專利名稱：人高效淋巴細(xì)胞趨化因子基因組序列、其編碼的多肽及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種新的人基因核苷酸序列。更具體地說，本發(fā)明涉及人高效淋巴細(xì)胞趨化因子(efficient chemoattractant forlymphocyte，簡稱為“ECL”)的基因組序列，該因子是人淋巴細(xì)胞趨化因子的同系物。本發(fā)明還涉及由該核苷酸序列編碼的多肽，這些多核苷酸和多肽的應(yīng)用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生產(chǎn)方法。
趨化因子(chemokine)是80年代末發(fā)現(xiàn)的一類細(xì)胞因子，它對各類白細(xì)胞的轉(zhuǎn)移有調(diào)控作用(Hedrick，J.et al.1996 Curr Opin Immunol，8，143.)。根據(jù)趨化因子分子中的4個保守的半胱氨酸的位置的不同，可以把它們分為4類(1)CXC亞家族，其中前兩個Cys被一個不保守的氨基酸隔開。(2)CC亞家族，其中前兩個Cys相鄰。(3)C亞家族，其中只有兩個(第2、4個)Cys。(4)CX3C亞家族，其中前兩個Cys被3個其它氨基酸隔開(Joseph，A.et al.1997 J Immunology，159，1589-1593.)。不同的亞家族可能在功能上有一定的差異，如CXC亞家族通常對嗜中性粒細(xì)胞起誘導(dǎo)趨化作用；CC亞家族和CX3C亞家族則一般對單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞起作用，一些CC亞家族的成員還可以作用于嗜堿細(xì)胞和嗜曙紅細(xì)胞；C亞家族特異性的對T細(xì)胞和NK細(xì)胞作用。此外，這些亞家族的某些成員也能作用于T細(xì)胞和NK細(xì)胞。除了前面所述的誘導(dǎo)白細(xì)胞轉(zhuǎn)移的功能外，近來還發(fā)現(xiàn)了趨化因子家族的一些其它的功能，如對血紅細(xì)胞的生長抑制作用、對血管生長的抑制或刺激作用、以及對愛滋病毒增殖的抑制作用等。
CC趨化因子亞家族中最早被鑒定的成員是MIP-1。早在1985年，BECUTLER，B.等人在研究CACHECTIN/TNF和FRIEND ERYTHROLEUKEMIC細(xì)胞的分化抑制劑時發(fā)現(xiàn)了MIP-1(BECUTLER，B.et al.1985，J.EXP.MED.161，984-995)。而編碼該分子基因的克隆則是在1988年由SHERRY，B.和DAVATELIS，G.等完成(SHERRY，B.et al.1988，J.EXP.MED.168，2251-2259；DAVATELIS，G.et al.1988，J.EXP.MED.167，1939-1944.)。迄今為止，CC趨化因子亞家族已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了MIP-1α、MIP-1β、MIP-2、RANTES、MCP以及最近發(fā)現(xiàn)的TARC、LARC/MIP-3α/EXODUS-1、SLC/EXODUS-2/6-C-KINE等成員(HROMAS，R.et al.1997 BLOOD，89(9)，3315-3322；NAGIRA，M.et al.1997，J.BIOL.CHEM.272(31)，19518-19524；HEDRICK，JA.AND ZLOMIK，A.1997，JIMMUNOL.159，1589-1593；HROMAS，R.et al.1997，J IMMUNOL.159，2554-2558).
其中，高效淋巴細(xì)胞趨化因子ECL(又稱為“SLC”、“EXODUS-2”或“6-C-KINE”)的CDNA序列已經(jīng)由HEDRICK，JA.和ZLOMIK，A.(J IMMUNOL.159，1589-1593(1997))以及HROMAS，R.等人(J IMMUNOL.159，2554-2558(1997))公開。
但是，在本發(fā)明之前，對高效淋巴細(xì)胞趨化因子的基因組序列還不清楚。
本發(fā)明的目的就是提供一種人高效淋巴細(xì)胞趨化因子人基因組序列，以便為進(jìn)一步研究該基因的功能以及轉(zhuǎn)錄翻譯過程。
本發(fā)明的另一目的是提供一種產(chǎn)生人高效淋巴細(xì)胞趨化因子的方法。
在本發(fā)明的一個方面，提供了一種分離的人高效淋巴細(xì)胞趨化因子(humanefficient chemoattractant for lymphocyte，簡稱為“HUMECL”)的基因組序列，該序列的多核苷酸全長為1056個核苷酸，其詳細(xì)序列見SEQ ID NO3，其中編碼框位于6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸。還提供了SEQ ID NO3的簡并序列。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種含有人高效淋巴細(xì)胞趨化因子基因組序列的載體。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，它被含有人高效淋巴細(xì)胞趨化因子基因組序列的載體所轉(zhuǎn)化。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種生產(chǎn)人高效淋巴細(xì)胞趨化因子的方法，它包括在適合表達(dá)的條件下，培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞具有含人高效淋巴細(xì)胞趨化因子基因組序列的載體，其中該序列是SEQ ID NO3或其簡并序列；和分離所表達(dá)的人高效淋巴細(xì)胞趨化因子。
在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種探針分子，該探針長度通常為8-100個BP，較佳地10-35個核苷酸，而且含有對應(yīng)于SEQ ID NO3中除6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸之外的序列。在含有對應(yīng)于SEQ ID NO3中除6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸之外的序列的同時，探針還可含有SEQ ID NO3中6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸的序列。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種人高效淋巴細(xì)胞趨化因子基因組序列的用途，它包括使用10-35個核苷酸的核酸探針來檢測人細(xì)胞樣本，以判斷該基因的內(nèi)含子部分是否存在變異，其中該探針含有對應(yīng)于SEQ ID NO3中除6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸之外的序列。
在本發(fā)明的另一方面，還提供了該因子基因組序列的反義序列及其片段。這些反義序列及其片段可以用于抑制或減少細(xì)胞中人高效淋巴細(xì)胞趨化因子的表達(dá)。因而可用于治療人高效淋巴細(xì)胞趨化因子表達(dá)過多而導(dǎo)致的疾病。
在本發(fā)明中，術(shù)語“人高效淋巴細(xì)胞趨化因子基因組序列”指SEQ ID NO3序列及其簡并序列。該簡并序列是指，位于SEQ ID NO3序列的編碼框6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸中，有一個或多個密碼子被編碼相同氨基酸的簡并密碼子所取代后而產(chǎn)生的序列。該術(shù)語還包括能編碼具有與人高效淋巴細(xì)胞趨化因子相同功能的因子的、SEQ ID NO3序列的變異形式。這些變異形式包括(但并不限于)若干個(通常為1-90個，較佳地1-60個，更佳地1-20個，最佳地1-10個)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加數(shù)個(通常為60個以內(nèi)，較佳地為30個以內(nèi)，更佳地為10個以內(nèi)，最佳地為5個以內(nèi))核苷酸。
在本發(fā)明中，術(shù)語“人高效淋巴細(xì)胞趨化因子”指具有SEQ ID NO4序列的多肽。該術(shù)語還包括具有與人高效淋巴細(xì)胞趨化因子相同功能的、SEQ ID NO4序列的變異形式。這些變異形式包括(但并不限于)若干個(通常為1-50個，較佳地1-30個，更佳地1-20個，最佳地1-10個)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一個或數(shù)個(通常為20個以內(nèi)，較佳地為10個以內(nèi)，更佳地為5個以內(nèi))氨基酸。例如，在本領(lǐng)域中，用性能相近或相似的氨基酸進(jìn)行取代時，通常不會改變蛋白質(zhì)的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一個或數(shù)個氨基酸通常也不會改變蛋白質(zhì)的功能。
在本發(fā)明中，可以使用的“載體”包括本領(lǐng)域中已知的載體，例如市售的載體。
在本發(fā)明中，可以使用的宿主細(xì)胞是指本領(lǐng)域中已知宿主細(xì)胞。較佳地，該宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞，如CHO細(xì)胞、COS細(xì)胞等。
在本發(fā)明中，人高效淋巴細(xì)胞趨化因子的基因組核苷酸序列是如此獲得的以U937細(xì)胞基因組DNA為模板，用寡核苷酸5’-CATATGGCTCAGTCACTGGCTCTGAGC-3’為正向引物，寡核苷酸5’-AAGCTTATGGCCCTTTAGGGGTCTGTGA-3’為反向引物，進(jìn)行PCR，經(jīng)鑒定測序后得到SEQ ID NO3的全長基因組序列。
通過同源檢索發(fā)現(xiàn)本發(fā)明(HUMECL的基因組序列)的cDNA序列已被發(fā)表并確認(rèn)為人的Exodus-2/6-C-kine/SLC基因，并且Exodus-2/6-C-kine/SLC屬于淋巴細(xì)胞CC亞家族。該基因編碼的蛋白已被證實(shí)能夠選擇性的刺激趨化胸腺淋巴細(xì)胞和活化的T細(xì)胞，而對B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞等無趨化作用(Hedrick，JA.and Zlomik，A.1997，J Immunol.159，1589-1593；Hromas，R.et al.1997，J Immunol.159，2554-2558)。除此之外，由于HUMECL已被證實(shí)屬于淋巴趨化因子的CC亞家族，所以推測其還同樣具有該亞族所具有的一些功能是合理的。如該亞家族能夠在一定條件下抑制骨髓祖細(xì)胞的增殖(Graham，GJ.et al.1990，Nature，344442；Broxmeyer，HE.et al.1990，Blood，761110；Broxmeyer，HE.et al.1993，JImmunol，.150，3448；Broxmeyer，HE.et al.1995，Ann.Hematol，71235.)，這一特性在醫(yī)學(xué)上將有廣闊的應(yīng)用前景。最近，一些報道顯示CC亞家族的成員還能抑制愛滋病毒在PBMC細(xì)胞中的增殖(Moore，JP.et al.1997，Current Opinion inImmunology，9，551-562.)下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(New YorkColdSpring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實(shí)施例1HUMECL的基因組DNA序列的克隆和測定1.基因組總DNA的提取U937細(xì)胞在5％ CO2，37℃條件下，用10％的新生小牛血清和RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。收集指數(shù)生長期細(xì)胞，1000g離心洗滌后，細(xì)胞在Eppendorf離心管內(nèi)懸浮于1ml含10mmol Tris·HCl(pH8.0)、1mmol EDTA、10mmol NaCl、1％ SDS的DNA抽提緩沖液中，補(bǔ)充20μgRNAase及100μg蛋白酶K，用玻璃棒輕輕攪拌使溶液至粘稠狀，37℃過夜。待DNA抽提緩沖液冷卻至室溫后，加入等體積已飽和酚溶液，溫和地上下轉(zhuǎn)動離心管混勻兩相，12000g離心10分鐘，小心吸出上層粘稠水相，移至一干凈Eppendorf離心管內(nèi)，加入等體積飽和酚溶液再抽提一次。用1∶1氯仿∶酚溶液抽提一次后將上層水相移入一新的Eppendorf管內(nèi)，加入1/10體積的乙酸鈉溶液，終濃度為0.3mol/L，混勻溶液，輕輕反復(fù)翻轉(zhuǎn)離心管后加入準(zhǔn)確二倍體積的冰冷無水乙醇置冰格30分鐘。4℃、12000g離心10分鐘收取DNA，棄去乙醇后用70％乙醇混勻漂洗3次，開蓋室溫放置15分鐘讓乙醇揮發(fā)，加入適當(dāng)體積的1mmol EDTA、10mmol Tris·HCl(pH7.8)TE緩沖液，使DNA溶解，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 2.引物擴(kuò)增以上述步驟1中提取得到的U937細(xì)胞基因組DNA為模板，用寡核苷酸5’-CATATGGCTCAGTCACTGGCTCTGAGC-3’(SEQ ID NO1)為正向引物，寡核苷酸5’-AAGCTTATGGCCCTTTAGGGGTCTGTGA-3’(SEQ ID NO2)為反向引物，進(jìn)行PCR，PCR條件為93℃3分鐘，隨之以93℃1分鐘、68℃1分30秒和72℃1分鐘進(jìn)行35個循環(huán)，最后72℃延伸5分鐘。電泳檢測得到的近1kb目的片段。
3.PCR產(chǎn)物的鑒定和測序以上述步驟2中得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，用SequiTherm EXCELTMDNA測序試劑盒(Epicentre Technologies)從兩端分別進(jìn)行測序，最后用電腦軟件拼接并分析順序，獲得HUMECL的全長基因組序列，共1056bp，詳細(xì)序列見SEQ ID NO3，其中外顯子位于1-72、177-297、396-578、652-1056位核苷酸；開放讀框序列由位于6-72、177-297、396-578、652-685位核苷酸的順序組成。
根據(jù)得到的全長基因組序列推導(dǎo)出HUMECL的氨基酸序列，共134個氨基酸殘基，其氨基酸序列詳見SEQ ID NO4。
實(shí)施例2同源比較用HUMECL的全長基因組序列及其編碼蛋白在Non-redundantGenBank+EMBL+DDBJ+PDB數(shù)據(jù)庫及Non-redundant GenBank CDStranslations+PDB+SwissProt+Spupdate+PIR數(shù)據(jù)庫中用BLAST進(jìn)行核酸和蛋白同源檢索。結(jié)果發(fā)現(xiàn)其eDNA序列及蛋白序列已被公布(檢索號分別為gb|U88320和gi|2196920)，該基因被確認(rèn)為人類淋巴細(xì)胞趨化因子CC亞家族的一個成員。
應(yīng)用重組HUMECL基因以及與之高度同源的鼠ECL重組基因進(jìn)行實(shí)驗(yàn)都發(fā)現(xiàn)ECL具有對胸腺淋巴細(xì)胞和活化T淋巴細(xì)胞選擇性的刺激趨化作用，而對B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞等無趨化作用，該特性在CC亞家族中是比較獨(dú)特的(Hedrick，JA.and Zlomik，A.1997，J Immunol.159，1589-1593；Hromas，R.et al.1997，J Immunol.159，2554-2558)。
除此之外，HUMECL還具有淋巴趨化因子的CC亞家族成員的一些共同的功能。如該亞家族成員能夠在一定條件下抑制骨髓祖細(xì)胞(造血祖細(xì)胞)的增殖(Graham，GJ.et al.1990，Nature，344442；Broxmeyer，HE.et al.1990，Blood，761110；Broxmeyer，HE.et al.1993，J Immunol，.150，3448；Broxmeyer，HE.et al.1995，Ann.Hematol，71235.)且該抑制作用與HUMECL的劑量相關(guān)。這一特性為治療某些與造血功能紊亂有關(guān)的疾病提供了一種新的途徑。例如，治療處于慢性期的骨髓性白血病(myelogenous leukemia in chronic phase)，該病目前最有效的治療立法是運(yùn)用γ-干擾素，而HUMECL可能通過與γ-干擾素相類似的方式有效抑制慢性髓性白血病的血細(xì)胞增殖。HUMECL抑制骨髓祖細(xì)胞增殖的這一特性還能被用來保護(hù)祖細(xì)胞免受化療中周期特異的細(xì)胞毒性作用。
最近，一些報道顯示淋巴細(xì)胞趨化因子CC亞家族的成員(如MIP-1α、MIP-1β、RANTES等)能抑制愛滋病毒(HIV-1)在某些細(xì)胞株中的增殖(Moore，JP.et al.1997，Current Opinion in Immunology，9，551-562.)。愛滋病毒通過與靶細(xì)胞細(xì)胞膜融合而進(jìn)入細(xì)胞，這一過程與細(xì)胞表面受體CD4有關(guān)。然而，僅有CD4受體并不足以完成這一過程。1996年發(fā)現(xiàn)CXCR4和CCR5作為輔助受體，對于愛滋病毒分別進(jìn)入細(xì)胞是必需的，其中T-tropic細(xì)胞株中CXCR4起主要作用，而在M-tropic細(xì)胞株中CCR5起決定作用，然而對于許多其它的細(xì)胞株來說，這兩者往往共同起作用。CC亞家族成員已被證實(shí)能夠與CCR5相互作用并抑制其功能，從而阻止HIV-1對細(xì)胞的感染。作為CC亞家族的成員HUMECL可能也具有類似功能。
實(shí)施例3HUMECL的表達(dá)譜分析多種組織Northern(MNTTM)印跡膜(60種組織)購自Clontech公司(Catalog#7770-1)，以上實(shí)施例1步驟中得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為探針，用α-32P-dATP(DuPont公司)對其進(jìn)行隨機(jī)引物標(biāo)記，條件為37℃1小時，具體操作條件按照MegaprimeDNA標(biāo)記系統(tǒng)說明書(Amersham)中的條件。
60種組織的Northern雜交結(jié)果顯示HUMECL基因?yàn)樘禺愋员磉_(dá)基因，僅在胃腸道淋巴組織高表達(dá)，在其它淋巴組織也有中等表達(dá)。
實(shí)施例4HUMECL在真核細(xì)胞(CHO細(xì)胞株)中的表達(dá)在該實(shí)施例中，編碼HUMECL的基因組DNA序列(GenBank Accession No.AF030572。注因?yàn)樯暾埍Ｃ?，所以登錄的序列在本申請之前沒有對公眾公開)，用對應(yīng)于該DNA序列的5’和3’端的PCR寡核苷酸引物進(jìn)行擴(kuò)增，獲得HUMECL基因作為插入片段。
PCR反應(yīng)中使用的5’寡核苷酸引物序列為
5’-AACGGAATTCATGGCTCAGTCACTGGCTC-3’(SEQ ID NO.5)，該引物含有EcoR I限制性限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，在該酶切位點(diǎn)之后是由起始密碼子開始的HUMECL編碼序列的23個核苷酸；3’端引物序列為5’-ACAGGAATTCCTATGGCCCTTTAGGGGTC-3’(SEQ ID NO.6)該引物含有EcoR I限制性限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)、一個翻譯終止子和HUMECL的編碼序列。
引物上的限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)對應(yīng)于CHO細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3(Invitrogen公司)上的限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)，該質(zhì)粒載體編碼抗生素抗性(Ampr和Neor)、一個噬菌體復(fù)制起點(diǎn)(f1 ori)、一個病毒復(fù)制起點(diǎn)(SV40 ori)、一個T7啟動子、一個病毒啟動子(P-CMV)、一個Sp6啟動子、一個SV40啟動子、一個SV40加尾信號和相應(yīng)的polyA順序、一個BGH加尾信號和相應(yīng)的polyA順序。
用EcoR I消化pcDNA3載體及插入片段，隨后將插入片段連接到pcDNA3載體。隨后用連接混合物轉(zhuǎn)化E.coli DH5α菌株。在含有Amp的LB培養(yǎng)皿上篩選轉(zhuǎn)化子，在補(bǔ)加Amp(100μg/ml)的LB液體培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)(O/N)含所需構(gòu)建物的克隆。抽提質(zhì)粒，用HindIII酶切鑒定插入片段大小及方向，并測序驗(yàn)證HUMECL的基因組片段已正確插入了載體。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)染用Lipofectin(GiBco Life)方法進(jìn)行，轉(zhuǎn)染48小時后，經(jīng)2-3周的持續(xù)G418加壓篩選，收集細(xì)胞及細(xì)胞上清測定表達(dá)蛋白酶活力。去G418，連續(xù)傳代培養(yǎng)；對混合克隆細(xì)胞極限稀釋，選擇具有較高蛋白活性的細(xì)胞亞克隆。按常規(guī)方法大量培養(yǎng)上述陽性亞克隆。48小時后，開始收集細(xì)胞及上清，用超聲裂解方法破碎細(xì)胞。以含0.05％Triton的50mMTris·HCl(pH7.6)溶液為平衡液及洗脫液，用經(jīng)預(yù)平衡的Superdex G-75柱收集上述蛋白的活性峰。再用50mMTris·HCl(pH8.0)平衡的DEAE-Sepharose柱，以含0-1M NaCl的50mMTris·HCl(pH8.0)溶液為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，收集上述蛋白的活性峰。然后以PBS(pH7.4)為透析液對表達(dá)蛋白溶液進(jìn)行透析。最后凍干保存?zhèn)溆谩?br> 用12％的SDS-PAGE膠進(jìn)行電泳，鑒定表達(dá)蛋白的分子量大小為15KDa。
此外，用常規(guī)方法對表達(dá)蛋白的N端和C端各10個氨基酸長度的氨基酸進(jìn)行測序，發(fā)現(xiàn)與SEQ ID NO4的序列一致。
序列表(2)SEQ ID NO1的信息(i)序列特征(A)長度27堿基(B)類型核酸(C)鏈性單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型寡核苷酸(xi)序列描述SEQ ID NO1CATATGGCTC AGTCACTGGC TCTGAGC 27(2)SEQ ID NO2的信息(i)序列特征(A)長度28堿基(B)類型核酸(C)鏈性單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型寡核苷酸(xi)序列描述SEQ ID NO2AAGCTTATGG CCCTTTAGGG GTCTGTGA 28(2)SEQ ID NO3的信息(i)序列特征(A)長度1056bp(B)類型核酸(C)鏈性單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型cDNA(xi)序列描述SEQ ID NO31 CAGACATGGC TCAGTCACTG GCTCTGAGCC TCCTTATCCT GGTTCTGGCC TTTGGCATCC61 CCAGGACCCA AGGTACCAAG GCAGGGAGGG GCCTTGCATG GGGCTAAGGG GATCAAGAGG121 CCTGGGATAG GAGCTTGCCA GCAGCCCCTG GCTCCCTGTG AATCCACCCT TGCCAGGCAG181 TGATGGAGGG GCTCAGGACT GTTGCCTCAA GTACAGCCAA AGGAAGATTC CCGCCAAGGT241 TGTCCGCAGC TACCGGAAGC AGGAACCAAG CTTAGGCTGC TCCATCCCAG CTATCCTGTG301 AGTGGACACA AAGGGGTGGG TACTGGCTGG TGACGGGGTG GGGAGGGTCA TGGTGGGCAA361 GACTAAGGAA GGCCTTACTA GCCCCCCACC CGCAGGTTCT TGCCCCGCAA GCGCTCTCAG421 GCAGAGCTAT GTGCAGACCC AAAGGAGCTC TGGGTGCAGC AGCTGATGCA GCATCTGGAC481 AAGACACCAT CCCCACAGAA ACCAGCCCAG GGCTGCAGGA AGGACAGGGG GGCCTCCAAG541 ACTGGCAAGA AAGGAAAGGG CTCCAAAGGC TGCAAGAGGT GAGGAATCTG AGGGATGTGG601 GGTAAAGGGG AGCCTCAGTC AGCCCCTCAC ACCCCTCTTC TGCCCTCAGA GGACTGAGCG661 GTCACAGACC CCTAAAGGGC CATAGCCCAG TGAGCAGCCT GGAGCCCTGG AGACCCCACC721 AGCCTCACCA GCGCTTGAAG CCTGAACCCA AGATGCAAGA AGGAGGCTAT GCTCAGGGGC781 CCTGGAGCAG CCACCCCATG CTGGCCTTGC CACACTCTTT CTCCTGCTTT AACCACCCCA841 TCTGCATTCC CAGCTCTCAC CCTGCATGGC TGAGTCTGCC CACAGCAGGC CAGGTCCAGA901 GAGACCGAGG AGGGAGAGTC TCCCAGGGAG CATGAGAGGA GGCAGCAGGA CTGTCCCCTT961 GAAGGAGAAT CATCAGGACC CTGGACCTGA TACGGCTCCC CAGTACACCC CACCTCTTCC1021 TTGTAAATAT GATTTATACC TAACTGAATA AAAAAG(2)SEQ ID NO4的信息(i)序列特征(A)長度134個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型多肽(xi)序列描述SEQ ID NO41 Met Ala Gln Ser Leu Ala Leu Ser Leu Leu Ile Leu Val Leu Ala16 Phe Gly Ile Pro Arg Thr Gln Gly Ser Asp Gly Gly Ala Gln Asp31 Cys Cys Leu Lys Tyr Ser Gln Arg Lys Ile Pro Ala Lys Val Val46 Arg Ser Tyr Arg Lys Gln Glu Pro Ser Leu Gly Cys Ser Ile Pro61 Ala Ile Leu Phe Leu Pro Arg Lys Arg Ser Gln Ala Glu Leu Cys76 Ala Asp Pro Lys Glu Leu Trp Val Gln Gln Leu Met Gln His Leu91 Asp Lys Thr Pro Ser Pro Gln Lys Pro Ala Gln Gly Cys Arg Lys106 Asp Arg Gly Ala Ser Lys Thr Gly Lys Lys Gly Lys Gly Ser Lys121 Gly Cys Lys Arg Thr Glu Arg Ser Gln Thr Pro Lys Gly Pro(2)SEQ ID NO5的信息(i)序列特征(A)長度29堿基(B)類型核酸(C)鏈性單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型寡核苷酸(xi)序列描述SEQ ID NO5AACGGAATTC ATGGCTCAGT CACTGGCTC 29(2)SEQ ID NO6的信息(i)序列特征(A)長度29堿基(B)類型核酸(C)鏈性單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型寡核苷酸(xi)序列描述SEQ ID NO6ACAGGAATTC CTATGGCCCT TTAGGGGTC 29
權(quán)利要求
1.一種分離的編碼人高效淋巴細(xì)胞趨化因子的基因組序列，其特征在于，它包括SEQ ID NO3所示的核苷酸序列及其簡并序列。
2.如權(quán)利要求1所述序列，其特征在于，它是SEQ ID NO3所示的核苷酸序列。
3.一種載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求1所述的人高效淋巴細(xì)胞趨化因子基因組序列。
4.一種轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，其特征在于，它被權(quán)利要求3所述的載體所轉(zhuǎn)化。
5.一種生產(chǎn)人高效淋巴細(xì)胞趨化因子的方法，其特征在于，它包括在適合表達(dá)的條件下，培養(yǎng)權(quán)利要求4所述的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞具有含人高效淋巴細(xì)胞趨化因子基因組序列的載體，其中該序列是SEQ ID NO3或其簡并序列；和分離所表達(dá)的人高效淋巴細(xì)胞趨化因子。
6.一種探針分子，其特征在于，該探針長度為10-35個核苷酸。而且該探針含有對應(yīng)于SEQ ID NO3中除6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸之外的序列。
7.一種人高效淋巴細(xì)胞趨化因子基因組序列的用途，它包括使用10-35個核苷酸的核酸探針來檢測人細(xì)胞樣本，其中該探針含有對應(yīng)于SEQ ID NO3中除6-72，177-297，396-578，652-685位核苷酸之外的序列。
8.一種核苷酸分子，其特征在于，它是權(quán)利要求1所述的序列的反義序列。
全文摘要
發(fā)明涉及一種新的人基因核苷酸序列。更具體地說,本發(fā)明涉及人高效淋巴細(xì)胞趨化因子HUMECL的基因組序列,該因子是人淋巴細(xì)胞趨化因子的同系物。本發(fā)明還涉及由該核苷酸序列編碼的多肽,這些多核苷酸和多肽的應(yīng)用,以及所述多核苷酸和所述多肽的生產(chǎn)方法。
文檔編號C12N15/19GK1246533SQ9811103
公開日2000年3月8日 申請日期1998年8月31日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月31日
發(fā)明者余龍, 傅強(qiáng), 畢安定, 劉擎, 趙壽元 申請人:上海新黃浦復(fù)旦基因工程有限公司