以香果、香葉為原料制備的香辛料及其在抑制單增李斯特菌中的應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種以香果、香葉為原料制備的香辛料，是通過以下方法制備得到的：(1)粉碎：取香果和香葉，分別用粉碎機粉碎至顆粒直徑為0.1mm；(2)取上述粉碎完的香果和香葉，分別置于蒸餾瓶中，加入乙酸乙酯，料液比1:10，在60℃水浴條件下浸提5小時；(3)抽濾：將浸提液抽濾后得到濾液；(4)濃縮：蒸發(fā)濃縮，得到濃縮浸膏，即分別得到香果提取物、香葉提取物；將香果提取物與香葉提取物按質量比1:1的比例混合，即得。通過上述方法制備得到的香辛料，經實驗證明，其對豬肉中的單增李斯特菌有抑制作用，且取得了增效作用，因此，可以作為豬肉的防腐劑進行應用，也可以作為抑菌劑進行應用。
【專利說明】
以香果、香葉為原料制備的香辛料及其在抑制單増李斯特菌 中的應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及一種以香果、香葉為原料制備的香辛料及其在抑制單增李斯特菌中的 應用。
【背景技術】
[0002] 在食品調味調香中使用的芳香植物的干燥粉末或精油被人們稱為香辛料。香辛料 主要來自植物的種子、莖葉、花蕾、果實等其他部位，有獨特的刺激性味道，如香、甜、苦、辣 等味道，有抗氧化、著色、防腐抗菌以及其他生理藥理作用，此外，還有使食品風味更好和香 味更濃的作用。香辛料有以下的特點：絕大多數(shù)香辛料具有一定的藥理作用;絕大多數(shù)香辛 料含有揮發(fā)性物質;有典型的滋味或香氣;在正常使用量(一般不做限量）內對人體功能不 會造成損害，或對身體功能有幫助。
[0003] 香果，又名川芎，傘形科、藁本屬多年生草本植物，高40~60厘米。發(fā)達的根莖形成 不規(guī)則的結節(jié)狀拳形團塊，有強烈的香氣。根莖豎立，形狀為圓柱形，條紋縱向發(fā)展，上部大 多是分枝，下部莖節(jié)脹大呈盤狀(苓子）。大多在路邊、樹林邊緣、山地疏林或以竹類為優(yōu)勢 的開敞的混交林中、海拔700-1000米生長，而很少在密林中生長。主產四川（灌縣），在其他 地區(qū)也有培育，比如云南、浙江、江蘇、陜西、廣西、貴州、江西、湖北、甘肅、內蒙古、河北等省 區(qū)。香辛料的根莖具有藥用價值，可以祛濕，活血化瘀，治療頭痛頭暈、腹部疼痛、癰疽瘡瘍、 閉經、難產等癥狀。
[0004] 香葉，也可稱為月桂葉、香桂葉、桂葉、天竺桂等。香葉為樟科月屬常綠小喬木，它 的葉片是烹調中的調味料。香葉為小喬木或綠灌木，主要生長在南歐地中海沿岸，這兩種香 葉的顏色都呈現(xiàn)為綠色，形狀為長橢圓披針形，長約三英寸，葉面是光滑的，味道有辛辣及 強烈苦味。歐洲人常用香葉作為調味料和餐點裝飾，可以和肉食、蔬菜、湯作為搭配，有健胃 保胃的功能。
[0005] 肉類保鮮是當今社會面臨的一大難題，人們在肉類中添加防腐劑來維持肉類的新 鮮，防止其變質腐敗，最終推遲肉類的貨架期。但是化學防腐劑對身體會造成一定的危害， 損害身體健康。因此，選出安全可靠的天然防腐劑刻不容緩。

【發(fā)明內容】

[0006] 針對上述現(xiàn)有技術，本發(fā)明提供了一種以香果、香葉為原料制備的香辛料，通過實 驗證明，本發(fā)明的香辛料，對豬肉中的單增李斯特菌有較好的抑菌效果，可作為天然防腐劑 進行應用。
[0007] 本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的：
[0008] -種以香果、香葉為原料制備的香辛料，是通過以下方法制備得到的：
[0009] (1)粉碎:取香果和香葉，分別用粉碎機粉碎至顆粒直徑為0.1_;
[0010] (2)取上述粉碎完的香果和香葉，分別置于蒸餾瓶中，加入乙酸乙酯，料液比1:10 (單位g:ml)，在60°C水浴條件下浸提5小時；
[0011] (3)抽濾:將浸提液抽濾后得到濾液；
[0012] (4)濃縮:使用水浴鍋于通風櫥中蒸發(fā)濃縮，得到除去全部溶劑的濃縮浸膏，即分 別得到香果提取物、香葉提取物;將香果提取物與香葉提取物按質量比1:1的比例混合，即 得。
[0013] 通過上述方法制備得到的香辛料，經實驗證明，其對豬肉中的單增李斯特菌有抑 制作用，且取得了增效作用，因此，可以作為豬肉的防腐劑進行應用，也可以作為抑菌劑進 行應用。
【附圖說明】
[0014] 圖1:25 °C時香果提取物對豬肉中單增李斯特菌的抑菌效果圖。
[0015] 圖2:4°C時香果提取物對豬肉中單增李斯特菌的抑菌效果圖。
[0016]圖3:25°C時香葉提取物對豬肉中單增李斯特菌的抑菌效果圖。
[0017] 圖4:4°C香葉提取物對豬肉中單增李斯特菌的抑菌效果圖。
[0018] 圖5:25°C時香果香葉復配物對豬肉中單增李斯特菌的抑菌效果圖。
[0019] 圖6:4°C時香果香葉復配物對豬肉中單增李斯特菌的抑菌效果圖。
[0020] 圖7:25°C時熟肉中單增李斯特菌的抑菌效果圖。
[0021] 圖8:4°C時熟肉中單增李斯特菌的抑菌效果圖。
【具體實施方式】
[0022]下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0023]下述實施例中所涉及的儀器、試劑、材料等，若無特別說明，均為現(xiàn)有技術中已有 的常規(guī)儀器、試劑、材料等，可通過正規(guī)商業(yè)途徑獲得。下述實施例中所涉及的實驗方法，檢 測方法等，若無特別說明，均為現(xiàn)有技術中已有的常規(guī)實驗方法，檢測方法等。
[0024]實施例1香辛料的研究 [0025] 1研究目的和意義
[0026]隨著人們對食品越來越高的需求，食品防腐也變得越來越重要。作為天然防腐劑 的香辛料，更引起了人們的高度重視。香辛料在中國乃至世界的烹調業(yè)中占有重要地位，利 用香辛料的抗菌防腐及抗氧化作用可以相應減少或不加防腐劑抗氧化劑等化學添加劑。香 辛料的調味作用是食品風味的關鍵，隨著世界經濟的發(fā)展，對香辛料的要求更高，香辛料也 會必將會有更廣闊的應用前景。
[0027] 2材料與方法
[0028] 2.1實驗材料與設備
[0029] 2.1.1實驗材料
[0030] 主要原料：如下：
[0031]香果，干制，購自徐州農貿市場。
[0032]香葉，干制，購自徐州農貿市場。
[0033] 主要試劑:如下：
[0034]無水乙醇，分析純，上海博河精細化學品有限公司。
[0035] 乙酸乙酯，分析純，上海蘇懿化學試劑有限公司。
[0036] 超純水，分析純，化學與食品實驗室。
[0037] 胰蛋白胨大豆瓊脂，生化試劑，上海盛思生化科技有限責任公司。
[0038] 胰蛋白胨大豆肉湯，生化試劑，北京陸橋技術有限責任公司。
[0039] 純化瓊脂粉，生化試劑，上海宜興市有信生物有限公司。
[0040] 氯化鈉，分析純，江蘇騰獅化工廠 [0041 ] 2.1.2實驗設備:如下：
[0042] 旋轉蒸發(fā)儀，上海申生科技有限公司。
[0043] 循環(huán)水式真空栗，鞏義市英峪予華儀器廠。
[0044] 數(shù)顯式電熱恒溫水浴鍋，上海躍進醫(yī)療器械廠。
[0045] 電熱恒溫干燥箱，上海躍進醫(yī)療器械廠。
[0046] JA2003N型電子天平，上海精密儀器有限公司。
[0047]微型植物粉碎機，天津市泰斯特儀器有限公司。
[0048] DNP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海精宏實驗設備有限公司。
[0049] SW-CJ-IC標準型雙人凈化工作臺，蘇州凈化設備廠。
[0050] 2.1.3供試菌種:如表1所示。
[0051 ] 表1供試菌種
[0052]
[0054] 2.2實驗方法
[0055] 2.2.1提取工藝
[0050]流程為：香果、香葉（干制）-粉碎-稱量-乙酸乙酯60 °C浸提-抽濾-蒸發(fā)濃縮 ^成品。
[0057] 步驟如下：
[0058] (1)粉碎:取香果或香葉，用粉碎機粉碎到顆粒直徑為0.1mm，用篩子篩選(顆粒太 大，提取率不高，也不利于有效成分溶出;顆粒太小，各種雜質的溶出度也會增高，而且不利 于過濾、濃縮和分離）。
[0059] (2)取30g粉碎完的香果或香葉，置于蒸餾瓶中，加入300ml乙酸乙酯，在60°C水浴 條件下浸提5小時。
[0060] (3)抽濾:將浸提液抽濾后得到濾液。
[0061] (4)濃縮:使用水浴鍋于通風櫥中蒸發(fā)濃縮，得到濃縮浸膏（除去全部溶劑），即分 別得到香果提取物、香葉提取物。
[0062] (5)保存:提取好后，放于離心管中，121°C高溫滅菌，保存。
[0063] 2.2.2抑菌作用的研究
[0064] 2.2.2.1實驗用培養(yǎng)基的配制
[0065] 胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（用于細菌培養(yǎng)）454348，水10001^，？!17.4~7.6。
[0066] 配制生理鹽水:氯化鈉100g，水900ml。
[0067] 均于121Γ高溫滅菌。
[0068] 2.2.2.2菌懸液制備
[0069] 1.菌種的活化。將供試菌種從冷凍中取出，放入無菌操作臺中解凍5分鐘左右。點 燃酒精燈，并用酒精棉消毒雙手和擦凈臺面。將接種環(huán)在酒精燈火焰外焰燒至通紅，冷卻， 挑取2-3次供試菌種，接入培養(yǎng)液中進行活化，置于37°C水浴中恒溫振蕩培養(yǎng)。
[0070] 2.菌懸液的制備。在無菌條件下，在9.5ml的生理鹽水中加入0.5ml活化好的菌種， 稀釋成10倍的稀釋液，得到菌懸液。
[0071] 2.2.2.3在純培養(yǎng)中的抑制
[0072] 濾紙片的制備及處理:將定性濾紙對折2-3次，用打孔器制備出6mm的圓片，放入離 心管中密封，在121°C的高壓滅菌鍋中干熱滅菌20min后放于置于烘箱中烘干，備用。
[0073] 在無菌操作臺中，用滅菌鑷子夾取烘干后的滅菌濾紙圓片，將其放到香辛料提取 物中浸泡2h，以無菌水浸過的濾紙片做空白對照。濾紙片經充分浸泡后取出晾干，備用。
[0074] 在無菌操作臺中，將滅過菌的TSA固體培養(yǎng)基倒入同樣滅過菌的干凈培養(yǎng)皿，待其 完全冷卻凝固后，倒置放于無菌操作臺中。在酒精燈周圍分別移取各菌懸液O.lmL于培養(yǎng)基 中，用涂布器涂布均勻。
[0075] 在無菌操作臺中，將浸泡過香辛料提取物的四種不同的濾紙片和空白濾紙片分別 貼在一個平板上，之間間隔一定距離，每種菌做三個平行。倒置于恒溫培養(yǎng)箱中，在適宜溫 度下培養(yǎng)24h。觀察測量抑菌圈直徑大小。
[0076] 2.2.2.4在豬肉中的抑制研究
[0077] 實驗準備:在無菌操作臺中用天平稱取新鮮豬肉10g共40份(盡量做到肉塊大小均 勻），將豬肉置于高溫滅菌過的大燒杯中在無菌環(huán)境下加熱煮熟l_2h，確保達到殺菌效果。
[0078] 材料處理:將香辛料提取物分為香果提取物、香葉提取物和香果香葉混合提取物 進行研究，另外做一組空白組作為對照試驗。在無菌操作臺中分別取稀釋至1〇 5濃度的三代 以后純菌液0.5ml滴加在每塊煮熟的豬肉上，用手揉搓10-20min。將40份豬肉平均分成八 份，其中兩份在涂上菌液揉搓后作為空白對照，一份每塊分別裝入無菌均質袋中標上〇d、 1(1、2(1、3(1、4(1放入25°(：恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，另一份每塊分別裝入無菌均質袋標上0(1、2(1、4(1、 5d、6d放入冰箱4°C冷藏。在剩下的豬肉中取兩份，在每塊豬肉上滴加50mg的香果提取物，揉 搓10-20min。裝入無菌均質袋中，照空白組一樣，一份標上0d、1 d、2d、3d、4d放入25 °C恒溫培 養(yǎng)箱中培養(yǎng)，另一份裝入無菌均質袋中標上〇(1、2(1、4(1、5(1、6(1放入4°(：冰箱冷藏。再取兩份豬 肉按照之上步驟在每塊豬肉上滴加香葉提取物50mg，揉搓10-20min以后標上記號分別放入 25°C和4°C保存。最后兩份的每塊豬肉上是分別滴加香果提取物25mg和香葉提取物25mg進 行揉搓10_20min以后放入無菌均質袋標記分別放入25°C和4°C保存。
[0079]抑菌研究：處理完所有豬肉之后取出標有0d的無菌均質袋，在袋中倒入90ml滅過 菌的生理鹽水，放入拍打機中拍打直至將豬肉拍爛拍碎，用移液槍移取拍打液進行稀釋接 種到TSA上培養(yǎng)，隔天進行菌落總數(shù)的計算。將剩余的袋裝豬肉放好根據(jù)袋上的標記日期測 定數(shù)據(jù)，25°C的每24h測一次，4°C每24h測一次共測兩次，之后的每48h測一次。
[0080] 3實驗結果
[0081 ] 3.1香辛料提取物在純培養(yǎng)環(huán)境中的抑菌效果
[0082]由抑菌實驗表明，天然香辛料對熟肉中單增李斯特菌有抑菌效果，其中香果香葉 混合物抑菌效果最好，香果提取物抑菌效果其次，香葉的抑菌效果最差。
[0083] 3.1.1香果提取物對各種供試菌種的最大抑菌圈數(shù)據(jù)
[0084]根據(jù)實驗結果可知（如表2所示），香果提取物對各種供試菌種均有良好的抑菌效 果，其中腸炎沙門氏菌和耶爾森氏菌屬的抑菌效果最為明顯，單增李斯特菌的抑菌效果也 較為明顯。
[0085] 表2香果提取物抑菌效果(抑菌圈直徑mm)
[0086]
[0087] 3.1.2香葉提取液對各種供試菌種的最大抑菌圈數(shù)據(jù)
[0088] 香葉提取液對各種供試菌種均有抑菌效果（如表3所示），但是沒有香果的抑菌效 果好。其中熒光假單胞菌和耶爾森氏菌屬的抑菌效果較其他菌種而言略高。單增李斯特菌 的抑菌效果一般。
[0089]表3香葉提取物抑菌效果(抑菌圈直徑mm)
[0090]
[0091 ] 3.2香辛料提取物在豬肉中對單增李斯特菌的抑制作用
[0092] 3.2.1香果提取物對豬肉中單增李斯特菌的抑制作用，如表4、圖1所示。
[0093] 3.2.1.1香果提取物在25°C情況下抑菌效果
[0094]表4香果提取物中的菌落總數(shù)(個/ml)
[0095]
[0096] 由圖1可知，25°C時經過香果提取物處理的豬肉上單增李斯特菌的生長速度比沒 處理的空白組的豬肉上的單增李斯特菌生長速度明顯要慢，說明在25°C情況下香果提取物 對單增李斯特菌有抑制作用。
[0097] 3.2.1.2香果提取物在4°C情況下抑菌效果，如表5、圖2所示。
[0098] 由圖2可知，4°C時經過香果提取物處理的豬肉上單增李斯特菌的生長速度比沒處 理的空白組的豬肉上的慢，說明在4°C情況下香果提取物對單增李斯特菌有抑制作用。
[0099] 將25°C情況下的抑菌效果圖與4°C情況下的抑菌效果圖作對比，可知在4°C情況 下，經香果提取物處理過的豬肉中單增李斯特菌的生長速度更為緩慢，同樣抑菌效果更好。
[0100] 表5香果提取物中的菌落總數(shù)(個/ml)
[0101]
[0102] 3.2.2香葉提取物對豬肉中單增李斯特菌的抑制作用
[0103] 3.2.2.1香葉提取物在25 °C情況下的抑菌效果，如表6、圖3所示。
[0104] 表6香葉提取物中的菌落總數(shù)(個/ml)
[0105]
[0106] 由圖3可知，25°C時經過香葉提取物處理的豬肉上單增李斯特菌的生長速度比沒 處理的空白組的豬肉上的單增李斯特菌的生長速度慢，說明在25°C情況下香葉提取物對單 增李斯特菌有抑制作用，但是抑菌效果并不明顯。
[0107] 3.2.2.2香葉提取物在4°C情況下的抑菌效果，如表7、圖4所示。
[0108] 表7香葉提取物中的菌落總數(shù)(個/ml)
[0109]
[0110] 由圖4可知，4°C時經過香葉提取物處理的豬肉上單增李斯特菌的生長速度比沒處 理的空白組的豬肉上的單增李斯特菌生長速度要慢，說明在4 °C情況下香葉提取物對單增 李斯特菌有抑制作用。
[0111] 將25°C情況下的抑菌效果圖與4°C情況下的抑菌效果圖作對比，可知在4°C情況 下，經香葉提取物處理過的豬肉中單增李斯特菌的生長速度更為緩慢，同樣抑菌效果更好。 [0112] 3.2.3香果香葉混合提取物對豬肉中單增李斯特菌的抑制作用
[0113] 香果香葉混合提取物對各種供試菌種均有良好的抑菌效果，效果也是最強的。
[0114] 3.2.3.1香果香葉混合提取物25°C情況下的抑菌效果，如表8、圖5所示。
[0115] 表8香果香葉混合提取物中的菌落總數(shù)(個/ml)
[0116]
[0117] 由圖5可知，25°C情況下經過香果香葉復配物處理的豬肉中單增李斯特菌的生長 速度比未經處理過的空白組豬肉上單增李斯特菌的生長速度慢很多，說明香果香葉復配物 在25 °C情況下對單增李斯特菌有明顯的抑菌效果。
[0118] 3.2.3.2香果香葉混合提取物在4°C情況下的抑菌效果，如表9、圖6所示。
[0119] 由圖6可知，4°C時經過香果香葉復配物處理的豬肉上單增李斯特菌的生長速度比 沒處理的空白組的豬肉上的單增李斯特菌生長速度要慢，說明在4°C情況下香果香葉復配 物對單增李斯特菌有抑制作用。將25°C情況下的抑菌效果圖與4°C情況下的抑菌效果圖作 對比，可知在4°C情況下，經香果香葉復配物處理過的豬肉中單增李斯特菌的生長速度更為 緩慢，同樣抑菌效果更好。
[0120] 表9香果香葉混合提取物中的菌落總數(shù)(個/ml)
[0121]
[0122] 3.3總結對比
[0123] 根據(jù)實驗結果，測定25°C環(huán)境下熟肉中單增李斯特菌的菌落生長總數(shù)的數(shù)據(jù)，繪 制圖如圖7所示。
[0124] 由圖7可知，在25°C時經過香葉提取物處理的豬肉中單增李斯特菌的生長速度較 快，香果次之，香果香葉復配物最慢，而未任何處理的豬肉中單增李斯特菌的生長速度作對 比。說明香果香葉復配物對豬肉中單增李斯特菌的抑制效果最好，香果其次，香葉最差。
[0125] 根據(jù)實驗結果，測定4°C環(huán)境下熟肉中單增李斯特菌的菌落生長總數(shù)的數(shù)據(jù)，繪制 圖如圖8所示。
[0126] 由圖8可知，在4°C時經過香葉提取物處理的豬肉中單增李斯特菌的生長速度較 快，香果次之，香果香葉復配物最慢，而未任何處理的豬肉中單增李斯特菌的生長速度作對 比。說明香果香葉復配物對豬肉中單增李斯特菌的抑制效果最好，香果其次，香葉最差。
[0127] 3.4討論分析
[0128] 由以上圖表可以看出，香辛料提取物都對熟肉中單增李斯特菌的生長有抑制作 用。以煮熟未經處理的豬肉做空白，經過香果香葉復配物處理的熟豬肉上，單增李斯特菌的 生長得到較好抑制；香果的抑制效果次之;香葉的抑制效果最差。在4 °C下香辛料提取物的 抑制效果要比在25°C下的抑制效果要好，因為在低溫環(huán)境下，單增李斯特菌生長更緩慢，從 而得到了更好的抑制效果。
[0129] 香果香葉復配物對熟肉中單增李斯特菌的抑制效果最好，是協(xié)同增效的作用。香 果和香葉的提取物中含有兩種或兩種以上的成分對抑制單增李斯特菌的生長有協(xié)同增效 作用，從而促使抑制作用更明顯，抑菌效果更好。
[0130] 結論：
[0131] 1.由上述實驗可以得知:香果、香葉兩種香辛料對細菌均有較好的抑菌效果。豬肉 中的抑菌效果香果優(yōu)于香葉，在今后的豬肉生產加工中，適當?shù)奶岣邼舛瓤赡軙沟孟愎?的抑菌效果增強。香果香葉的抑菌效果隨著溫度也會有所改變，4°C情況下的抑菌效果比25 °C情況下的好，因此在豬肉防腐這一塊可以利用低溫和香辛料雙重保鮮。
[0132] 2.根據(jù)利用香果香葉混合抑菌實驗的結果，顯示出了不同的香辛料共同使用，比 單一香辛料的抑菌效果要更好。在今后使用香辛料的過程中，我們可以同時使用多種香辛 料，使它們的抑菌成分相互協(xié)同，發(fā)揮出更好的抑菌效果。
【主權項】
1. 一種以香果、香葉為原料制備的香辛料，其特征在于:是通過以下方法制備得到的： (1) 粉碎:取香果和香葉，分別用粉碎機粉碎至顆粒直徑為0.1mm; (2) 取上述粉碎完的香果和香葉，分別置于蒸餾瓶中，加入乙酸乙酯，料液比1:10,在60 °(：水浴條件下浸提5小時； (3) 抽濾:將浸提液抽濾后得到濾液； (4) 濃縮:蒸發(fā)濃縮，得到濃縮浸膏，即分別得到香果提取物、香葉提取物;將香果提取 物與香葉提取物按質量比1:1的比例混合，即得。2. 權利要求1所述的香辛料的制備方法，其特征在于:步驟如下： (1) 粉碎:取香果和香葉，分別用粉碎機粉碎至顆粒直徑為〇. 1mm; (2) 取上述粉碎完的香果和香葉，分別置于蒸餾瓶中，加入乙酸乙酯，料液比1:10,在60 °(：水浴條件下浸提5小時； (3) 抽濾:將浸提液抽濾后得到濾液； (4) 濃縮:蒸發(fā)濃縮，得到濃縮浸膏，即分別得到香果提取物、香葉提取物;將香果提取 物與香葉提取物按質量比1:1的比例混合，即得。3. 權利要求1所述的香辛料在抑制單增李斯特菌中的應用。4. 權利要求1所述的香辛料在制備抑制微單增李斯特菌的抑菌劑中的應用。5. 權利要求1所述的香辛料在作為或制備豬肉防腐劑中的應用。
【文檔編號】A23B4/20GK106070536SQ201610423425
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月15日 公開號201610423425.2, CN 106070536 A, CN 106070536A, CN 201610423425, CN-A-106070536, CN106070536 A, CN106070536A, CN201610423425, CN201610423425.2
【發(fā)明人】賀菊萍, 張晨, 楊佳怡, 王子燕
【申請人】徐州工程學院