一種穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉及其制備方法，以大豆分離蛋白、濃縮乳清蛋白和磷脂為主要原料，將甜葉菊低溫加工成甜葉菊提取物，可最大限度地保留甜葉菊的有效成分和生物活性成分，提取率高，風(fēng)味純正、色澤天然、無甘草味，與主料科學(xué)復(fù)配，并添加抗凍多肽、膳食纖維粉、蜂蛹蟲酶解物、小麥芽粉，制備一種口感適宜、溶解性好、營養(yǎng)全面、生物活性強(qiáng)、適宜人群廣泛且穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉。制備方法采用非熱加工技術(shù)，工作效率高，能源消耗少，對(duì)環(huán)境友好，無污染，減少了食品添加劑和化學(xué)助劑的引入，有效提高了食品安全性，提高了產(chǎn)品質(zhì)量和降低了生產(chǎn)成本，實(shí)現(xiàn)了低碳生產(chǎn)目標(biāo)，可規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化發(fā)展。
【專利說明】
一種穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及蛋白粉，特別涉及一種穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛋白質(zhì)是人體的主要構(gòu)成物質(zhì)，又是人體生命活動(dòng)的主要物質(zhì)。蛋白質(zhì)加上核酸， 是生命存在的主要形式。蛋白質(zhì)在古拉丁語的原意是"首要"的意思，它雖是營養(yǎng)物質(zhì)的一 份子，但卻是處于各種營養(yǎng)物質(zhì)一個(gè)中心的地位，其作用主要是：1、用于制造肌肉、血液、皮 膚和各種身體器官。2、幫助身體制造新組織以替代壞掉的組織。3、向細(xì)胞輸送各種營養(yǎng)。4、 調(diào)節(jié)體內(nèi)水分的平衡。5、為免疫系統(tǒng)制造對(duì)抗細(xì)菌和感染的抗體。6、幫助傷口血液凝結(jié)及 愈合。7、在體內(nèi)制造酶，有助將食物轉(zhuǎn)化為能量。人體缺乏蛋白質(zhì)是可以致命的，人體中的 蛋白質(zhì)約占體重的16 %，一個(gè)60kg體重的人，體內(nèi)有10~11 kg的蛋白質(zhì)，人體如果丟失體內(nèi) 蛋白質(zhì)的20%以上，生命活動(dòng)就會(huì)被迫停止運(yùn)行。常見蛋白質(zhì)的缺乏癥狀為代謝率下降，生 命變得脆弱而易病，遠(yuǎn)期效果在器官上的損害是肯定的，蛋白質(zhì)的缺乏，往往又與能量的缺 乏共同存在，常見的有兒童生長發(fā)育遲緩，體重下降。中老年人易產(chǎn)生淡漠、易激怒，情緒不 穩(wěn)定，貧血以及干瘦或水腫，并因?yàn)槊庖吡Φ拖乱赘腥径^發(fā)疾病。
[0003] 乳清蛋白能對(duì)抗各種免疫挑戰(zhàn)，能促進(jìn)體液免疫和細(xì)胞免疫。此外亦發(fā)現(xiàn)乳清蛋 白可對(duì)抗微生物感染，如沙門氏菌、鏈球菌性肺炎等。大豆蛋白質(zhì)約占大豆含量的40%，是 谷類食物的4~5倍。大豆蛋白質(zhì)的氨基酸組成與牛奶蛋白質(zhì)相近，除蛋氨酸略低外，其余必 需氨基酸含量均較豐富，是植物性完全蛋白質(zhì)，在營養(yǎng)價(jià)值上可與動(dòng)物蛋白等同。大豆蛋白 對(duì)健康所起的積極作用主要有:大豆蛋白有助于降低血漿膽固醇水平，能阻止尿鈣損失，有 助促進(jìn)骨質(zhì)健康。另外大豆蛋白的攝入有促進(jìn)腎功能的效果，大豆蛋白可以作為腎病患者 相對(duì)安全的蛋白質(zhì)來源。
[0004] 磷脂是含有磷脂根的類脂化合物，是生命基礎(chǔ)物質(zhì)。而細(xì)胞膜就由4 0%左右蛋白 質(zhì)和50%左右的脂質(zhì)（磷脂為主）構(gòu)成。它是由卵磷脂，肌醇磷脂，腦磷脂等組成。這些磷脂 分別對(duì)人體的各部位和各器官起著相應(yīng)的功能。人體所有細(xì)胞中都含有磷脂，它是維持生 命活動(dòng)的基礎(chǔ)物質(zhì)。磷脂對(duì)活化細(xì)胞，維持新陳代謝，基礎(chǔ)代謝及荷爾蒙的均衡分泌，增強(qiáng) 人體的免疫力和再生力，都能發(fā)揮重大的作用。概括來講磷脂的基本功用是:增強(qiáng)腦力，安 定神經(jīng)，平衡內(nèi)分泌，提高免疫力和再生力，解毒利尿，清潔血液，健美肌膚，保持年輕，延緩 衰老。
[0005] 目前，以大豆分離蛋白、乳清蛋白、磷脂為原料制備復(fù)合蛋白粉的較多，有的主要 以補(bǔ)充人體營養(yǎng)為目的：中國專利CN 104770743A公開了一種復(fù)合蛋白粉及其制備方法。復(fù) 合蛋白粉含有大豆蛋白粉、乳清蛋白粉、青稞蛋白粉、馬鈴薯蛋白粉、甘薯蛋白粉、膠原蛋白 粉、豌豆蛋白粉、核桃粉、蛋清粉、蛋黃粉、大豆磷脂、油菜花粉、甜味劑、香精。其制備方法是 將原料烘烤、冷卻、混合、包裝，即可得成品。該發(fā)明所選取的原料配比符合現(xiàn)代養(yǎng)生原理， 配方科學(xué)合理，具有良好的補(bǔ)充人體所需營養(yǎng)的作用，且口感良好、風(fēng)味獨(dú)特。中國專利CN 105146043A公開了一種瑪咖蛋白粉，由主料和輔料混合制備而成，所述主料為瑪咖粉和大 豆蛋白粉;所述輔料，包括卵磷脂、乳清蛋白粉、結(jié)晶果糖、香蘭素、植脂末、低聚果糖、微量 元素、復(fù)合維生素、二氧化硅和魔芋膠;其配料質(zhì)量比為:瑪咖粉2.2-3.8份、大豆蛋白粉55-80份、卵磷脂1.5-2.5份、乳清蛋白粉4.9-8.5份、結(jié)晶果糖7.3-9.2份、香蘭素0.0015-0.0035份、植脂末4.8-8.2份、低聚果糖5.1-6.7份、微量元素0.9-1.5份、復(fù)合維生素0.Οβ-Ο. 22 份 、二氧化硅 0.07-0. 2 份和魔芋膠 0.08-0. 23 份， 將配料粉碎后 ，過 100-150 目篩 ，混合 均勻，即得。該發(fā)明有效補(bǔ)充缺少的營養(yǎng)物質(zhì)，全面調(diào)節(jié)營養(yǎng)平衡，提高免疫力，強(qiáng)健身體。 中國專利CN 103005464Β公開了一種乳清蛋白組合物、方法及用途。該發(fā)明提供了多種乳清 蛋白組合物，其作為營養(yǎng)配方適合用作即用液體組合物，其貯存穩(wěn)定并且含有高水平的完 整乳清蛋白含量。
[0006] 有的以預(yù)防和治療疾病為目的：中國專利CN 103584089Α公開了一種多營養(yǎng)復(fù)合 蛋白質(zhì)粉的加工方法，是由下述重量份的原料制成:類人膠原蛋白15、牛初乳15、大豆蛋白 350、乳清蛋白550、靈芝5、金銀花5、玄參5、麥冬3、銀杏葉2、斑竹根3、丹參3、金蕎麥2、黃開 口 3、洛神花汁30;該發(fā)明提供了一種多營養(yǎng)復(fù)合蛋白質(zhì)粉的加工方法，其加工步驟簡單，原 料來源廣，安全健康;采用該發(fā)明方法生產(chǎn)的蛋白質(zhì)粉，營養(yǎng)豐富，食用方便，吸收、利用率 高，能減少腸胃負(fù)擔(dān)，并且在補(bǔ)充蛋白質(zhì)的同時(shí)可以避免過量脂肪和膽固醇的攝入，能有效 地減少心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。中國專利CN 104839736Α公開了一種可以預(yù)防老年癡呆癥 的蛋白粉，其由下列重量的原料組成：大豆蛋白粉80-90,乳清蛋白粉20-30、野菊花凍干粉 10-12、核桃仁10-12、茯苓12-15、黑芝麻6-8、荸薺12-15、蓮子10-12、大棗12-15、山藥ΙΟ-?〗、金針菇 10-12、猴頭菇 15-20、銀耳 12-15,遠(yuǎn)志 10-12, 昆布 10-12, 何首烏 10-12、絞股藍(lán) 12-16、人參葉2-15,銀杏葉12-15、石菖蒲10-12,營養(yǎng)添加劑3-5。該發(fā)明的蛋白粉，營養(yǎng)豐 富，長期食用可以起到安神健腦、補(bǔ)肝益腎，改善腦細(xì)胞的活力，得到健腦，預(yù)防發(fā)生老年性 癡呆癥的功效。中國專利公開了 CN 103768585Β-種鹿膠原蛋白營養(yǎng)組合物，由鹿膠原蛋 白、氨基葡萄糖、透明質(zhì)酸、大豆異黃酮和茶多酚組成。所述組合物中含有70%~95% (重量 百分比）的鹿膠原蛋白、1%~10% (重量百分比）的氨基葡萄糖、1%~10% (重量百分比）的 透明質(zhì)酸、0.1 %~5% (重量百分比）的大豆異黃酮和0.1 %~6% (重量百分比）的茶多酚。 所述鹿膠原蛋白由鹿筋膠原蛋白、鹿骨膠原蛋白和鹿皮膠原蛋白組成，鹿筋膠原蛋白、鹿骨 膠原蛋白和鹿皮膠原蛋白的重量比為1:1:1。所述鹿膠原蛋白的分子量分布在1500道爾頓 以下。該發(fā)明以鹿膠原蛋白為主要成分，輔以氨基葡萄糖、透明質(zhì)酸、大豆異黃酮及抗氧化 作用的茶多酚形成了具有增強(qiáng)骨密度、能夠顯著改善骨質(zhì)疏松的營養(yǎng)組合物。
[0007] 還有主要解決溶解性問題的：中國專利CN 103271166Α公開了一種大豆乳清復(fù)合 粉及其配制方法。該大豆乳清復(fù)合粉是以非轉(zhuǎn)基因大豆蛋白粉和乳清蛋白為主要原料，添 加大豆卵磷脂、大豆異黃酮、大豆低聚糖及其它微量元素，營養(yǎng)更豐富，更全面，更均衡。含 多種天然活性成分，為高蛋白營養(yǎng)食品。具有大豆蛋白特有的香味，口感爽滑，口味純正，濃 郁，即沖即溶，補(bǔ)充營養(yǎng)快速全面。在溫開水中稍微攪拌能夠快速溶解，具有固有的香味和 氣味，并且長時(shí)間不分層。中國專利CN 102630947Β公開了一種低分子量營養(yǎng)蛋白質(zhì)粉的生 產(chǎn)方法，該方法包括以下步驟：以大豆蛋白粉與乳清蛋白粉為原料，加入70~90°C水?dāng)嚢璩?均勻的混懸液，在不低于60°C條件下趁熱通過濾膜過濾:先選用5000道爾頓的濾膜，濾液再 通過500道爾頓的濾膜;將得到的濾液噴霧干燥，加入噴霧干燥粉體重0.5~1.5 %的卵磷脂 混合均勻。該發(fā)明工藝制備得到的蛋白質(zhì)粉分子量小、氨基酸組成科學(xué)合理，易吸收;外形 潔白，美觀，無豆腥、奶腥味；易溶于水，在冷水中也可較快溶解，易于分散，特別適用于蛋白 質(zhì)缺乏人群，體弱多病以及腫瘤患者。
[0008]上述公開的專利無論是單一蛋白粉還是復(fù)合蛋白粉、無論是動(dòng)物蛋白粉還是植物 蛋白粉主要集中解決了蛋白質(zhì)粉的營養(yǎng)性、功能性(溶解性、穩(wěn)定性、泡沫性、乳化性、凝膠 性等)和預(yù)防疾病等方面，并且均或多或少存在以下缺陷：1)含有大量的過量飽和脂肪、膽 固醇、高熱量;2)在加工工藝中添加了大量的食品添加劑如色素、甜味劑、防腐劑等;3)溶解 性、穩(wěn)定性差，沖調(diào)不均勻，易出現(xiàn)結(jié)團(tuán)、分層現(xiàn)象;4)氨基酸組成不夠全面，各營養(yǎng)成分組 成不夠均衡;5)消費(fèi)群體涉及中老年人和婦女較少，有局限性;對(duì)蛋白粉的生物活性研究的 較少，蛋白質(zhì)粉的生物活性、效價(jià)是其營養(yǎng)性、功能性等多方面性質(zhì)的綜合體現(xiàn)，在加工和 貯存過程受外界環(huán)境(溫度、濕度、光照、氧氣）的影響很大，尤其在活性微生物菌劑、酶制劑 等技術(shù)領(lǐng)域顯現(xiàn)更為突出。
[0009]長期以來，在蛋白質(zhì)粉生物活性方面主要集中研究了高溫對(duì)蛋白質(zhì)生物活性的影 響，卻忽視了低溫冷凍的影響?？箖龅鞍祝ˋntifreeze Protein，AFP)，又稱熱滯蛋白 (Thermal Hysteresis Protein，THP)，冰結(jié)合蛋白（Ice Binding Proteins)或冰晶組織蛋 白（Ice Structuring Proteins)?？箖龅鞍啄芡ㄟ^與特定的冰晶表面結(jié)合，非依數(shù)性地降 低溶液的冰點(diǎn)或者抑制冰晶生長，具有低溫保護(hù)功能。抗凍蛋白可用于人體或動(dòng)物器官的 超低溫保存，改善其冷凍質(zhì)量;可提高特定微生物的抗凍能力，減小食品凍藏時(shí)冰晶的形成 和重結(jié)晶對(duì)食品結(jié)構(gòu)的破壞，改善食品品質(zhì)?？箖龅鞍卓勺鳛橐环N高級(jí)防凍劑應(yīng)用，在醫(yī) 學(xué)、化妝品、生物和食品領(lǐng)域均有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
[0010]在蛋白質(zhì)粉的加工、運(yùn)輸和儲(chǔ)藏過程科學(xué)復(fù)配抗凍蛋白（或相關(guān)物質(zhì)），不僅可提 高蛋白質(zhì)粉的生物活性、營養(yǎng)性、功能性，而且在同樣保質(zhì)期內(nèi)可適當(dāng)提高蛋白粉的水分含 量，降低生產(chǎn)成本。現(xiàn)有技術(shù)中解決復(fù)合蛋白粉或組合物的抗凍性的相關(guān)專利文獻(xiàn)或技術(shù) 文獻(xiàn)較少，幾乎沒有。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有復(fù)合蛋白組合物的缺陷，以大豆分離蛋白、 濃縮乳清蛋白和磷脂為主要原料，將甜葉菊低溫加工成甜葉菊提取物，與其科學(xué)復(fù)配，并添 加抗凍多肽、膳食纖維粉、蜂蛹蟲酶解物、小麥芽粉，制備一種口感適宜、溶解性好、營養(yǎng)全 面、生物活性強(qiáng)、適宜人群廣泛且穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉。
[0012]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0013] 一種穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備:大豆分離蛋白100-120 份，濃縮乳清蛋白30-50份，膳食纖維粉45-65份，小麥芽粉45-65份，磷脂35-55份，抗凍多肽 20-30份，蜂蛹蟲酶解物15-25份，甜葉菊3-5份；
[0014] 優(yōu)選地，所述穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備:大豆分離蛋白 105-115份，濃縮乳清蛋白35-45份，膳食纖維粉50-60份，小麥芽粉50-60份，磷脂40-50份， 抗凍多肽23-27份，蜂蛹蟲酶解物18-22份，甜葉菊3.5-4.5份；
[0015] 更優(yōu)選地，所述穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備:大豆分離蛋 白110份，濃縮乳清蛋白40份，膳食纖維粉55份，小麥芽粉55份，磷脂45份，抗凍多肽25份，蜂 蛹蟲酶解物20份，甜葉菊4份；
[0016] 進(jìn)一步地，所述膳食纖維粉是將膳食纖維經(jīng)物理、化學(xué)或生物的方法處理而得到 的可溶性纖維素含量高、生物活性強(qiáng)、對(duì)人體益生菌群有重要的、積極作用的纖維素，與普 通膳食纖維相比，其功能性、生物活性更強(qiáng)大；
[0017] 優(yōu)選地，所述膳食纖維粉是由菊粉、蘋果纖維、小麥纖維、燕麥纖維中的一種或多 種經(jīng)超微粉碎、擠壓膨化和生物酶酶解而得到的；
[0018] 更優(yōu)選地，所述膳食纖維粉的制備方法，包括以下步驟:將菊粉、蘋果纖維、小麥纖 維、燕麥纖維按質(zhì)量比4-6:2-4:1-3:1-2均勻混合，超微粉碎至粒徑3-6μπι，調(diào)整粉碎物水分 含量為17-19%，于螺桿轉(zhuǎn)速160-180r/min、溫度185-200 °C條件擠壓膨化，加入膨化物質(zhì)量 2-4倍的水，室溫200-400W、35-40KHz條件超聲提取10-15min，然后在電場強(qiáng)度20-40kV/cm， 脈沖時(shí)間400-600ys，脈沖頻率200-400Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理10-15min;用乳酸 調(diào)節(jié)pH值為4.5-6.5，加入混合物質(zhì)量0.1-0.3 %的生物酶，于45-55 °C酶解20-48min;酶解 液減壓濃縮、冷凍干燥即得膳食纖維粉；
[0019] 所述生物酶為纖維素酶、木聚糖酶、漆酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-3: 0.5-1.5:0.2-1 均勻混合。
[0020]進(jìn)一步地，所述小麥芽粉是以小麥為主要原料，依次經(jīng)超聲清洗、微波瞬時(shí)處理、 超聲輔助生物酶解浸泡、發(fā)芽、干燥、低溫粉碎等工藝而制備的；
[0021] 優(yōu)選地，所述小麥芽粉的制備方法，包括如下步驟:將小麥放在裝有0.04-0.06 % 碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于功率200-400W、頻率20-30KHZ室溫超聲清洗3-5min，取 出、瀝干，于頻率2450MHz、功率3000W、溫度38-42 °C、料層厚度2-4cm微波干燥6-8s，然后置 溫度為33-36°C、pH值為6-8的浸泡液中浸泡4-6h，浸泡液含有質(zhì)量百分比濃度為0.3-0.5% 的復(fù)合酶，每隔15_20min通風(fēng)一次，通風(fēng)壓力0.13-0.15MPa，同時(shí)于電場強(qiáng)度10_15kV/cm， 脈沖時(shí)間100-300ys，脈沖頻率60-80HZ條件進(jìn)行高壓脈沖電場處理，直至小麥水分含量為 40-45% ;浸泡后的小麥瀝干，在發(fā)芽室內(nèi)進(jìn)行暗發(fā)芽，暗發(fā)芽溫度保持20-24°C，暗發(fā)芽時(shí) 間為20-24h，經(jīng)發(fā)芽后的小麥干燥至水分含量為5-8%，低溫粉碎，過80-100目篩即得小麥 芽粉；
[0022] 所述復(fù)合酶為纖維素酶、β-葡聚糖酶、木聚糖酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-3均勻混合。
[0023] 進(jìn)一步地，所述抗凍多肽是以含有豐富抗凍基質(zhì)的天然植物種子為原料制備的植 物提取物與絲膠肽科學(xué)復(fù)配而成，不僅可顯著提高穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉抗凍性，進(jìn)而大大提 高其生物活性、營養(yǎng)性、功能性，而且在同樣保質(zhì)期內(nèi)可適當(dāng)提高穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的水分 含量，降低生產(chǎn)成本；同時(shí)又增加了穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的溶解性和穩(wěn)定性，產(chǎn)生了意想不到 的有益效果，特別適合作為穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的抗凍保護(hù)劑；
[0024]優(yōu)選地，所述抗凍多肽的質(zhì)量組成為:植物提取物:絲膠肽=12-29:3-9;
[0025] 優(yōu)選地，所述植物提取物是以冬黑麥、沙地柏、沙冬青的種子中的一種或幾種為原 料，經(jīng)高壓靜電、高壓脈沖電場輔助水楊酸浸泡、冷藏冷凍處理后再經(jīng)混合酶分段酶解而制 得；
[0026] 更優(yōu)選地，所述植物提取物的制備方法，包括如下步驟:將冬黑麥、沙地柏、沙冬青 的種子按質(zhì)量比9-17:2-4:1-2均勻混合，裝盤，首先于電場強(qiáng)度5-7kV/cm高壓靜電處理5-7min;接著在濃度為10-30m g//L的水楊酸溶液中室溫浸泡2-4h，同時(shí)在電場強(qiáng)度10-20kV/ cm，脈沖時(shí)間150-250ys，脈沖頻率150-250HZ條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理;漂洗、瀝干，于 3- 5°C 靜置 18-24h，然后依次在 1-3°C 冷藏 2-4d，-3-5°C 冷凍 l-3d、-15-18°C 冷凍 10-15h， 立即放在室外于光照強(qiáng)度0.5-5萬Lx自然光照5-7h，使混合料半解凍后立即進(jìn)行粉碎，粉碎 物粒徑0.5-1.5mm，接著加入粉碎物質(zhì)量4-6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5-5.5;最后加入 混合料液質(zhì)量1-2%的混合酶，首先于35-50°(：酶解10-301^11，然后于50-60°(：酶解20-40min;酶解液過濾、濾液減壓濃縮至固形物含量為15-25 %即得植物提取物；
[0027]所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比8-10:5-7:2-4: 1-3:1-2均勻混合。
[0028]進(jìn)一步地，所述蜂蛹蟲酶解物以2-3日齡的蜂王幼蟲和11-12日齡的雄蜂蛹為原 料，經(jīng)抗凍保護(hù)、冷凍破碎、真空脫氣脫腥、復(fù)配酶生物酶解、生物破乳和離心分離而得到 的；
[0029]優(yōu)選地，所述蜂蛹蟲酶解物的制備方法，包括如下步驟:將新鮮蜂王幼蟲與雄蜂蛹 按質(zhì)量比2-5:1-3均勻混合，加入混合物質(zhì)量1-2倍的質(zhì)量百分比為4-7%的絲膠肽溶液和 0.1-0.3倍的離子溶液，攪拌均勻，于-18-22°(：冷凍12-181^11，破碎，破碎率為98-100%，破 碎物粒徑200-300μπι，用乳酸調(diào)節(jié)破碎物pH值為5-7,升溫至40-50°C，向其中加入破碎物質(zhì) 量0.3-0.5 %的復(fù)配酶，混合均勻，于真空度-0.07-0.09MPa脫氣脫腥10-15min，繼續(xù)酶解 l〇-15min得到酶解液;將酶解液置真空離心機(jī)中5000-7000r/min真空離心8-10min，自上而 下分離得到游離脂肪、乳狀液、水解液和殘?jiān)?，將得到的乳狀液控制溫度?5-55Γ，添加乳 狀液質(zhì)量〇. 2-0.4%的生物破乳劑破乳20_40min，破乳后于4000-6000r/min真空離心2次， 間隔時(shí)間1 _3h，每次離心10-15min，合并三次離心得到的水解液，取其質(zhì)量0.5-0.7 %的蛋 清，放入攪拌機(jī)中于轉(zhuǎn)速800-1000r/min攪拌10-12min,直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡 沫，將蛋清泡沫加入合并得到的水解液中，常壓煮沸2-4min，降至室溫，于5000-7000r/min 真空離心8-10min，收集水解液，依次經(jīng)硅藻土過濾、超濾、凍干即得蜂蛹蟲酶解物；
[0030] 進(jìn)一步地，所述離子溶液為含有鈉離子15-20mg/L、鋅離子10-15mg/L、鉀離子8-離子6-10mg/L和鎂離子5-8mg/L的水溶液；
[0031 ]進(jìn)一步地，所述復(fù)配酶質(zhì)量組成為:風(fēng)味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶=1-3:1-2: 0.1-0.3；
[0032] 進(jìn)一步地，所述真空離心條件為溫度5_8°C、真空度-0.02-0.04MPa;
[0033] 進(jìn)一步地，所述生物破乳劑為糖脂類、脂肽類、胞壁結(jié)合類生物破乳劑中的一種或 幾種組合；
[0034] 優(yōu)選地，所述生物破乳劑的質(zhì)量組成為:糖脂類:脂肽類:胞壁結(jié)合類=3-5:1-3: 1-2；
[0035] 優(yōu)選地，所述糖脂類生物破乳劑為鼠李糖脂、烷基糖苷中的一種或兩種組合；
[0036]更優(yōu)選地，所述糖脂類生物破乳劑的質(zhì)量組成為：鼠李糖脂:烷基糖苷= 6-8:3-5。
[0037] 本發(fā)明還提供了上述穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的制備方法，包括如下步驟：
[0038] 1)甜葉菊提取物的制備:按照配方，準(zhǔn)確稱取各組份原料，首先將甜葉菊放入裝有 0.1-0.3 %碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200-400W、20-40KHZ清洗3-5min，瀝干，置微 波干燥中于功率3_5kW、料層厚度2-4cm、80-100°C、干燥2-4min，然后浸泡在質(zhì)量百分比為 4- 7%的絲膠肽溶液中10-15min，取出，于-18-22°C冷凍15-25min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料 層厚度3-5cm，粉碎物粒徑0.3-0.5mm，接著加入粉碎物質(zhì)量8-12倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為 3.5-5.5，于室溫下在電場強(qiáng)度25-35kV/cm，脈沖時(shí)間300-500ys，脈沖頻率200-300Hz條件 下進(jìn)行高壓脈沖電場處理l〇_15min;然后于室溫在功率150-300W條件下進(jìn)行微波輻照提取 8-12min，同時(shí)在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液質(zhì) 量0.2-0.6 %的降解酶，于40-50°C酶解30-50min，取酶解液質(zhì)量2-4 %的蛋清，放入攪拌機(jī) 中于轉(zhuǎn)速800-1000r/min攪拌10-12min，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫 加入酶解液中，常壓煮沸l(wèi)_3min，迅速降至室溫，80-100目篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形 物含量至8-12 %得甜葉菊提取物；
[0039] 所述降解酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶按質(zhì)量比1-3:1-2:1-2均勻混合；
[0040] 2)混料:將抗凍多肽質(zhì)量的40-60 %和膳食纖維粉質(zhì)量的4-6 %依次加入甜葉菊提 取物中，均勻混合，在功率300-500W，頻率35-45KHZ條件下進(jìn)行超聲溶解10-15min，得混合 液；
[0041 ] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-40~-50 °C，并在-40~-50 °C下預(yù)凍2~3h;然 后將凍干倉內(nèi)抽真空至15~20Pa后，在8-10h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-15~-18°C;接著在凍干倉內(nèi)真空度不變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在5-7h內(nèi)逐步升溫至 室溫，到凍干粉水分小于4%時(shí)出料，無菌條件下依次與大豆分離蛋白、濃縮乳清蛋白、小麥 芽粉、磷脂、蜂蛹蟲酶解物、剩余抗凍多肽、剩余膳食纖維粉均勻混合得穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉。 [0042] 有益效果：
[0043]本發(fā)明以大豆分離蛋白、濃縮乳清蛋白和磷脂為原料，首先將甜葉菊采用超聲清 洗進(jìn)行殺蟲滅卵、殺滅微生物、去除農(nóng)藥殘留和重金屬離子等，大大提高了成品的食品安全 性;采用微波干燥在使得甜葉菊短時(shí)、低溫膨化干燥的同時(shí)主要是滅酶，防止提取物褐變； 在含有絲膠肽的水溶液中浸泡復(fù)水，可最大限度地減少經(jīng)冷凍而造成的甜葉菊活性物質(zhì)及 冷敏性成分的損失，提高了甜葉菊生物活性成分的提取率，同時(shí)將抗凍多肽、膳食纖維粉與 甜葉菊提取物科學(xué)復(fù)配，為后續(xù)凍干工藝及成品貯藏提供了良好的冷凍保護(hù)劑，提高了抗 凍效果，防止蛋白質(zhì)冷凍變性，提高其生物活性和效價(jià);全程采用低溫提取工藝，將超聲清 洗、微波滅酶和膨化、高壓脈沖電場提取、超聲輔助微波提取、生物酶解有機(jī)結(jié)合，得到的提 取物最大限度地保留了甜葉菊的天然色澤、風(fēng)味和口感，同時(shí)使得提取物含有的生物活性 物質(zhì)和營養(yǎng)保健物質(zhì)含量最大化，原料提取率和利用率最高，降低了提取成本;采用蛋清制 備的蛋清泡沫對(duì)酶解液短時(shí)凝絮，進(jìn)一步去除了甜葉菊苷的甘草味，提高了成品的溶解性 和穩(wěn)定性;將部分膳食纖維粉、抗凍多肽加入甜葉菊提取物不僅提高了抗凍效果還可提高 混料的固形物含量，降低水分含量，縮短了凍干時(shí)間，提高了凍干效率，降低了冷凍損失，提 高了凍干粉的穩(wěn)定性，經(jīng)超聲溶解，進(jìn)一步增強(qiáng)了混料的均一性、穩(wěn)定性和溶解性，進(jìn)而提 高了成品的均一性、穩(wěn)定性和溶解性;采用本發(fā)明制備的功能性膳食纖維粉代替現(xiàn)有的抗 結(jié)劑，顯著提高了成品的崩解速度，提高了成品的溶解性和溶解后的感官質(zhì)量，同時(shí)大大延 長了成品的保質(zhì)期;最終制得一種口感適宜、溶解性好、營養(yǎng)全面、生物活性強(qiáng)、適宜人群廣 泛的復(fù)合蛋白粉。具體試驗(yàn)效果見實(shí)施例7-10,具體技術(shù)原理如下：
[0044] 1.本發(fā)明制備的抗凍多肽是以含有豐富抗凍基質(zhì)的天然植物種子為原料制備的 植物提取物與絲膠肽科學(xué)學(xué)復(fù)配而成，不含任何化學(xué)物質(zhì)和食品添加劑，天然抗凍基質(zhì)全 面、豐富，可溶性抗凍蛋白及抗凍多肽含量高，大大提高了穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的食品安全 性，不僅可顯著提高穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉抗凍性，進(jìn)而大大提高其生物活性、營養(yǎng)性、功能性， 而且在同樣保質(zhì)期內(nèi)可適當(dāng)提高蛋白粉的水分含量，降低生產(chǎn)成本；同時(shí)又增加了穩(wěn)定的 復(fù)合蛋白粉的溶解性和穩(wěn)定性，產(chǎn)生了意想不到的有益效果，特別適合作為復(fù)合蛋白粉的 抗凍保護(hù)劑。其中的植物提取物將含有豐富抗凍基質(zhì)的天然植物種子原料科學(xué)復(fù)配，將高 壓靜電處理、高壓脈沖電場輔助水楊酸誘導(dǎo)、低溫分段脅迫處理和自然光照有機(jī)結(jié)合，使得 本身含有抗凍基質(zhì)的活性種子在外界環(huán)境的脅迫和誘導(dǎo)下，抗凍基質(zhì)成分得到了最全面、 最豐富的合成和積累，經(jīng)生物酶解后可最大化溶出，同時(shí)可使抗凍肽含量增加，提高了植物 提取物的溶解性和穩(wěn)定性，進(jìn)而消除了因抗凍蛋白造成的成品溶解性差的問題，與膳食纖 維粉、小麥芽粉、蜂蛹蟲酶解物、磷脂、甜葉菊提取物科學(xué)復(fù)配，效果更佳。
[0045] 2.本發(fā)明制備的膳食纖維粉將超微粉碎、擠壓膨化、超聲提取、高壓脈沖電場提取 和生物酶解科學(xué)結(jié)合，所得膳食纖維粉持水性、膨脹性、增稠性更強(qiáng)，比單一方法制備的改 性膳食纖維提高20-40%，且不受酸、堿、鹽的影響，可溶性纖維素含量高，比單一方法制備 的改性膳食纖維提高10-30%，更容易被乳酸菌利用，提高乳酸菌在人體腸道的生長及繁殖 能力，增加益生菌菌群的種類和數(shù)量，降低人體腸道pH值，改善人體腸道微生態(tài)環(huán)境;吸附 能力強(qiáng)，經(jīng)改性后，纖維素的比表面積增大，網(wǎng)格結(jié)構(gòu)豐富，吸附力增強(qiáng)，螯合、吸附膽固醇 和膽汁酸類的有機(jī)分子能力更強(qiáng)、抑制人體對(duì)他們的吸收；離子交換能力增強(qiáng)，對(duì)金屬元 素，特別是重金屬元素吸附效果更強(qiáng)，有效防止了人體重金屬中毒;調(diào)節(jié)和維持腸道菌群的 定植時(shí)間，增強(qiáng)腸道的消化和吸收能力，提高機(jī)體免疫力；有效促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)，減緩并消除 胃脹、腹脹等不良反應(yīng);強(qiáng)大的包埋作用可防止環(huán)境(氧氣、溫度、光照、水分活度等）因素對(duì) 穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的影響，進(jìn)一步穩(wěn)定了復(fù)合蛋白粉的生物活性，延長了產(chǎn)品的保質(zhì)期。
[0046] 3.本發(fā)明小麥芽粉的制備方法對(duì)浸泡過程的小麥進(jìn)行超聲清洗、微波瞬時(shí)處理和 高壓脈沖電場處理有效防止了浸泡液污染雜菌，避免了產(chǎn)生臭味滲透到小麥芽粉產(chǎn)品中， 同時(shí)，可有效增強(qiáng)谷物種皮細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的相對(duì)透性、提高全谷物種子的吸水率，促進(jìn)種 子提前萌發(fā)，提高超氧陰離子自由基的產(chǎn)生速率及三磷酸腺苷(ATP)含量，促進(jìn)發(fā)芽前期小 麥種子多種生物酶的激活和釋放、胚乳溶解及功能性營養(yǎng)成分、生物活性成分、抗氧化成分 的合成，促進(jìn)了種子的呼吸代謝作用，加快了營養(yǎng)及功能性物質(zhì)、生物活性成分、抗氧化成 分的富集進(jìn)程，縮短了富集時(shí)間，提高了營養(yǎng)及功能性物質(zhì)、生物活性成分、抗氧化成分的 含量，與生物酶解有機(jī)結(jié)合，可進(jìn)一步降解種皮纖維素及半纖維素結(jié)構(gòu)，增加種皮通透性， 激活各種生物活性物質(zhì)（內(nèi)源酶等)活力最強(qiáng)，富集量更大，可溶性纖維素含量隨之增大，為 小麥芽粉中的植物乳桿菌提供了營養(yǎng)因子，效果更佳顯著;將超聲、微波、高壓脈沖電場技 術(shù)和生物酶解有機(jī)結(jié)合，縮短了浸泡時(shí)間，提高了發(fā)芽率和發(fā)芽均一度;可最大限度保持小 麥芽粉熱敏性物質(zhì)含量，尤其是抗氧化物質(zhì)(谷胱甘肽、六磷酸肌醇、維生素 C、多酚等），最 大限度地保證小麥芽粉的天然色澤、口感和風(fēng)味，同時(shí)還可起到殺菌作用;特別是經(jīng)微波瞬 時(shí)適度殺胚后，在不影響小麥芽種子的生物活性的情況下，隨著水分的吸收，小麥芽胚被抑 制但不影響各項(xiàng)酶及生物活性物質(zhì)的增長和胚乳的溶解，芽生長很短，呼吸作用弱，發(fā)芽損 失低，提高了小麥芽粉的產(chǎn)量和質(zhì)量，顯著提高了小麥芽粉產(chǎn)品中功能性、營養(yǎng)性、生物活 性物質(zhì)的含量，提高了小麥芽粉的保健功能（提高人體免疫力、去除人體內(nèi)氧自由基、降血 月旨、延緩衰老）、營養(yǎng)價(jià)值和食品安全性。制備的小麥芽發(fā)芽率達(dá)97 %以上，芽長0.2-0.5mm， 長度均一，發(fā)芽損失僅為1.5-2.1 %，比現(xiàn)有發(fā)芽工藝損失降低4.8-7.1 %，功能性物質(zhì)含量 高，其中γ -氨基丁酸含量為303 ·8-315 ·6mg/100g，谷胱甘肽16 · 1-18 · 3mg/100g，六磷酸肌 醇（IP6)460 · 8-484 · 4mg/100g，膳食纖維 3 · 7-4 · 2mg/100g。
[0047] 4.本發(fā)明制備的蜂蛹蟲酶解物以2-3日齡的蜂王幼蟲和11-12日齡的雄蜂蛹為原 料，經(jīng)抗凍保護(hù)、冷凍破碎、真空脫氣脫腥、復(fù)配酶生物酶解、生物破乳和真空離心分離等低 溫加工技術(shù)而得到的，有效提高了蜂王幼蟲和雄蜂蛹的利用率，降低了營養(yǎng)及保健物質(zhì)的 損失，最大限度地保留了原料的生物活性成分和營養(yǎng)成物質(zhì)含量。在含有絲膠肽的水溶液 中浸泡，可最大限度地減少經(jīng)冷凍而造成的蛹蟲活性物質(zhì)的損失，提高了蛹蟲有效成分的 提取率，同時(shí)也為后續(xù)的凍干工藝提供了天然抗凍保護(hù)劑;將真空脫氣與復(fù)配酶生物酶解 有機(jī)結(jié)合，不僅降低了酶解液的溶解氧含量，有效防止生物活性成分氧化變質(zhì)，而且除去了 酶解液中蜂王幼蟲和雄蜂蛹的蟲腥味，提升了復(fù)合蛋白組合物的口感，增加了食欲，離子溶 液與蜂王蛹蟲、雄蜂蛹和復(fù)配酶的科學(xué)復(fù)配，使得復(fù)配酶活力發(fā)揮最大，催化能力更加徹 底，進(jìn)而使得原料中的蛋白質(zhì)和脂肪充分降解，提高了蛋白組合物的穩(wěn)定性和澄明度;將生 物破乳劑破乳和真空離心有機(jī)結(jié)合，可使酶解液中的游離脂肪和水解液充分分離，得到營 養(yǎng)和生物活性物質(zhì)含量豐富、澄清透明的水解液，再加上蛋清泡沫加入和煮沸滅酶，蜂王幼 蟲和雄蜂蛹酶解物更加穩(wěn)定、透明，進(jìn)一步增強(qiáng)了復(fù)合蛋白粉的溶解性、泡沫型、穩(wěn)定性;同 時(shí)含有大量的蜂王幼蟲多肽和雄蜂蛹多肽，為穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉增添了更多的功能性生物 活性物質(zhì)，進(jìn)一步增強(qiáng)了穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的功能性和營養(yǎng)性。
[0048] 5.本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的制備方法采用非熱加工技術(shù)，工作效率高，能源消 耗少，對(duì)環(huán)境友好，無污染，減少了食品添加劑和化學(xué)助劑的引入，有效提高了食品安全性， 提高了產(chǎn)品質(zhì)量和降低了生產(chǎn)成本，實(shí)現(xiàn)了低碳生產(chǎn)目標(biāo)，可規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化發(fā)展。
[0049]需要說明的是該穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的食用效果是各組分相互協(xié)同、相互作用的結(jié) 果，并非簡單的原料功能的疊加，各原料組分的科學(xué)復(fù)配和提取，產(chǎn)生的效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過各單 一組份功能和效果的疊加，具有較好的先進(jìn)性和實(shí)用性。
【具體實(shí)施方式】
[0050]下面通過具體的實(shí)施方案敘述本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段 均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實(shí)施方案應(yīng)理解為說明性的，而非限制本發(fā)明的 范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本 發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的前提下，對(duì)這些實(shí)施方案中的物料成分和用量進(jìn)行的各種改變或改動(dòng)也 屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0051 ] 實(shí)施例1原料制備 [0052] 1.膳食纖維粉的制備：
[0053]所述膳食纖維粉的制備方法，包括以下步驟:將菊粉、蘋果纖維、小麥纖維、燕麥纖 維按質(zhì)量比5:3:2:1.5均勻混合，超微粉碎至粒徑5μπι，調(diào)整粉碎物水分含量為18%，于螺桿 轉(zhuǎn)速170r/min、溫度192°C條件擠壓膨化，加入膨化物質(zhì)量3倍的水，室溫300W、40KHz條件超 聲提取12min，然后在電場強(qiáng)度30kV/cm，脈沖時(shí)間500ys，脈沖頻率300Hz條件下進(jìn)行高壓脈 沖電場處理12min;用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5，加入混合物質(zhì)量0.2%的生物酶，于50°C酶解 35min;酶解液減壓濃縮、冷凍干燥即得膳食纖維粉；
[0054]所述生物酶為纖維素酶、木聚糖酶、漆酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比3: 2:2:1:0.6均 勻混合。
[0055] 2.小麥芽粉的制備：
[0056]所述小麥芽粉的制備方法，包括如下步驟:將小麥放在裝有0.05 %碳酸氫鈉溶液 的超聲波清洗機(jī)中于功率300W、頻率25KHz室溫超聲清洗4min，取出、瀝干，于頻率2450MHz、 功率3000W、溫度40°C、料層厚度3cm微波干燥7s，然后置溫度為35°C、pH值為7的浸泡液中浸 泡5h，浸泡液含有質(zhì)量百分比濃度為0.4%的復(fù)合酶，每隔18min通風(fēng)一次，通風(fēng)壓力 0.14MPa，同時(shí)于電場強(qiáng)度12kV/cm，脈沖時(shí)間200ys，脈沖頻率70Hz條件進(jìn)行高壓脈沖電場 處理，直至小麥水分含量為42%;浸泡后的小麥瀝干，在發(fā)芽室內(nèi)進(jìn)行暗發(fā)芽，暗發(fā)芽溫度 保持22°C，暗發(fā)芽時(shí)間為22h，經(jīng)發(fā)芽后的小麥干燥至水分含量為6%，低溫粉碎，過90目篩 即得小麥芽粉；
[0057]所述復(fù)合酶為纖維素酶、β_葡聚糖酶、木聚糖酶按質(zhì)量比3:2:2均勻混合。
[0058] 3.植物提取物的制備：
[0059] 所述植物提取物的制備方法，包括如下步驟:將冬黑麥、沙地柏、沙冬青的種子按 質(zhì)量比13:3:1.5均勾混合，裝盤，首先于電場強(qiáng)度6kV/cm高壓靜電處理6min;接著在濃度為 20mg/L的水楊酸溶液中室溫浸泡3h，同時(shí)在電場強(qiáng)度15kV/cm，脈沖時(shí)間200ys，脈沖頻率 200Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理;漂洗、瀝干，于4°C靜置21h，然后依次在2°C冷藏3d，-4 °C冷凍2d、-16°C冷凍12h，立即放在室外于光照強(qiáng)度2萬Lx自然光照6h，使混合料半解凍后 立即進(jìn)行粉碎，粉碎物粒徑1. 〇mm，接著加入粉碎物質(zhì)量5倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4.5;最 后加入混合料液質(zhì)量1.5 %的混合酶，首先于42°C酶解20min，然后于55°C酶解30min;酶解 液過濾、濾液減壓濃縮至固形物含量為20 %即得植物提取物；
[0060] 所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比9:6:3:2:1.5均 勻混合。
[0061 ] 4.蜂蛹蟲酶解物的制備：
[0062]所述蜂蛹蟲酶解物的制備方法，包括如下步驟:將新鮮蜂王幼蟲與雄蜂蛹按質(zhì)量 比3:2均勻混合，加入混合物質(zhì)量1.5倍的質(zhì)量百分比為6%的絲膠肽溶液和0.2倍的離子溶 液，攪拌均勻，于-20 °C冷凍15min，破碎，破碎率為99 %，破碎物粒徑250μπι，用乳酸調(diào)節(jié)破碎 物pH值為6，升溫至45°C，向其中加入破碎物質(zhì)量0.4%的復(fù)配酶，混合均勻，于真空度-0.08MPa脫氣脫腥12min，繼續(xù)酶解12min得到酶解液;將酶解液置真空離心機(jī)中6000r/min 真空離心9min，自上而下分離得到游離脂肪、乳狀液、水解液和殘?jiān)?，將得到的乳狀液控?溫度為50°C，添加乳狀液質(zhì)量0.3%的生物破乳劑破乳30min，破乳后于5000r/min真空離心 2次，間隔時(shí)間2h，每次離心12min，合并三次離心得到的水解液，取其質(zhì)量0.6%的蛋清，放 入攪拌機(jī)中于轉(zhuǎn)速900r/min攪拌1 lmin，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫 加入合并得到的水解液中，常壓煮沸3min，降至室溫，于6000r/min真空離心9min，收集水解 液，依次經(jīng)硅藻土過濾、超濾、凍干即得蜂蛹蟲酶解物；
[0063] 所述離子溶液為含有鈉離子18mg/L、鋅離子12mg/L、鉀離子10mg/L、鈣離子8mg/L 和鎂離子6mg/L的水溶液；
[0064]所述復(fù)配酶質(zhì)量組成為:風(fēng)味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶=2:1.5:0.2;
[0065] 所述真空離心條件為溫度6°C、真空度_0.03MPa;
[0066] 所述生物破乳劑的質(zhì)量組成為:糖脂類:脂肽類:胞壁結(jié)合類=4:2:1.5;
[0067] 所述糖脂類生物破乳劑的質(zhì)量組成為：鼠李糖脂:烷基糖苷=7:4。
[0068]以下實(shí)施例2-6所使用的膳食纖維粉、小麥芽粉、植物提取物、蜂蛹蟲酶解物均為 實(shí)施例1制備。
[0069] 實(shí)施例2
[0070] -種穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0071] 大豆分離蛋白110份，濃縮乳清蛋白40份，膳食纖維粉55份，小麥芽粉55份，磷脂45 份，抗凍多肽25份，蜂蛹蟲酶解物20份，甜葉菊4份；
[0072] 所述抗凍多肽的質(zhì)量組成為:植物提取物:絲膠肽=21:6;
[0073]制備方法，包括如下步驟：
[0074] 1)甜葉菊提取物的制備:按照配方，準(zhǔn)確稱取各組份原料，首先將甜葉菊放入裝有 0.2%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于300W、30KHz清洗4min，瀝干，置微波干燥中于功率 4kW、料層厚度3復(fù)、90°(：、干燥31^11，然后浸泡在質(zhì)量百分比為6%的絲膠肽溶液中121^11，取 出，于-20°C冷凍20min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度4cm，粉碎物粒徑0.4mm，接著加入粉 碎物質(zhì)量10倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4.5，于室溫下在電場強(qiáng)度301^/〇]1，脈沖時(shí)間40(^8， 脈沖頻率250Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理12min;然后于室溫在功率200W條件下進(jìn)行微 波輻照提取l〇min，同時(shí)在功率250W，頻率35KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液質(zhì) 量0.4 %的降解酶，于45 °C酶解40min，取酶解液質(zhì)量3 %的蛋清，放入攪拌機(jī)中于轉(zhuǎn)速900r/ min攪拌1 lmin，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶解液中，常壓煮沸 2min，迅速降至室溫，90目篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至10%得甜葉菊提取物；
[0075] 所述降解酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶按質(zhì)量比2:1.5:1.5均勻混合；
[0076] 2)混料:將抗凍多肽質(zhì)量的50%和膳食纖維粉質(zhì)量的5%依次加入甜葉菊提取物 中，均勻混合，在功率400W，頻率40KHz條件下進(jìn)行超聲溶解12min，得混合液；
[0077] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-45°C，并在-45°C下預(yù)凍2.5h;然后將凍干倉內(nèi) 抽真空至18Pa后，在9h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-16°C;接著在凍干倉內(nèi)真空度 不變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在6h內(nèi)逐步升溫至室溫，到凍干粉水分小于4%時(shí)出 料，無菌條件下依次與大豆分離蛋白、濃縮乳清蛋白、小麥芽粉、磷脂、蜂蛹蟲酶解物、剩余 抗凍多肽、剩余膳食纖維粉均勻混合得穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉。
[0078] 實(shí)施例3
[0079] -種穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備:大豆分離蛋白100份， 濃縮乳清蛋白30份，膳食纖維粉45份，小麥芽粉45份，磷脂35份，抗凍多肽20份，蜂蛹蟲酶解 物15份，甜葉菊3份；
[0080] 所述抗凍多肽的質(zhì)量組成為:植物提取物:絲膠肽=12:3;
[0081] 制備方法，包括如下步驟：
[0082] 1)甜葉菊提取物的制備:按照配方，準(zhǔn)確稱取各組份原料，首先將甜葉菊放入裝有 0.1%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于2001、201(抱清洗3 1^11，瀝干，置微波干燥中于功率 3kW、料層厚度2復(fù)、80°(：、干燥21^11，然后浸泡在質(zhì)量百分比為4%的絲膠肽溶液中1〇1^11，取 出，于-18°C冷凍15min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度3cm，粉碎物粒徑0.3mm，接著加入粉 碎物質(zhì)量8倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5，于室溫下在電場強(qiáng)度25kV/cm，脈沖時(shí)間300ys， 脈沖頻率200Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理lOmin;然后于室溫在功率150W條件下進(jìn)行微 波輻照提取8min，同時(shí)在功率200W，頻率30KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液質(zhì) 量0.2 %的降解酶，于40 °C酶解30min，取酶解液質(zhì)量2 %的蛋清，放入攪拌機(jī)中于轉(zhuǎn)速800r/ min攪拌lOmin，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶解液中，常壓煮沸 lmin，迅速降至室溫，80篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至8%得甜葉菊提取物； [0083]所述降解酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶按質(zhì)量比1:1:1均勻混合；
[0084] 2)混料:將抗凍多肽質(zhì)量的40%和膳食纖維粉質(zhì)量的4%依次加入甜葉菊提取物 中，均勻混合，在功率300W，頻率35KHz條件下進(jìn)行超聲溶解lOmin，得混合液；
[0085] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-40°C，并在-40°C下預(yù)凍2h;然后將凍干倉內(nèi)抽 真空至15Pa后，在8h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-15°C;接著在凍干倉內(nèi)真空度不 變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在5h內(nèi)逐步升溫至室溫，到凍干粉水分小于4%時(shí)出 料，無菌條件下依次與大豆分離蛋白、濃縮乳清蛋白、小麥芽粉、磷脂、蜂蛹蟲酶解物、剩余 抗凍多肽、剩余膳食纖維粉均勻混合得穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉。
[0086] 實(shí)施例4
[0087] -種穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備:大豆分離蛋白120份， 濃縮乳清蛋白50份，膳食纖維粉65份，小麥芽粉65份，磷脂55份，抗凍多肽30份，蜂蛹蟲酶解 物25份，甜葉菊5份；
[0088]所述抗凍多肽的質(zhì)量組成為:植物提取物:絲膠肽=29:9;
[0089]制備方法，包括如下步驟：
[0090] 1)甜葉菊提取物的制備:按照配方，準(zhǔn)確稱取各組份原料，首先將甜葉菊放入裝有 0.3%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于400W、40KHz清洗5min，瀝干，置微波干燥中于功率 5kW、料層厚度4復(fù)、100°(：、干燥41^11，然后浸泡在質(zhì)量百分比為7%的絲膠肽溶液中151^11， 取出，于-22°C冷凍25min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度5cm，粉碎物粒徑0.5mm，接著加入 粉碎物質(zhì)量12倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5,于室溫下在電場強(qiáng)度35kV/cm，脈沖時(shí)間500μ s，脈沖頻率300Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理15min;然后于室溫在功率300W條件下進(jìn)行 微波輻照提取12min，同時(shí)在功率300W，頻率40KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液 質(zhì)量〇 . 6 %的降解酶，于50 °C酶50min，取酶解液質(zhì)量4 %的蛋清，放入攪拌機(jī)中于轉(zhuǎn)速 1000r/min攪拌12min，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶解液中，常 壓煮沸3min，迅速降至室溫，100目篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至12%得甜葉菊 提取物；
[0091] 所述降解酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶按質(zhì)量比3:2:2均勻混合；
[0092] 2)混料:將抗凍多肽質(zhì)量的60%和膳食纖維粉質(zhì)量的6%依次加入甜葉菊提取物 中，均勻混合，在功率500W，頻率45KHz條件下進(jìn)行超聲溶解15min，得混合液；
[0093] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-50°C，并在-50°C下預(yù)凍3h;然后將凍干倉內(nèi)抽 真空至20Pa后，在10h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-18°C;接著在凍干倉內(nèi)真空度 不變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在7h內(nèi)逐步升溫至室溫，到凍干粉水分小于4%時(shí)出 料，無菌條件下依次與大豆分離蛋白、濃縮乳清蛋白、小麥芽粉、磷脂、蜂蛹蟲酶解物、剩余 抗凍多肽、剩余膳食纖維粉均勻混合得穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉。
[0094] 實(shí)施例5
[0095] -種穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0096]大豆分離蛋白105份，濃縮乳清蛋白35份，膳食纖維粉50份，小麥芽粉50份，磷脂40 份，抗凍多肽23份，蜂蛹蟲酶解物18份，甜葉菊3.5份；
[0097]所述抗凍多肽的質(zhì)量組成為:植物提取物:絲膠肽=12:9;
[0098] 本發(fā)明還提供了上述穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的制備方法，包括如下步驟：
[0099] 1)甜葉菊提取物的制備:按照配方，準(zhǔn)確稱取各組份原料，首先將甜葉菊放入裝有 0.1%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于4001、201(抱清洗5 1^11，瀝干，置微波干燥中于功率 3kW、料層厚度4復(fù)、80°(：、干燥41^11，然后浸泡在質(zhì)量百分比為4%的絲膠肽溶液中151^11，取 出，于-22°C冷凍15min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度5cm，粉碎物粒徑0.3mm,接著加入粉 碎物質(zhì)量12倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5-5，于室溫下在電場強(qiáng)度35kV/cm，脈沖時(shí)間300μ s，脈沖頻率300Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理lOmin;然后于室溫在功率300W條件下進(jìn)行 微波輻照提取8min，同時(shí)在功率300W，頻率30KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液 質(zhì)量〇 . 6 %的降解酶，于40 °C酶解50min，取酶解液質(zhì)量2 %的蛋清，放入攪拌機(jī)中于轉(zhuǎn)速 1000r/min攪拌lOmin，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶解液中，常 壓煮沸l(wèi)min，迅速降至室溫，100目篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至8%得甜葉菊提 取物；
[0100] 所述降解酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶按質(zhì)量比1:2:1均勻混合；
[0101] 2)混料:將抗凍多肽質(zhì)量的40%和膳食纖維粉質(zhì)量的6%依次加入甜葉菊提取物 中，均勻混合，在功率300W，頻率45KHz條件下進(jìn)行超聲溶解lOmin，得混合液；
[0102] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-40°C，并在-50°C下預(yù)凍2h;然后將凍干倉內(nèi)抽 真空至20Pa后，在8-10h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-15°C;接著在凍干倉內(nèi)真空 度不變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在7h內(nèi)逐步升溫至室溫，到凍干粉水分小于4%時(shí) 出料，無菌條件下依次與大豆分離蛋白、濃縮乳清蛋白、小麥芽粉、磷脂、蜂蛹蟲酶解物、剩 余抗凍多肽、剩余膳食纖維粉均勻混合得穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉。
[0103] 實(shí)施例6
[0104] -種穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0105] 大豆分離蛋白115份，濃縮乳清蛋白45份，膳食纖維粉60份，小麥芽粉60份，磷脂50 份，抗凍多肽27份，蜂蛹蟲酶解物22份，甜葉菊4.5份；
[0106] 所述抗凍多肽的質(zhì)量組成為:植物提取物:絲膠肽=29:3;
[0107] 制備方法，包括如下步驟：
[0108] 1)甜葉菊提取物的制備:按照配方，準(zhǔn)確稱取各組份原料，首先將甜葉菊放入裝有 0.3%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200W、40KHz清洗3min，瀝干，置微波干燥中于功率 5kW、料層厚度2復(fù)、100°(：、干燥21^11，然后浸泡在質(zhì)量百分比為7%的絲膠肽溶液中1〇1^11， 取出，于-22°C冷凍15min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度5cm，粉碎物粒徑0.3mm,接著加入 粉碎物質(zhì)量12倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5,于室溫下在電場強(qiáng)度35kV/cm，脈沖時(shí)間300μ s，脈沖頻率300Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理lOmin;然后于室溫在功率300W條件下進(jìn)行 微波輻照提取8min，同時(shí)在功率300W，頻率30KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液 質(zhì)量〇 . 6 %的降解酶，于40 °C酶解50min，取酶解液質(zhì)量2 %的蛋清，放入攪拌機(jī)中于轉(zhuǎn)速 1000r/min攪拌lOmin，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶解液中，常 壓煮沸3min，迅速降至室溫，80目篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至12%得甜葉菊提 取物；
[0109] 所述降解酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶按質(zhì)量比3:1:2均勻混合；
[0110] 2)混料:將抗凍多肽質(zhì)量的60%和膳食纖維粉質(zhì)量的4%依次加入甜葉菊提取物 中，均勻混合，在功率500W，頻率35KHz條件下進(jìn)行超聲溶解15min，得混合液；
[0111] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-50°C，并在-40°C下預(yù)凍3h;然后將凍干倉內(nèi)抽 真空至15Pa后，在10h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-15°C;接著在凍干倉內(nèi)真空度 不變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在7h內(nèi)逐步升溫至室溫，到凍干粉水分小于4%時(shí)出 料，無菌條件下依次與大豆分離蛋白、濃縮乳清蛋白、小麥芽粉、磷脂、蜂蛹蟲酶解物、剩余 抗凍多肽、剩余膳食纖維粉均勻混合得穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉。
[0112] 實(shí)施例7本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的感官品評(píng)試驗(yàn)
[0113] 邀請24名人員對(duì)本發(fā)明實(shí)施例2制備的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉與市售兩種同類相同生 產(chǎn)日期的復(fù)合蛋白粉進(jìn)行品評(píng)，感官打分，其中專業(yè)和非專業(yè)人員各12名，專業(yè)人員青年、 中年、老年各4名，男女各半，非專業(yè)人員少年、青年、中年、老年各3名，男女各半;打分包括 外觀（20分）、質(zhì)地(25分）、風(fēng)味（30分）、口感（25分）四個(gè)方面，打分人員獨(dú)立進(jìn)行，互不影 響，以保證品評(píng)結(jié)果準(zhǔn)確。對(duì)品評(píng)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，均分值取近似值，保留整數(shù)，具體見表1:
[0114] 表1:感官品評(píng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果
[0115]
LUI IL>」 th: |口」一個(gè)」ΙΛΗ小，|、| 口J，J、與于可衣/」、左開亞，仞、/|、|口」人與于可衣/J、左開 極顯著(Ρ<〇.01)，標(biāo)有相同字母表示差異不顯著(Ρ>〇.05)。
[0117]以上結(jié)果表明，本發(fā)明制備的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉從外觀、質(zhì)地、風(fēng)味和口感任何一 方面都要明顯優(yōu)于市售凍干粉，特別是外觀、風(fēng)味和口感極好，最大限度地保留了食品原料 的天然色澤、口感和風(fēng)味，同時(shí)也適合不同年齡段、不同消費(fèi)層次的消費(fèi)者食用。
[0118] 需要說明的是:本發(fā)明實(shí)施例3-6制備的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉同樣具有上述實(shí)驗(yàn)效 果，各實(shí)施例之間及與上述實(shí)驗(yàn)效果差異性不大。
[0119] 實(shí)施例8本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的生物活性試驗(yàn)
[0120] 將本發(fā)明實(shí)施例2制備的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉與市售相同生產(chǎn)日期的粉狀糖化酶分 另IJ于-12°C和40°C條件下儲(chǔ)存12個(gè)月，采用《GB8726-2006食品添加劑糖化酶制劑》中檢測方 法測定蛋白粉和粉狀糖化酶的酶活力，計(jì)算酶活損失率，酶活損失率是指實(shí)際檢測的酶活 力與產(chǎn)品標(biāo)注酶活力的差值占標(biāo)注酶活力的百分率，結(jié)果如表2
[0121]表2儲(chǔ)存期酶活力損失率
[0122]
[0123] 以上結(jié)果表明，在-12°C和40°C條件下儲(chǔ)存12個(gè)月，本發(fā)明功能性穩(wěn)定的復(fù)合蛋白 粉比市售粉狀糖化酶酶活損失分別降低34%和10.2%，具有優(yōu)良的溫度儲(chǔ)存性，酶活力非 常穩(wěn)定，同時(shí)也說明本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉含有的其它生物活性物質(zhì)的損失率極低，具 有較好的抗凍、抗熱性能，保質(zhì)期長。
[0124] 需要說明的是:本發(fā)明實(shí)施例3-6制備的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉同樣具有上述實(shí)驗(yàn)效 果，各實(shí)施例之間及與上述實(shí)驗(yàn)效果差異性不大。
[0125] 實(shí)施例9本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉溶解性試驗(yàn)
[0126] 蛋白粉作為一種食品原料制備的粉劑，參照固體飲料的穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)，將溶解時(shí)間、 溶解后均一性確定為蛋白粉的質(zhì)量穩(wěn)定性指標(biāo)，它不僅直接反映了產(chǎn)品的溶解程度，亦反 映了產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量及穩(wěn)定性，是蛋白粉最重要質(zhì)控指標(biāo)。
[0127] 溶解時(shí)間：按質(zhì)量比1:5加入55_65°C溫水，充分?jǐn)嚢?，完全溶解的時(shí)間；
[0?28]均一1性表征方法:上下均一、無分層90-100分;微分層80-89分;分層70-79分;較分 層0-69分;嚴(yán)重分層50-59分;沉淀49分以下(沉淀顆粒越大、數(shù)量越多，分?jǐn)?shù)越低）。
[0129] 將本發(fā)明實(shí)施例2制備的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉和市售同類型、同規(guī)格、同生產(chǎn)日期的 復(fù)合蛋白粉于玻璃杯中溶解后，靜置，觀察均一性，每5min觀察記錄結(jié)果一次，結(jié)果見表3:
[0130] 表3:溶解后穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉澄明度檢測結(jié)果
[0131]
[0133]以上結(jié)果表明：本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉和市售復(fù)合蛋白粉相比，溶解性較好，溶 解時(shí)間短，溶解后的溶液穩(wěn)定性強(qiáng)，均一性強(qiáng)，外觀質(zhì)量較好，隨著靜置時(shí)間的延長，市售復(fù) 合蛋白粉溶液液相相對(duì)不穩(wěn)定，產(chǎn)生沉淀，大大影響了飲料的外觀質(zhì)量和內(nèi)在質(zhì)量，同時(shí)也 說明本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉內(nèi)在質(zhì)量較好，食用效果安全、穩(wěn)定。
[0134]需要說明的是:本發(fā)明實(shí)施例3-6制備的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉同樣具有上述實(shí)驗(yàn)效 果，各實(shí)施例之間及與上述實(shí)驗(yàn)效果差異性不大。
[0135] 實(shí)施例10本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉對(duì)機(jī)體免疫力的影響
[0136] 1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>[0137] 通過運(yùn)動(dòng)耐力測試（小鼠游泳試驗(yàn)），驗(yàn)證本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的提高免疫 力、抗疲勞作用。
[0138] 2實(shí)驗(yàn)材料與試劑
[0139] 2.1供試藥物：
[0140] 市售復(fù)合蛋白粉(G1);市售復(fù)合蛋白粉(G2);本發(fā)明實(shí)施例2-6制備的穩(wěn)定的復(fù)合 蛋白粉(G3-G7)。
[0141] 2.2試劑：
[0142] 肝/肌糖原測試盒，購自南京建成生物制品研究所;濃硫酸(AR)，南京化學(xué)試劑有 限公司；生理鹽水，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
[0143] 3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0144] ICR小鼠，d，清潔級(jí)，體重18_22g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，實(shí)驗(yàn)期間小 鼠自由飲食。
[0145] 4.主要儀器
[0146] 錯(cuò)制游泳箱（50cmX 50cmX 40cm)，鉛絲，低溫高速離心機(jī)：5804R型，Eppendrof公 司；水浴鍋:DK-S26型，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；電子稱:BS224S型，Sartorius公司；秒 表，溫度計(jì)
[0147] 5.實(shí)驗(yàn)分組
[0148] 5.1劑量分組及受試樣品給予時(shí)間隨機(jī)將小鼠分為8組，每組10只，第1組至第7組 分別給G1~G7的藥物，第8組為空白對(duì)照組，給予等體積的雙蒸水，每組每日均灌胃1次，灌 胃體積為0.2ml/10g，連續(xù)給予受試樣品30天。
[0149] 5.2樣品配制第1組至第7組:稱取2.25g藥物樣品，用蒸餾水配至150ml;空白對(duì)照 組:雙蒸水150ml。
[0150] 6.實(shí)驗(yàn)方法
[0151] 6.1負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o藥30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水溫25 ±l°c，鼠尾根部負(fù)荷5%體重的鉛皮，記錄小鼠游泳開始至死亡的時(shí)間，作為小鼠游泳時(shí) 間。
[0152] 6.2小鼠血清尿素測定末次給藥3〇11^11后，在溫度為30°(：的水中不負(fù)重游泳9〇1^11， 休息60min后摘眼球采血0.5mL (不加抗凝劑），置4°C冰箱3h，血凝固后2000r/min離心 15min，取血清送寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測。
[0153] 6.3肝糖原的測定末次給藥3〇11^11后，在溫度為25±1°(：的水中不負(fù)重游泳9〇1^11， 頸椎脫臼處死小鼠，用生理鹽水洗凈，并用濾紙吸干水分后，準(zhǔn)確稱取肝臟l〇〇mg，肝糖原檢 測試劑盒檢測小鼠肝糖原含量。
[0154] 6.4血乳酸的測定末次給藥30min后采血，然后不負(fù)重在溫度為30 °C的水中游泳 lOmin后停止。乳酸儀測定方法:分別在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20yL加 入40yL破膜液中，立即充分振蕩破碎細(xì)胞用乳酸儀測定。（血乳酸曲線下面積= 5X(游泳前 血乳酸值+3 X游泳后Omin的血乳酸值+2 X游泳后20min的血乳酸值）
[0155] 7.觀察指標(biāo)負(fù)重游泳時(shí)間，血乳酸、尿素、肝糖原值
[0156] 8.統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較
[0157] 9.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0158] 9.1本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉對(duì)小鼠體重的影響
[0159] 各組小鼠在給予G1~G9藥物后，前、中，后期體重分別見下表所示，各組小鼠的初 始體重和增重體重與對(duì)照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>〇.05)，表明G1~G9藥物均無明顯的 毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見表4。
[0160] 表4負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)小鼠的初始體重、中期體重和結(jié)束體重(±,ν)
[0161]
[0163] 9.2本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響
[0164] 經(jīng)口給予小鼠 G1~G7藥物后，G1~G2藥物與空白對(duì)照組比較，可以明顯延長小鼠 負(fù)重游泳時(shí)間，具有顯著性差異(Ρ<〇.05)，本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉G3~G7藥物與空白對(duì) 照組比較，可以顯著延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，具有極顯著性差異(Ρ<〇.01)，且明顯優(yōu)于G1 ~G2藥物。結(jié)果詳見表5。
[0165] 表5穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響(? 土y)
[0166]
[0167] "*"p〈0.05vs 空白對(duì)照；
[0168] "**"？〈0.01￥8空白對(duì)照；
[0169] 9.3本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)前后血乳酸的影響
[0170]經(jīng)口給予小鼠本發(fā)明的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉后，本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉G3~G7藥 物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸曲線下面積與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<〇.05)，G1~G2藥物組 小鼠血乳酸曲線下面積與對(duì)照組比較雖有所降低，但并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>〇.05)。結(jié)果見表 6〇
[0171 ]表6本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)前后血乳酸水平的影響（^ ± Λ.)
[0172]
[0174] "*"p〈0.05vs 空白對(duì)照；
[0175] 9.4本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉對(duì)小鼠肝糖原的影響
[0176] 經(jīng)口給予小鼠 G1~G7藥物后，G1~G2藥物與空白對(duì)照組比較，小鼠肝糖原含量均 有明顯的升高，具有顯著性差異(P<〇.05)，本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉G3~G7藥物與與空白 對(duì)照組比較，小鼠肝糖原含量均有明顯的升高，具有極顯著性差異(P<〇.01)，且明顯優(yōu)于 G1~G2藥物。結(jié)果詳見表7。
[0177] 表7本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉對(duì)小鼠肝糖原含量的影響(^±,0 「01781
[0179] "*"p〈0.05vs 空白對(duì)照；
[0180] "**"？〈0.01￥8空白對(duì)照；
[0181] 9.5本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉對(duì)小鼠血清尿素的影響
[0182] 經(jīng)口給予小鼠 G1~G7藥物后，G1~G2藥物組與空白對(duì)照組比較，小鼠運(yùn)動(dòng)后血清 尿素含量均有明顯的降低，具有顯著性差異(P<〇.05)，本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉G3~G7藥 物與與空白對(duì)照組比較，小鼠運(yùn)動(dòng)后血清尿素含量均有明顯的降低，具有極顯著性差異(P <0.01)，且明顯優(yōu)于G1~G2藥物。結(jié)果詳見表8。
[0183] 表8本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉對(duì)小鼠血清尿素含量的影響（I土.v)
[0184]
[0185] "*"p〈0.05vs 空白對(duì)照；
[0186] "**"p〈0.01vs 空白對(duì)照；
[0187] 10.實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0188] 本實(shí)驗(yàn)主要通過小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，同時(shí)檢測小鼠肝糖原的儲(chǔ)備來觀察本發(fā)明穩(wěn) 定的復(fù)合蛋白粉提高免疫力、抗疲勞的效果。初步研究結(jié)果顯示如下：
[0189] 1、本發(fā)明G3~G7穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉均能延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間（P<0.01)，且效 果明顯優(yōu)于其它G1~G2的復(fù)合蛋白粉。
[0190] 2、生化檢測方面顯示，本發(fā)明G3~G7穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉各劑量組均能減少運(yùn)動(dòng)后 小鼠血清中葡萄糖無氧酵解所產(chǎn)生的乳酸含量，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<〇.05)，而 其它G1~G2的復(fù)合蛋白粉雖然也能減少運(yùn)動(dòng)后小鼠血清中葡萄糖無氧酵解所產(chǎn)生的乳酸 含量，但與對(duì)照組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>〇.05);
[0191] 3、本發(fā)明G3~G7穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉各劑量組均能顯著提高小鼠肝臟中糖原的儲(chǔ) 備(P<0.01)，且效果明顯優(yōu)于其它G1~G2的復(fù)合蛋白粉；
[0192] 4、高尿酸模型發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明G3~G7穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉能顯著降低小鼠游泳后血清 中尿素的含量(P<〇.01)，且效果明顯優(yōu)于其它G1~G2復(fù)合蛋白粉；
[0193] 11.結(jié)論
[0194] 上述實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉能顯著提高機(jī)體免疫力，提高小鼠的體力 和耐力，降低小鼠運(yùn)動(dòng)后血清中尿素及乳酸的含量，且能顯著提高小鼠肝臟中糖原的儲(chǔ)備， 有助于緩解運(yùn)動(dòng)負(fù)荷引起的疲勞;能延長小鼠負(fù)重游泳至力竭的時(shí)間。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：大豆分離蛋白100-120 份，濃縮乳清蛋白30-50份，膳食纖維粉45-65份，小麥芽粉45-65份，磷脂35-55份，抗凍多肽 20-30份，蜂蛹蟲酶解物15-25份，甜葉菊3-5份。2. 如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，其特征在于，主要由以下重量份數(shù)的原料制 備:大豆分離蛋白105-115份，濃縮乳清蛋白35-45份，膳食纖維粉50-60份，小麥芽粉50-60 份，磷脂40-50份，抗凍多肽23-27份，蜂蛹蟲酶解物18-22份，甜葉菊3.5-4.5份。3. 如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，其特征在于，主要由以下重量份數(shù)的原料制 備:大豆分離蛋白110份，濃縮乳清蛋白40份，膳食纖維粉55份，小麥芽粉55份，磷脂45份，抗 凍多肽25份，蜂蛹蟲酶解物20份，甜葉菊4份。4. 如權(quán)利要求1-3任一所述的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，其特征在于，所述膳食纖維粉的制備 方法，包括以下步驟:將菊粉、蘋果纖維、小麥纖維、燕麥纖維按質(zhì)量比4-6:2-4:1-3:1-2均 勻混合，超微粉碎至粒徑3-6μπι，調(diào)整粉碎物水分含量為17-19%，于螺桿轉(zhuǎn)速160-180r/ min、溫度185-200 °C條件擠壓膨化，加入膨化物質(zhì)量2-4倍的水，室溫200-400W、35-40KHz條 件超聲提取l〇_15min，然后在電場強(qiáng)度20-40kV/cm，脈沖時(shí)間400-600ys，脈沖頻率200-400Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理10-15min;用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4.5-6.5，加入混合物質(zhì) 量0.1-0.3 %的生物酶，于45-55 °C酶解20-48min;酶解液減壓濃縮、冷凍干燥即得膳食纖維 粉； 所述生物酶為纖維素酶、木聚糖酶、漆酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-3:0.5_ 1.5:0.2-1均勻混合。5. 如權(quán)利要求1-3任一所述的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，其特征在于，所述小麥芽粉的制備方 法，包括如下步驟:將小麥放在裝有0.04-0.06%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于功率 200-400W、頻率20-30KHZ室溫超聲清洗3-5min，取出、瀝干，于頻率2450MHz、功率3000W、溫 度38-42°(：、料層厚度2-4〇11微波干燥6-8 8，然后置溫度為33-36°(：、？!1值為6-8的浸泡液中浸 泡4-6h，浸泡液含有質(zhì)量百分比濃度為0.3-0.5 %的復(fù)合酶，每隔15-20min通風(fēng)一次，通風(fēng) 壓力0.13-0.1510^，同時(shí)于電場強(qiáng)度10-151^/〇11，脈沖時(shí)間100-30(^8，脈沖頻率60-80!^條 件進(jìn)行高壓脈沖電場處理，直至小麥水分含量為40-45 % ;浸泡后的小麥瀝干，在發(fā)芽室內(nèi) 進(jìn)行暗發(fā)芽，暗發(fā)芽溫度保持20_24°C，暗發(fā)芽時(shí)間為20-24h，經(jīng)發(fā)芽后的小麥干燥至水分 含量為5-8%，低溫粉碎，過80-100目篩即得小麥芽粉； 所述復(fù)合酶為纖維素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-3均勻混合。6. 如權(quán)利要求1-3任一所述的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，其特征在于，所述抗凍多肽的質(zhì)量組 成為:植物提取物:絲膠肽=12-29:3-9; 所述植物提取物的制備方法，包括如下步驟:將冬黑麥、沙地柏、沙冬青的種子按質(zhì)量 比9-17:2-4:1-2均勻混合，裝盤，首先于電場強(qiáng)度5-7kV/cm高壓靜電處理5-7min;接著在濃 度為10-30mg/L的水楊酸溶液中室溫浸泡2-4h，同時(shí)在電場強(qiáng)度10-20kV/cm，脈沖時(shí)間150-25(^ 8，脈沖頻率150-250他條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理；漂洗、瀝干，于3-5°(：靜置18-24h，然后依次在1-3°C冷藏2-4d，-3-5°C冷凍l-3d、-15-18°C冷凍10_15h，立即放在室外 于光照強(qiáng)度0.5-5萬Lx自然光照5-7h，使混合料半解凍后立即進(jìn)行粉碎，粉碎物粒徑0.5-1.5mm,接著加入粉碎物質(zhì)量4-6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5-5.5;最后加入混合料液質(zhì) 量1-2 %的混合酶，首先于35-50 °C酶解10_30min，然后于50-60 °C酶解20-40min;酶解液過 濾、濾液減壓濃縮至固形物含量為15-25 %即得植物提取物； 所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比8-10:5-7:2-4:1-3: 1-2均勻混合。7. 如權(quán)利要求1-3任一所述的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，其特征在于，所述蜂蛹蟲酶解物的制 備方法，包括如下步驟:將新鮮蜂王幼蟲與雄蜂蛹按質(zhì)量比2-5:1-3均勻混合，加入混合物 質(zhì)量1-2倍的質(zhì)量百分比為4-7%的絲膠肽溶液和0.1-0.3倍的離子溶液，攪拌均勻，于_ 18-22°C冷凍12-18min，破碎，破碎率為98-100%，破碎物粒徑200-300μπι，用乳酸調(diào)節(jié)破碎 物pH值為5-7，升溫至40-50°C，向其中加入破碎物質(zhì)量0.3-0.5%的復(fù)配酶，混合均勻，于真 空度-0.07-0.09MPa脫氣脫腥10-15min，繼續(xù)酶解10-15min得到酶解液;將酶解液置真空 離心機(jī)中5000-7000r/min真空離心8-10min，自上而下分離得到游離脂肪、乳狀液、水解液 和殘?jiān)?，將得到的乳狀液控制溫度?5-55°C，添加乳狀液質(zhì)量0.2-0.4%的生物破乳劑破 乳20_40min，破乳后于4000-6000r/min真空離心2次，間隔時(shí)間l_3h，每次離心10_15min，合 并三次離心得到的水解液，取其質(zhì)量0.5-0.7%的蛋清，放入攪拌機(jī)中于轉(zhuǎn)速800-1000r/ min攪拌10-12min，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入合并得到的水解 液中，常壓煮沸2_4min，降至室溫，于5000-7000r/min真空離心8-10min，收集水解液，依次 經(jīng)硅藻土過濾、超濾、凍干即得蜂蛹蟲酶解物； 所述離子溶液為含有鈉離子15_20mg/L、鋅離子10-15mg/L、鉀離子8-12mg/L、鈣離子6-10mg/L和鎂離子5-8mg/L的水溶液； 所述復(fù)配酶質(zhì)量組成為:風(fēng)味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶=1-3:1-2:0.1-0.3; 所述真空離心條件為溫度5-8°C、真空度-0.02-0.04MPa。8. 如權(quán)利要求7所述的穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉，其特征在于，所述生物破乳劑的質(zhì)量組成 為:糖脂類:脂肽類:胞壁結(jié)合類=3-5:1-3:1-2;所述糖脂類生物破乳劑的質(zhì)量組成為：鼠 李糖脂:烷基糖苷=6-8:3-5。9. 如權(quán)利要求1-8任一所述穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的制備方法，其特征在于，包括如下步 驟： 1) 甜葉菊提取物的制備:按照配方，準(zhǔn)確稱取各組份原料，首先將甜葉菊放入裝有0.1-〇. 3 %碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200-400W、20-40KHZ清洗3-5min，瀝干，置微波干 燥中于功率3_5kW、料層厚度2-4cm、80-100°C、干燥2-4min，然后浸泡在質(zhì)量百分比為4-7% 的絲膠肽溶液中l(wèi)〇-15min，取出，于-18-22°C冷凍15-25min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚 度3-5cm，粉碎物粒徑0.3-0.5_，接著加入粉碎物質(zhì)量8-12倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5-5.5，于室溫下在電場強(qiáng)度25-351^/〇11，脈沖時(shí)間300-50(^8，脈沖頻率200-300他條件下進(jìn) 行高壓脈沖電場處理l〇_15min;然后于室溫在功率150-300W條件下進(jìn)行微波輻照提取8-12min，同時(shí)在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液質(zhì)量 0.2-0.6 %的降解酶，于40-50 °C酶解30-50min，取酶解液質(zhì)量2-4 %的蛋清，放入攪拌機(jī)中 于轉(zhuǎn)速800-1000r/min攪拌10-12min，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加 入酶解液中，常壓煮沸l(wèi)_3min，迅速降至室溫，80-100目篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形物 含量至8-12 %得甜葉菊提取物； 所述降解酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶按質(zhì)量比1-3:1-2:1-2均勻混合； 2) 混料:將抗凍多肽質(zhì)量的40-60 %和膳食纖維粉質(zhì)量的4-6 %依次加入甜葉菊提取物 中，均勻混合，在功率300-500W，頻率35-45KHZ條件下進(jìn)行超聲溶解10-15min，得混合液； 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-40~-50 °C，并在-40~-50 °C下預(yù)凍2~3h;然后將 凍干倉內(nèi)抽真空至15~20Pa后，在8-10h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-15~-18°C; 接著在凍干倉內(nèi)真空度不變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在5_7h內(nèi)逐步升溫至室溫， 到凍干粉水分小于4%時(shí)出料，無菌條件下依次與大豆分離蛋白、濃縮乳清蛋白、小麥芽粉、 磷脂、蜂蛹蟲酶解物、剩余抗凍多肽、剩余膳食纖維粉均勻混合得穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉。10.如權(quán)利要求9所述穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉的制備方法，其特征在于，所述穩(wěn)定的復(fù)合蛋 白粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備:大豆分離蛋白110份，濃縮乳清蛋白40份，膳食纖維 粉55份，小麥芽粉55份，磷脂45份，抗凍多肽25份，蜂蛹蟲酶解物20份，甜葉菊4份； 所述抗凍多肽的質(zhì)量組成為:植物提取物:絲膠肽=21:6; 制備方法，包括如下步驟： 1) 甜葉菊提取物的制備：按照配方，準(zhǔn)確稱取各組份原料，首先將甜葉菊放入裝有 0.2%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于300W、30KHz清洗4min，瀝干，置微波干燥中于功率 4kW、料層厚度3復(fù)、90°(：、干燥31^11，然后浸泡在質(zhì)量百分比為6%的絲膠肽溶液中121^11，取 出，于-20°C冷凍20min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度4cm，粉碎物粒徑0.4mm，接著加入粉 碎物質(zhì)量10倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4.5，于室溫下在電場強(qiáng)度301^/〇]1，脈沖時(shí)間40(^8， 脈沖頻率250Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理12min;然后于室溫在功率200W條件下進(jìn)行微 波輻照提取l〇min，同時(shí)在功率250W，頻率35KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液質(zhì) 量0.4 %的降解酶，于45 °C酶解40min，取酶解液質(zhì)量3 %的蛋清，放入攪拌機(jī)中于轉(zhuǎn)速900r/ min攪拌1 lmin，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶解液中，常壓煮沸 2min，迅速降至室溫，90目篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至10%得甜葉菊提取物； 所述降解酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶按質(zhì)量比2:1.5:1.5均勻混合； 2) 混料:將抗凍多肽質(zhì)量的50%和膳食纖維粉質(zhì)量的5%依次加入甜葉菊提取物中，均 勻混合，在功率400W，頻率40KHz條件下進(jìn)行超聲溶解12min，得混合液； 3) 凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-45 °C，并在-45 °C下預(yù)凍2.5h;然后將凍干倉內(nèi)抽真 空至18Pa后，在9h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-16°C ;接著在凍干倉內(nèi)真空度不變 的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在6h內(nèi)逐步升溫至室溫，到凍干粉水分小于4%時(shí)出料， 無菌條件下依次與大豆分離蛋白、濃縮乳清蛋白、小麥芽粉、磷脂、蜂蛹蟲酶解物、剩余抗凍 多肽、剩余膳食纖維粉均勻混合得穩(wěn)定的復(fù)合蛋白粉。
【文檔編號(hào)】A23L33/19GK105996017SQ201610341239
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月23日
【發(fā)明人】李建樹, 李政
【申請人】天津天綠健科技有限公司