專利名稱：一種煙葉浸提液培養(yǎng)基及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)基，尤其涉及一種培養(yǎng)煙堿降解微生物的煙葉浸提液培養(yǎng)基 及其應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
煙堿是煙草中的生物堿，它對人的中樞神經(jīng)有強(qiáng)烈的刺激和麻痹作用，少量使人 興奮，大量會引起眩暈、嘔吐甚至中毒死亡。煙葉中煙堿含量過高，就會嚴(yán)重危害煙民的健 康。另外煙堿也是一種環(huán)境有毒物質(zhì)，在煙草制品的生產(chǎn)加工過程中會產(chǎn)生大量的固體、液 體和氣體廢棄物，這些廢棄物如果不加處理就投放到環(huán)境中，會嚴(yán)重破壞生態(tài)環(huán)境，危害人 類健康。微生物法降解煙堿因具有針對性、快速有效性的優(yōu)點，受到越來越多的重視。至今， 國內(nèi)外研究者已經(jīng)從環(huán)境中分離了多種煙堿降解菌。目前所報道的培養(yǎng)煙堿降解菌株的培養(yǎng)基成分復(fù)雜，例如添加Na2HPCV KH2PO4, K2SO4^MgCl2 · 6H20、MnCl2 · 4H20、FeCl3 · 6H20、CaCl2 等基礎(chǔ)離子成分后，再添加一定含量的 煙堿，不僅制備繁瑣，而且煙堿價格昂貴，成本較高，因而迫切需要尋找簡單廉價的替代培
養(yǎng)基配方。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種簡單廉價適合培養(yǎng)煙堿降解微生物的培養(yǎng) 基及其應(yīng)用。發(fā)明概述本發(fā)明所述的煙葉浸提液培養(yǎng)基中添加了煙葉浸提液，采用該培養(yǎng)基培養(yǎng)煙堿降 解類微生物可以獲得更大的生物量，而且該煙葉浸提液培養(yǎng)基不需要額外添加各種微量元 素和無機(jī)鹽，使該培養(yǎng)基配制簡單、使用方便、成本低、適合工業(yè)化應(yīng)用。發(fā)明詳述一種煙葉浸提液，其特征在于，由如下步驟制得將煙葉碎片和水按照質(zhì)量體積比10 80 1的比例混合，煮沸25 35分鐘，過 濾除去沉淀，定容，即得煙葉浸提液；所述的質(zhì)量體積比單位為g/L。經(jīng)檢測，煙葉碎片與水按照10 1比例混合時，煙葉浸提液含有煙堿1. 3 1. Sg/ L，煙葉碎片與水按照20 1比例混合時，煙葉浸提液含有煙堿1.9 2. 5g/L，煙葉碎片與 水按照40 1比例混合時，煙葉浸提液含有煙堿3.9 4. 5g/L，煙葉碎片與水按照60 1 比例混合時，煙葉浸提液含有煙堿6. 2 6. 8g/L，煙葉碎片與水按照80 1比例混合時，煙 葉浸提液含有煙堿9. 2 9. 8g/L。一種煙葉浸提液培養(yǎng)基，其特征在于，組分如下煙葉浸提液1L，牛肉膏3 5g、蛋白胨5 10g、NaCl 5 10g、瓊脂18 22g， ρΗ7· 0 7· 5。
優(yōu)選的，煙葉浸提液培養(yǎng)基成分如下煙葉浸提液1L，牛肉膏3g、蛋白胨10g、 NaC15g、瓊脂20g，pH7. 0 7. 5，所述的煙葉浸提液由煙葉碎片與水按照20 1的比例混合.一種煙葉浸提液培養(yǎng)基，其特征在于，組分如下煙葉浸提液1L，葡萄糖3 7g、蛋白胨3 7g、酵母粉3 7g、瓊脂18 22g，pH 自然。優(yōu)選的，煙葉浸提液培養(yǎng)基成分如下煙葉浸提液1L、葡萄糖3g、蛋白胨5g、酵母 粉3g、瓊脂20g，pH自然，所述的煙葉浸提液由煙葉碎片與水按照20 1的比例混合。一種煙葉浸提液培養(yǎng)基，其特征在于，組分如下煙葉浸提液1L，酵母粉0. 5 lg，pH7. 0 7. 5或pH自然。當(dāng)pH7. 0 7. 5時適 合培養(yǎng)細(xì)菌類煙堿降解微生物，當(dāng)PH為自然時適合培養(yǎng)真菌類煙堿降解微生物。優(yōu)選的，煙葉浸提液培養(yǎng)基成分如下煙葉浸提液1L，酵母粉0. 5g，pH7. 0 7. 5 或PH自然，所述的煙葉浸提液由煙葉碎片與水按照20 1或80 1的比例混合。本發(fā)明還提供上述煙葉浸提液培養(yǎng)基在培養(yǎng)煙堿降解微生物方面的應(yīng)用。優(yōu)選的，所述煙堿降解微生物為米曲霉(Aspergillus oryzae)CGMCC NO. 3687、假單胞菌(Pseudomonas sp.) CCTCC Ν0· M207083、煙草假單胞菌(Pseudomonas nicotianae)CGMCC N0. 0757、根癌土 壤桿菌(Agrobacterium tumefaciens)CCTCC N0.M206131、巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium) CGMCC Ν0· 0674 之一。所述煙葉碎片可由普通卷煙廠獲得。在本發(fā)明制備的適合培養(yǎng)煙堿降解微生物的培養(yǎng)基方法中，采用煙葉碎片，經(jīng)煮 沸后，煙葉碎片中的營養(yǎng)成分釋放溶解于水中，為培養(yǎng)微生物提供了豐富的微量元素及營 養(yǎng)物質(zhì)，同時也提供了煙堿降解微生物的選擇營養(yǎng)物質(zhì)——煙堿。本發(fā)明將煙葉碎片用來 制備培養(yǎng)煙堿降解微生物的培養(yǎng)基，可以達(dá)到節(jié)約煙堿降解菌株培養(yǎng)基的配制成本。由于 本發(fā)明方法不需要額外添加各種微量元素和無機(jī)鹽，因此，培養(yǎng)基的制備簡便、快速。利用 本發(fā)明培養(yǎng)基培養(yǎng)的煙堿降解菌生長量高，降解煙堿能力強(qiáng)，同時本發(fā)明的方法還解決了 現(xiàn)有技術(shù)中純品煙堿添加的高成本問題，具有廣闊的工業(yè)應(yīng)用前景。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明所保護(hù)范圍不僅限于此。實施例中所述的試劑均為市售產(chǎn)品，煙葉碎片由山東濟(jì)南將軍集團(tuán)購得，所述操 作方法如無特別說明均為本領(lǐng)域通用操作方法。實施例1煙葉浸提液的制備將煙葉碎片和水按照質(zhì)量體積比(g/L) 20 1和80 1的比例混合，煮沸30分 鐘，抽濾除去沉淀，加水定容至1L，分別制得2%的煙葉浸提液和8%的煙葉浸提液；經(jīng)檢 測，2%的煙葉浸提液含有煙堿2. 2g/L，8%的煙葉浸提液含有煙堿9. 5g/L。(1)煙葉浸提液培養(yǎng)基的制備①菌種活化培養(yǎng)基(細(xì)菌)的組分2%的煙葉浸提液1L，牛肉膏3g、蛋白胨10g、 NaCl 5g、瓊脂 20g;
菌種活化培養(yǎng)基(真菌)的組分2%的煙葉浸提液1L，葡萄糖3g、蛋白胨5g、酵 母粉3g、瓊脂20g。②種子培養(yǎng)液的組分2%的煙葉浸提液1L，酵母粉0. 5g。③發(fā)酵培養(yǎng)基的組分8%的煙葉浸提液1L，酵母粉0. 5g。按照上述組分混合，pH自然(真菌)，或者，用lmol/L的NaOH調(diào)pH7. 0 7. 5 (細(xì) 菌)，在115°C高溫下滅菌30分鐘，即可。(2)對比實驗1 ①菌株活化培養(yǎng)基的制備在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中加入煙堿，使其終濃度為2g/L。②種子培養(yǎng)基的制備在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中加入煙堿，使其終濃度為2g/L。③發(fā)酵培養(yǎng)基的制備在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中加入煙堿，使其終濃度為9. 5g/L。上述無機(jī)鹽培養(yǎng)基的制備=K2HPO4·3Η20 13. 3g/L,KH2PO4 4g/L、MgS04 ·7Η20 0. 2g/ L、0. 5ml微量元素溶液，蒸餾水配制。上述微量元素溶液的制備=CaCl2·2Η20 0. 05g/L,CuCl2 ·2Η20 0. 05g/L,MnSO4 ·Η20 0. 008g/L、FeS04 ·7Η20 0. 004g/L,ZnSO4 0. lg/L,Na2MoO4 ·2Η20 0. lg/L,Na2WO4 ·2Η20 0. 05g/ L，0. lmol/LHCl 配制。上述培養(yǎng)基pH7. 0 7. 5，用于培養(yǎng)細(xì)菌。上述培養(yǎng)基使用前都在115 °C高溫下滅菌30分鐘。上述培養(yǎng)基中，煙堿單獨經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾除菌步驟后加入。(3)對比實驗2①菌株活化培養(yǎng)基的制備牛肉膏3. Og/L、蛋白胨10g/L、NaCl 5. Og/L、瓊脂20g/ L0②種子培養(yǎng)基的制備牛肉膏3. Og/L、蛋白胨10g/L、NaCl 5. 0g/L。③發(fā)酵培養(yǎng)基的制備在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入煙堿，使其終濃度為9. 5g/L。上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備=NH4NO31. 00g/L、MgSO4 · 7H20 0. 50g/L、(NH4)2SO4 0. 50g/ L、KH2PO4 0. 50g/L、NaCl 0. 50g/L、酵母粉 0. 05g/L、K2HPO4 1. 50g/L。上述培養(yǎng)基均為蒸餾水配制，pH7. 0 7. 5，用于培養(yǎng)細(xì)菌。上述培養(yǎng)基使用前都在115°C高溫下滅菌30分鐘。所述步驟③中，煙堿單獨經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾除菌步驟后加入。(4)對比實驗3①菌株活化培養(yǎng)基的制備=K2HPO4·3Η20 13g/L, (NH4)2SO4 lg/L,KH2PO4 4g/L、酵母 粉 lg/L、煙堿 2g/L、瓊脂 20g/L。②種子培養(yǎng)基的制備=K2HPO4· 3H20 13g/L、(NH4)2SO4 lg/L、KH2PO4 4g/L、酵母粉 lg/L、煙堿 2g/L。③發(fā)酵培養(yǎng)基的制備=K2HPO4· 3H20 13g/L、(NH4)2SO4 lg/L、KH2PO4 4g/L、酵母粉 lg/L、煙堿9. 5g/L、ImL微量元素溶液。上述微量元素溶液的制備=MgSO4·7Η20 10g/L、MnS04 ·4Η20 4g/L、CaCl2 · 2H20 2g/ L、FeSO4 · 7H20 2g/L，0. lmol/L HCl 配制。上述培養(yǎng)基均為蒸餾水配制，pH7. 0 7. 5，用于培養(yǎng)細(xì)菌。上述培養(yǎng)基使用前都在115 °C高溫下滅菌30分鐘。
上述培養(yǎng)基中，煙堿單獨經(jīng)0. 22 ym濾膜過濾除菌步驟后加入。(5)對比實驗4①菌株活化培養(yǎng)基的制備在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中加入煙堿，使其終濃度為2g/L。②種子培養(yǎng)基的制備在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中加入煙堿，使其終濃度為2g/L。③發(fā)酵培養(yǎng)基的制備在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中加入煙堿，使其終濃度為9. 5g/L。上述無機(jī)鹽培養(yǎng)基的制備Na2HP045. 57g/L、KH2P04 2 . 44g/L、K2S04 lg/L、 MgCl2 6H20 0. 2g/L、MnCl2 4H20 0. 0004g/L、FeCl3 6H20 0. 001g/L、CaCl2 0. 001g/L。上述培養(yǎng)基均為蒸餾水配制，pH7. 0 7. 5，用于培養(yǎng)細(xì)菌。上述培養(yǎng)基使用前都在115°C高溫下滅菌30分鐘。上述培養(yǎng)基中，煙堿單獨經(jīng)0. 22 ym濾膜過濾除菌步驟后加入。⑶對比實驗5①菌株活化培養(yǎng)基的制備在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入煙堿，使其終濃度為2g/L。②種子培養(yǎng)基的制備在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入煙堿，使其終濃度為2g/L。③發(fā)酵培養(yǎng)基的制備在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入煙堿，使其終濃度為9. 5g/L。上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備:KH2P040 . 65g/L、K2HP04 1. Og/L、MgS04 7H20 0. 5g/ L、(NH4)2S04 0.5g/L、NaCl 0. 5g/L、CaCl2 2H20 0. lg/L、NaMo04 0 . 00 5g/L、FeS04 7H20 0. 005g/L、MnS04 0 . 01g/L、酵母粉 0. 05g/L、0. 5mL 微量元素溶液。上述微量元素溶液成分為CuCl2 2H20 0. 05g/L、ZnS04 0. lg/L。上述培養(yǎng)基均為蒸餾水配制，pH7. 0 7. 5，用于培養(yǎng)細(xì)菌。上述培養(yǎng)基使用前都在115°C高溫下滅菌30分鐘。上述培養(yǎng)基中，煙堿單獨經(jīng)0. 22 ym濾膜過濾除菌步驟后加入。(7)對比實驗6①菌株活化培養(yǎng)基的制備大豆粉5g/L、葡萄糖20g/L、酵母粉5g/L、NaCl 5g/L、 K2HP045g/L、瓊脂 20g/L。②種子培養(yǎng)基的制備大豆粉5g/L、葡萄糖20g/L、酵母粉5g/L、NaCl 5g/L、 K2HP045g/L。 ③發(fā)酵培養(yǎng)基的制備大豆粉5g/L、葡萄糖20g/L、酵母粉5g/L、NaCl 5g/L、 K2HP045g/L、煙堿 9. 5g/L。上述培養(yǎng)基均為蒸餾水配制，pH6. 5 7. 0，用于培養(yǎng)真菌。上述培養(yǎng)基在115°C高溫下滅菌30分鐘，所述步驟③中，煙堿單獨經(jīng)0. 22 ym濾膜過濾除菌步驟后加入。⑶對比實驗7①菌株活化培養(yǎng)基的制備馬鈴薯200g/L、葡萄糖20g/L、瓊脂20g/L、自然pH。馬 鈴薯去皮，切成塊煮沸30分鐘，然后用紗布過濾，再加糖及瓊脂，溶化后補(bǔ)足水至1L，115°C 滅菌30分鐘。②種子培養(yǎng)基的制備麥芽浸粉3g/L、酵母粉3g/L、蛋白胨5g/L、葡萄糖10g/L， pH6. 5。③發(fā)酵培養(yǎng)基的制備:KH2P04lg/L、MgS04 0. 5g/L、FeS04 0 . 00 3g/L、CaCl2 0. 003g/L、MnS04 0 . 001g/L、煙堿 9. 5g/L, pH6. 5。
上述培養(yǎng)基均為蒸餾水配制，用于培養(yǎng)真菌。上述培養(yǎng)基在115°C高溫下滅菌30分鐘。所述步驟③中，煙堿單獨經(jīng)0. 22 ym濾膜過濾除菌步驟后加入。由以上比較可以看出，本專利提供的培養(yǎng)基配方配制更加方便，成本低，適宜于工 業(yè)化應(yīng)用。實施例2利用煙葉浸提液培養(yǎng)基培養(yǎng)具有煙堿降解能力的米曲霉CGMCC NO. 3687本實施例中的菌株活化培養(yǎng)基(真菌)、種子培養(yǎng)液、發(fā)酵培養(yǎng)基的配制同實施例 1。(1)選擇米曲霉CGMCC NO. 3687，接種至菌株活化培養(yǎng)基(真菌)活化40小時，培 養(yǎng)溫度為28°C，然后，取活化后的米曲霉CGMCC NO. 3687接種于種子培養(yǎng)液，培養(yǎng)30小時， 培養(yǎng)溫度為28°C，得初級培養(yǎng)液；將初級培養(yǎng)液，按體積比5% (v/v)的接種量轉(zhuǎn)接于發(fā)酵 培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為28°C，搖床轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分。培養(yǎng)40小時后，抽濾收集菌絲體，測 定菌體生長量，并分析發(fā)酵液上清中煙堿殘留量。其40小時生物量達(dá)到8. lg/L，煙堿降解 量為 7. 8g/L。上述生物量的測定方法為抽濾菌絲體，用蒸餾水洗滌3次，將菌絲體冷凍干燥至
恒重，稱量。煙堿降解量的測定方法為初始煙堿含量(g/L)與培養(yǎng)40小時后測得的煙堿剩余 含量(g/L)之差。上述煙堿含量分析所用設(shè)備及條件分析型高壓液相色譜儀(Agilent 1 lOOSeries)，美國安捷倫公司；樣品經(jīng)煮沸5分鐘、12000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后，用 同體積甲醇稀釋，4°C冰箱靜置30分鐘，0.22i!m Millipore膜過濾待檢測。分析柱為 TC-C18 (150X4. 6mm)，流動相為體積比為15 85的甲醇甲酸(濃度0. 05 % )，流速 0. 5mL/min,柱溫30°C，紫外檢測波長254nm。(2)對比實驗1參照實施例2(1)，所不同的是①米曲霉CGMCC NO. 3687在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)40小時后生物量為5. lg/L，煙堿降 解量為3. 8g/L。②菌株活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基同實施例1 (7)所述。(3)對比實驗2參照實施例2(1)，所不同的是①米曲霉CGMCC NO. 3687在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)40小時后生物量為4. 9g/L，煙堿降 解量為3. lg/L。②菌株活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基同實施例1 (8)所述。以上對比實驗表明，利用本專利提供的培養(yǎng)基培養(yǎng)米曲霉CGMCC NO. 3687，獲得的 生物量更多，煙堿降解量更高。實施例3利用煙葉浸提液培養(yǎng)基培養(yǎng)具有煙堿降解能力的巨大芽孢桿菌CGMCC NO. 0674。本實施例中的菌株活化培養(yǎng)基(細(xì)菌)、種子培養(yǎng)液、發(fā)酵培養(yǎng)基的配制同實施例1。(1)選擇巨大芽孢桿菌CGMCC NO. 0674，接種至菌株活化培養(yǎng)基(細(xì)菌)活化18小 時，培養(yǎng)溫度為37°C，然后，取活化后的巨大芽孢桿菌CGMCC NO. 0674接種于種子培養(yǎng)液， 培養(yǎng)20小時，培養(yǎng)溫度為37°C，得初級培養(yǎng)液；將初級培養(yǎng)液，按體積比5% (v/v)的接種 量轉(zhuǎn)接于發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為37°C，搖床轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分。培養(yǎng)20小時后，測定菌 體生長量，并分析發(fā)酵液上清中煙堿殘留量。其20小時生物量達(dá)到0D_ = 3. 1，煙堿降解 量為 1. 8g/L。上述菌體生物量的測定方法為細(xì)菌發(fā)酵液5mL經(jīng)過12000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后 獲得菌體，用蒸餾水洗滌3次，然后用5mL蒸餾水重新懸浮，在600nm處測定其0D值。上述煙堿含量分析所用設(shè)備及條件同實施例2(1)所述。(2)對比實驗1參照實施例3(1)，所不同的是①巨大芽孢桿菌CGMCC NO. 0674在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)20小時后生物量為0D6(1(1 = 2. 1，煙堿降解量為1. lg/L。②菌株活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基同實施例1 (2)所述。(3)對比實驗2參照實施例3(1)，所不同的是①巨大芽孢桿菌CGMCC NO. 0674在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)20小時后生物量為0D6(1(1 = 1.9，煙堿降解量為0. 6g/L。②菌株活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基同實施例1 (3)所述。(4)對比實驗3參照實施例3(1)，所不同的是①巨大芽孢桿菌CGMCC NO. 0674在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)20小時后生物量為0D6(1(1 = 1.6，煙堿降解量為0. 4g/L。②菌株活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基同實施例1 (4)所述。(5)對比實驗4參照實施例3(1)，所不同的是①巨大芽孢桿菌CGMCC NO. 0674在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)20小時后生物量為0D6(1(1 = 1.5，煙堿降解量為0. 3g/L。②菌株活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基同實施例1 (5)所述。(6)對比實驗5參照實施例3(1)，所不同的是①巨大芽孢桿菌CGMCC NO. 0674在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)20小時后生物量為0D6(1(1 = 1.6，煙堿降解量為0. 4g/L。②菌株活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基同實施例1 (6)所述。以上對比實驗表明，利用本專利提供的培養(yǎng)基培養(yǎng)巨大芽孢桿菌CGMCC NO. 0674， 獲得的生物量更多，煙堿降解量更高。
權(quán)利要求
一種煙葉浸提液，其特征在于，由如下步驟制得將煙葉碎片和水按照質(zhì)量體積比10～80∶1的比例混合，煮沸25～35分鐘，過濾除去沉淀，定容，即得煙葉浸提液；所述的質(zhì)量體積比單位為g/L。
2.一種由權(quán)利要求1所述的煙葉浸提液配制的煙葉浸提液培養(yǎng)基，其特征在于，組分 如下煙葉浸提液1L，牛肉膏3 5g、蛋白胨5 10g、NaCl 5 10g、瓊脂18 22g，pH 7. 0 7. 5。
3.如權(quán)利要求2所述的煙葉浸提液培養(yǎng)基，其特征在于，牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、瓊脂20g，pH 7. 0 7. 5，所述的煙葉浸提液由煙葉碎片與水按照20 1的比例混合。
4.一種由權(quán)利要求1所述的煙葉浸提液配制的煙葉浸提液培養(yǎng)基，其特征在于，組分 如下煙葉浸提液1L，葡萄糖3 7g、蛋白胨3 7g、酵母粉3 7g、瓊脂18 22g，pH自然。
5.如權(quán)利要求4所述的煙葉浸提液培養(yǎng)基，其特征在于，葡萄糖3g、蛋白胨5g、酵母粉 3g、瓊脂20g，pH自然，所述的煙葉浸提液由煙葉碎片與水按照20 1的比例混合。
6.一種由權(quán)利要求1所述的煙葉浸提液配制的煙葉浸提液培養(yǎng)基，其特征在于，組分 如下煙葉浸提液1L，酵母粉0. 5 lg，pH7.0 7. 5或pH自然。
7.如權(quán)利要求6所述的煙葉浸提液培養(yǎng)基，其特征在于，酵母粉0.5g，pH7. 0 7. 5或 pH自然，所述的煙葉浸提液由煙葉碎片與水按照20 1或80 1的比例混合。
8.權(quán)利要求2、4或6所述的煙葉浸提液培養(yǎng)基在培養(yǎng)煙堿降解微生物方面的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述煙堿降解微生物為米曲霉 (Aspergi 1 lusoryzae) CGMCC NO. 3687、假單胞菌(Pseudomonas sp.) CCTCC NO. M207083, 煙草假單胞菌(Pseudomonas nicotianae) CGMCC NO. 0757、根癌土壤桿菌(Agrobacterium tumefaci ens) CCTCC NO. M206131、巨大芽孢桿菌(Bacillus me gat erium) CGMCC NO. 0674 之
全文摘要
本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)基，尤其涉及一種培養(yǎng)煙堿降解微生物的煙葉浸提液培養(yǎng)基及其應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的煙葉浸提液培養(yǎng)基，其主要成分含有煙葉浸提液，制備方法為將煙葉碎片和水按照質(zhì)量體積比10～80∶1的比例混合，煮沸25～35分鐘，抽濾定容，即得煙葉浸提液。本發(fā)明還提供煙葉浸提液培養(yǎng)基在培養(yǎng)煙堿降解微生物方面的應(yīng)用，該培養(yǎng)基適用于多種煙堿降解微生物的培養(yǎng)，并且可以獲得更大的生物量，同時提高煙堿降解能力。本發(fā)明所述培養(yǎng)基配制簡單、使用方便、成本低、適合工業(yè)化應(yīng)用。
文檔編號A24B15/24GK101856143SQ20101017358
公開日2010年10月13日 申請日期2010年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月17日
發(fā)明者盧麗麗, 孟祥璟, 肖敏 申請人:山東大學(xué)