專利名稱：一種微生物(no.1)及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及微生物技術領域，具體地說是一種微生物(No.1)及其制備方法。
背景技術：
目前由于未自然發(fā)酵好的原煙和青煙在摻入工業(yè)配方中使用時，給煙氣帶來了刺激性大、吸味辛辣、粗糙、澀口、滯舌，香氣不足或缺乏香氣，燃燒性不好等缺點。這不僅給卷煙成品的內在質量、產品風格等方面帶來了較大的損壞。再者，目前全國各大煙廠、煙草公司有近60％的上部煙葉和低次煙葉由于使用率低，大量積壓，占用大量倉庫和資金。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是針對目前沒有有效的煙葉醇化劑，提供一種能用于改善成品煙品質和上部煙葉、低次煙葉的可用性的微生物及其制備方法。
本發(fā)明是采用分離煙葉本身有益微生物的方法而得到的微生物，該微生物是巨大芽孢桿菌No.1(Bacillus megaterium)，其保藏登記號為CGMCC NO.0674。
本發(fā)明的微生物經檢測具有以下性質細胞桿狀，革蘭氏陽性，大小為1.5*2.5～3.5m，產生近中生的橢圓狀芽孢，孢囊不膨大。細胞內有聚-β-羥基丁酸鹽(PHB)顆粒。在肉汁培養(yǎng)基上的菌落為圓形、擴展、邊緣整齊，淡黃色，有光澤，18小時后菌落直徑大于1毫米。不產生乙酰甲基甲醇(V-P反應陰性)，VP液最終pH為4.9。接觸酶陽性。卵磷脂酯陰性，還原硝酸鹽。在pH5.7和7％NaCl中生長，營嚴格好氧生活。從葡萄糖、阿拉伯糖、木糖和甘露醇產酸。石蕊牛奶呈還原反應，分解酷素和淀粉。利用檸檬酸鹽。
本發(fā)明的微生物的培養(yǎng)方法是先采用固體豆芽汁培養(yǎng)基YBA，將上述菌在試管斜面培養(yǎng)基上接種后，27-29℃下活化培養(yǎng)，二天后，再采用流體豆芽汁培養(yǎng)基YB，將試管中巨大芽孢桿菌接種在錐形瓶YB豆芽汁流體培養(yǎng)基中28℃搖床培養(yǎng)24小時。
該微生物的液體發(fā)酵制備方法按以下步驟進行1)試管培養(yǎng)基采用滅菌固體豆芽汁(YBA)培養(yǎng)基，將巨大芽孢桿菌接種在試管培養(yǎng)基上，接種后27-29℃下活化培養(yǎng)48小時；
2)擴大培養(yǎng)基采用滅菌液體YB豆芽汁培養(yǎng)基，將試管培養(yǎng)基中巨大芽孢桿菌接種在錐形瓶中，置于搖床上28℃，振蕩培養(yǎng)24-46小時，作為種子液；3)液體發(fā)酵培養(yǎng)基在發(fā)酵缺罐中采用液體YB豆芽汁培養(yǎng)液，121℃高壓滅菌30分鐘左右，待滅菌培養(yǎng)液冷卻至27.5℃時，將錐形瓶中的培養(yǎng)物按5-7％的比例接種發(fā)酵液，27-28℃培養(yǎng)48小時，可得到巨大芽孢桿菌菌液。
該微生物的分離方法是將煙末加入已滅菌的豆芽汁培養(yǎng)液培養(yǎng)液YB中，于25℃搖床培養(yǎng)24小時后，用吸管吸取培養(yǎng)液，采用稀釋涂布法在滅菌固體豆芽汁培養(yǎng)基YBA上進行涂布平板，待菌長出后，用接種針在另一滅菌固體豆芽汁培養(yǎng)基YBA上進行劃線法分離，經純化培養(yǎng)后得該單菌落純培養(yǎng)菌。
本發(fā)明的微生物用于煙草加工工藝過程中，作為降低卷煙煙氣的刺激性以及雜氣，增加卷煙煙氣協(xié)調性，香氣細膩性以及改善余味具有良好的效果。通過以一定比例加入本發(fā)明的微生物后，可有效降低上部煙葉和低次煙葉中的蛋白質、煙堿等含量，使煙氣更協(xié)調，香氣顯現(xiàn)，改善余味。本發(fā)明的微生物能使煙草業(yè)中庫存的上部煙葉加快其可使和性，節(jié)約倉庫、減少大量資金積壓，減少庫存煙葉和因長期貯存蟲害霉變引致的損失，同時可配合開發(fā)不同吸味、風格品牌的卷煙。
具體實施方案本發(fā)明的微生物是從煙草葉片上分離得到的巨大芽孢桿菌No.1，其保藏登記號為CGMCC NO.0674。
其培養(yǎng)方法是先采用固體豆芽汁培養(yǎng)基YBA，將上述菌在試管斜面培養(yǎng)基上接種后，27-29℃下活化培養(yǎng)，二天后，再采用流體豆芽汁培養(yǎng)基YB，將試管中巨大芽孢桿菌接種在錐形瓶YB豆芽汁流體培養(yǎng)基中28℃搖床培養(yǎng)24小時。
其液體發(fā)酵制備方法按以下步驟進行1)試管培養(yǎng)基采用滅菌固體豆芽汁(YBA)培養(yǎng)基，將巨大芽孢桿菌接種在試管培養(yǎng)基上，接種后27-29℃下活化培養(yǎng)48小時；2)擴大培養(yǎng)基采用滅菌液體YB豆芽汁培養(yǎng)基，將試管培養(yǎng)基中巨大芽孢桿菌接種在錐形瓶中，置于搖床上28℃，振蕩培養(yǎng)24-46小時，作為種子液；
3)液體發(fā)酵培養(yǎng)基在發(fā)酵缺罐中采用液體YB豆芽汁培養(yǎng)液，121℃高壓滅菌30分鐘左右，待滅菌培養(yǎng)液冷卻至27.5℃時，將錐形瓶中的培養(yǎng)物按6％的比例接種發(fā)酵液，27-28℃培養(yǎng)48小時，可得到巨大芽孢桿菌菌液。
上述微生物的分離方法是將煙末加入已滅菌的豆芽汁培養(yǎng)液培養(yǎng)液YB中，于25℃搖床培養(yǎng)24小時后，用吸管吸取培養(yǎng)液，采用稀釋涂布法在滅菌固體豆芽汁培養(yǎng)基YBA上進行涂布平板，待菌長出后，用接種針在另一滅菌固體豆芽汁培養(yǎng)基YBA上進行劃線法分離，經純化培養(yǎng)后得該單菌落純培養(yǎng)菌。
權利要求
1.一種微生物，其特征在于它是從煙草葉片上分離得到的巨大芽孢桿菌No.1(Bacillus megaterium)，其保藏登記號為CGMCC NO.0674。
2.根據權利要求1所述的微生物的培養(yǎng)方法，其特征在于先采用固體豆芽汁培養(yǎng)基YBA，將上述菌在試管斜面培養(yǎng)基上接種后，27-29℃下活化培養(yǎng)，二天后，再采用流體豆芽汁培養(yǎng)基YB，將試管中巨大芽孢桿菌接種在錐形瓶YB豆芽汁流體培養(yǎng)基中28℃搖床培養(yǎng)24小時。
3.根據權利要求1所述的微生物的液體發(fā)酵制備方法，其特征在于按以下步驟進行1)試管培養(yǎng)基采用滅菌固體豆芽汁(YBA)培養(yǎng)基，將巨大芽孢桿菌接種在試管培養(yǎng)基上，接種后27-29℃下活化培養(yǎng)48小時；2)擴大培養(yǎng)基采用滅菌液體YB豆芽汁培養(yǎng)基，將試管培養(yǎng)基中巨大芽孢桿菌接種在錐形瓶中，置于搖床上28℃，振蕩培養(yǎng)24-46小時，作為種子液；3)液體發(fā)酵培養(yǎng)基在發(fā)酵罐中采用液體YB豆芽汁培養(yǎng)液，121℃高壓滅菌30分鐘左右，待滅菌培養(yǎng)液冷卻至27.5℃時，將錐形瓶中的培養(yǎng)物按5-7％的比例接種發(fā)酵液，27-28℃培養(yǎng)48小時，可得到巨大芽孢桿菌菌液。
4.根據權利要求1所述的微生物的分離方法，其特征在于將煙末加入已滅菌的豆芽汁培養(yǎng)液YB中，于25℃搖床培養(yǎng)24小時后，用吸管吸取培養(yǎng)液，采用稀釋涂布法在滅菌固體豆芽汁培養(yǎng)基YBA上進行涂布平板，待菌長出后，用接種針在另一滅菌固體豆芽汁培養(yǎng)基YBA上進行劃線法分離，經純化培養(yǎng)后得該單菌落純培養(yǎng)菌。
全文摘要
本發(fā)明是一種微生物及其制備方法。其特征在于它是從煙草葉片上分離得到的巨大芽孢桿菌No.1(Bacillusmegaterium)，其保藏登記號為CGMCC NO.0674。本發(fā)明的微生物用于煙草加工工藝過程中，作為降低卷煙煙氣的刺激性以及雜氣，增加卷煙煙氣協(xié)調性，香氣細膩性以及改善余味具有良好的效果。可有效降低上部煙葉和低次煙葉中的蛋白質、煙堿等含量，使煙氣更協(xié)調，香氣顯現(xiàn)，改善余味。本發(fā)明的微生物能使煙草業(yè)中庫存的上部煙葉加快其可使和性，節(jié)約倉庫、減少大量資金積壓，減少庫存煙葉和因長期貯存蟲害霉變引致的損失，同時可配合開發(fā)不同吸味、風格品牌的卷煙。
文檔編號A24B15/20GK1439715SQ0211339
公開日2003年9月3日 申請日期2002年2月23日 優(yōu)先權日2002年2月23日
發(fā)明者王革 申請人:王革