和溫度條件下酶的最佳活性和費(fèi)用。補(bǔ)充酶是能夠切斷異黃酮葡糖苷的異黃酮部分與葡萄糖部分之間的鍵的酶，如能切斷1,4-糖苷鍵的糖酶。優(yōu)選的補(bǔ)充酶為商業(yè)上可得到的α-和β-葡糖苷酶，β-半乳糖苷酶，葡糖-淀粉酶和果膠酶。特別優(yōu)選諸如Biopectinase100L(優(yōu)選在約3-6的pH范圍使用)，Biopectinase300L(最佳pH范圍約為3-6),BiopectinaseOK 70L(最佳pH值范圍約3-6),Biolactase30,000(最佳pH范圍約3-6)和Neutral Lactase(最佳pH范圍約6-8)之類的酶，所有這些酶都可從Quest International,1833 57th street,Post Office Box 3917,Sarasota,Florida 34243購(gòu)得。還可特別優(yōu)選Lactase F(最佳pH范圍約4-6)和Lactase 50,000(最佳pH值范圍約4-6)，這些酶可從Amano International Enzyme Co.,Inc.,Post Office Box1000,Troy,Virginia 22974購(gòu)得。其它特別優(yōu)選的補(bǔ)充酶包括G-ZymeG990(最佳pH值范圍約4-6)和Enzeco Fungal LactaseConcentrate(最佳pH值范圍約4-6)，可從Enzyme DevelopmentCorporation,2 Penn Plaza,Suite 2439,New York,New York 10121購(gòu)得；Lactozyme3000L(最佳pH范圍約6-8)和α-Gal 600L(最佳pH范圍約4-6.5)，可從Novo Nordisk Bioindustrials,Inc.,33 TurnerRoad,Danbury,Connecticut 06813購(gòu)得；Neutral Lactase(最佳pH值范圍約6-8)，可從Pfizer Food Science Group,205 East 42ndStreet,New York,New York10017得到；以及MaxilactL2000(最佳pH范圍約4-6),可從Gist Brocades Food Ingredients,Inc.,King ofPrussia,Pennsylvania 19406購(gòu)得。
一旦存在足夠濃度的酶，不論是來(lái)自殘余酶，還是來(lái)自補(bǔ)充酶，還是來(lái)自二者，這些酶在一定的pH值和溫度下，與乳清中的異黃酮葡糖苷接觸足夠長(zhǎng)的時(shí)間，把至少大部分，優(yōu)選地，基本上所有的異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮。如果必要的話，富含異黃酮葡糖苷的乳清的pH值應(yīng)當(dāng)調(diào)節(jié)到使酶與異黃酮葡糖苷能有效反應(yīng)的pH值范圍。組合的殘余酶和補(bǔ)充酶與異黃酮葡糖苷反應(yīng)的pH值范圍為約3-9。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，乳清中的殘余酶在約7-9的pH值范圍內(nèi)有活性，盡管有人認(rèn)為在反應(yīng)的過(guò)程中乳清的pH會(huì)降低。補(bǔ)充酶在酶的生產(chǎn)廠商指定的最適pH值范圍內(nèi)有活性，如上述的幾個(gè)具體的酶。一般地，補(bǔ)充酶在約6-8的中性pH范圍或約4-6的酸性pH范圍內(nèi)有活性。酸性酶在pH值約為3時(shí)也表現(xiàn)了出活性。
大多數(shù)情況下，通過(guò)添加一種或多種合適的酸如乙酸、硫酸、磷酸、鹽酸或任何其它合適的試劑，可以把乳清的pH值從第一步的相對(duì)高的或堿性的pH調(diào)節(jié)下來(lái)。優(yōu)選的試劑是食品級(jí)的酸性試劑或酸。
異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮的溫度范圍為大約5℃-75℃。溫度顯著地影響酶的活性從而影響轉(zhuǎn)化的速率。補(bǔ)充酶在高于72.5℃的溫度有活性，例如α-Gal 600L在75℃時(shí)有活性，但是優(yōu)選使轉(zhuǎn)化在較低溫度下進(jìn)行以避免酶失活。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)化在約35℃-45℃的溫度范圍進(jìn)行。
優(yōu)選地，使酶反應(yīng)在與第一步轉(zhuǎn)化相同的溫度下進(jìn)行，從而無(wú)需在第一步轉(zhuǎn)化后改變?nèi)榍宓臏囟?。最?yōu)選地，第二步轉(zhuǎn)化與第一步轉(zhuǎn)化都在35℃下進(jìn)行。
同時(shí)也優(yōu)選，使異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮的整個(gè)過(guò)程中，溫度保持恒定。然而，在某些情況下，在反應(yīng)的過(guò)程中，升高、降低或以其它方式改變溫度可能更為適宜。
第二步轉(zhuǎn)化所需的時(shí)間取決于與酶相關(guān)的因素，特別是乳清的濃度，溫度及pH值。大多數(shù)情況下，能夠在24小時(shí)之內(nèi)實(shí)現(xiàn)完全轉(zhuǎn)化，但是，優(yōu)選添加補(bǔ)充酶以極大地提高反應(yīng)速率。選定的補(bǔ)充酶，酶濃度，pH值和溫度最好使轉(zhuǎn)化在2小時(shí)之內(nèi)，最優(yōu)選在1小時(shí)之內(nèi)，基本完成。
在第二步轉(zhuǎn)化中，異黃酮葡糖苷到配基異黃酮的轉(zhuǎn)化程度是非常高的，一般地從至少約80％到100％。通常至少有95％的異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮。
在異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮以后，可以按需要使用富含配基異黃酮的乳清而不需要干燥或去除乳清中的蛋白質(zhì)，或者另外一種選擇，可將配基異黃酮乳清蛋白材料回收以濃縮蛋白材料中的配基異黃酮。這里所用的“配基異黃酮乳清蛋白材料”被定義為一種包含蛋白質(zhì)、配基異黃酮和可以沉淀出來(lái)并從植物蛋白乳清中分離出去的殘余植物化合物的材料。富含配基異黃酮的蛋白材料可以用常規(guī)方法如超濾，熱凝集和脫水方法回收。產(chǎn)生的配基異黃酮乳清蛋白材料可以用常規(guī)方法脫水和干燥。
也可用冷卻乳清的辦法，從乳清中回收配基異黃酮乳清蛋白材料。配基異黃酮乳清蛋白材料不溶于冷卻的乳清，可以作為沉淀，通過(guò)離心冷卻的乳清而從乳清中分離出來(lái)。優(yōu)選地，將乳清冷卻到約4℃以沉淀出蛋白材料。
在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，將乳清濃縮以提高配基異黃酮乳清蛋白材料的回收。發(fā)現(xiàn)，通過(guò)濃縮乳清而增大乳清中固液比，可以增加從乳清中捕獲配基異黃酮乳清蛋白材料的量。乳清可以通過(guò)加熱，減壓下放置乳清或二者并用來(lái)濃縮。優(yōu)選地，將乳清濃縮到固液比大約為1∶3-1∶6，最優(yōu)選約1∶3。
染料木黃酮含量高的材料和黃豆苷原含量高的材料可以從回收的配基異黃酮乳清蛋白材料制得。這里所用的“染料木黃酮含量高的材料”被定義為一種至少含有40％的染料木黃酮，最優(yōu)選地至少含有90％的染料木黃酮和殘余的植物材料的一種植物材料，如果染料木黃酮含量高的材料是從大豆乳清中回收得到的，則該殘余的植物材料就是殘余的大豆材料。黃豆苷原含量高的材料包含至少40％的黃豆苷原和殘余的植物材料。
為了生產(chǎn)染料木黃酮和黃豆苷原含量高的材料，先洗滌配基異黃酮乳清蛋白材料以除去不希望有的鹽和糖，然后干燥。為洗滌配基異黃酮乳清蛋白材料，把材料用水稀釋，優(yōu)選稀釋為含大約1％-6％的固體，最優(yōu)選稀釋為含大約2％的固體。洗滌用的水可以是任何溫度的，然而優(yōu)選大約25℃-75℃，最優(yōu)選大約60℃的洗滌用的水。洗滌完的配基異黃酮乳清蛋白材料從洗滌液中分離，干燥。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)離心材料和把上清液從材料中傾潷出來(lái)的方法來(lái)分離材料。
然后，配基異黃酮乳清蛋白材料可以用含水醇萃取劑萃取以從乳清蛋白中分離配基異黃酮和生產(chǎn)富含配基異黃酮的萃取液。優(yōu)選低分子量的醇如甲醇，特別是乙醇作為萃取劑的醇組分。發(fā)現(xiàn)配基異黃酮能溶于幾乎所有醇濃度的萃取劑中。當(dāng)萃取劑包含大約30％-90％的醇，最優(yōu)選地包含大約60％-80％的醇時(shí)，配基異黃酮特別易于溶解。雖然含水醇溶液是優(yōu)選的溶劑，但是其它的溶劑包括水，乙腈，二氯甲烷，丙酮和乙酸乙酯以及這些溶劑的混和物都可用于從乳清蛋白材料中萃取配基異黃酮。
使用最小量的萃取劑進(jìn)行萃取。優(yōu)選萃取劑與配基異黃酮乳清蛋白材料的重量比不超過(guò)11∶1。在一個(gè)實(shí)施方案中，材料可以用逆流萃取方法萃取，其中萃取劑與材料的重量比為大約6∶1-8∶1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，材料可以用兩份萃取劑萃取，其中萃取劑與材料的總重量比不超過(guò)11∶1。
雖然萃取可以在任何pH下進(jìn)行，但是優(yōu)選使萃取劑的pH值大約為配基異黃酮乳清蛋白材料中蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)以使蛋白質(zhì)在萃取劑中的溶解度最小。當(dāng)乳清蛋白為大豆乳清蛋白時(shí)，優(yōu)選的萃取劑其pH值為大約3-6，最優(yōu)選大約4.5。
萃取可在任何溫度，最高達(dá)到萃取劑的沸點(diǎn)下進(jìn)行，優(yōu)選在大約25℃-70℃的溫度下進(jìn)行。為了減少?gòu)呐浠慄S酮乳清蛋白材料中萃取配基異黃酮所需的時(shí)間，優(yōu)選使萃取在高于室溫的溫度下，最優(yōu)選在大約60℃下進(jìn)行。
萃取后，通過(guò)使萃取液與吸附材料接觸足以使染料木黃酮和黃豆苷原含量高的材料從萃取液中分離出來(lái)的時(shí)間可以將染料木黃酮和黃豆苷原含量高的材料從富含配基異黃酮的萃取液中分離出來(lái)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)反相高效液相色譜(HPLC)可以把染料木黃酮和黃豆苷原含量高的材料從萃取液中分離出來(lái)。通過(guò)洗脫流過(guò)吸附材料顆粒的萃取液，可以把染料木黃酮和黃豆苷原與萃取液中的其它異黃酮和雜質(zhì)分離開(kāi)，該吸附材料以化合物特異性方式可釋放地結(jié)合染料木黃酮、黃豆苷原，其它異黃酮和雜質(zhì)，因此可使每個(gè)化合物都分離開(kāi)來(lái)。
先把富含配基異黃酮的萃取液過(guò)濾以除去會(huì)堵塞HPLC柱子的不溶性材料。通過(guò)用顆粒狀吸附材料裝填常規(guī)的可商購(gòu)的HPLC柱子而制備HPLC柱，該吸附材料將以化合物特異性方式可釋放地結(jié)合染料木黃酮，黃豆苷原，其它異黃酮和雜質(zhì)。吸附材料可以是任何反相HLPC填料，但是，優(yōu)選的填料可以根據(jù)填充容量，分離效果和費(fèi)用來(lái)選擇。這樣的一個(gè)優(yōu)選的填料是從瑞典的?？酥Z貝爾，諾貝爾工業(yè)公司買到Kromasil C18 16μm 100珠粒。
讓經(jīng)過(guò)過(guò)濾的萃取液流過(guò)填充的HPLC柱，直到柱子的所有結(jié)合位點(diǎn)都被異黃酮充分飽和，這可通過(guò)柱子流出液中出現(xiàn)的異黃酮而檢測(cè)。然后，可以用極性洗脫劑洗脫HLPC柱子以進(jìn)行分離。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，洗脫劑為含水醇。含水醇洗脫劑其醇含量可以為約30％-90％醇，優(yōu)選醇含量為約50％以提供對(duì)異黃酮好的分離和溶解度。優(yōu)選的醇為甲醇或乙醇，其中當(dāng)染料木黃酮或黃豆苷原含量高的產(chǎn)品材料用于食品或藥品時(shí)，優(yōu)選乙醇。
染料木黃酮和黃豆苷原含量高的材料從柱洗出液中收集。含有黃豆苷原的洗出液餾分先從柱子上洗脫下來(lái)，隨后是黃豆黃素餾分，再后是極性更大的染料木黃酮餾分。黃豆苷原和染料木黃酮餾分在它們從柱子上洗脫下來(lái)的時(shí)候收集。如果需要的話，黃豆黃素餾分也可收集。
餾份中的醇可通過(guò)蒸發(fā)除去，之后可用常規(guī)的分離方法如離心或過(guò)濾回收染料木黃酮和黃豆苷原以及黃豆黃素含量高的材料?；厥盏娜玖夏军S酮含量高的材料包含至少40％的染料木黃酮，優(yōu)選至少90％的染料木黃酮和殘余的植物材料，如果是從大豆乳清中回收染料木黃酮，則該殘余的植物材料為殘余的大豆材料。回收的黃豆苷原含量高的材料包含至少40％的黃豆苷原和殘余的植物材料，該植物材料一般包含相當(dāng)數(shù)量的黃豆黃素。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，配基異黃酮材料是從富含配基異黃酮的萃取液生產(chǎn)的。這里所用的“配基異黃酮材料”被定義為含有至少10％的染料木黃酮和至少5％的黃豆苷原以及其它異黃酮和殘余的植物化合物的材料。
萃取完配基異黃酮乳清蛋白材料后，可濃縮富含配基異黃酮的萃取液以便使配基異黃酮從萃取液中沉淀出來(lái)?？梢杂眉訜彷腿∫海演腿∫褐糜跍p壓下或二者共用來(lái)濃縮萃取液。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，把萃取液濃縮到其原來(lái)體積的約15％-30％。
通過(guò)向萃取液中加水可使配基異黃酮材料從萃取液中沉淀出來(lái)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，每份濃縮的萃取液添加約6-8份的水。水加入到萃取液中后，一些配基異黃酮就會(huì)沉淀出來(lái)。
為了最大限度地從萃取液中回收配基異黃酮材料，把萃取液和水充分混合，然后冷卻。萃取液和水一起混合一段時(shí)間，優(yōu)選大約30分鐘至1小時(shí)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，萃取液與水在大約50℃-75℃，最優(yōu)選大約70℃的溫度下混合。當(dāng)水和萃取液充分混合后，冷卻混合物以沉淀出配基異黃酮材料。優(yōu)選地，把萃取液/水混合物冷卻到大約5℃-20℃，最優(yōu)選大約10℃，經(jīng)過(guò)足夠長(zhǎng)的時(shí)間以沉淀出基本上所有的配基異黃酮材料。然后用常規(guī)方法如離心或過(guò)濾把沉淀出的配基異黃酮材料從萃取液/水混合物中分離出來(lái)。
然后，分離出來(lái)的配基異黃酮材料可以用水洗滌。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在大約70℃的溫度下，用水洗滌配基異黃酮材料約5分鐘，其中洗滌水與材料的重量比為大約0.8∶1-2∶1。用常規(guī)方法如過(guò)濾或離心把配基異黃酮從洗滌液中分離出來(lái)，然后干燥?；厥盏呐浠慄S酮材料一般含有至少20％的染料木黃酮和至少10％的黃豆苷原，而材料的其余部分由殘余的植物材料(包括其它配基異黃酮)組成。如果配基異黃酮材料是從大豆乳清中分離出來(lái)的，則殘余的植物材料為大豆材料。
回收的配基異黃酮材料可以被進(jìn)一步純化以生產(chǎn)含有至少40％的染料木黃酮，優(yōu)選至少90％的染料木黃酮的染料木黃酮含量高的材料和含有至少40％的黃豆苷原的黃豆苷原含量高的材料。可以將配基異黃酮材料溶于含水醇溶劑中。優(yōu)選低分子量的醇作為溶劑的醇組分，其中用于食品和藥物時(shí)，最優(yōu)選乙醇，因?yàn)槠涞偷亩拘浴?yōu)選的溶劑醇含量為約30％-90％，其中最優(yōu)選約80％的醇含量以提供對(duì)配基異黃酮材料的好的溶解。
含有溶解的配基異黃酮材料的含水醇溶液可以與吸附材料接觸足夠長(zhǎng)的時(shí)間以便從含水醇溶液中分離出染料木黃酮和黃豆苷原含量高的材料。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，用反相HPLC把染料木黃酮和黃豆苷原含量高的材料從含水醇溶液中分離出來(lái)。HPLC柱子如前述方法制備，把含有配基異黃酮材料的含水醇溶液加到柱子上，以前述方法把染料木黃酮含量高的材料和黃豆苷原含量高的材料從柱子上洗脫下來(lái)。染料木黃酮含量高的材料含有至少40％的染料木黃酮，優(yōu)選地，至少90％的染料木黃酮和殘余的植物材料，如果染料木黃酮是從大豆乳清中回收的，則該殘余植物材料是殘余大豆材料。黃豆苷原含量高的材料含有至少40％的黃豆苷原和殘余的植物材料。
實(shí)驗(yàn)通過(guò)下列用大豆乳清作為植物蛋白乳清的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作更加詳細(xì)的說(shuō)明。這些實(shí)施例目的在于說(shuō)明，無(wú)論如何不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明范圍的限制或限定。
如前所述，大豆乳清包括具有相應(yīng)的糖苷、共軛物和配基成員的異黃酮“族”的染料木黃酮、黃豆苷原和黃豆黃素，其中染料木黃酮族中包含共軛物6”-氧丙二酸單?；玖夏拒蘸?”-氧乙?；玖夏拒?，糖苷染料木苷和配基染料木黃酮；黃豆苷原族包含共軛物6”-氧丙二酸單酰基黃豆苷和6”-氧乙?；S豆苷，糖苷黃豆苷和配基黃豆苷原；黃豆黃素族包含共軛物6”-氧丙二酸單?；S豆黃素苷，糖苷黃豆黃素苷和配基黃豆黃素。下列表中，測(cè)量了異黃酮“族”中各種異黃酮相對(duì)濃度的百分?jǐn)?shù)。例如，在染料木黃酮族中，染料木苷％+6”-氧丙二酸單?；玖夏拒眨?6”-氧乙?；玖夏拒眨?染料木黃酮％=100％。共軛物轉(zhuǎn)化為糖苷及糖苷轉(zhuǎn)化為配基的轉(zhuǎn)化程度可以通過(guò)比較一個(gè)異黃酮“族”中各種化合物的百分含量而確定。
實(shí)施例1在第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，檢測(cè)了異黃酮共軛物向異黃酮葡糖苷的轉(zhuǎn)化。利用異黃酮“族”中丙二酸酯和乙酸酯百分?jǐn)?shù)的定量減少結(jié)合相應(yīng)的同一異黃酮“族”中葡糖苷百分?jǐn)?shù)的定量增加，可以確定轉(zhuǎn)化的程度。
測(cè)定了兩個(gè)不同的溫度下，不同的pH值條件對(duì)第一步由異黃酮共軛物向異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化的影響。把噴霧干燥的大豆乳清在水中形成淤漿，形成一含2wt％固體的大豆乳清懸浮液。把該大豆乳清分成兩組，各四個(gè)樣品。每組的樣品pH值分別調(diào)節(jié)到pH6.0,pH7.0,pH9.0和pH11.0。將兩組樣品溫育24小時(shí)，其中一組在45℃下溫育，另外一組在72.5℃下溫育。分別在0,2,4,6,8和24小時(shí)時(shí)定時(shí)分折各樣品以確定樣品中異黃酮的含量。下面的表1顯示了試驗(yàn)過(guò)程中異黃酮的變化和分布。
表1樣品 染料 6”-氧丙二 6”-氧乙 染料木 黃豆苷 6”-氧丙 6”-氧 黃豆 黃豆 6”-氧丙二 黃豆木苷酸單?；? ?；? 黃酮二酸單酰 乙?；? 苷原 黃素 酸單酰基黃 黃素料木苷 料木苷 基黃豆苷 黃豆苷苷豆黃素苷百分?jǐn)?shù)pH6,45℃t=0 16 65 0 1915 65 2 18 32 3336t=2hrs15 62 0 2315 61 2 21 34 3728t=4hrs13 61 0 2613 60 2 25 30 3436t=6hrs11 61 0 2811 60 2 27 30 3337t=8hrs11 60 0 2910 60 2 28 31 3336t=24hrs 24 49 2 2516 52 0 32 30 2743pH7,45℃t=0 16 65 0 1915 65 2 1832 3530t=2hrs22 59 0 1920 50 2 1942 2534t=4hrs22 57 0 2121 57 1 2035 3233t=6hrs21 57 0 2020 58 0 2140 3030t=8hrs22 56 0 2121 57 0 2237 3133t=24hrs 17 49 0 1515 49 0 3626 2846pH9,45℃t=0 16 65 0 1915 65 218 32 32 30t=2hrs50 34 0 1650 34 015 50 20 30t=4hrs57 27 0 1557 27 016 49 17 34t=6hrs62 23 0 1562 23 015 54 13 34t=8hrs67 19 0 1467 18 015 57 10 34t=24hrs 70 17 0 1363 17 020 50 10 39pH11,45℃t=0 16 65 0 1915 65 218 32 33 36t=2hrs85 00 1582 0 018 62 0 38t=4hrs85 00 1581 0 019 63 0 37t=6hrs86 00 1479 0 021 61 0 39t=8hrs87 00 1377 0 023 60 0 40t=24hrs 90 00 1053 0 047 46 0 54pH6,72.5℃t=0 16 65 0 1915 65 218 32 3336t=2hrs33 48 0 1933 48 217 39 2734t=4hrs43 39 0 1742 39 217 46 2133t=6hrs51 33 0 1749 32 317 50 1931t=8hrs56 28 0 1654 27 316 57 1429t=24hrs 80 50 1577 5 316 66 0 34pH7,72.5℃t=0 16 65 0 1915 65 218 32 33 36t=2hrs41 43 0 1741 39 217 47 25 29t=4hrs52 32 0 1550 32 216 49 18 33t=6hrs58 27 0 1556 26 216 5. 15 35t=8hrs64 21 0 1562 20 216 55 12 32t=24hrs 59 40 3861 3 036 50 0 50pH9,72.5℃
t=0 16 65 0 1915 65 2 18 32 33 36t=2hrs83 40 1382 4 0 14 64 0 36t=4hrs88 20 1184 2 0 15 65 0 35t=6hrs90 00 1085 0 0 15 65 0 35t=8hrs91 00 985 0 0 15 65 0 35t=24hrs 100 00 085 0 0 15 100 0 0pH11,72.5℃t=0 16 65 0 1915 65 2 18 32 33 36t=2hrs86 00 1476 0 024 57 0 43t=4hrs87 00 1372 0 0 28 54 0 46t=6hrs87 00 1367 0 0 33 51 0 49t=8hrs88 00 1261 0 039 48 0 52t=24hrs78 00 2224 0 0 76 31 0 696”-氧丙二酸單?；?”-氧乙?；慄S酮共軛物相對(duì)濃度的減小和相應(yīng)的葡糖苷染料木苷，黃豆苷和黃豆黃素苷濃度的增加表明第一步轉(zhuǎn)化在高的、堿性大的pH條件下和高的溫度下進(jìn)行得迅速而完全。pH值為9和11的樣品，在45℃和72.5℃兩個(gè)溫度下，異黃酮共軛物向異黃酮葡糖苷的轉(zhuǎn)化基本上進(jìn)行完全了。pH為6和7的樣品在72.5℃的溫度下，轉(zhuǎn)化也接近完全。
實(shí)施例2在第二個(gè)試驗(yàn)中，檢測(cè)了異黃酮葡糖苷向配基異黃酮的轉(zhuǎn)化。將由第一步轉(zhuǎn)化生產(chǎn)的富含異黃酮葡糖苷的乳清用于檢測(cè)第二步轉(zhuǎn)化。利用異黃酮族的葡糖苷的百分?jǐn)?shù)的定量減少結(jié)合相應(yīng)的同一異黃酮族的配基的百分?jǐn)?shù)的定量增加來(lái)確定轉(zhuǎn)化的程度。
通過(guò)把乳清的pH值調(diào)節(jié)到11.0并在35℃下溫育30分鐘，大豆乳清轉(zhuǎn)化為富含異黃酮葡糖苷的乳清。把一個(gè)富含葡糖苷的乳清樣品在45℃下溫育24小時(shí)以測(cè)定乳清中的殘余酶作用下，由異黃酮葡糖苷向配基異黃酮的轉(zhuǎn)化。把其它富含葡糖苷的乳清樣品與下列可商購(gòu)的補(bǔ)充酶一起溫育Biopectinase 100L,Biopectinase 300L,Biopectinase OK70L,Lactase F,α-Gal 600L,G-Zyme G990,Quest Biolactase30,000,Novo Lactozyme 3000L,MaxilactL2000,Enzeco Fungal Lactase,Pfizer Neutral Lactase和QuestNeutral Lactase。與α-Gal 600L,G-Zyme G990,Biopectinase100L,Biopectinase 300L,Biopectinase OK70L,Lactase F和Enzeco Fungal Lactase一起溫育的樣品在溫育前其pH要調(diào)節(jié)到4.5；與Novo Lactozyme 3000L,MaxilactL2000,Pfizer NeutralLactase,Quest Biolactase30,000和Quest Neutral Lactase一起溫育的樣品，在溫育前，其pH值要調(diào)節(jié)到4.5和7.0。然后把補(bǔ)充酶樣品在50℃下溫育，例外的是，Lactase F樣品在35℃溫育,Biopectinase300L和Biopectinase OK70L樣品在40℃溫育。每隔一定時(shí)間采其小樣，測(cè)定異黃酮含量。下列的表2顯示了試驗(yàn)過(guò)程中異黃酮的分布。
表2樣品 染料 6”-氧丙 6”-氧乙 染料 黃 6”-氧 6”-氧 黃豆 黃豆 6”-氧丙 黃木苷 二酸單?；灸军S 豆 丙二酸 乙酰 苷原 黃素 二酸單酰 豆?；玖夏拒?酮苷單酰基 基黃苷基黃豆黃 黃料木苷 黃豆苷豆苷 素苷素百分?jǐn)?shù)殘余酶pH9.0,45℃t=0 865 0 9 79 4 0 18100 0 0t=2hrs 892 0 9 81 1 0 18100 0 0t=4hrs 921 0 8 82 0 0 18100 0 0t=6hrs 930 0 7 82 0 0 18100 0 0t=24hrs 00 0 100 0 0 0 1000 0 100Biopectinase300L，pH4.5,40℃0.1g/100g富含葡糖苷的乳清t=0 740 11 15 100 00 0 77023t=0.5hrs 460 054 46 30 51 75025t=1hrs220 078 24 30 73 6610 24t=1.5hrs 110 089 14 30 82 73027t=2hrs6 0 094 730 90 70030BiopectinaseOK 70L,pH4.5,40℃,0.1g/100g富含葡糖苷的乳清t=0740 11 15 100 0 0 77023t=0.5hrs 690 031 70 0 30 76024t=1hrs540 046 53 3 44 7610 24t=1.5hrs 440 056 43 0 52 75025t=2hrs370 063 35 3 62 74026Biopectinase100L,pH4.5,50℃,0.04g/100g富含葡糖苷的乳清t=0 502 047 61 2 37 60 40t=1hrs 252 073 31 2 67 54 55t=2hrs 122 086 15 1 83 51 50t=3hrs 7 2 092 91 90 0 100Lactase F,pH4,5,35℃0.1g/100g富含葡糖苷的乳清t=0478 045 457 48 74 26t=0.5hrs 9 9 082 89 83 55 39t=1hrs 3 8 089 28 90 46 54t=2hrs 0 9 091 08 92 32 68α-Gal 600L,pH4.5,50℃0.1g/100g富含葡糖苷的乳清t=0 83 0 017 83 0 0 17 800 20t=1hrs 40 096 20 0 98 230 77t=2hrs 10 099 00 0 100 10 14 76t=3hrs 00 0100 00 0 100 814 78Enzeco FungalLactase,pH4.5,35℃0.1g/100g富含葡糖苷的乳清t=0 83 1 0 16 79 3 1 17 85015t=0.5hrs 17 1 0 82 16 4 3 77 39055t=1hrs 61 0 93 54 3 87 26074t=2hrs 01 0 99 04 3 92 4 096G-Zyme G990,pH4.5,50℃0.1g/100g富含葡糖苷的乳清t=0830 0 17 830 017 80 020t=1hrs 491 0 51 410 059 82 018t=2hrs 301 0 69 210 079 79 021t=3hrs 180 0 82 110 089 69 11 19Novo Lactozyme3000L,50℃,0.2g/100g富含葡糖苷的乳清pH4.5t=o787 015 77 7 016 75 619t=1hr 788 014 80 7 013 86 014t=4hrs 778 015 80 7 013 84 016pH7.0t=0 787 015 77 7 016 75619t=1hr 728 020 77 7 016 72 028t=4hrs 688 024 74 7 019 61 039Maxilact L2000,50℃0.2g/100g富含葡糖苷的乳清pH4.5t=0 787 015 77 70 16 75619t=1hr 787 015 77 70 16 75619t=4hrs 767 017 76 70 17 73621pH7.0t=0 787 015 77 70 16 75619t=1hr 717 022 73 60 21 56731t=4hrs 657 028 69 50 26 52048Pfizer Neutral Lactase,50℃0.2g/100g富含葡糖苷的乳清pH4.5t=0 787 015 77 7 0 16 75619t=1hr 777 016 77 6 0 17 73720t=4hrs 770 716 77 6 0 17 76024pH7.0t=o 787 015 77 7 0 16 75619t=1hr 707 023 72 5 0 23 70624t=4hrs 557 038 60 6 0 34 66034Quest Biolactase 30,000,50℃,0.2g/100g富含葡糖苷的乳清pH4.5t=o 787 015 777016 75619t=1hr 0 6 094 06 094 0 0100t=4hrs 0 4 096 05 095 0 0100pH7.0t=o 787 051 77 7 016 75619t=1hr 2 7 091 37 090 29021t=4hrs 0 7 093 06 094 0 0100Quest NeutralLactase.50℃0.2g/100g富含葡糖苷的乳清pH4.5t=o 787 015 77 7016 75619t=1hr736 021 76 5019 79021t=4hrs 736 021 76 5019 76024pH7.0t=o 787 015 77 70 1675619t=1hr2 7 091 740 8915015t=4hrs 0 7 093 040 960 0100由染料木苷，黃豆苷和黃豆黃素苷分別轉(zhuǎn)化為染料木黃酮，黃豆苷原和黃豆黃素表明，異黃酮葡糖苷向配基異黃酮的轉(zhuǎn)化基本上進(jìn)行完全了。補(bǔ)充酶顯著地增加了轉(zhuǎn)化率，用某些補(bǔ)充酶可使轉(zhuǎn)化在1小時(shí)之內(nèi)基本完成。發(fā)現(xiàn)在pH4.5時(shí)最有效的補(bǔ)充酶是Biopectinase100L,Biopectinase 300L,Lactase F,α-Gal 600L,G-ZymeG990,Quest Biolactase30,000和Enzeco Fungal Lactase；在pH7.0下最有效的補(bǔ)充酶是Quest Biolactase30,000和Quest NeutralLactase。
實(shí)施例3在另外一個(gè)試驗(yàn)中，從富含配基異黃酮的大豆乳清中回收配基異黃酮乳清蛋白材料。把重1000g含有30mg的染料木黃酮，37mg的黃豆苷原和7mg黃豆黃素的富含配基異黃酮的大豆乳清的第一個(gè)樣品通過(guò)低熱蒸發(fā)濃縮為163g(濃縮比1∶6.1)。加熱濃縮后的乳清以使乳清中的蛋白材料凝集，然后離心以進(jìn)一步濃縮乳清蛋白材料。從乳清中分離出21g含有25mg的染料木黃酮，32mg黃豆苷原和6mg黃豆黃素的乳清蛋白材料。回收的乳清蛋白材料含有占總?cè)榍搴腿榍宓鞍撞牧现?2％的染料木黃酮，88％的黃豆苷原和77％的黃豆黃素。
把重400g含有12mg的染料木黃酮，15mg的黃豆苷原和3mg的黃豆黃素的富含配基異黃酮的大豆乳清的第二個(gè)樣品加熱使乳清中的蛋白材料凝集而無(wú)需濃縮乳清。離心經(jīng)過(guò)凝集的乳清蛋白材料和乳清以進(jìn)一進(jìn)濃縮乳清蛋白材料?；厥盏?.7g含有5mg染料木黃酮，7mg黃豆苷原和1mg黃豆黃素的乳清蛋白材料?；厥盏娜榍宓鞍撞牧虾姓伎偟娜榍宓鞍撞牧虾腿榍逯?4％的染料木黃酮，47％的黃豆苷原和34％的黃豆黃素。
比較第一個(gè)樣品和第二個(gè)樣品中的乳清蛋白材料，很清楚的是在分離乳清蛋白材料前濃縮富含配基異黃酮的乳清導(dǎo)致從乳清蛋白材料中收獲更多的配基異黃酮。
實(shí)施例4在另一個(gè)試驗(yàn)中，通過(guò)用含水醇萃取劑萃取配基異黃酮乳清蛋白材料并從萃取液中沉淀出配基異黃酮材料的辦法來(lái)回收配基異黃酮材料。
通過(guò)把乳清中的異黃酮共軛物和異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮并從乳清中回收配基異黃酮乳清蛋白材料，獲得了821g包含86％的干重蛋白質(zhì)，4.7g染料木黃酮，2.2g黃豆苷原和0.36g黃豆黃素的配基異黃酮乳清蛋白材料。該配基異黃酮乳清蛋白材料用6360g重量百分比為80∶20的乙醇/水溶液(7.7∶1的溶液/配基異黃酮乳清蛋白材料)在60℃下萃取45分鐘。萃取后，把產(chǎn)生的淤漿冷卻到25℃，用沃特曼4號(hào)(Whatman No.4)濾紙真空過(guò)濾。回收到一個(gè)重1584g的含有798g固體，0.8g染料木黃酮，0.4g黃豆苷原和0.02g黃豆黃素的濕濾餅和3397g含有23g固體，3.9g染料木黃酮，1.8g黃豆苷原和0.34g黃豆黃素的澄清的萃取液。
用2000g重量百分比為80∶20的乙醇/水溶液(2.3∶1的溶液/原始配基異黃酮乳清蛋白材料)于25℃下再次對(duì)濾餅進(jìn)行萃取。第二次萃取后產(chǎn)生的淤漿再用沃特曼4號(hào)濾紙過(guò)濾?；厥盏揭粋€(gè)重1542g的含有794g固體，0.3g染料木黃酮，0.1g黃豆苷原和0.01g黃豆黃素的濕濾餅和2042g含有4.0g固體，0.5g染料木黃酮，0.3g黃豆苷原和0.01g黃豆黃素的二次萃取液。合并兩次的萃取液，該合并的萃取液含有最初的配基異黃酮乳清蛋白材料中的94％的染料木黃酮和95％的黃豆苷原。
然后在布基(Buchi)蒸發(fā)器中于真空下，70℃把萃取液蒸發(fā)濃縮為1528g(為原萃取液總體積的20％)。將6000g去離子水加入到濃縮后的萃取液中(4∶1的水/萃取液)。水加入時(shí)，白色的異黃酮沉淀就形成了。把沉淀的淤漿加熱到70℃維持45分鐘，然后在4℃下冷凍24小時(shí)，讓異黃酮沉淀形成并沉降下來(lái)。從沉淀中傾潷分離出7300g上清液，離心剩余的淤漿以回收沉淀?；厥盏某恋碓儆?00g去離子水于70℃下洗滌15分鐘。離心回收沉淀，于50℃下真空干燥。
得到重7.3g，含有49％的染料木黃酮，19％的黃豆苷原和4％的黃豆黃素的干燥的配基異黃酮材料。
實(shí)施例5在另一個(gè)試驗(yàn)中，用反相HPLC從配基異黃酮材料中分離出染料木黃酮含量高的材料和黃豆苷原含量高的材料。把2g含有占其干重55％的染料木黃酮，21％的黃豆苷原和4％的黃豆黃素的配基異黃酮材料加入到1升重量百分比為50∶50的甲醇/水溶液中。溶液用沃特曼5號(hào)濾紙過(guò)濾，然后用0.45μ過(guò)濾器過(guò)濾。
然后把溶液裝載到直徑為2英寸、長(zhǎng)度為25cm、用Kromsil填充材料(Kromasil C18 16μm，100珠粒)裝填的HPLC柱子上。讓由重量百分比50∶50的甲醇/水溶液組成的流動(dòng)相以64ml/分鐘的速度流過(guò)柱子，用紫外吸收檢測(cè)柱子流出液中黃豆苷原、黃豆黃素和染料木黃酮的出現(xiàn)。先收集的餾份是黃豆苷原，第二個(gè)收集的餾份是染料木黃酮。蒸發(fā)黃豆苷原餾份和染料木黃酮餾份以除去醇，這引起各餾份中染料木黃酮含量高的材料和黃豆黃素含量高的材料沉淀出來(lái)。沉淀出來(lái)的染料木黃酮和黃豆黃素含量高的材料用離心方法回收并在真空爐中干燥。回收的染料木黃酮含量高的材料含有約95％的染料木黃酮，而回收的黃豆苷原含量高的材料含有約45％的黃豆苷原。
在上述的試驗(yàn)中，所有針對(duì)6”-氧丙二酸單酰基染料木苷，6”-氧乙酰基染料木苷，6”-氧丙二酸單酰基黃豆苷，6”-氧乙?；S豆苷，6”-氧丙二酸單?；S豆黃素苷和黃豆黃素的百分?jǐn)?shù)都是計(jì)算值。所標(biāo)的酶濃度的百分?jǐn)?shù)是從每100g乳清固體中或單個(gè)樣品中每100g乳清中商品酶制劑的克數(shù)計(jì)算出來(lái)的。
下面敘述確定大豆產(chǎn)品中異黃酮數(shù)量的方法。通過(guò)把0.75g樣品(噴霧干燥的或磨細(xì)的粉末)與50ml 80/20的甲醇/水溶劑混合來(lái)從大豆產(chǎn)品中提取異黃酮，用軌道搖動(dòng)器在室溫下把混合物搖動(dòng)2小時(shí)。2小時(shí)后，用沃特曼42號(hào)濾紙過(guò)濾除去殘余的不溶解的材料。將5ml的濾液用4ml水和1ml甲醇稀釋。
通過(guò)HPLC(高效液相色譜)，用Hewlett Packard C18 Hypersil反相柱分離萃取的異黃酮。將異黃酮注入柱子，用梯度溶劑洗脫，開(kāi)始為88％的甲醇、10％的水和2％的冰乙酸。流速為0.4ml/分鐘，所有的異黃酮-染料木苷，6”-氧乙?；玖夏拒眨?”-氧丙二酸單?；玖夏拒?，染料木黃酮，黃豆苷，6”-氧乙酰基黃豆苷，6”-氧丙二酸單酰基黃豆苷，黃豆苷原，黃豆黃素苷，6”-氧丙二酸單酰基黃豆黃素苷和黃豆黃素都很清晰地分辨開(kāi)來(lái)。用紫外吸收在260nm下進(jìn)行峰檢測(cè)，用HPLC-質(zhì)譜儀進(jìn)行峰鑒定。
通過(guò)使用從Indofine化學(xué)公司，薩英維爾市，新澤西州購(gòu)買的純的標(biāo)準(zhǔn)試劑(染料木苷，染料木黃酮，黃豆苷和黃豆苷原)，實(shí)現(xiàn)了定量化分析。計(jì)算了以上每種化合物的響應(yīng)因子(積分面積/濃度)，并將其用于定量未知的樣品。對(duì)共軛物來(lái)說(shuō)，沒(méi)有純的標(biāo)準(zhǔn)試劑可用，響應(yīng)因子假定為母體分子的響應(yīng)因子但要對(duì)分子量差異作較正。黃豆黃素苷的響應(yīng)因子假定為作了分子量差異校正的染料木苷的響應(yīng)因子。
這種方法提供了每個(gè)單個(gè)異黃酮的數(shù)量。為了方便起見(jiàn)，可以計(jì)算出總的染料木黃酮，總的黃豆苷原和總的黃豆黃素的數(shù)量。如果所有的共軛物形式的異黃酮都轉(zhuǎn)化為它們相應(yīng)的非共軛物形式，則該總的數(shù)量代表這些化合物的總重量。這些總的數(shù)量也可通過(guò)一種用酸水解轉(zhuǎn)化為非共軛物形式的方法而直接測(cè)量得到。
上述僅僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。在不離開(kāi)實(shí)質(zhì)性思想的前提下可做各種變化和改動(dòng)，其廣義的方面將在所附的權(quán)利要求書中提出，該權(quán)利要求書遵循了專利法的原則包括等同原則。
權(quán)利要求
1．一種從含有異黃酮共軛物的植物蛋白乳清生產(chǎn)富含配基異黃酮的植物蛋白乳清的方法，包括a)在一定溫度和pH值下，處理所說(shuō)的植物蛋白乳清，經(jīng)一段足夠長(zhǎng)的時(shí)間使異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷；和b)使一種酶與所述植物蛋白乳清中的所述異黃酮葡糖苷在一定溫度和pH值下接觸一段足夠長(zhǎng)的時(shí)間，使至少大部分異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮。
2．權(quán)利要求1中所提的方法，其中在大約6-13.7的pH值和大約2℃-121℃的溫度下，處理植物蛋白乳清，使異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷。
3．權(quán)利要求2中所提的方法，其中在大約9-10的pH值和大約45℃-73℃的溫度下，處理植物蛋白乳清。
4．權(quán)利要求3中所提的方法，其中使異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷所用的時(shí)間為大約4-6小時(shí)。
5．權(quán)利要求2中所提的方法，其中在大約10-11的pH值和大約5℃-50℃的溫度下處理植物蛋白乳清。
6．權(quán)利要求5中所提的方法，其中使異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷的時(shí)間為大約0.5-1小時(shí)。
7．權(quán)利要求1中所提的方法，其中至少大部分所述異黃酮共軛物被轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷。
8．權(quán)利要求7中所提的方法，其中至少80％的所述異黃酮共軛物被轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷。
9．權(quán)利要求8中所提的方法，其中至少90％的所述異黃酮共軛物被轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷。
10．權(quán)利要求1中所提的方法，其中使所述酶與植物蛋白乳清中的異黃酮葡糖苷在大約5℃-75℃的溫度和大約3-9的pH值下接觸。
11．權(quán)利要求10中所提的方法，其中使所述酶與植物蛋白乳清中的異黃酮葡糖苷在大約35℃-45℃的溫度下接觸。
12．權(quán)利要求10中所提的方法，其中使一種酶與所述植物蛋白乳清中的所說(shuō)的異黃酮葡糖苷接觸包括向植物蛋白乳清中添加有效量的一種補(bǔ)充酶。
13．權(quán)利要求12中所提的方法，其中補(bǔ)充酶包括能切斷1,4-糖苷鍵的糖酶。
14．權(quán)利要求13中所提的方法，其中補(bǔ)充酶選自α-葡糖苷酶，β-葡糖苷酶，β-半乳糖苷酶，葡糖-淀粉酶，果膠酶及其組合。
15．權(quán)利要求1中所提的方法，其中至少80％的所述異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮。
16．權(quán)利要求15中所提的方法，其中至少90％的所述異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮。
17．權(quán)利要求1中所提的方法，其中所說(shuō)的植物蛋白乳清包括大豆乳清。
18．權(quán)利要求1中所提的方法，還包括從所說(shuō)的富含配基異黃酮的植物蛋白乳清中回收一種含有蛋白質(zhì)和配基異黃酮的配基異黃酮乳清蛋白材料。
19．權(quán)利要求18中所提的方法，其中所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料可用超濾，熱凝集和脫水中的至少一種方法回收。
20．權(quán)利要求18中所提的方法，其中所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料是通過(guò)冷卻所說(shuō)的植物蛋白乳清并從所說(shuō)的冷卻過(guò)的乳清中分離出所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料來(lái)回收的。
21．權(quán)利要求18中所提的方法，其中從濃縮的植物蛋白乳清中回收所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料。
22．權(quán)利要求18中所提的方法，還包括a)用一種含水醇萃取劑萃取所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料生產(chǎn)一種富含配基異黃酮的萃取液；和b)使所說(shuō)的萃取液與一種吸附材料接觸一段足夠長(zhǎng)的時(shí)間以便從所說(shuō)的萃取液中分離出染料木黃酮含量高的材料。
23．權(quán)利要求22中所提的方法，其中所說(shuō)的含水醇萃取劑包括大約30％-90％的醇。
24．權(quán)利要求22中所提的方法，其中所說(shuō)的含水醇萃取劑的pH值大約為所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料中所說(shuō)的蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)值。
25．權(quán)利要求24中所提的方法，其中所說(shuō)的含水醇萃取劑的pH值大約為3-6。
26．權(quán)利要求22中所提的方法，其中用所說(shuō)的萃取劑萃取所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料，其中萃取劑與乳清蛋白材料的重量比不超過(guò)11∶1。
27．權(quán)利要求22中所提的方法，其中用兩批含水醇萃取劑來(lái)萃取所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料，其中所說(shuō)的兩批萃取劑之和與所說(shuō)的乳清蛋白材料的總重量比不超過(guò)11∶1。
28．權(quán)利要求22中所提的方法，其中所說(shuō)的吸附材料為顆粒狀。
29．權(quán)利要求22中所提的方法，其中使所說(shuō)的萃取液與一種吸附材料接觸還包括用所說(shuō)的吸附材料可釋放地結(jié)合所說(shuō)的萃取液中的染料木黃酮。
30．權(quán)利要求22中所提的方法，其中用一種洗脫劑把所說(shuō)的萃取液從所說(shuō)的吸附材料上洗脫下來(lái)以便從所說(shuō)的萃取液中分離出染料木黃酮含量高的材料。
31．權(quán)利要求22中所提的方法，其中所說(shuō)的染料木黃酮含量高的材料含有至少40％的染料木黃酮。
32．權(quán)利要求31中所提的方法，其中所說(shuō)的染料木黃酮含量高的材料含有至少90％的染料木黃酮。
33．權(quán)利要求18中所提的方法，還包括a)用一種含水醇萃取劑萃取所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料以生產(chǎn)一種富含配基異黃酮的萃取液；和b)使所說(shuō)的萃取液與一種吸附材料接觸一段足夠長(zhǎng)的時(shí)間以便從所說(shuō)的萃取液中分離出黃豆苷原含量高的材料。
34．權(quán)利要求33中所提的方法，其中所說(shuō)的含水醇萃取劑包含大約30％-90％的醇。
35．權(quán)利要求33中所提的方法，其中所說(shuō)的含水醇萃取劑的pH值大約為所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料中所說(shuō)的蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。
36．權(quán)利要求35中所提的方法，其中所說(shuō)的含水醇萃取劑的pH值大約為3-6。
37．權(quán)利要求33中所提的方法，其中用所說(shuō)的萃取劑萃取所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料，其中萃取劑與乳清蛋白材料的重量比不超過(guò)大約11∶1。
38．權(quán)利要求33中所提的方法，其中用兩批含水醇萃取劑萃取所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料，其中所說(shuō)的兩批萃取劑之和與所說(shuō)的乳清蛋白材料的總重量比不超過(guò)大約11∶1。
39．權(quán)利要求33中所提的方法，其中所說(shuō)的吸附材料是顆粒狀的。
40．權(quán)利要求33中所提的方法，其中所說(shuō)的萃取液與一種吸附材料接觸還包括用所說(shuō)的吸附材料可釋放地結(jié)合所說(shuō)萃取液中的黃豆苷原。
41．權(quán)利要求33中所提的方法，其中用一種洗脫劑把所說(shuō)的萃取液從所說(shuō)的吸附材料上洗脫下來(lái)以便從所說(shuō)的萃取液中分離出一種黃豆苷原含量高的材料。
42．權(quán)利要求33中所提的方法，其中所說(shuō)的黃豆苷原含量高的材料含有至少40％的黃豆苷原。
43．權(quán)利要求18中所提的方法，還包括a)用一種含水醇萃取劑萃取所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料生產(chǎn)一種富含配基異黃酮的萃取液；和b)使所說(shuō)的萃取液與一種吸附材料接觸一段足夠長(zhǎng)的時(shí)間以便從所說(shuō)的萃取液中分離出一種含有黃豆黃素的材料。
44．權(quán)利要求18所提的方法，還包括a)用一種含水醇萃取劑萃取所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料生產(chǎn)一種富含配基異黃酮的萃取液；b)把所說(shuō)的富含配基異黃酮的萃取液濃縮到大約其原來(lái)體積的15％-30％；和c)通過(guò)向所說(shuō)的萃取液中加入水來(lái)沉淀出一種配基異黃酮材料。
45．權(quán)利要求44中所提的方法，其中所說(shuō)的含水醇萃取劑含有大約30％-90％的醇。
46．權(quán)利要求44中所提的方法，其中用所說(shuō)的萃取劑萃取所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料，其中萃取劑與乳清蛋白材料的重量比不超過(guò)大約11∶1。
47．權(quán)利要求44中所提的方法，其中用兩批所說(shuō)的含水醇萃取劑萃取所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料，其中所說(shuō)的兩批萃取劑之和與所說(shuō)的乳清蛋白材料的總重量比不超過(guò)11∶1。
48．權(quán)利要求44中所提的方法，其中所說(shuō)的含水醇萃取劑的pH值大約為所說(shuō)的配基異黃酮乳清蛋白材料中所說(shuō)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。
49．權(quán)利要求48中所提的方法，其中所說(shuō)的含水醇萃取劑pH值大約為3-6。
50．權(quán)利要求44中所提的方法，其中把水加入到所說(shuō)的萃取液中，其中水與萃取液的重量比大約為6∶1-8∶1。
51．權(quán)利要求44中所提的方法，還包括用水洗滌沉淀的配基異黃酮材料，其中水與所說(shuō)的配基異黃酮材料的重量比大約為0.8∶1-2∶1。
52．權(quán)利要求44中所提的方法，還包括把萃取液和水冷卻以最大限度地把所說(shuō)的配基異黃酮材料沉淀出來(lái)。
53．權(quán)利要求44中所提的方法，還包括a)把所說(shuō)的配基異黃酮材料溶解于一種含水醇溶液中；和b)使所說(shuō)的包含所說(shuō)的溶解的配基異黃酮材料的含水醇溶液與一種吸附材料接觸一段足夠長(zhǎng)的時(shí)間以便從所說(shuō)的含水醇溶液中分離出染料木黃酮含量高的材料。
54．權(quán)利要求44中所提的方法，還包括a)把所說(shuō)的配基異黃酮材料溶解于一種含水醇溶液中；和b)使所說(shuō)的包含所說(shuō)的溶解的配基異黃酮材料的含水醇溶液與一種吸附材料接觸一段足夠長(zhǎng)的時(shí)間以便從所說(shuō)的含水醇溶液中分離出黃豆苷原含量高的材料。
55．一種用權(quán)利要求1的方法生產(chǎn)的富含配基異黃酮的植物蛋白乳清。
56．一種用權(quán)利要求18的方法生產(chǎn)的配基異黃酮乳清蛋白材料。
57．一種用權(quán)利要求22的方法生產(chǎn)的染料木黃酮含量高的材料。
58．一種用權(quán)利要求33的方法生產(chǎn)的黃豆苷原含量高的材料。
59．一種用權(quán)利要求53的方法生產(chǎn)的染料木黃酮含量高的材料。
60．一種用權(quán)利要求54的方法生產(chǎn)的黃豆苷原含量高的材料。
61．一種用權(quán)利要求44的方法生產(chǎn)的配基異黃酮材料。
62．一種包含乳清蛋白和配基異黃酮的配基異黃酮乳清蛋白材料。
63．一種包含大豆材料、至少10％的染料木黃酮和至少5％的黃豆苷原的配基異黃酮材料。
64．一種包含大豆材料和至少40％的染料木黃酮的染料木黃酮含量高的材料。
65．含有至少90％的染料木黃酮的權(quán)利要求64的染料木黃酮含量高的材料。
66．一種包含大豆材料和至少40％的黃豆苷原的黃豆苷原含量高的材料。
全文摘要
富含配基異黃酮的植物蛋白乳清,乳清蛋白材料,染料木黃酮含量高的材料,黃豆苷原含量高的材料和配基異黃酮材料以及從植物蛋白乳清生產(chǎn)該材料的方法。通過(guò)在一定溫度和一定pH值下處理乳清一段足以使其發(fā)生轉(zhuǎn)化的時(shí)間,使植物蛋白乳清中的異黃酮共軛物轉(zhuǎn)化為異黃酮葡糖苷。用酶催化反應(yīng)使異黃酮葡糖苷轉(zhuǎn)化為配基異黃酮以生產(chǎn)富含配基異黃酮的植物蛋白乳清。從中回收配基異黃酮乳清蛋白材料。染料木黃酮含量高的材料、黃豆苷含量高的材料和配基異黃酮材料可從配基異黃酮乳清蛋白材料的醇萃取液生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A23J3/16GK1214871SQ9712281
公開(kāi)日1999年4月28日 申請(qǐng)日期1997年10月17日 優(yōu)先權(quán)日1997年10月17日
發(fā)明者J·申, M·A·魯西, B·A·布賴恩, M·C·奧爾雷德 申請(qǐng)人:蛋白質(zhì)技術(shù)國(guó)際公司