專利名稱：一種用于煙梗處理的枯草芽孢桿菌制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于煙用添加劑的技術領域，更具體地說，本發(fā)明涉及一種微生物制劑。同時還涉及所述微生物制劑的制備方法及其在煙草工業(yè)中的應用。
背景技術：
隨著我國卷煙工藝技術水平的提高和煙草行業(yè)減害降焦工作的持續(xù)開展，膨脹梗絲在卷煙配方中的應用更加廣泛。在配方中加入膨脹梗絲后，由于其填充值較高，可以減少卷煙煙絲用量，不僅節(jié)約卷煙成本，也可以起到降低卷煙焦油量的作用。然而，目前對煙梗資源綜合利用的技術水平較為落后，閑置煙梗浪費大，梗絲在卷煙配方中的摻兌比例低，對煙葉的依存度高，卷煙配方成本較高，還未能更好地發(fā)揮其在卷煙產(chǎn)品中提質降耗、減害降焦的效果。因此，改善梗絲質量，提高梗絲的綜合利用率，對卷煙減害降焦工作和降低制造成本具有重要的現(xiàn)實意義。另一方面，煙梗的主要成分是細胞壁物質，約占40%以上，其包括木質素、纖維素、 半纖維素和果膠等。這類物質的熱裂解產(chǎn)物具有強烈的刺激性，雜氣重、嗆咳、澀口、香氣量少，嚴重影響了卷煙的吸味品質，直接限制了梗絲在葉組配方中所占的比例。因此，降低梗絲燃燒產(chǎn)生的不良氣息，提高梗絲吸味是提高梗絲綜合利用率的關鍵問題。近期研究表明，通過微生物或生物酶處理具有明顯消除煙葉的青雜氣，減輕刺激性的作用，對煙葉香氣質量的改善也有一定的幫助。利用木質素降解菌和降解酶對煙梗進行處理能減輕梗絲的木質氣、刺激性。但現(xiàn)有技術中，關于添加微生物制劑直接作用于梗絲并提高梗絲抽吸品質的研究鮮見報道。經(jīng)文獻檢索，尚未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明內容相同的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有梗絲處理技術的不足，提供一種新的微生物制劑。本發(fā)明的另一目的是提供所述微生物制劑的制備方法。本發(fā)明進一步的目的是提供所述微生物制劑在梗絲處理中的應用。本發(fā)明的目的通過下述技術方案予以實現(xiàn)。*除非另有說明，本發(fā)明所采用的百分數(shù)均為質量百分數(shù)。A.本發(fā)明提供了一種新的微生物制劑，該微生物制劑是采用下述方法制備獲得 取從烤煙葉面上分離得到細菌Van3的液體菌種，按照0. 的接種量接種于200ml的LB 液體培養(yǎng)基中，在37°C搖床，轉速180r/min振蕩培養(yǎng)至OD值=1. 5 ；3500rpm/min離心 lOmin，用無菌水洗滌沉淀，離心，最后用20mL無菌水振蕩均勻，使用時稀釋10倍即為所需的微生物制劑；其中，所述的細菌Van3的液體菌種，經(jīng)鑒定屬于枯草芽孢桿菌，該菌株命名為 Bacillus subtilis。B.本發(fā)明提供了一種所述微生物制劑的制備方法，該方法采用下述步驟(1)烤煙葉面上分離得到細菌Van3的液體菌種；(2)取液體菌種，按照0. 1 %的接種量接種于200ml的LB液體培養(yǎng)基中；
(3)在 37 "C 搖床，轉速 180r/min 振蕩培養(yǎng)至 OD 值=1. 5 ； 3500rpm/min 離心 IOmin ；(4)用無菌水洗滌沉淀，離心，然后用20mL無菌水振蕩均勻，使用時稀釋10倍即為菌劑。C.本發(fā)明提供了所述微生物制劑在梗絲處理中的應用。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有以下突出的優(yōu)點(1)本發(fā)明提供的微生物制劑能明顯提高梗絲的香氣量、愉悅性等品質，雜氣、刺激性等下降，煙氣濃度和勁頭減少，余味變得舒適。(2)本發(fā)明成本低、可控性強、操作簡單，便于實現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的開發(fā)應用前景。保藏牛物材料的說明本發(fā)明涉及的枯草芽孢桿菌Van3的菌株已經(jīng)保存在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址中國.北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號；保藏日期2010年 08月16日；保藏號為CGMCC No. 4091。
具體實施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下通過實施例及試驗數(shù)據(jù)，對本發(fā)明作進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅用以解釋本發(fā)明， 并不用于限定本發(fā)明的保護范圍。實施例1——試管斜面培養(yǎng)采用Luria-Bertani(LB)培養(yǎng)基，配方為蛋白胨10g，氯化鈉10g，酵母提取物 5g，瓊脂20g，蒸餾水定容到1000ml。121°C滅菌25分鐘，擺成斜面。接種Van35，28°C培養(yǎng) Mh，獲得試管種。實施例2——種子培養(yǎng)采用Luria-Bertani(LB)培養(yǎng)基，配方為蛋白胨10g，氯化鈉10g，酵母提取物 5g，蒸餾水定容到1000ml。121°C滅菌25分鐘。接種Van35試管種，培養(yǎng)12h，獲得液體菌種。實施例3——制備微生物制劑取液體菌種，按照0. 1 %的接種量接種于200ml的LB液體培養(yǎng)基中，在37°C搖床， 轉速180r/min振蕩培養(yǎng)至OD值=1. 5。3500rpm/min離心lOmin，用無菌水洗滌沉淀，離心，然后用20mL無菌水振蕩均勻，使用時稀釋10倍即為菌劑。應用實施例——微生物制劑對梗絲的作用用制備好的微生物制劑對梗絲進行處理，具體實驗步驟如下1)稱取含水率在11% -13%的梗絲100g。2)取菌劑20ml，用小型噴霧器將其均勻地噴灑到IOOg梗絲上，密封，以防止水分蒸發(fā)。3)直接噴灑等量的無菌水作為對照。4)將樣品封入密封袋，以防止水分蒸發(fā)，30°C恒溫乩。5)將梗絲置于120°C烘箱中烘干，使含水率達到11^-13 ^
6)將梗絲于22°C相對濕度為60 %的恒溫恒濕箱平衡48h。7)取出部分煙絲，檢測主要化學成分含量和致香物質。8)將剩余的煙絲手工卷制成煙支，樣品和對照隨機編號，由評吸專家組成的評吸小組進行感官評吸。常規(guī)化學成分的檢測結果表明經(jīng)所述的微生物制劑處理后，梗絲的生物大分子化合物的含量發(fā)生了較大的改變，其中還原糖和總糖的含量顯著提高，煙堿含量下降。致香成分檢測結果表明經(jīng)微生物制劑處理后，梗絲的致香成分，包括β-大馬酮、香葉丙酮、苯甲醇、苯乙醇、糠醛、二氫獼猴桃內酯、香蘭素等的含量較對照顯著提高。感官評吸結果表明梗絲經(jīng)微生物制劑處理后，雜氣、刺激性等下降，香氣量、愉悅性較對照顯著提升，煙氣濃度和勁頭減少，余味變得舒適。試驗結果表明，該發(fā)明的微生物制劑具有明顯降低梗絲刺激性、掩蓋雜氣、細膩醇和煙氣的效果，能夠達到提高梗絲抽吸品質，提高梗絲在卷煙中的摻配量的目的。
權利要求
1.一種微生物制劑，其特征在于，該微生物制劑是采用下述方法制備獲得取從烤煙葉面上分離得到細菌Van3的液體菌種為原料，按照0. 1 %的接種量接種于200ml的LB液體培養(yǎng)基中，在37°C搖床，轉速180r/min振蕩培養(yǎng)至OD值=1.5 ；3500rpm/min離心IOmin, 用無菌水洗滌沉淀，離心，然后用20mL無菌水振蕩均勻，使用時稀釋10倍即為所需的微生物制劑；其中，所述的細菌Van3的液體菌種，經(jīng)鑒定屬于枯草芽孢桿菌，該菌株命名為 Bacillus subtilis。
2.—種權利要求1所述的微生物制劑的制備方法，該方法采用下述步驟(1)烤煙葉面上分離得到細菌Van3的液體菌種；(2)取液體菌種，按照0.的接種量接種于200ml的LB液體培養(yǎng)基中；(3)在37°C搖床，轉速 180r/min 振蕩培養(yǎng)至 OD 值=1. 5 ；3500rpm/min 離心 IOmin ；(4)用無菌水洗滌沉淀，離心，最后用20mL無菌水振蕩均勻，使用時稀釋10倍即為所需菌劑。
3.一種權利要求1所述的微生物制劑在梗絲處理中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種煙用微生物制劑及其制備方法和應用，屬于煙用添加劑的技術領域。本發(fā)明采用生產(chǎn)菌株液體發(fā)酵培養(yǎng)后得到相應的微生物制劑。所述生產(chǎn)菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis.Van3)，該菌株已于2010年8月16日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.4091。本發(fā)明的微生物制劑，能夠明顯提高梗絲的香氣量、愉悅性等品質，雜氣、刺激性等下降，煙氣濃度和勁頭減少，余味變得舒適，從而進一步提高梗絲在卷煙中的摻配量，達到減害降焦、降低卷煙生產(chǎn)成本的目的。
文檔編號A24B15/20GK102250812SQ201110199168
公開日2011年11月23日 申請日期2011年7月17日 優(yōu)先權日2011年7月17日
發(fā)明者何靚, 唐麗, 廖頭根, 曾曉鷹, 段焰青, 王堅, 王家俊, 陳興, 黃立斌 申請人:紅云紅河煙草(集團)有限責任公司