專利名稱：編碼tage分子的分離的核酸分子及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及編碼腫瘤排斥抗原前體的核酸分子家族。腫瘤排斥抗原前體或“TRAP”可被加工成人白細(xì)胞抗原分子呈遞的肽。所述基因似乎與其它已知的腫瘤排斥抗原前體編碼序列不相關(guān)。
T細(xì)胞識(shí)別細(xì)胞異常的機(jī)理也涉及到癌癥。例如，PCT申請(qǐng)PCT/US92/04354(1992年5月22日提交，1992年11月26日公開，引入本文作為參考)中公開了被加工成肽，該肽又在細(xì)胞表面表達(dá)的基因家族，所述肽通過(guò)特異性的溶細(xì)胞T淋巴細(xì)胞(下文稱之為“CTL”)可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞裂解。據(jù)稱該基因編碼“腫瘤排斥抗原前體”或“TRAP”分子，由其衍生的肽被稱為“腫瘤排斥抗原”或“TRA”。有關(guān)該基因家族的詳細(xì)資料可參見Traversari等，免疫遺傳學(xué)，35145(1992)；van der Bruggen等，科學(xué)2541643(1991)。也可參見美國(guó)專利申請(qǐng)流水號(hào)807，043(1991年12月12日，現(xiàn)為美國(guó)專利5，342，774，其全文引入本文作為參考)。此專利中公開了腫瘤排斥抗原前體的“MAGE”家族。
美國(guó)專利5，405，940(引入本文作為參考)中解釋了MAGE-1基因編碼腫瘤排斥抗原前體，所述前體被加工成由HLA-A1分子呈遞的九肽。既然基元已達(dá)到要求，與HLA-A1結(jié)合的九肽即遵循結(jié)合“規(guī)則”。有關(guān)內(nèi)容可參見如PCT/US93/07421；Falk等，自然351290-296(1991)；Engelhard，Ann Rev.Immunol.12181-207(1994)；Ruppert等，細(xì)胞74929-937(1993)；Rotzschke等，自然348252-254(1990)；Bjorkman等，自然329512-518(1987)；Traversari等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志1761453-1457(1992)。參考文獻(xiàn)教導(dǎo)我們假定已知特定的肽對(duì)特定的HLA分子具有特異性，人們預(yù)期一種特定的肽與一種HLA分子結(jié)合，而不與其它HLA分子結(jié)合。這一點(diǎn)至關(guān)重要，因?yàn)椴煌膫€(gè)體具有不同的HLA表型。結(jié)果，盡管將特定肽鑒定為具體HLA分子的配對(duì)物有利于診斷和治療，但這僅與具有該特定HLA表型的個(gè)體相關(guān)。在此領(lǐng)域還需要進(jìn)一步的工作，因?yàn)榧?xì)胞異常并不局限于一種特定的HLA表型，靶向治療需要一些處于爭(zhēng)論中的異常細(xì)胞表型的知識(shí)。
美國(guó)專利申請(qǐng)流水號(hào)008，446(1993年1月22日提交，引入本文作為參考)公開了MAGE-1表達(dá)產(chǎn)物被加工成第二種TRA這一事實(shí)。該第二種TRA由HLA-Cw*1601分子呈遞。該專利表明給定TRAP可產(chǎn)生多種TRA，每種TRA都滿足與MHC分子結(jié)合的基元規(guī)則。
美國(guó)專利申請(qǐng)流水號(hào)994，928(1992年12月22日提交，引入本文作為參考)闡明由一些正常細(xì)胞(如黑素細(xì)胞)產(chǎn)生的分子，即酪氨酸酶在腫瘤細(xì)胞中被加工，產(chǎn)生由HLA-A2分子呈遞的肽。
在美國(guó)專利5，683，886(全文列入本文作為參考)中，非衍生自酪氨酸酶的第二種TRA由HLA-A2分子呈遞。這種TRA衍生自TRAP，但由非-MAGE基因編碼。該專利表明特定的HLA分子可呈遞衍生自不同來(lái)源的TRA。
美國(guó)專利5，571，711(1993年6月17日提交，引入本文作為參考)描述了不相關(guān)的腫瘤排斥抗原前體，即所謂的“BAGE”前體。BAGE前體與MAGE家族不相關(guān)。
美國(guó)專利申請(qǐng)流水號(hào)08/096，039和流水號(hào)08/250，162(皆引入本文作為參考)中也公開了不相關(guān)的TRAP前體GAGE。
由上文所述的論文，專利和專利申請(qǐng)描述的工作在很大程度上與MAGE基因家族和不相關(guān)的BAGE和GAGE基因有關(guān)。然而，目前已發(fā)現(xiàn)其它的腫瘤排斥抗原前體由細(xì)胞表達(dá)。這些腫瘤排斥抗原前體被稱為“TAGE”腫瘤排斥抗原前體，它們與MAGE基因家族，BAGE基因家族或GAGE基因家族沒有同源性。因此，本發(fā)明涉及編碼這種TAGE TRAP的基因，被編碼的腫瘤排斥抗原前體，由其衍生的腫瘤排斥抗原，基因的片斷，以及它們的用途。
下文將進(jìn)一步闡明本發(fā)明。
實(shí)施例1本實(shí)施例描述了本發(fā)明核酸分子的分離。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法學(xué)由睪丸組織制備cDNA文庫(kù)。具體地說(shuō)，使用商購(gòu)的寡-dT mRNA提取試劑盒分離poly A RNA。一旦分離出RNA，即使用寡-dT引物和標(biāo)準(zhǔn)方法將其轉(zhuǎn)變?yōu)閏DNA。
然后將cDNA與NotI/BstX銜接子連接，插入已知的表達(dá)載體pcDNAI／Amp，將所得重組質(zhì)粒電穿孔至大腸桿菌DH5αF’IQ中。根據(jù)Sambrook等，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社，1989)，p1.94(引入本文作為參考)所述的方法，用氨芐青霉素(50微克/毫升)選擇經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)菌，鋪于尼龍膜上進(jìn)行復(fù)制。簡(jiǎn)單地說(shuō)，將細(xì)菌鋪于膜上，然后將膜置于固體基質(zhì)上，當(dāng)可以看見菌落時(shí)，在第一張膜上放上第二張膜。一些細(xì)菌粘附到第二張膜上，如此產(chǎn)生復(fù)制品。
預(yù)處理之后，將膜用于雜交實(shí)驗(yàn)。具體地說(shuō)，于65℃，在10％葡聚糖硫酸酯，1％SDS和1M NaCl的溶液中使這些膜與32P標(biāo)記的寡核苷酸探針接觸。探針由美國(guó)專利5，571，711(引入本文作為參考)中的SEQ ID NO1的核苷酸100-385組成，接著進(jìn)行2次5分鐘的室溫洗滌(2×SSC)，再于60℃進(jìn)行2次30分鐘的洗滌(2×SSC，1％SDS)。
對(duì)一個(gè)陽(yáng)性克隆進(jìn)行部分測(cè)序。482個(gè)堿基對(duì)的部分序列示于SEQ IDNO1中。它與已知序列沒有同源性，與衍生得到雜交探針的cDNA序列也沒有同源性。雜交條件的低嚴(yán)緊性促成了雜交。
實(shí)施例2然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定分離的核酸分子(下文稱之為“TAGE”)是否屬于基因家族。為此，用EeoRI消化黑素瘤細(xì)胞系MZ2-MEL(描述于美國(guó)專利5，342，774中，列入本文作為參考)的基因組DNA。根據(jù)SEQ ID NO1制備核苷酸探針，該探針由SEQ ID NO1的核苷酸166-446組成，將其用于基因組消化物的Southem印跡。使用了嚴(yán)緊條件(0.2×SSC，1％SDS，20分鐘，60℃)，觀察到兩條分別為3.5和6.5kb的帶。使用Hind Ⅲ消化物重復(fù)實(shí)驗(yàn)，觀察到4條帶。其中兩條帶大于12kb，其余兩條帶為5和7千堿基長(zhǎng)。這一結(jié)果表明可能存在TAGE基因家族。
實(shí)施例3然后進(jìn)行研究以確定TAGE基因是否在正常或癌細(xì)胞和組織中表達(dá)。為此，使用標(biāo)準(zhǔn)的異硫氰酸胍法從樣品中提取總RNA。使用寡dT引物對(duì)2ug RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄以獲得cDNA。94℃ 5分鐘和73℃ 15分鐘處理之后，經(jīng)由30輪PCR循環(huán)來(lái)擴(kuò)增對(duì)應(yīng)于100ng總RNA(104個(gè)細(xì)胞)的cDNA量。一輪PCR循環(huán)為94℃ 1分鐘，59℃ 2分鐘和73℃ 2分鐘。引物分別由SEQ ID NO1的核苷酸166-187和核苷酸425-446的互補(bǔ)物組成。預(yù)期的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為281個(gè)堿基對(duì)。
擴(kuò)增之后，在1.5％瓊脂糖凝膠上按大小分級(jí)分離產(chǎn)物。將人β肌動(dòng)蛋白的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用作對(duì)照。
在受試的20個(gè)正常成人組織類型中，僅有精子和睪丸為陽(yáng)性。6個(gè)受試的胎兒組織無(wú)一為陽(yáng)性。在受試的22個(gè)腫瘤類型中，在精原細(xì)胞瘤(100％受試樣品)中發(fā)現(xiàn)了強(qiáng)表達(dá)，在黑素瘤，肉瘤，頭頸鱗狀細(xì)胞癌和成神經(jīng)細(xì)胞瘤中也發(fā)現(xiàn)了表達(dá)。檢測(cè)了15種腫瘤細(xì)胞系，其中肉瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，胸膜間皮瘤和甲狀腺瘤細(xì)胞系為陽(yáng)性。
上述實(shí)施例顯示出編碼腫瘤排斥抗原前體的核酸分子的分離。然而，該“TRAP”編碼分子與上文參考文獻(xiàn)中所述的先前已公開的MAGE，BAGE或GAGE編碼序列或任何其它已知的基因不具有同源性。因此，本發(fā)明的一方面是具有SEQ ID NO1所示核苷酸序列的分離的核酸分子和編碼TRA的SEQ ID NO1片斷或部分(有時(shí)稱之為“小基因”)，以及這些核酸分子中編碼TAGE蛋白之免疫活性部分的片斷或部分。此序列不是MAGE，BAGE或GAGE編碼序列，通過(guò)將該序列與上述文獻(xiàn)中所述的這些基因序列中任一相比較可以看出這一點(diǎn)。本發(fā)明的另一方面是編碼腫瘤排斥抗原前體的核酸序列，該序列在嚴(yán)緊條件下可與具有SEQ ID NO1之核苷酸序列的核酸分子雜交。本文所用術(shù)語(yǔ)“嚴(yán)緊條件”指的是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的參數(shù)。更具體地說(shuō)，本文所用的嚴(yán)緊條件指的是在3.5×SSC，1×Denhardt(0.02％Ficoll，0.02％聚乙烯吡咯烷酮，0.02％BDA)，25mMNaH2PO4，pH7.0，0.5％SDS，2mM EDTA中雜交，接著于65℃用2×SSC，0.5％SDS進(jìn)行2次15分鐘的洗滌，接著于65℃用0.2×SSC，0.1％SDS進(jìn)行1次15分鐘的洗滌。也可使用其它條件，試劑等而能達(dá)到相同的或更高程度的嚴(yán)緊性。本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)這種條件是熟悉的，因此，本文中不再給出這些條件。
從實(shí)施例中可以看出本發(fā)明包括在表達(dá)載體中使用序列，所述載體可用于轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞和細(xì)胞系，所述細(xì)胞可以是原核的(如大腸桿菌)或真核的(如CHO或COS細(xì)胞)。表達(dá)載體需要相關(guān)序列(即上文所述序列)與啟動(dòng)子可操作相連。由于已發(fā)現(xiàn)人白細(xì)胞抗原呈遞衍生自腫瘤排斥抗原前體的腫瘤排斥抗原，表達(dá)載體也可包括編碼HLA分子的核酸序列。在載體含有這兩種編碼序列的情況下，可以用此載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染一般不表達(dá)這兩種編碼序列之任一種的細(xì)胞。當(dāng)如宿主細(xì)胞已表達(dá)HLA分子時(shí)，也可單獨(dú)使用腫瘤排斥抗原前體編碼序列。當(dāng)然，對(duì)所用的特定宿主細(xì)胞沒有限制。由于載體含有兩個(gè)編碼序列，可將它們用于不表達(dá)HLA的宿主細(xì)胞。
本發(fā)明也包括所謂的表達(dá)試劑盒，本領(lǐng)域技術(shù)人員使用該試劑盒可制備所需的表達(dá)載體。這種表達(dá)試劑盒至少包括上述各編碼序列的獨(dú)立部分。必要時(shí)也可加入其它成分，只要包括上述必需序列即可。
為了將本發(fā)明的核酸分子和TRAP與以前描述的MAGE，BAGE和GAGE物質(zhì)區(qū)分開，本發(fā)明應(yīng)被稱作TAGE基因家族和TRAP。因此，本文所用的“TAGE”指的是由本文所述序列編碼的腫瘤排斥抗原前體。采用“TAGE編碼分子”和類似術(shù)語(yǔ)來(lái)描述核酸分子本身。
本文所述的發(fā)明具有多種用途，本文描述了其中一些用途。首先，本發(fā)明使本領(lǐng)域技術(shù)人員可以診斷特征在于TRAP表達(dá)的疾病。所述方法包括測(cè)定TRAP基因的表達(dá)和/或由其衍生的TRA，如由HLA呈遞的TRA。在前一種情況下，可經(jīng)由任何標(biāo)準(zhǔn)的核酸測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，所述測(cè)定法包括聚合酶鏈反應(yīng)或用標(biāo)記的雜交探針進(jìn)行檢測(cè)。在后一種情況下，特別優(yōu)選用TRA和HLA復(fù)合體的結(jié)合配對(duì)物如抗體進(jìn)行檢測(cè)。另一種檢測(cè)方法是上文所述類型的TNT或51Cr釋放檢測(cè)法。
TRAP基因的分離使得TRAP分子自身，尤其是含有由SEQ ID NO1編碼的氨基酸序列的TRAP分子也可被分離。當(dāng)這些分離的分子作為TRA或TRA與HLA的復(fù)合體形式存在時(shí)，它們可與諸如佐劑的物質(zhì)聯(lián)合以產(chǎn)生疫苗，所述疫苗可用于治療特征在于TRAP分子表達(dá)的疾病。另外，在其表面呈遞TRA/HLA復(fù)合體的細(xì)胞，如非增殖性癌細(xì)胞，非增殖性轉(zhuǎn)染子等也可制備疫苗。在細(xì)胞用作疫苗的情況下，所述細(xì)胞是被提供CTL反應(yīng)所必需的一種或兩種成分的編碼序列轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，或者是不經(jīng)轉(zhuǎn)染即可表達(dá)這兩種分子的細(xì)胞。另外，使用本領(lǐng)域眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，TRAP分子，其相關(guān)的TRA以及TRA和HLA的復(fù)合體可用于產(chǎn)生抗體或CTL。所述疫苗包括一種或多種細(xì)胞因子，如GM-CSF。
本文所用術(shù)語(yǔ)“疾病”指的是表達(dá)和加工腫瘤排斥抗原前體的任何病理學(xué)狀態(tài)。所述疾病的例子是癌癥，尤其是黑素瘤。眾所周知，黑素瘤是產(chǎn)生色素之細(xì)胞的癌癥。
根據(jù)本發(fā)明的治療方法的前題是導(dǎo)致TRA呈遞細(xì)胞裂解的受試者免疫系統(tǒng)反應(yīng)。這類方法之一是給具有表型有問題的異常細(xì)胞的受試者施用特異于所述復(fù)合體的CTL。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知在體外制備這種CTL。具體地說(shuō)，將細(xì)胞樣品(如血細(xì)胞)與呈遞復(fù)合體并能促進(jìn)特異性CTL增殖的細(xì)胞接觸。靶細(xì)胞可以是轉(zhuǎn)染子，如上述類型的COS細(xì)胞。這些轉(zhuǎn)染子將所需復(fù)合體呈遞至其表面，當(dāng)與所需的CTL混合時(shí)，會(huì)刺激其增殖。本文所用的COS細(xì)胞來(lái)源很廣，正如其它適宜的宿主細(xì)胞那樣。
為了詳細(xì)描述治療方法學(xué)，稱為過(guò)繼轉(zhuǎn)移(Greenberg，J.免疫學(xué)雜志，136(5)1917(1986)；Riddel等，科學(xué)257238(7-10-92)；Lynch等，歐洲免疫學(xué)雜志，211403-1410(1991)；Kast等，細(xì)胞59603-614(11-17-89))，將呈遞所需復(fù)合體的細(xì)胞與CTL混合，導(dǎo)致特異于該細(xì)胞的CTL增殖。然后將增殖的CTL施用于細(xì)胞異常的受試者，所述細(xì)胞異常的特征在于某些呈遞特定復(fù)合體的異常細(xì)胞，其中復(fù)合體含有相關(guān)的HLA分子。CTL可裂解異常細(xì)胞，從而達(dá)到所需的治療目的。
上述療法假定至少一些受試者的異常細(xì)胞呈遞相關(guān)的HLA/TRA復(fù)合體。這一點(diǎn)很容易被確定，因?yàn)楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員很熟悉呈遞特定HLA分子的細(xì)胞的鑒定方法，以及如何鑒定表達(dá)相關(guān)序列(此時(shí)為TAGE序列)的DNA的細(xì)胞。一旦經(jīng)由上述篩選方法學(xué)鑒定出呈遞相關(guān)復(fù)合體的細(xì)胞，可將它們與患者的樣品混合，其中所述樣品含有CTL。如果復(fù)合體呈遞細(xì)胞被混合的CTL樣品裂解，則可以假定TAGE衍生的腫瘤排斥抗原被呈遞，該受試者是上文所述治療方法的適當(dāng)候選者。
過(guò)繼轉(zhuǎn)移不是本發(fā)明可以提供的唯一治療形式。也可使用多種方法在體內(nèi)刺激CTL產(chǎn)生。上文已闡明了一種方法，即使用非增殖性的細(xì)胞表達(dá)復(fù)合體。此方法中所用的細(xì)胞是那些正常表達(dá)復(fù)合體的細(xì)胞，如經(jīng)照射的黑素瘤細(xì)胞或被用于呈遞復(fù)合體所需的一種或兩種基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。Chen等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA88110-114(1991年1月)描述了此方法，并在治療方案中使用了表達(dá)HPV E7肽的轉(zhuǎn)染細(xì)胞?？墒褂枚喾N細(xì)胞類型。類似地，可使用攜有一種或兩種所需基因的載體。尤其優(yōu)選病毒或細(xì)菌載體。在這些系統(tǒng)中，所需基因按Layton等，免疫學(xué)87(2)171-178(1996)，Gibert等，Nat Biotechnol.15(12)1280-1284(1997)(引入本文作為參考)所述，由例如痘苗病毒和腺病毒，逆轉(zhuǎn)錄病毒，Yersinia病毒或Ty病毒樣顆粒或細(xì)菌BCG攜有，所述物質(zhì)實(shí)際上“感染”宿主細(xì)胞。也可使用其它類型的載體，如脂質(zhì)體或陽(yáng)離子脂質(zhì)。所得細(xì)胞呈遞所需復(fù)合體，并被自身的CTL識(shí)別，然后該CTL增殖。通過(guò)將腫瘤排斥抗原或前體本身與佐劑混合也可獲得類似的效果，即便于摻入HLA呈遞細(xì)胞，然后所述細(xì)胞呈遞所需的HLA/肽復(fù)合體。TRAP被加工形成HLA分子的肽配對(duì)物，而TRA無(wú)需進(jìn)一步的加工即可被呈遞。
無(wú)需贅言，本發(fā)明的其它方面對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。
本文所用術(shù)語(yǔ)和表述方式旨在描述而不是限制本發(fā)明，所述術(shù)語(yǔ)和表述方式的使用也包括所示或所述特征或其部分的任何等同物，應(yīng)認(rèn)識(shí)到在本發(fā)明的范圍之內(nèi)進(jìn)行各種修飾也是可能的。
序列表(1)一般資料(ⅰ)申請(qǐng)人Van der Bruggen，Pierre；Boon-Falleur，Thierry(ⅱ)發(fā)明名稱編碼TAGE分子的分離的核酸分子及其用途(ⅲ)序列數(shù)目1(ⅳ)聯(lián)系地址(A)聯(lián)系人Fulbright&Jaworski L.L.P.
(B)街道666 5th Avenue(C)城市紐約(D)州紐約(E)國(guó)家美國(guó)(F)郵政編碼10103-3198(ⅴ)計(jì)算機(jī)可讀形式(A)介質(zhì)類型軟盤，3.5英寸，1.44KB內(nèi)存(B)計(jì)算機(jī)IBM PS/2(C)操作系統(tǒng)PC(D)軟件Wordperfect(ⅳ)目前的申請(qǐng)資料(A)申請(qǐng)?zhí)?B)申請(qǐng)日(C)分類號(hào)(ⅷ)律師/代理人資料(A)姓名Hanson，Norman D.
(B)登記號(hào)30，946(C)參考/案號(hào)LUD 5376 PCT(ⅸ)通訊信息(A)電話(212)318-3168(B)電傳(212)752-5958(2)SEQID NO1的資料
(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度482個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ⅹⅰ)序列描述SEQID NO1GACAGAGTGT GCAGCACGAC CAGAGTGGCT TTTCTGGCTT TGCCGCCCAG CTGCTCCATG 60CCAGGAGGAG GAGGAGACAC CTAGAGCCTG CGACACCATG GCTCGCCTCG CTGCAGTGTA120GGTTCTACCC ATGTAACAGA TGAGGAAACC AAGGAGCACA GTTATTTACT AACTCGCACA180AGGTTCGAGG CCGAGCTCAG ACCTGTGGAG CAGAAGCTGA GTGCGCTGCA GTCCCCGCTG240GCCCAGAGGC CCTTCTTCGA GGTGCCCTCA CCCCTGGGCG CCGTGGACCT GTACGAGTAT300GCATGCGGGG ATGAGGACCT GGAGCCACTG TGACGCCACC CATGAGAACG CCGCTGCGGG360GCCGCTCCAC ACGTGCCACG GCCACCACTG GGACACCGCC GCTTGTGTAA AAACTGTTGT420CTTTTGTGGA AAATGAGTGT GTTTGCATGG AATGATAAAT TTTATTTATT CACAAAAAAA480AA 48權(quán)利要求
1．分離的核酸分子，其基本上由SEQ ID NO1所示的核苷酸序列組成。
2．分離的核酸分子，其互補(bǔ)序列在嚴(yán)緊條件下與SEQ ID NO1所示的核酸分子雜交，并且編碼腫瘤排斥抗原前體。
3．分離的核酸分子，其編碼具有由SEQ ID NO1所示的核苷酸序列編碼之蛋白質(zhì)的氨基酸序列的蛋白質(zhì)。
4．分離的核酸分子，其與權(quán)利要求1的核酸分子完全互補(bǔ)。
5．被權(quán)利要求1的核酸分子轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
6．被權(quán)利要求2的核酸分子轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
7．被權(quán)利要求3的核酸分子轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
8．表達(dá)載體，其含有與啟動(dòng)子可操作相連的權(quán)利要求1的分離的核酸分子。
9．表達(dá)載體，其含有與啟動(dòng)子可操作相連的權(quán)利要求2的分離的核酸分子。
10．表達(dá)載體，其含有與啟動(dòng)子可操作相連的權(quán)利要求3的分離的核酸分子。
11．權(quán)利要求5的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
12．權(quán)利要求6的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
13．權(quán)利要求7的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
14．權(quán)利要求8的表達(dá)載體，進(jìn)一步包括編碼人白細(xì)胞抗原的核酸分子。
15．權(quán)利要求9的表達(dá)載體，進(jìn)一步包括編碼人白細(xì)胞抗原的核酸分子。
16．權(quán)利要求10的表達(dá)載體，進(jìn)一步包括編碼人白細(xì)胞抗原的核酸分子。
17．表達(dá)試劑盒，其含有下列物質(zhì)的獨(dú)立部分(ⅰ)權(quán)利要求1的分離的核酸分子，和(ⅱ)編碼人白細(xì)胞抗原的核酸分子。
18．表達(dá)試劑盒，其含有下列物質(zhì)的獨(dú)立部分(ⅰ)權(quán)利要求2的分離的核酸分子，和(ⅱ)編碼人白細(xì)胞抗原的核酸分子。
19．表達(dá)試劑盒，其含有下列物質(zhì)的獨(dú)立部分(ⅰ)權(quán)利要求3的分離的核酸分子，和(ⅱ)編碼人白細(xì)胞抗原的核酸分子。
20．由權(quán)利要求1，2或3的核酸分子編碼的分離的腫瘤排斥抗原前體。
全文摘要
本發(fā)明公開了新的腫瘤排斥抗原前體家族和編碼它們的核酸分子。這些腫瘤排斥抗原前體被稱為TAGE腫瘤排斥抗原前體,編碼它們的核酸分子被稱為TAGE編碼分子。本發(fā)明還描述了編碼序列和腫瘤排斥抗原及其前體分子的多種診斷和治療用途。
文檔編號(hào)C12P21/02GK1284962SQ98813782
公開日2001年2月21日 申請(qǐng)日期1998年12月2日 優(yōu)先權(quán)日1998年3月6日
發(fā)明者皮埃爾·范德布魯根, 蒂里·布恩－法勒爾 申請(qǐng)人:路德維格癌癥研究院