互花米草木質(zhì)素生物降解方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種互花米草木質(zhì)素生物降解方法，包括將互花米草風(fēng)干至含水量低于18％后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)6％～24％的尿素水溶液噴灑在粉粒上并攪拌均勻，然后壓實密封5～8天進(jìn)行氨化處理，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比為0.26～0.31：1，氨化完成后在暗環(huán)境下接種黃孢原毛平革菌進(jìn)行發(fā)酵處理，接種量為5％～15％，發(fā)酵時間5～20天。本發(fā)明利用黃孢原毛平革菌對互花米草木質(zhì)素實施生物降解，顯著降低互花米草木質(zhì)素含量，同時提高互花米草的飼用效率。
【專利說明】
互花米草木質(zhì)素生物降解方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及外來入侵生物防控與利用技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是一種互花米草木質(zhì)素 生物降解方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 互花米草自1979年引入我國沿海灘涂后呈現(xiàn)爆發(fā)增長，對海灘生態(tài)環(huán)境造成損 害，2003年3月被收錄到入侵我國的16種外來入侵種名單。當(dāng)前對互花米草的防治方法主要 是通過物理、化學(xué)、天敵生物和生物替代等方式，控制互花米草的生長與擴散，這些方法通 常因為高成本、對環(huán)境造成污染等原因很難得到推廣運用。將有害的互花米草進(jìn)行資源化 利用是有效防控措施之一，互花米草因富含蛋白質(zhì)、脂肪、纖維素等可做為家蓄飼料加以開 發(fā)利用。
[0003] 互花米草富含纖維素、半纖維素和木質(zhì)素。木質(zhì)素與纖維素?fù)胶显谝黄?，將纖維素 緊緊包裹在里面，保護(hù)纖維素免遭微生物襲擊和降解酶進(jìn)攻，而草食動物的瘤胃微生物缺 乏降解木質(zhì)素的酶，所以互花米草細(xì)胞內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)不能釋放出來，從而限制了動物對纖 維素和半纖維素等成分的降解和利用。因此，提高互花米草消化率的關(guān)鍵是降解木質(zhì)素，黃 孢原毛平革菌富含木質(zhì)素降解酶，利用黃孢原毛平革菌對互花米草木質(zhì)素實施降解，可以 提尚互花米草的伺用效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu) 點。
[0005] 本發(fā)明的還有一個目的是提供一種互花米草木質(zhì)素生物降解方法。其通過將互花 米草碎成粉粒進(jìn)行氨化處理，在暗環(huán)境下再接種黃孢原毛平革菌發(fā)酵，利用黃孢原毛平革 菌對互花米草木質(zhì)素實施降解，顯著降低木質(zhì)素含量，同時提高互花米草的飼用效率。
[0006] 為了實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點，提供了互花米草木質(zhì)素生物降解方 法:將互花米草風(fēng)干至含水量低于18 %后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)6 %~24 %的尿素水溶液噴 灑在粉粒上并攪拌均勻，然后壓實密封5~8天進(jìn)行氨化處理，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比 為0.26~0.31:1，氨化完成后在暗環(huán)境下接種黃孢原毛平革菌進(jìn)行發(fā)酵處理，接種量為5 % ~15%，發(fā)酵時間5~20天。
[0007] 優(yōu)選的是，黃孢原毛平革菌在接種前的培養(yǎng)具體為:將黃孢原毛平革菌菌種劃線 至roA培養(yǎng)基上，在25~30 °C暗環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)5~7天，之后在3~4°C冷藏備用，所述roA培 養(yǎng)基由以下重量份數(shù)的原料制成:選取土豆4000~6000份、葡萄糖400~600份、瓊脂300~ 450份、純凈水30000份，在90~110°C熬制成稀狀物，再加入KH 2P〇4 60~80份、MgS(k · 7H2〇 30~45份、維生素 B1 0.008~0.012份，混勻后調(diào)節(jié)pH至6.0左右，即得PDA培養(yǎng)基。
[0008] 優(yōu)選的是，尿素水溶液噴灑前加入檸檬酸、蘋果酸和磷酸二氫銨溶解在尿素水溶 液中，檸檬酸、蘋果酸、磷酸二氫銨與尿素水溶液質(zhì)量比為0.01:0.01:0.02:100。
[0009] 優(yōu)選的是，尿素水溶液噴灑后在粉粒中加入質(zhì)量為粉粒質(zhì)量1~1.5%的添加物形 成第一混合物，所述添加物為質(zhì)量比3:1:2的豆渣、菜籽餅和脫脂奶液，第一混合物壓實密 封5~8天進(jìn)行氨化處理的溫度控制為30~35°C，第一混合物氨化處理后取出選擇陰涼通風(fēng) 處放置12~14h。
[0010] 優(yōu)選的是，接種黃孢原毛平革菌前第一混合物在氨化處理后需與基礎(chǔ)培養(yǎng)液混合 形成第二混合物，基礎(chǔ)培養(yǎng)液與第一混合物質(zhì)量比為1:10,基礎(chǔ)培養(yǎng)液均勻噴灑于第一混 合物表面，然后將第二混合物進(jìn)行高壓滅菌，于暗環(huán)境下再進(jìn)行接種發(fā)酵，發(fā)酵溫度為30~ 35°C，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液配置方法如下:首先配置第一培養(yǎng)液，第一培養(yǎng)液中各組分摩爾濃度 如下KH 2P〇4 1.35X10-2~1.47X10-2mol/L，MgS〇4 · 7H20 1.96X 10-3~2.03X10-3mol/L以 及CaCl2 · 7Η20 5.9ΧΠΓ4~6.8X10_4mol/L，然后于第一培養(yǎng)液中加入維生素 B1，每升第一 培養(yǎng)液維生素 B1的加入量為100~120mg，再加入第一培養(yǎng)液總質(zhì)量0.05%~0.06%的吐 溫-80，最后加入微量元素混合液，第一培養(yǎng)液與微量元素混合液體積比為9:1，混勻后即為 基礎(chǔ)培養(yǎng)液。
[0011] 優(yōu)選的是，所述微量元素混合液中各組分摩爾濃度如下NaMo〇4 · 2Η203.6Χ 10-5~ 4.1X10-5mol/L，MgS〇4 · 7Η20 1.8X10-2~2X10-2mol/L，MnS〇4 · Η20 1.35X 10-2~1.47Χ 10-2mol/L，NaCl 1.5X10-2~1.7X10-2mol/L，F(xiàn)eS〇4 · 7Η20 3.46X 10-4~3.59X10-4mol/L， CoCl2 7.62X 10-4~7.75X10-4mol/L，CaCl2 8.7X10-4~9.0X10-4mol/L，ZnS04*H20 3.35 X10-4~3.48X10-4mol/L，CuS04*7H20 3.2X 10-5~4.0X10-5mol/L，AlK(S04)2*7H20 1.9 X 10-5~2 · 1 X 10-5mol/L，H3B〇3l ·4X 10-4~1 ·6 X 10-4mol/L以及氨基乙酸7 · 5 X 10-3~7 ·8 X 10-3mol/L〇
[0012] 優(yōu)選的是，發(fā)酵過程中每隔5天噴灑一次配方液，配方液中包括以下重量份數(shù)的原 料:木醋液1~2份、蘋果酸2~3份、蜂蜜8~12份以及純凈水100份，噴灑過程中不斷上下翻 動接種了黃孢原毛平革菌的第二混合物使第二混合物濕度均勻，噴灑完成后第二混合物濕 度達(dá)到50~56%。
[0013] 本發(fā)明的至少包括以下有益效果：
[0014] 第一、本發(fā)明將氨化處理與發(fā)酵接種相結(jié)合，先氨化然后接種黃孢原毛平革菌發(fā) 酵，氨化處理可防止互花米草粉粒腐敗，具有殺滅腐敗細(xì)菌的作用，氨吸附在粉粒上，也增 加了粉粒非蛋白氨的含量，更重要的是氨化處理具有堿化粉粒的作用，可使粉粒內(nèi)部的木 質(zhì)素和纖維素之間的酯鍵斷裂，打破木質(zhì)素和纖維素的鑲嵌結(jié)構(gòu)，黃孢原毛平革菌發(fā)酵產(chǎn) 生木質(zhì)素降解酶，由此利用生物降解方法將木質(zhì)素進(jìn)一步降解，將互花米草細(xì)胞內(nèi)的營養(yǎng) 物質(zhì)釋放出來，從而提高了粉粒的消化率；
[0015] 第二、本發(fā)明在尿素水溶液噴灑前加入檸檬酸、蘋果酸和磷酸二氫銨溶解在尿素 水溶液中，檸檬酸、蘋果酸和磷酸二氫銨能加速尿素水解釋放出氨，加快氨化處理的進(jìn)程， 同時檸檬酸、蘋果酸具有防腐抗菌功能，能抑制粉粒中霉菌的生長繁殖，磷酸二氫鉀能用作 水分保持劑，增強氨化處理過程的穩(wěn)定性；
[0016] 第三、本發(fā)明中尿素水溶液噴灑后在粉粒中加入豆渣、菜籽餅和脫脂奶液物，豆 渣、菜籽餅和脫脂奶液物都富含蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)氨化分解出氨，與尿素分解出的氨產(chǎn)生相互 協(xié)同作用，同時剩余的蛋白質(zhì)也能增加粉粒中蛋白質(zhì)的含量；
[0017] 第四、本發(fā)明將氨化處理后的第一混合物與基礎(chǔ)培養(yǎng)液混合形成第二混合物，再 進(jìn)行高壓滅菌然后接種黃孢原毛平革菌發(fā)酵，基礎(chǔ)培養(yǎng)液中富含黃孢原毛平革菌生長繁殖 的必需元素，能為第二混合物的發(fā)酵過程提供持續(xù)的營養(yǎng)供應(yīng)，保障發(fā)酵的穩(wěn)定快速進(jìn)行；
[0018] 第五、本發(fā)明將維生素 B1添加于TOA培養(yǎng)基和基礎(chǔ)培養(yǎng)液中，將維生素 B1作為生長 因子使用，能顯著促進(jìn)黃孢原毛平革菌細(xì)胞質(zhì)里三羧酸循環(huán)系統(tǒng)的進(jìn)行，三羧酸循環(huán)系統(tǒng) 將黃孢原毛平革菌吸收的營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)換成能量，為黃孢原毛平革菌的生長繁殖活動提供能 量，加快木質(zhì)素的生物降解；
[0019] 第六、發(fā)酵過程中每隔5天噴灑一次含木醋液、蘋果酸、蜂蜜的配方液，低濃度木醋 液、蘋果酸能抑制霉菌的繁殖，對黃孢原毛平革菌的生長有促進(jìn)作用，蜂蜜富含葡萄糖、果 糖和維生素，能為黃孢原毛平革菌發(fā)酵過程提供營養(yǎng)，加速黃孢原毛平革菌的生長繁育，進(jìn) 一步加快木質(zhì)素的生物降解。
[0020] 本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本 發(fā)明的研究和實踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
【具體實施方式】
[0021] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域普通技術(shù)人員參閱本說明書后 能夠據(jù)以實施。
[0022] 〈實施例1>
[0023] 一種互花米草木質(zhì)素生物降解方法，包括以下步驟：
[0024]將互花米草風(fēng)干至含水量低于18%后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)24%的尿素水溶液噴 灑在粉粒上并攪拌均勻，然后壓實密封8天進(jìn)行氨化處理，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比為 0.26:1，氨化完成后在暗環(huán)境下接種黃孢原毛平革菌進(jìn)行發(fā)酵處理，接種量為5 %，發(fā)酵時 間5天。
[0025]〈實施例2>
[0026] 一種互花米草木質(zhì)素生物降解方法，包括以下步驟：
[0027]將互花米草風(fēng)干至含水量低于18%后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)16%的尿素水溶液噴 灑在粉粒上并攪拌均勻，然后壓實密封8天進(jìn)行氨化處理，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比為 0.28:1，氨化完成后在暗環(huán)境下接種黃孢原毛平革菌進(jìn)行發(fā)酵處理，接種量為15 %，發(fā)酵時 間12天。
[0028]〈實施例3>
[0029] 一種互花米草木質(zhì)素生物降解方法，包括以下步驟：
[0030]將互花米草風(fēng)干至含水量低于18%后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)6%的尿素水溶液噴 灑在粉粒上并攪拌均勻，然后壓實密封8天進(jìn)行氨化處理，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比為 0.31:1，氨化完成后在暗環(huán)境下接種黃孢原毛平革菌進(jìn)行發(fā)酵處理，接種量為10%，發(fā)酵時 間20天。
[0031]〈實施例4>
[0032] 一種互花米草木質(zhì)素生物降解方法，包括以下步驟：
[0033] S1、配置PDA培養(yǎng)基，由以下重量份數(shù)的原料制成:選取土豆6000份、葡萄糖600份、 瓊脂450份、純凈水30000份，在90°C熬制成稀狀物，再加入KH2P04 80份、MgS〇4 · 7H20 45份、 維生素 B1 0.012份，混勻后調(diào)節(jié)pH至6.0左右，即得PDA培養(yǎng)基；
[0034] S2、將黃孢原毛平革菌菌種劃線至roA培養(yǎng)基上，在25 °C暗環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)5天，之 后在3 C冷減備用；
[0035] S3、將互花米草風(fēng)干至含水量低于18%后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)24%的尿素水溶 液噴灑在粉粒上并攪拌均勻，然后壓實密封8天進(jìn)行氨化處理，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比 為0.26:1;
[0036] S4、配置微量元素混合液，微量元素混合液中各組分摩爾濃度如下NaM〇04 · 2H20 3.6X10-5mol/L，MgS〇4.7H20 1.8X10-2mol/L，MnS〇4.H20 1.35 X 10-2mol/L，NaCl 1.5X 10-2mol/L，F(xiàn)eS〇4*7H20 3.46X 10-4mol/L，CoCl2 7.62X 10-4mol/L，CaCl2 8.7X10-4mol/L， ZnS〇4.H20 3.35 X 10-4mol/L，CuS〇4.7H2〇 3.2X10-5mol/L，AlK(S〇4)2.7H20 1.9X10- 5mol/L，H3B〇3l · 4 X 10-4mol/L以及氨基乙酸7 · 5 X 10-3mol/L;
[0037] S5、配置基礎(chǔ)培養(yǎng)液，首先配置第一培養(yǎng)液，第一培養(yǎng)液中各組分摩爾濃度如下 KH2P〇4 1.35X10-2mol/L，MgS〇4,7H20 1.96X 10-3mol/L以及CaCl2,7H2〇 5.9X10-4mol/L， 然后于第一培養(yǎng)液中加入維生素 Bl，每升第一培養(yǎng)液維生素 B1的加入量為120mg，再加入第 一培養(yǎng)液總質(zhì)量〇. 06 %的吐溫-80，最后加入S4中微量元素混合液，第一培養(yǎng)液與微量元素 混合液體積比為9:1，混勻后即為基礎(chǔ)培養(yǎng)液；
[0038] S6、將基礎(chǔ)培養(yǎng)液均勻噴灑于S3中氨化后粉粒表面，基礎(chǔ)培養(yǎng)液與氨化后粉粒質(zhì) 量比為1:10,然后進(jìn)行高壓滅菌，于暗環(huán)境下再進(jìn)行接種發(fā)酵，接種量為5%，發(fā)酵時間5天， 發(fā)酵溫度為30°C。
[0039] 〈實施例5>
[0040] -種互花米草木質(zhì)素生物降解方法，包括以下步驟：
[0041 ] S1、配置PDA培養(yǎng)基，由以下重量份數(shù)的原料制成:選取土豆5000份、葡萄糖500份、 瓊脂400份、純凈水30000份，在100°C熬制成稀狀物，再加入KH2P04 70份、MgS〇4· 7H20 40 份、維生素 B1 0.01份，混勻后調(diào)節(jié)pH至6.0左右，即得PDA培養(yǎng)基；
[0042] S2、將黃孢原毛平革菌菌種劃線至roA培養(yǎng)基上，在28 °C暗環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)6天，之 后在4 C冷減備用；
[0043] S3、將互花米草風(fēng)干至含水量低于18%后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)16%的尿素水溶 液噴灑在粉粒上并攪拌均勻，然后壓實密封7天進(jìn)行氨化處理，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比 為0.28:1;
[0044] S4、配置微量元素混合液，微量元素混合液中各組分摩爾濃度如下NaM〇04 · 2H20 3.8X10-5mol/L，MgS〇4.7H20 1.9X10-2mol/L，MnS〇4.H20 1.41X10-2mol/L，NaCl 1.6X 10-2mol/L，F(xiàn)eS〇4*7H20 3.51 X 10-4mol/L，CoCl2 7.7X10-4mol/L，CaCl2 8.9X10-4mol/L， ZnS〇4.H20 3.41 X 10-4mol/L，CuS〇4.7H2〇 3.5X10-5mol/L，AlK(S〇4)2.7H20 2.0X 10- 5mol/L，H3B〇3l · 5 X 10-4mol/L以及氨基乙酸7 · 6 X 10-3mol/L;
[0045] S5、配置基礎(chǔ)培養(yǎng)液，首先配置第一培養(yǎng)液，第一培養(yǎng)液中各組分摩爾濃度如下 KH2P〇4 1.40X10-2mol/L，MgS〇4,7H20 2.01 X 10-3mol/L以及CaCl2,7H2〇 6.2X10-4mol/L， 然后于第一培養(yǎng)液中加入維生素 Bl，每升第一培養(yǎng)液維生素 B1的加入量為llOmg，再加入第 一培養(yǎng)液總質(zhì)量〇. 05 %的吐溫-80，最后加入S4中微量元素混合液，第一培養(yǎng)液與微量元素 混合液體積比為9:1，混勻后即為基礎(chǔ)培養(yǎng)液；
[0046] S6、將基礎(chǔ)培養(yǎng)液均勻噴灑于S3中氨化后粉粒表面，基礎(chǔ)培養(yǎng)液與氨化后粉粒質(zhì) 量比為1:10,然后進(jìn)行高壓滅菌，于暗環(huán)境下再進(jìn)行接種發(fā)酵，接種量為15%，發(fā)酵時間12 天，發(fā)酵溫度為33 °C。
[0047]〈實施例6>
[0048] 一種互花米草木質(zhì)素生物降解方法，包括以下步驟：
[0049] S1、配置PDA培養(yǎng)基，由以下重量份數(shù)的原料制成:選取土豆4000份、葡萄糖400份、 瓊脂300份、純凈水30000份，在110°C熬制成稀狀物，再加入KH2P04 60份、MgS〇4· 7H20 30 份、維生素 B1 0.008份，混勻后調(diào)節(jié)pH至6.0左右，即得PDA培養(yǎng)基；
[0050] S2、將黃孢原毛平革菌菌種劃線至roA培養(yǎng)基上，在30°C暗環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)7天，之 后在3 C冷減備用；
[0051] S3、將互花米草風(fēng)干至含水量低于18%后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)6%的尿素水溶液 噴灑在粉粒上并攪拌均勻，然后壓實密封8天進(jìn)行氨化處理，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比為 0.31:1；
[0052] S4、配置微量元素混合液，微量元素混合液中各組分摩爾濃度如下NaM〇0 4 · 2H20 3.6X10-5mol/L，MgS〇4.7H20 1.8X10-2mol/L，MnS〇4.H20 1.35 X 10-2mol/L，NaCl 1.5X 10-2mol/L，F(xiàn)eS〇4*7H20 3.46X 10-4mol/L，CoCl2 7.62X 10-4mol/L，CaCl2 8.7X10-4mol/L， ZnS〇4.H20 3.35X 10-4mol/L，CuS〇4*7H2〇 3.2X10-5mol/L，AlK(S〇4)2*7H20 1.9X10-5， H3BO31 · 4 X 10-4mo 1 /L 以及氨基乙酸 7 · 5 X 10-3mo 1 /L;
[0053] S5、配置基礎(chǔ)培養(yǎng)液，首先配置第一培養(yǎng)液，第一培養(yǎng)液中各組分摩爾濃度如下 KH2P〇4 1.35X10-2mol/L，MgS〇4,7H2〇 1.96X10-3mol/L以及CaCl2,7H2〇 5.9X10-4mol/L， 然后于第一培養(yǎng)液中加入維生素 Bl，每升第一培養(yǎng)液維生素 B1的加入量為100mg，再加入第 一培養(yǎng)液總質(zhì)量〇. 05 %的吐溫-80，最后加入S4中微量元素混合液，第一培養(yǎng)液與微量元素 混合液體積比為9:1，混勻后即為基礎(chǔ)培養(yǎng)液；
[0054] S6、將基礎(chǔ)培養(yǎng)液均勻噴灑于S3中氨化后粉粒表面，基礎(chǔ)培養(yǎng)液與氨化后粉粒質(zhì) 量比為1:10,然后進(jìn)行高壓滅菌，于暗環(huán)境下再進(jìn)行接種發(fā)酵，接種量為10%，發(fā)酵時間20 天，發(fā)酵溫度為35 °C。
[0055]〈實施例7>
[0056] 一種互花米草木質(zhì)素生物降解方法，包括以下步驟：
[0057] S1、配置PDA培養(yǎng)基，由以下重量份數(shù)的原料制成:選取土豆6000份、葡萄糖600份、 瓊脂450份、純凈水30000份，在90°C熬制成稀狀物，再加入KH2P04 80份、MgS〇4 · 7H20 45份、 維生素 B1 0.012份，混勻后調(diào)節(jié)pH至6.0左右，即得PDA培養(yǎng)基；
[0058] S2、將黃孢原毛平革菌菌種劃線至roA培養(yǎng)基上，在25 °C暗環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)5天，之 后在3 C冷減備用；
[0059] S3、將互花米草風(fēng)干至含水量低于18%后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)24%的尿素水溶 液噴灑在粉粒上并攪拌均勻，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比為〇. 26:1，尿素水溶液噴灑前加 入檸檬酸、蘋果酸和磷酸二氫銨溶解在尿素水溶液中，檸檬酸、蘋果酸、磷酸二氫銨與尿素 水溶液質(zhì)量比為〇. 01: 〇. 01: 〇. 02:100，尿素水溶液噴灑后在粉粒中加入質(zhì)量為粉粒質(zhì)量 1 %的添加物形成第一混合物，所述添加物為質(zhì)量比3:1:2的豆渣、菜籽餅和脫脂奶液，第一 混合物壓實密封5天進(jìn)行氨化處理的溫度控制為30°C，第一混合物氨化處理后取出選擇陰 涼通風(fēng)處放置12h;
[0060] S4、配置微量元素混合液，微量元素混合液中各組分摩爾濃度如下NaMo〇4 · 2H20 3.6X10-5mol/L，MgS〇4.7H20 1.8X10-2mol/L，MnS〇4.H20 1.35 X 10-2mol/L，NaCl 1.5X 10-2mol/L，F(xiàn)eS〇4*7H20 3.46X 10-4mol/L，CoCl2 7.62X 10-4mol/L，CaCl2 8.7X10-4mol/L， ZnS〇4.H20 3.35 X 10-4mol/L，CuS〇4.7H2〇 3.2X10-5mol/L，AlK(S〇4)2.7H20 1.9X10- 5mol/L，H3B〇3l · 4 X 10-4mol/L以及氨基乙酸7 · 5 X 10-3mol/L;
[0061] S5、配置基礎(chǔ)培養(yǎng)液，首先配置第一培養(yǎng)液，第一培養(yǎng)液中各組分摩爾濃度如下 KH2P〇4 1.35X10-2mol/L，MgS〇4,7H20 1.96X 10-3mol/L以及CaCl2,7H2〇 5.9X10-4mol/L， 然后于第一培養(yǎng)液中加入維生素 Bl，每升第一培養(yǎng)液維生素 B1的加入量為120mg，再加入第 一培養(yǎng)液總質(zhì)量〇. 06 %的吐溫-80，最后加入S4中微量元素混合液，第一培養(yǎng)液與微量元素 混合液體積比為9:1，混勻后即為基礎(chǔ)培養(yǎng)液；
[0062] S6、接種黃孢原毛平革菌前S3中第一混合物在氨化處理后需與基礎(chǔ)培養(yǎng)液混合形 成第二混合物，基礎(chǔ)培養(yǎng)液與第一混合物質(zhì)量比為1:10,基礎(chǔ)培養(yǎng)液均勻噴灑于第一混合 物表面，然后將第二混合物進(jìn)行高壓滅菌，于暗環(huán)境下再進(jìn)行接種發(fā)酵，接種量為5%，發(fā)酵 時間5天，發(fā)酵溫度為30 °C。
[0063]〈實施例8>
[0064] 一種互花米草木質(zhì)素生物降解方法，包括以下步驟：
[0065] S1、配置PDA培養(yǎng)基，由以下重量份數(shù)的原料制成:選取土豆5000份、葡萄糖500份、 瓊脂400份、純凈水30000份，在100°C熬制成稀狀物，再加入KH2P04 70份、MgS〇4· 7H20 40 份、維生素 B1 0.01份，混勻后調(diào)節(jié)pH至6.0左右，即得PDA培養(yǎng)基；
[0066] S2、將黃孢原毛平革菌菌種劃線至TOA培養(yǎng)基上，在28 °C暗環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)6天，之 后在4 C冷減備用；
[0067] S3、將互花米草風(fēng)干至含水量低于18%后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)16%的尿素水溶 液噴灑在粉粒上并攪拌均勻，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比為〇. 28:1，尿素水溶液噴灑前加 入檸檬酸、蘋果酸和磷酸二氫銨溶解在尿素水溶液中，檸檬酸、蘋果酸、磷酸二氫銨與尿素 水溶液質(zhì)量比為〇. 01: 〇. 01: 〇. 02:100，尿素水溶液噴灑后在粉粒中加入質(zhì)量為粉粒質(zhì)量 1.2%的添加物形成第一混合物，所述添加物為質(zhì)量比3:1:2的豆渣、菜籽餅和脫脂奶液，第 一混合物壓實密封7天進(jìn)行氨化處理的溫度控制為33°C，第一混合物氨化處理后取出選擇 陰涼通風(fēng)處放置13h;
[0068] S4、配置微量元素混合液，微量元素混合液中各組分摩爾濃度如下NaM〇04 · 2H20 3.8X10-5mol/L，MgS〇4.7H20 1.9X10-2mol/L，MnS〇4.H20 1.41X10-2mol/L，NaCl 1.6X 10-2mol/L，F(xiàn)eS〇4*7H20 3.51 X 10-4mol/L，CoCl2 7.7X10-4mol/L，CaCl2 8.9X10-4mol/L， ZnS〇4.H20 3.41 X 10-4mol/L，CuS〇4.7H2〇 3.5X10-5mol/L，AlK(S〇4)2.7H20 2.0X 10- 5mol/L，H3B〇3l · 5 X 10-4mol/L以及氨基乙酸7 · 6 X 10-3mol/L;
[0069] S5、配置基礎(chǔ)培養(yǎng)液，首先配置第一培養(yǎng)液，第一培養(yǎng)液中各組分摩爾濃度如下 KH2P〇4 1.40X10-2mol/L，MgS〇4,7H20 2.01 X 10-3mol/L以及CaCl2,7H2〇 6.2X10-4mol/L， 然后于第一培養(yǎng)液中加入維生素 Bl，每升第一培養(yǎng)液維生素 B1的加入量為llOmg，再加入第 一培養(yǎng)液總質(zhì)量〇. 05 %的吐溫-80，最后加入S4中微量元素混合液，第一培養(yǎng)液與微量元素 混合液體積比為9:1，混勻后即為基礎(chǔ)培養(yǎng)液；
[0070] S6、接種黃孢原毛平革菌前S3中第一混合物在氨化處理后需與基礎(chǔ)培養(yǎng)液混合形 成第二混合物，基礎(chǔ)培養(yǎng)液與第一混合物質(zhì)量比為1:10,基礎(chǔ)培養(yǎng)液均勻噴灑于第一混合 物表面，然后將第二混合物進(jìn)行高壓滅菌，于暗環(huán)境下再進(jìn)行接種發(fā)酵，接種量為15%，發(fā) 酵時間12天，發(fā)酵溫度為33°C，發(fā)酵過程中每隔5天噴灑一次配方液，配方液中包括以下重 量份數(shù)的原料，木醋液1.5份、蘋果酸2.5份、蜂蜜10份以及純凈水100份，噴灑過程中不斷上 下翻動接種了黃孢原毛平革菌的第二混合物使第二混合物濕度均勻，噴灑完成后第二混合 物濕度達(dá)到53 %。
[0071]〈實施例9>
[0072] 一種互花米草木質(zhì)素生物降解方法，包括以下步驟：
[0073] S1、配置PDA培養(yǎng)基，由以下重量份數(shù)的原料制成:選取土豆4000份、葡萄糖400份、 瓊脂300份、純凈水30000份，在110°C熬制成稀狀物，再加入KH2P04 60份、MgS〇4· 7H20 30 份、維生素 B1 0.008份，混勻后調(diào)節(jié)pH至6.0左右，即得PDA培養(yǎng)基；
[0074] S2、將黃孢原毛平革菌菌種劃線至TOA培養(yǎng)基上，在30 °C暗環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)7天，之 后在3 C冷減備用；
[0075] S3、將互花米草風(fēng)干至含水量低于18%后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)6%的尿素水溶液 噴灑在粉粒上并攪拌均勻，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比為〇. 31:1，尿素水溶液噴灑前加入 檸檬酸、蘋果酸和磷酸二氫銨溶解在尿素水溶液中，檸檬酸、蘋果酸、磷酸二氫銨與尿素水 溶液質(zhì)量比為0.01:0.01:0.02:100,尿素水溶液噴灑后在粉粒中加入質(zhì)量為粉粒質(zhì)量 1.5%的添加物形成第一混合物，所述添加物為質(zhì)量比3:1:2的豆渣、菜籽餅和脫脂奶液，第 一混合物壓實密封8天進(jìn)行氨化處理的溫度控制為35 °C，第一混合物氨化處理后取出選擇 陰涼通風(fēng)處放置14h;
[0076] S4、配置微量元素混合液，微量元素混合液中各組分摩爾濃度如下NaM〇04 · 2H20 3.6X10-5mol/L，MgS〇4.7H20 1.8X10-2mol/L，MnS〇4.H20 1.35 X 10-2mol/L，NaCl 1.5X 10-2mol/L，F(xiàn)eS〇4*7H20 3.46X 10-4mol/L，CoCl2 7.62X 10-4mol/L，CaCl2 8.7X10-4mol/L， ZnS〇4.H20 3.35X 10-4mol/L，CuS〇4*7H2〇 3.2X10-5mol/L，AlK(S〇4)2*7H20 1.9X10-5， H3BO31 · 4 X 10-4mo 1 /L 以及氨基乙酸 7 · 5 X 10-3mo 1 /L;
[0077] S5、配置基礎(chǔ)培養(yǎng)液，首先配置第一培養(yǎng)液，第一培養(yǎng)液中各組分摩爾濃度如下 KH2P〇4 1.35X10-2mol/L，MgS〇4,7H20 1.96X 10-3mol/L以及CaCl2,7H2〇 5.9X10-4mol/L， 然后于第一培養(yǎng)液中加入維生素 Bl，每升第一培養(yǎng)液維生素 B1的加入量為100mg，再加入第 一培養(yǎng)液總質(zhì)量〇. 05 %的吐溫-80，最后加入S4中微量元素混合液，第一培養(yǎng)液與微量元素 混合液體積比為9:1，混勻后即為基礎(chǔ)培養(yǎng)液；
[0078] S6、接種黃孢原毛平革菌前S3中第一混合物在氨化處理后需與基礎(chǔ)培養(yǎng)液混合形 成第二混合物，基礎(chǔ)培養(yǎng)液與第一混合物質(zhì)量比為1:10,基礎(chǔ)培養(yǎng)液均勻噴灑于第一混合 物表面，然后將第二混合物進(jìn)行高壓滅菌，于暗環(huán)境下再進(jìn)行接種發(fā)酵，接種量為10%，發(fā) 酵時間20天，發(fā)酵溫度為35°C，發(fā)酵過程中每隔5天噴灑一次配方液，配方液中包括以下重 量份數(shù)的原料，木醋液2份、蘋果酸3份、蜂蜜12份以及純凈水100份，噴灑過程中不斷上下翻 動接種了黃孢原毛平革菌的第二混合物使第二混合物濕度均勻，噴灑完成后第二混合物濕 度達(dá)到56 %。
[0079]〈對比試驗〉
[0080] 將互花米草風(fēng)干至含水量低于18%后碎成的粉粒為對比例1，將互花米草風(fēng)干至 含水量低于18%后碎成粉粒，然后暗環(huán)境下接種黃孢原毛平革菌進(jìn)行常規(guī)發(fā)酵處理作為對 比例2,將實施例與對比例中互花米草木質(zhì)素降解后木質(zhì)素的含量進(jìn)行對比，得出如下數(shù) 據(jù)：
[0081 ]表1各實施例對互花米草生物降解木質(zhì)素的影響 [0082]
[0083]從表1可看出，風(fēng)干后互花米草粉粒木質(zhì)素含量為36.8%，在經(jīng)過常規(guī)方法接種發(fā) 酵處理后木質(zhì)素含量下降到24.5%，按本發(fā)明對互花米草粉粒先進(jìn)行氨化處理再接種黃孢 原毛平革菌發(fā)酵，顯著降低互花米草木質(zhì)素含量，使木質(zhì)素含量低于17.2%，基礎(chǔ)培養(yǎng)液中 的維生素 B1和其它營養(yǎng)物質(zhì)能促進(jìn)木質(zhì)素的生物降解，使木質(zhì)素含量降到12.1 %~ 15.0 %，檸檬酸、蘋果酸和磷酸二氫銨，豆渣、菜籽餅和脫脂奶液，木醋液、蘋果酸和蜂蜜的 加入進(jìn)一步促進(jìn)生物降解，降低木質(zhì)素含量至10.5%~11.7%，同時提高了互花米草的飼 用效率。
[0084]盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列 運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地 實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限 于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的實施例。
【主權(quán)項】
1. 一種互花米草木質(zhì)素生物降解方法，其特征在于：將互花米草風(fēng)干至含水量低于 18%后碎成粉粒，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)6%~24%的尿素水溶液噴灑在粉粒上并攪拌均勻，然后壓實 密封5~8天進(jìn)行氨化處理，尿素水溶液與粉粒的質(zhì)量比為0.26~0.31:1，氨化完成后在暗 環(huán)境下接種黃孢原毛平革菌進(jìn)行發(fā)酵處理，接種量為5%~15%，發(fā)酵時間5~20天。2. 如權(quán)利要求1所述的互花米草木質(zhì)素生物降解方法，其特征在于，黃孢原毛平革菌在 接種前的培養(yǎng)具體為:將黃孢原毛平革菌菌種劃線至PDA培養(yǎng)基上，在25~30°C暗環(huán)境中進(jìn) 行培養(yǎng)5~7天，之后在3~4°C冷藏備用； 其中，所述PDA培養(yǎng)基由以下重量份數(shù)的原料制成:選取土豆4000~6000份、葡萄糖400 ~600份、瓊脂300~450份、純凈水30000份，在90~110°C熬制成稀狀物，再加入KH2P〇4 60~ 80份、MgS〇4· 7H20 30~45份、維生素 B1 0.008~0.012份，混勻后調(diào)節(jié)pH至6.0左右，即得 PDA培養(yǎng)基。3. 如權(quán)利要求1所述的互花米草木質(zhì)素生物降解方法，其特征在于，尿素水溶液噴灑前 加入檸檬酸、蘋果酸和磷酸二氫銨溶解在尿素水溶液中，檸檬酸、蘋果酸、磷酸二氫銨與尿 素水溶液質(zhì)量比為〇 · 01: · 01: · 02:100。4. 如權(quán)利要求1所述的互花米草木質(zhì)素生物降解方法，其特征在于，尿素水溶液噴灑后 在粉粒中加入質(zhì)量為粉粒質(zhì)量1~1.5%的添加物形成第一混合物，所述添加物為質(zhì)量比3: 1:2的豆渣、菜籽餅和脫脂奶液，第一混合物壓實密封5~8天進(jìn)行氨化處理的溫度控制為30 ~35°C，第一混合物氨化處理后取出選擇陰涼通風(fēng)處放置12~14h。5. 如權(quán)利要求4所述的互花米草木質(zhì)素生物降解方法，其特征在于，接種黃孢原毛平革 菌前第一混合物在氨化處理后需與基礎(chǔ)培養(yǎng)液混合形成第二混合物，基礎(chǔ)培養(yǎng)液與第一混 合物質(zhì)量比為1:10,基礎(chǔ)培養(yǎng)液均勻噴灑于第一混合物表面，然后將第二混合物進(jìn)行高壓 滅菌，于暗環(huán)境下再進(jìn)行接種發(fā)酵，發(fā)酵溫度為30~35°C; 其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液配置方法如下:首先配置第一培養(yǎng)液，第一培養(yǎng)液中各組分摩爾 濃度如下冊2?04 1.35\10-2~1.47\10-2111〇1/1，]\%504.7!120 1.96\10-3~2.03\10-3111〇1/ L以及CaCl2 · 7H20 5.9X 10-4~6.8\10-4111〇1/1，然后于第一培養(yǎng)液中加入維生素81，每升 第一培養(yǎng)液維生素 B1的加入量為100~120mg，再加入第一培養(yǎng)液總質(zhì)量0.05%~0.06%的 吐溫-80，最后加入微量元素混合液，第一培養(yǎng)液與微量元素混合液體積比為9:1，混勻后即 為基礎(chǔ)培養(yǎng)液。6. 如權(quán)利要求5所述的互花米草木質(zhì)素生物降解方法，其特征在于，所述微量元素混合 液中各組分摩爾濃度如下似]?〇04.2!120 3.6\10-5~4.1\10-5111〇1/1，]\%504.7!1201.8\10 - 2~2X10-2mol/L，MnS〇4 · H20 1.35 X 10-2~1.47X10-2mol/L，NaCl 1.5X10-2~1.7X10- 2mol/L，F(xiàn)eS〇4 · 7H20 3.46X 10-4~3.59X10-4mol/L，CoCl2 7.62X 10-4~7.75X10-4mol/L， CaCl28.7X 10-4~9.0X 10-4mol/L，ZnS〇4 · H2O 3.35X 10-4~3.48X 10-4mol/L，CuS〇4 · 7H2O3 · 2 X 10-5~4 · 0 X 10-5mol/L，AlK(S〇4)2 · 7H2O 1 · 9 X 10-5~2 · 1 X 10-5mol/L，H3B〇3l · 4 X 10-4~1 · 6 X 10-4mol/L以及氨基乙酸7 · 5 X 10-3~7 · 8 X 10-3mol/L。7. 如權(quán)利要求5所述的互花米草木質(zhì)素生物降解方法，其特征在于，發(fā)酵過程中每隔5 天噴灑一次配方液，配方液中包括以下重量份數(shù)的原料:木醋液1~2份、蘋果酸2~3份、蜂 蜜8~12份以及純凈水100份，噴灑過程中不斷上下翻動接種了黃孢原毛平革菌的第二混合 物使第二混合物濕度均勻，噴灑完成后第二混合物濕度達(dá)到50~56%。
【文檔編號】A23K10/30GK106036007SQ201610401814
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月8日
【發(fā)明人】莫竹承
【申請人】莫竹承