，進(jìn)行高溫滅菌，然后進(jìn)行分裝。
[0011] 實(shí)施例2: 步驟1:制備酵母菌種液： 種液罐擴(kuò)大培養(yǎng)基:YTO液體培養(yǎng)基，其質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1%酵母提取物，2%蛋白腺，2%葡萄 糖，2%瓊脂，其余為水，將YTO液體培養(yǎng)基放入0.5M3種子罐內(nèi)，115°C的50分鐘高溫滅菌;無 菌操作條件下將1.5公斤酵母菌干菌粉溶于3倍的無菌水中，形成菌液，將所述的菌液裝入 血清瓶并接種到0.5M 3種子罐，在30°C下通入無菌壓縮空氣，通氣量為O . 3立方米/分鐘，培 養(yǎng)30 h，待菌體生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期末期時(shí)停止培養(yǎng)，重復(fù)上述步驟可制得所需質(zhì)量的酵母菌液 的種液； 步驟2:制備乳酸菌種液： 種液罐擴(kuò)大培養(yǎng)基:麥芽復(fù)合汁增菌培養(yǎng)基，其質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為10%麥芽汁，0.5%大豆蛋 白腺，0.5%酵母膏，1%牛肉膏，0.2% K2HPO4,其余為水，將麥芽復(fù)合汁增菌培養(yǎng)基放入0.5M3 種子罐內(nèi)，115°C的50分鐘高溫滅菌;無菌操作條件下將1.5公斤乳酸菌的干菌粉溶于3倍的 無菌水中，菌液裝入血清瓶并接種到O . 5M3種子罐，37°C恒溫靜置培養(yǎng)36 h，待菌體生長(zhǎng)至 對(duì)數(shù)期末期時(shí)停止培養(yǎng)，可重復(fù)上述步驟可制得所需乳酸菌的種液;所述的步驟2中的乳酸 菌為0.5公斤雙歧桿菌，0.5公斤地衣芽抱桿菌，0.5公斤嗜熱鏈球菌。
[0012] 步驟3:培養(yǎng)發(fā)酵液： 先將質(zhì)量比為120:15:15:25:25:1000的番茄:蘋果:小白菜:葡萄:巧樣:水混合打碎過 濾取濾液，用所述濾液制成培養(yǎng)基，在115°C下高溫滅菌30-50分鐘，將所述培養(yǎng)基加入發(fā)酵 罐中，然后按質(zhì)量為所述濾液的10%的接種量接種步驟1制得的酵母菌的種液，在28°C的溫 度下培養(yǎng)4她，所述的發(fā)酵罐的體積為V立方米，通氣量為0.6V立方米/分鐘，攬拌轉(zhuǎn)速120 rpm/min;然后按質(zhì)量為所述濾液的5%-10%的接種量接種步驟2制得的乳酸菌種液，在37°C 的溫度下繼續(xù)培養(yǎng)7d(靜置培養(yǎng)，無攬拌，讓罐保持正壓W防染菌）至發(fā)酵結(jié)束，得到發(fā)酵 液； 步驟4:將發(fā)酵液離屯、處理獲得酵素原液： 將步驟3得到的發(fā)酵液導(dǎo)入離屯、機(jī)，經(jīng)6000 rpm離屯、lOmin，所得上清液即為酵素原液； 步驟5: 將質(zhì)量比為:蛹蟲草提取物:酵素原液=20:1000的蛹蟲草提取物和步驟4得到的酵素原 液混合，在115°C環(huán)境下維持50分鐘，進(jìn)行高溫滅菌，然后進(jìn)行分裝。
[0013]抗疲勞效果： 采用飼喂法飼喂昆明小鼠，每天WO. lmL/20g的體積給予蛹蟲草酵素受試物，陰性對(duì)照 組給予等體積純水，連續(xù)30d后，參照衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范-2003》中緩解 體力疲勞功能實(shí)驗(yàn)的檢驗(yàn)方法對(duì)受試小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間、血清尿素、肝糖原進(jìn)行檢測(cè)，取 平均值。試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表1。
表1 :緩解體力疲勞功能實(shí)驗(yàn)表 試驗(yàn)證明：蛹蟲草酵素受試物能明顯對(duì)抗疲勞，增強(qiáng)肌肉耐力，抵抗運(yùn)動(dòng)性疲勞，對(duì)抗 疲勞，增強(qiáng)精力、體力，改善貧血癥狀。使膚色看起來更年輕，精氣神更足。
[0015] W上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù) 人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本 發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，運(yùn)些變 化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其 等同物界定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種抗疲勞的蛹蟲草番茄酵素的制備方法，其特征是:所需步驟如下： 步驟1:制備酵母菌種液： 種液罐擴(kuò)大培養(yǎng)基:YPD液體培養(yǎng)基，其質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1%酵母提取物，2%蛋白胨，2%葡萄 糖，2%瓊脂，其余為水，將YH)液體培養(yǎng)基放入0.5M3種子罐內(nèi)，115°C的30-50分鐘高溫滅菌； 無菌操作條件下將1.5公斤酵母菌干菌粉溶于3倍的無菌水中，形成菌液，將所述的菌液裝 入血清瓶并接種到0.5M 3種子罐，在28-30°C下通入無菌壓縮空氣，通氣量為0.2-0.3立方 米/分鐘，培養(yǎng)20-30 h，待菌體生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期末期時(shí)停止培養(yǎng)，重復(fù)上述步驟可制得所需質(zhì) 量的酵母菌液的種液； 步驟2:制備乳酸菌種液： 種液罐擴(kuò)大培養(yǎng)基:麥芽復(fù)合汁增菌培養(yǎng)基，其質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為10%麥芽汁，0.5%大豆蛋 白胨，0.5%酵母膏，1%牛肉膏，0.2% K2HP〇4,其余為水，將麥芽復(fù)合汁增菌培養(yǎng)基放入0.5M3 種子罐內(nèi)，115°C的30-50分鐘高溫滅菌;無菌操作條件下將1.5公斤乳酸菌的干菌粉溶于3 倍的無菌水中，菌液裝入血清瓶并接種到0.5M 3種子罐，37°C恒溫靜置培養(yǎng)24-36 h，待菌體 生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期末期時(shí)停止培養(yǎng)，可重復(fù)上述步驟可制得所需乳酸菌的種液； 步驟3:培養(yǎng)發(fā)酵液： 先將質(zhì)量比為120:15:15:25:25:1000的番茄:蘋果:小白菜:葡萄:檸檬:水混合打碎過 濾取濾液，用所述濾液制成培養(yǎng)基，在115°C下高溫滅菌30-50分鐘，將所述培養(yǎng)基加入發(fā)酵 罐中，然后按質(zhì)量為所述濾液的5%_10%的接種量接種步驟1制得的酵母菌的種液，在28°C的 溫度下培養(yǎng)48h，所述的發(fā)酵罐的體積為V立方米，通氣量為(0.4-0.6)V立方米/分鐘，攪拌 轉(zhuǎn)速100-120 rpm/miη;然后按質(zhì)量為所述濾液的5%-10%的接種量接種步驟2制得的乳酸菌 種液，在37°C的溫度下繼續(xù)培養(yǎng)5-7d至發(fā)酵結(jié)束，得到發(fā)酵液； 步驟4:將發(fā)酵液離心處理獲得酵素原液： 將步驟3得到的發(fā)酵液導(dǎo)入離心機(jī)，經(jīng)6000 rpm離心10min，所得上清液即為酵素原液； 步驟5: 將質(zhì)量比為:蛹蟲草提取物:酵素原液=20:1000的蛹蟲草提取物和步驟4得到的酵素原 液混合，在115°C環(huán)境下維持30-50分鐘，進(jìn)行高溫滅菌，然后進(jìn)行分裝。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是:所述的步驟2中的乳酸菌為0.5公斤雙歧 桿菌，0.5公斤地衣芽孢桿菌，0.5公斤嗜熱鏈球菌。
【專利摘要】本發(fā)明所采用的技術(shù)解決方案是一種抗疲勞的蛹蟲草番茄酵素的制備方法，所需步驟如下：步驟1：制備酵母菌種液；步驟2：制備乳酸菌種液；步驟3：培養(yǎng)發(fā)酵液；步驟4：將發(fā)酵液離心處理獲得酵素原液；步驟5：將質(zhì)量比為：蛹蟲草提取物：酵素原液=20:1000的蛹蟲草提取物和步驟4得到的酵素原液混合，在115℃環(huán)境下維持30-50分鐘，進(jìn)行高溫滅菌，然后進(jìn)行分裝。
【IPC分類】C12N1/20, C12N1/16, C12R1/10, A23L31/00, C12R1/46, A23L33/00
【公開號(hào)】CN105533679
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510865342
【發(fā)明人】不公告發(fā)明人
【申請(qǐng)人】沈陽園康天然生物科技有限公司
【公開日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2015年12月1日