一種貽貝暫養(yǎng)過(guò)程中的免疫增強(qiáng)劑及其制備方法和應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種貽貝暫養(yǎng)過(guò)程中的免疫增強(qiáng)劑，其由以下組分組成：類(lèi)胡蘿卜提取物、肽聚糖、甘露寡糖、L?精氨酸以及輔酶Q10，并且上述各組分的質(zhì)量比為11～23:6～15:9～13:2～4:2～4；還涉及該免疫增強(qiáng)劑的制備方法和在貽貝暫養(yǎng)過(guò)程中的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明中的免疫增強(qiáng)劑中以類(lèi)胡蘿卜提取物為主要配料，該類(lèi)胡蘿卜提取物以蝦類(lèi)副產(chǎn)物為主要原料提取，充分利用水產(chǎn)品加工副產(chǎn)物進(jìn)行高值化開(kāi)發(fā)，同時(shí)組配肽聚糖和甘露寡糖，加入適量L?精氨酸以及輔酶Q10，各組分能協(xié)調(diào)增效，顯著提高貽貝類(lèi)機(jī)體的免疫功能，促進(jìn)貽貝生長(zhǎng)與代謝，降低死亡率。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種貽貝暫養(yǎng)過(guò)程中的免疫増強(qiáng)劑及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，尤其涉及一種貽貝暫養(yǎng)過(guò)程中的免疫增強(qiáng)劑及其制備 方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 貽貝為典型濾食性貝類(lèi)，如翡翠貽貝、紫貽貝、厚殼貽貝、隔貽貝等，其利用鰓上的 纖毛過(guò)濾水中的懸浮顆粒為食，因此需要過(guò)濾大量的海水。此外，由于貽貝的生存環(huán)境一般 是近岸，所以貽貝富集重金屬和有機(jī)化合物的幾率也高于其他海洋生物。
[0003] 近年來(lái)，貽貝養(yǎng)殖及暫養(yǎng)過(guò)程中，存在著生長(zhǎng)異常、死亡率增高的現(xiàn)象，有些學(xué)者 將其與目前日益增長(zhǎng)的海水污染聯(lián)系起來(lái)，并證實(shí)了環(huán)境污染與貽貝的非病原性疾病有著 一定的關(guān)系。貽貝對(duì)外界脅迫的免疫機(jī)制主要為細(xì)胞免疫和體液免疫，其中細(xì)胞免疫依賴 于貝體血細(xì)胞吞噬、包囊、形成細(xì)胞結(jié)等細(xì)胞免疫反應(yīng)，清除病原物顆粒和自體損傷或死亡 細(xì)胞，并參與損傷修復(fù)等功能。貝類(lèi)吞噬作用伴隨著水解酶類(lèi)釋放以及抗氧化酶類(lèi)參與來(lái) 共同殺滅入侵異物。此外，貝類(lèi)缺乏特異性免疫球蛋白，因此，除了以上的細(xì)胞免疫外，還需 依靠機(jī)體的體液免疫作用，乳凝集素凝集和調(diào)理作用、溶血素及溶酶體酶等非特異性免疫 因子來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)外界脅迫因子的抵御。
[0004] 目前，對(duì)于貽貝等雙殼貝類(lèi)的免疫調(diào)節(jié)及增強(qiáng)研究還存在較大不足，不過(guò)越來(lái)越 多的研究表明貝類(lèi)免疫作用在貝類(lèi)機(jī)體防御反應(yīng)中起著十分重要的作用。免疫增強(qiáng)劑指單 獨(dú)或同時(shí)與抗原使用均能增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答的物質(zhì)，且通過(guò)提高貝類(lèi)的非特異性免疫功能 以及特異性免疫功能，來(lái)增強(qiáng)水產(chǎn)貝類(lèi)的抗疾病感染能力。免疫增強(qiáng)劑與抗生素和疫苗相 比，具有安全、無(wú)殘留、作用范圍廣和使用方便等優(yōu)點(diǎn)?？梢?jiàn)，對(duì)貝類(lèi)的免疫調(diào)節(jié)及增強(qiáng)劑進(jìn) 行研究與應(yīng)用，有望為貝類(lèi)病害防御、保障貝類(lèi)產(chǎn)品安全提供一條新的途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)而提供一種能顯著增強(qiáng)貽貝 的免疫能力進(jìn)而提高其抗病力的貽貝暫養(yǎng)過(guò)程中的免疫增強(qiáng)劑。
[0006] 本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)而提供一種上述免疫增強(qiáng)劑 的制備方法。
[0007] 本發(fā)明所要解決的第三個(gè)技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)而提供一種上述免疫增強(qiáng)劑 在貽貝暫養(yǎng)過(guò)程中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明解決上述第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為:一種貽貝暫養(yǎng)過(guò)程中的免 疫增強(qiáng)劑，其特征在于，其由以下組分組成:類(lèi)胡蘿卜提取物、肽聚糖、甘露寡糖、L-精氨酸以 及輔酶Q10,并且上述各組分的質(zhì)量比為11~23:6~15:9~13:2~4:2~4。
[0009] 作為優(yōu)選，所述甘露寡糖的聚合度為3~6。
[0010] 本發(fā)明解決上述第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為:上述免疫增強(qiáng)劑的制備方 法包括以下步驟：
[0011] (1)類(lèi)胡蘿卜提取物的制備:取蝦類(lèi)加工副產(chǎn)物，加入體積比為2~4:6~8的異丙醇 和正己烷混合提取溶劑，蝦類(lèi)加工副產(chǎn)物與上述混合提取溶劑的質(zhì)量體積比為1~3:5~8; 提取8~10h后，高速均質(zhì)、離心，收集離心上清液，并將離心獲得的沉淀物，再次采用上述提 取溶劑提取1~2次后，合并上清液得提取混合液；
[0012] 除去提取混合液中的正己烷后，加入等體積的0.05~0.15%NaCl溶液進(jìn)行漂洗， 分液去除水層;然后加入少量硫酸鈉以去除殘留水分，經(jīng)過(guò)濾后采用氮?dú)獯荡?~8min，獲 得提取物;將獲得的提取物38~43°C下進(jìn)行真空減壓濃縮，即得所需的類(lèi)胡蘿卜素提取物；
[0013] (2)將獲得的類(lèi)胡蘿卜提取物與肽聚糖、甘露寡糖、L-精氨酸以及輔酶Q10按上述質(zhì) 量比混合均勻，即得所需的免疫增強(qiáng)劑。
[0014] 作為優(yōu)選，所述蝦類(lèi)為南美白對(duì)蝦或斑節(jié)對(duì)蝦中的至少一種。
[0015] 作為優(yōu)選，所述步驟(2)中使用的甘露寡糖的聚合度為3~6。
[0016] 本發(fā)明解決上述第三個(gè)技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為:將上述免疫增強(qiáng)劑以飼料 添加劑的形式加入到貝類(lèi)暫養(yǎng)飼料中，其中每千克貝類(lèi)暫養(yǎng)飼料中加入2~4.5克上述免疫 增強(qiáng)劑。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明的免疫增強(qiáng)劑中以類(lèi)胡蘿卜提取物為 主要配料，該類(lèi)胡蘿卜提取物以蝦類(lèi)副產(chǎn)物為主要原料提取，充分利用水產(chǎn)品加工副產(chǎn)物進(jìn) 行高值化開(kāi)發(fā)，同時(shí)組配肽聚糖和甘露寡糖，加入適量L-精氨酸和輔酶Q10等組分，各組分 能協(xié)調(diào)增效，顯著提高貽貝類(lèi)機(jī)體的免疫功能，促進(jìn)貽貝生長(zhǎng)與代謝，降低死亡率。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0019] 實(shí)施例1:免疫增強(qiáng)劑制備
[0020] 本實(shí)施例中的免疫增強(qiáng)劑由以下組分組成:類(lèi)胡蘿卜提取物、肽聚糖(聚合度為3~ 6,下同）、甘露寡糖、L-精氨酸以及輔酶Q10,上述各組分的質(zhì)量比為11:6:9:2:2。
[0021] 本實(shí)施例中的免疫增強(qiáng)劑通過(guò)以下步驟制備:取蝦類(lèi)(南美白對(duì)蝦)加工副產(chǎn)物， 加入體積比為2:6的異丙醇和正己烷混合提取溶劑，蝦類(lèi)加工副產(chǎn)物與上述混合提取溶劑 的質(zhì)量體積比為1:5;提取8h后，高速均質(zhì)、離心，收集離心上清液，并將離心獲得的沉淀物， 再次采用上述提取溶劑提取1~2次后，合并上清液得提取混合液。除去提取混合液中的正 己烷后，加入等體積的0.05 %NaCl溶液進(jìn)行漂洗，分液去除水層;然后加入少量硫酸鈉以去 除殘留水分，經(jīng)過(guò)濾后采用氮?dú)獯荡?min，獲得提取物;將獲得的提取物38°C下進(jìn)行真空減 壓濃縮，即得類(lèi)胡蘿卜素提取物。
[0022]將獲得的類(lèi)胡蘿卜提取物與肽聚糖、甘露寡糖、L-精氨酸以及輔酶Q10按上述質(zhì)量 比混合均勻，即得所需的免疫增強(qiáng)劑。
[0023]實(shí)施例2:免疫增強(qiáng)劑制備
[0024] 本實(shí)施例中的免疫增強(qiáng)劑由以下組分組成:類(lèi)胡蘿卜提取物、肽聚糖、甘露寡糖、L-精氨酸以及輔酶Q1 〇，上述各組分的質(zhì)量比為23:15:13:4:4。
[0025] 本實(shí)施例中的免疫增強(qiáng)劑通過(guò)以下步驟制備:取蝦類(lèi)(斑節(jié)對(duì)蝦)加工副產(chǎn)物，加 入體積比為4:8的異丙醇和正己烷混合提取溶劑，蝦類(lèi)加工副產(chǎn)物與上述混合提取溶劑的 質(zhì)量體積比為3:8;提取10h后，高速均質(zhì)、離心，收集離心上清液，并將離心獲得的沉淀物， 再次采用上述提取溶劑提取1~2次后，合并上清液得提取混合液。除去提取混合液中的正 己烷后，加入等體積的0.15 %NaCl溶液進(jìn)行漂洗，分液去除水層;然后加入少量硫酸鈉以去 除殘留水分，經(jīng)過(guò)濾后采用氮?dú)獯荡?min，獲得提取物;將獲得的提取物43°C下進(jìn)行真空減 壓濃縮，即得所需的類(lèi)胡蘿卜素提取物。
[0026]將獲得的類(lèi)胡蘿卜提取物與肽聚糖、甘露寡糖、L-精氨酸以及輔酶Q10按上述質(zhì)量 比混合均勻，即得所需的免疫增強(qiáng)劑。
[0027]實(shí)施例3:免疫增強(qiáng)劑制備
[0028] 本實(shí)施例中的免疫增強(qiáng)劑由以下組分組成:類(lèi)胡蘿卜提取物、肽聚糖、甘露寡糖、L-精氨酸以及輔酶Q1 〇，上述各組分的質(zhì)量比為17:10:11:3:3。
[0029] 本實(shí)施例中的免疫增強(qiáng)劑通過(guò)以下步驟制備:取蝦類(lèi)加工副產(chǎn)物(南美白對(duì)蝦加 工副產(chǎn)物和斑節(jié)對(duì)蝦加工副產(chǎn)物混合物，混合比例1:1 )，加入體積比為3:7的異丙醇和正己 烷混合提取溶劑，蝦類(lèi)加工副產(chǎn)物與上述混合提取溶劑的質(zhì)量體積比為2:7 ;提取9h后，高 速均質(zhì)、離心，收集離心上清液，并將離心獲得的沉淀物，再次采用上述提取溶劑提取1~2 次后，合并上清液得提取混合液。除去提取混合液中的正己烷后，加入等體積的〇. 10 %NaCl 溶液進(jìn)行漂洗，分液去除水層;然后加入少量硫酸鈉以去除殘留水分，經(jīng)過(guò)濾后采用氮?dú)獯?打7min，獲得提取物;將獲得的提取物40°C下進(jìn)行真空減壓濃縮，即得所需的類(lèi)胡蘿卜素提 取物。
[0030] 將獲得的類(lèi)胡蘿卜提取物與肽聚糖、甘露寡糖、L-精氨酸以及輔酶Q10按上述質(zhì)量 比混合均勻，即得所需的免疫增強(qiáng)劑。
[0031] 實(shí)施例4:免疫增強(qiáng)劑制備
[0032] 本實(shí)施例中的免疫增強(qiáng)劑由以下組分組成:類(lèi)胡蘿卜提取物、肽聚糖、甘露寡糖、L-精氨酸以及輔酶Q1 〇，上述各組分的質(zhì)量比為18:10:10:2:4。
[0033] 本實(shí)施例中的免疫增強(qiáng)劑通過(guò)以下步驟制備:取蝦類(lèi)加工副產(chǎn)物，加入體積比為 2:8的異丙醇和正己烷混合提取溶劑，蝦類(lèi)加工副產(chǎn)物與上述混合提取溶劑的質(zhì)量體積比 為3:5;提取8h后，高速均質(zhì)、離心，收集離心上清液，并將離心獲得的沉淀物，再次采用上述 提取溶劑提取1~2次后，合并上清液得提取混合液。除去提取混合液中的正己烷后，加入等 體積的〇.〇8%NaCl溶液進(jìn)行漂洗，分液去除水層;然后加入少量硫酸鈉以去除殘留水分，經(jīng) 過(guò)濾后采用氮?dú)獯荡?min，獲得提取物;將獲得的提取物40°C下進(jìn)行真空減壓濃縮，即得所 需的類(lèi)胡蘿卜素提取物。
[0034]將獲得的類(lèi)胡蘿卜提取物與肽聚糖、甘露寡糖、L-精氨酸以及輔酶Q10按上述質(zhì)量 比混合均勻，即得所需的免疫增強(qiáng)劑。
[0035]實(shí)施例5:免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用試驗(yàn)
[0036] 試驗(yàn)組:任取實(shí)施例1~4中制備的免疫增強(qiáng)劑與貝類(lèi)暫養(yǎng)飼料以2~4.5克/千克 的比例混合用于紫貽貝暫養(yǎng)過(guò)程中的日常飼料，具體包括試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2以及試驗(yàn)組3， 其中試驗(yàn)組1中免疫增強(qiáng)劑與貝類(lèi)暫養(yǎng)飼料的混合比例為2克/千克，試驗(yàn)組2中免疫增強(qiáng)劑 與貝類(lèi)暫養(yǎng)飼料的混合比例為3克/千克，試驗(yàn)組3中免疫增強(qiáng)劑與貝類(lèi)暫養(yǎng)飼料的混合比 例為4.5克/千克；
[0037] 比較組:與試驗(yàn)組不同的是，該組采用市售免疫增強(qiáng)劑(殼寡糖），具體包括比較組 1、比較組2以及比較組3,其中比較組1中市售免疫增強(qiáng)劑與貝類(lèi)暫養(yǎng)飼料的混合比例為2 克/千克，比較組2中市售免疫增強(qiáng)劑與貝類(lèi)暫養(yǎng)飼料的混合比例為3克/千克，比較組3中市 售免疫增強(qiáng)劑與貝類(lèi)暫養(yǎng)飼料的混合比例為4.5克/千克，其他養(yǎng)殖條件均與試驗(yàn)組相同；
[0038]對(duì)照組:該組采用基礎(chǔ)飼料進(jìn)行喂食，其他養(yǎng)殖條件均與試驗(yàn)組相同。
[0039]各組均于相同大小的養(yǎng)殖池進(jìn)行試驗(yàn)，并且各組均重復(fù)設(shè)置三個(gè)相同的養(yǎng)殖池， 各養(yǎng)殖池均投放相同量的紫貽貝。試驗(yàn)周期為8周，水溫為15~20°C，每天分早晚投食兩次， 試驗(yàn)組和比較組中連續(xù)投食含免疫增強(qiáng)劑的飼料四天后改用基礎(chǔ)飼料進(jìn)行喂食三天，以此 模式循環(huán)喂養(yǎng)。
[0040] 養(yǎng)殖8周后，計(jì)算各養(yǎng)殖池中的紫貽貝數(shù)，計(jì)算成活率，同時(shí)對(duì)各養(yǎng)殖池中的所有 紫貽貝稱(chēng)重，計(jì)算增重率，其中試驗(yàn)組的增重率均大于比較組，而比較組的增重率均大于對(duì) 照組。免疫保護(hù)率=(1-實(shí)驗(yàn)組死亡率/對(duì)照組死亡率)*1〇〇。試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。
[0041] 表1各組紫貽貝成活率和免疫保護(hù)率
[0042]
?〇〇43?~由表1的試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，本發(fā)明中的免疫增強(qiáng)劑能顯著提高紫貽貝的成活率和生 長(zhǎng)速度，提高其機(jī)體免疫功能。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種貽貝暫養(yǎng)過(guò)程中的免疫增強(qiáng)劑，其特征在于，其由以下組分組成:類(lèi)胡蘿卜提取 物、肽聚糖、甘露寡糖、L-精氨酸以及輔酶Q10,并且上述各組分的質(zhì)量比為11~23:6~15:9 ~13:2~4:2~4〇2. 如權(quán)利要求1所述的免疫增強(qiáng)劑，其特征在于，所述甘露寡糖的聚合度為3~6。3. -種如權(quán)利要求1所述的免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 類(lèi)胡蘿卜提取物的制備:取蝦類(lèi)加工副產(chǎn)物，加入體積比為2~4:6~8的異丙醇和正 己烷混合提取溶劑，蝦類(lèi)加工副產(chǎn)物與上述混合提取溶劑的質(zhì)量體積比為1~3:5~8;提取 8~10h后，高速均質(zhì)、離心，收集離心上清液，并將離心獲得的沉淀物，再次采用上述提取溶 劑提取1~2次后，合并上清液得提取混合液； 除去提取混合液中的正己烷后，加入等體積的0.05~0.15 %NaCl溶液進(jìn)行漂洗，分液 去除水層;然后加入少量硫酸鈉以去除殘留水分，經(jīng)過(guò)濾后采用氮?dú)獯荡?~8min，獲得提 取物;將獲得的提取物38~43°C下進(jìn)行真空減壓濃縮，即得所需的類(lèi)胡蘿卜素提取物； (2) 將獲得的類(lèi)胡蘿卜提取物與肽聚糖、甘露寡糖、L-精氨酸以及輔酶Q10按上述質(zhì)量比 混合均勻，即得所需的免疫增強(qiáng)劑。4. 如權(quán)利要求3所述的免疫增強(qiáng)劑，其特征在于，所述蝦類(lèi)為南美白對(duì)蝦或斑節(jié)對(duì)蝦中 的至少一種。5. 如權(quán)利要求3所述的免疫增強(qiáng)劑，其特征在于，所述步驟(2)中使用的甘露寡糖的聚 合度為3~6。6. -種如權(quán)利要求1或2所述的免疫增強(qiáng)劑在貽貝暫養(yǎng)過(guò)程中的應(yīng)用，其特征在于，將 上述免疫增強(qiáng)劑以飼料添加劑的形式加入到貝類(lèi)暫養(yǎng)飼料中，其中每千克貝類(lèi)暫養(yǎng)飼料中 加入2~4.5克上述免疫增強(qiáng)劑。
【文檔編號(hào)】A23K10/30GK106071410SQ201610523298
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月29日
【發(fā)明人】張賓, 房傳棟, 鄧尚貴
【申請(qǐng)人】浙江海洋大學(xué)