專利名稱：一種治愈皮膚病用藥的產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制藥方面的技術(shù)，確切地談是一種從葡萄球菌的表皮素中提取的一種新型多肽抗菌素，主要用于潰瘍，竇道、褥瘡及各種創(chuàng)面的治療。
現(xiàn)有技術(shù)綜述目前有關(guān)金葡菌腸毒素與皮膚病的文獻(xiàn)還很少，特別是與皮膚病有關(guān)，真正涉及治療皮膚創(chuàng)傷或潰瘍的臨床可以說是沒有文字記載。目前人們用的皮膚病藥品，中藥和西藥據(jù)多，但真正用微生物制劑達(dá)到治療效果的產(chǎn)品人們還期待著問世。
本發(fā)明的目的公開的一種外用金葡液愈膚靈噴霧劑(擦劑)產(chǎn)品技術(shù)；本發(fā)明的另一目的在于提供一種對革蘭氏陽性細(xì)菌有明顯抑菌作用，對于組織細(xì)胞修復(fù)和傷口愈合均有顯著作用的微生物制劑。
本發(fā)明的具體方案是愈膚靈是一種生物制劑屬高聚金葡素系列，是金黃色葡萄球菌的代謝產(chǎn)物，含有游離凝固酶，氨基酸多伏復(fù)合物也是一種新型的多肽抗菌素。這些物質(zhì)尤其是游離凝固酶是一種類似凝血酶原的物質(zhì)，激活后形成耐熱的凝固酶樣物質(zhì)，可使血漿中液態(tài)的纖維蛋白質(zhì)變成固態(tài)的纖維蛋白進(jìn)一步形成膠元纖維和基質(zhì)的粘多糖，從而激發(fā)促進(jìn)細(xì)胞生長增殖。
本發(fā)明的配方主要由金黃色葡萄球菌代謝產(chǎn)物為主導(dǎo)并加入蛋白胨、豬心浸出液、氯化鈉、硫胺，所用原料的重量比為蛋白胨1-10；豬心浸出液1-100；氯化鈉1-5；硫胺1-0.1。
配方說明1、蛋白胨作為氮鹽，為金黃色葡萄球菌的代謝起著重要的作用。
2、氯化鈉，調(diào)節(jié)滲透壓作用。
3、豬心浸出物，作為一種營養(yǎng)成份，可提高金黃色葡萄球代謝轉(zhuǎn)化率。
4、硫胺，是一種生長因子，可促進(jìn)細(xì)胞的生長、發(fā)育。
5、同時蛋白胨、氯化鈉、豬心浸出物、硫胺又是一種良好的培養(yǎng)基，可使金黃色葡萄球菌分解成代謝產(chǎn)物，即多種氨基酸、酶和多肽復(fù)合物，其中游離凝固酶是一種類似凝血酶原的物質(zhì)，激活后形成耐熱的凝血酶樣物質(zhì)，可使血漿中液態(tài)的纖維蛋白原變成固態(tài)的纖維蛋白，進(jìn)一步形成膠原纖維和基質(zhì)的粘多糖，激發(fā)促進(jìn)組織細(xì)胞生長增殖，加之其具有廣譜抗菌作用(對革蘭氏陽性球菌)能預(yù)防瘡口感染，從而取得明顯的創(chuàng)口愈合效果。
其中將上述配方可制成各種劑型，噴霧劑擦劑。
下面結(jié)合工藝流程圖詳細(xì)描述菌種，復(fù)蘇，鑒定，培養(yǎng)，比濁，活菌計數(shù)，培養(yǎng)基，冷浸熱溶，活性炭處理，過濾，分裝，高壓滅菌接種，培養(yǎng)，除菌過濾，半成品檢查，除菌過濾，分裝，包裝，照射無菌，入庫配方金黃色葡萄球代謝產(chǎn)物蛋白胨10g豬心浸出液100g氯化鈉5g硫胺 0.1g稀釋至1000ml本發(fā)明的積極效果該技術(shù)的產(chǎn)品具有顯著的抑菌能力，特別是對革蘭氏陽性菌，促進(jìn)炎癥消退，同時又具有極強的組織修復(fù)能力，加速組織愈合。用于各種原因引起的皮膚潰瘍。如外傷、缺血、感染、褥瘡、濕疹、膿瘡瘡，特別是老爛腿及慢性骨髓炎引起的竇道，效果更加突出。
本發(fā)明采用該活性成份，以新的工藝和配方，研制出對皮膚和粘膜潰瘍有明顯修復(fù)作用，經(jīng)有關(guān)毒理試驗、皮膚刺激試驗，微實驗，眼刺激驗證以本品對人體無任何毒副作用，安全可靠，是燒傷、燙傷及皮膚潰瘍患者的較理想的首選藥。
實施例1、愈膚靈劑型有水劑、粉劑、針劑，水劑和噴霧劑為微黃澄明液體，粉劑為白色粉末狀結(jié)晶。
制作方法見工藝流程。
本品系用金黃色葡萄球菌經(jīng)培養(yǎng)，除菌過濾制成，愈膚靈噴霧劑(擦劑)。1、菌種1.1菌種來源生產(chǎn)用菌種系1976年自因藥物引起的料細(xì)胞減少癥繼發(fā)感染住院患者尿液中分離而得，株名為Z2，該菌株已于91年3月27日送中國微生物菌種保藏管理委員會微生物中心鑒定并保藏，保藏號0165,0292均是。1.2檢定1.2.1形態(tài)特征革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄狀。1.2.2培養(yǎng)特性在血瓊脂平板上經(jīng)35℃培育24小時形成的園形菌落，大小約1.5-2mm，突起、表面光滑、邊緣整齊、不透明、微溶血，產(chǎn)生脂溶性金黃色色素。在肉湯增減培養(yǎng)基中生長迅速，呈均勻混濁，培養(yǎng)時間達(dá)48小時，可見薄膜與少量沉淀。1.2.3生化反應(yīng)分解甘露醇、葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。1.2.4血清學(xué)試驗用家兔抗血清進(jìn)行定量凝集試驗，凝集價不應(yīng)低于原血清效價的一半。1.2.5聚集價測定聚集價應(yīng)在1∶2048以上。1.3菌種保存生產(chǎn)用菌種用凍干法保存，也可用半固體，每3個月傳代一次，保存溫度均應(yīng)2-8℃。2、制造2.1培養(yǎng)基采用PGH肉湯培養(yǎng)(附錄1)。2.2種子培養(yǎng)物由凍干菌種或半固體培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種子培養(yǎng)物須經(jīng)革蘭氏染色和用血玉脂平板作純菌檢查方可用于接種培養(yǎng)，種子培養(yǎng)物用肉湯稀釋后用比濁管及CFUS計數(shù)法計數(shù)，使每ml菌液含1000萬菌。2.3接種培養(yǎng)用種子培養(yǎng)物按1∶500接種PGH肉湯，置35℃培育20小時，然后逐瓶作純菌檢查。在純菌檢查期間，培養(yǎng)物放2-8℃保存。2.4原液和半成品制造2.4.1合并經(jīng)純菌檢查合格的培養(yǎng)物合并入一無菌容器中，作純菌檢查，是為原液。2.4.2除菌過濾經(jīng)純菌檢查合格的原液先用G6垂熔玻璃漏斗粗濾，接著用0.22μ微孔濾膜除菌過濾，所得濾液作無菌試驗，是為半成品，放2-8℃保存，保存期為三個月。2.5半成品檢定2.5.1無菌試驗按“中國生物制品無菌試驗項規(guī)程”進(jìn)行，如系保存一個月以上的半成品，分裝前仍須作一次無菌試驗。2.5.2安全試驗2.5.2.1毒性試驗用體重17-20克小鼠4只每只腹腔注射本品0.5ml，應(yīng)無立發(fā)反應(yīng)，觀察7天應(yīng)無異常反應(yīng)或死亡，體重不得減輕。2.5.2.2過敏試驗取體重250-350克豚鼠4只用本品隔日腹腔注射致三次，每次0.5ml，在末次注射后14天，由靜脈注入本品2.0ml進(jìn)行攻擊，觀察15-30分鐘，不應(yīng)出現(xiàn)抓鼻、干咳、豎毛、呼吸困難、死亡現(xiàn)象。2.5.3熱原試驗按“中國生物制品熱源質(zhì)試驗項規(guī)程”(1990版)進(jìn)行，注射量為家兔體重1ml/kg。2.5.4游離凝固酶活力測定應(yīng)500μ±100μ/2ml方法見(附錄1)2.5.5升白試驗P＜0.05方法見(附錄3)3、分裝3．1除菌過濾分裝前再用0.22μ微孔濾膜除菌一次。3.2流通蒸汽滅菌分裝后，用流通蒸汽100℃30分鐘滅菌一次。4、成品檢定4.1理化檢查4.1.1外觀澄明、微顯黃色、無沉淀、無異物。4.1.2PH應(yīng)在PH6.5-7.5范圍內(nèi)。4.2無菌試驗按“生物制品無菌試驗規(guī)程”進(jìn)行。4.3安全試驗同2.5.2.1。4.4游離凝固酶含量測定同2.5.4。4.5升白試驗。同2.5.5。5、保存及效期2-8℃，效期檢定合格之起二年。
附錄1 PGH培養(yǎng)基的制備2.1培養(yǎng)基成份2.1.1蛋白胨，以牛奶為基質(zhì)，精解，不含過敏原和熱原，1％。2.1.2豬心浸液10ml％2.1.3氯化鈉，注射用，0.5％2.1.4硫胺，注射用，0.01％2.2培養(yǎng)基精制2.2.1取商體四小時內(nèi)的新鮮豬心，去除脂肪、血塊、腱膜、用自來水、新鮮雙蒸水洗凈、鉸碎、稱重，加二倍量的新鮮雙蒸水煮沸二小時，冷卻后置冰箱(4℃)14小時冷浸出，再用布氏漏斗定量濾紙抽濾得澄清淡黃色濾液備用。2.2.2按需配藥量，稱取蛋白胨、氯化鈉、用新鮮雙蒸餾水加熱溶解。2.2.3按需配藥量量取(吸取)豬心浸出液和硫胺。2.2.4將2、3二液混合加針劑用新鮮雙蒸餾水至所需量。2.2.5用HCL調(diào)PH至3.5、加入0.5％針劑用粉末狀優(yōu)質(zhì)活性碳煮沸(不停攪拌)半小時。2.2.6用布氏漏斗定量濾紙抽濾、脫碳。2.2．用NaOH調(diào)PH至8.5，加入0.5％針劑用粉末狀優(yōu)質(zhì)活性碳再次煮沸(不停攪拌)半小時。2.2.8先后用布氏漏斗定量濾紙、G4玻璃濾器抽濾脫碳。2.2.9用HCL調(diào)PH至6.2，分裝500ml(已經(jīng)清潔液得理，雙蒸餾水洗凈180℃干烤二小時除熱原的)鹽水瓶加鋁蓋軋口，15磅30分鐘高壓滅菌備用。
本發(fā)明的創(chuàng)造性通過臨床數(shù)據(jù)來證明。
權(quán)利要求
1.一種采用金黃色葡萄球菌的代謝產(chǎn)物制備治愈皮膚病用藥的產(chǎn)品1，包括培養(yǎng)基的制備、菌種培養(yǎng)，腸毒素的提取等。其特征在于所述的微生物菌株(Staphy,tococcus,aureus)菌種保藏號(C1MCC-0292)在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，該菌株的代謝產(chǎn)物為主要原料再加入蛋白胨1-10，豬心浸出液1-100，氯化鈉1-5，硫胺1-0.1；
2.按照權(quán)利要求所述的一種治愈皮膚病用藥的產(chǎn)品其特征在于該技術(shù)是從金黃色葡萄球菌的表皮素中提出一種多肽抗菌素制成噴霧劑或針劑、擦劑等；
3.按照權(quán)利要求所述的一種治愈皮膚病用藥的產(chǎn)品其特征在于木發(fā)明公開了金葡菌腸毒素確實能改變或影響皮膚局部的免疫狀態(tài)，臨床數(shù)據(jù)證明該技術(shù)的產(chǎn)品對皮膚愈合有顯著療效。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物制藥方面的技術(shù),確切地談是一種從葡萄球菌的表皮素中提取一種新型多肽抗菌素主要成分是金黃色葡萄球菌的代謝產(chǎn)物等。金葡菌腸毒素確實能改變或影響皮膚局部的免疫狀態(tài),特別是通過誘導(dǎo)產(chǎn)生T細(xì)胞免疫狀況的變化及誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生各種細(xì)胞因子,具有顯著的抑菌能力特別是對革蘭氏陽性菌,促進(jìn)炎癥消退。同時,又具有極強的組織修復(fù)能力加速組織愈合,該技術(shù)的產(chǎn)品制成噴霧劑和擦劑、針劑等劑型。
文檔編號C12P1/04GK1228307SQ9811381
公開日1999年9月15日 申請日期1998年3月5日 優(yōu)先權(quán)日1998年3月5日
發(fā)明者陳巨余 申請人:沈陽協(xié)合制藥廠有限公司