專利名稱：新決明內(nèi)酯和其衍生物及其在降脂減肥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由決明子提取的一類新的化合物，及其這類化合物在降脂、減肥中的應(yīng)用。
決明子為豆科植物決明(Cassia obtusifolia L.)的干燥成熟種子。有祛風(fēng)散熱，清肝明目，潤腸通便之功效。臨床有降低血清膽甾醇的作用。決明子中含有多種蒽醌類成分和萘并吡喃酮類成分，據(jù)報道其中的某些蒽醌苷和萘并吡喃酮苷具有對抗四氯化碳和半乳糖胺對原代培養(yǎng)小鼠肝細胞毒害的作用(張啟偉等，中草藥，1996,27(2):79；Wong,SM,et al.,Planta Med.1989,55(3):276以及28(1):211)。
在眾多的專利申請文件中，提及了決明子和其他中藥一起制備的降脂藥、減肥藥，由于是復(fù)方，難以了解其中起到了關(guān)鍵作用的有效成分。
高橋周七等在Yakugaku Zasshi 93(3)261-267(1973)中報道了對Cassia tora L.種子中各種成分的研究結(jié)果，并公開了通式A的化合物 Ⅰ:R1,R2=HV:R3=H,R4=COCH3Ⅱ:R1,R2=COCH3Ⅲ:R1,R2=CH3Ⅳ:R1=H,R2=COCH3Ⅵ:R1=CH3,R2=H其中，化合物Ⅰ為一種黃色顏料，被命名為決明內(nèi)酯(toralactone)，但在該文獻中沒有有關(guān)這類化合物藥用作用的報道。
本發(fā)明的目的在于提供一種新型的具有降脂、減肥功效的決明子內(nèi)酯化合物。
本發(fā)明所涉及的化合物為如下通式[A]的新決明內(nèi)酯以及衍生物，該類化合物是從決明子中提取得到的，或者是通過對提取得到的化合物進行結(jié)構(gòu)改造所獲得的 其中，R3為H或C2-C4的酰基，R1、R2相同或不同，分別為H、糖基、C2-C4的酰基。
本發(fā)明進一步提供上述化合物在降血脂和減肥中的應(yīng)用，以及含有這類化合物的藥物組合物，其中，化合物(2)是優(yōu)選的。
以下對本發(fā)明進行詳細描述。
經(jīng)過對決明子中藥提取浸膏對降血脂方面應(yīng)用的長期研究，本發(fā)明人通過下述步驟對決明子浸膏進行提取1、取決明子(產(chǎn)自中國安徽省)，粉碎后用親水性溶劑，如水、甲醇、乙醇或丙酮等，加熱回流提取，然后，減壓回收溶劑，得浸膏(A)；棄去藥渣；2、將浸膏(A)用多孔性樹脂吸附，用水洗滌后，再用親水性溶劑，如甲醇、乙醇、丙酮等洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得浸膏(B)；3、將浸膏(B)用選自硅膠H、硅膠G或者氫氧化鋁進行柱層析，用氯仿、乙酸乙酯、乙醇或甲醇作為洗脫劑，分段收集，經(jīng)TLC檢測后合并相同組分后，回收溶劑；再用甲醇重結(jié)晶，分別得到化合物(1)、化合物(2)、化合物(3)、化合物(4)以及化合物(5)，它們?yōu)?化合物R1R2R3(1) H H H(2) 葡糖基H H(3) H 葡糖基 H(4) 半乳糖基 H H(5) CH3H H其中，化合物(5)為已知的決明內(nèi)酯(toralactone)，即前述的化合物Ⅰ，化合物(1)～(4)為新化合物，分別被命名為(1)新決明內(nèi)酯，或者，去甲決明內(nèi)酯；(2)新決明內(nèi)酯-6-O-β-D-葡萄糖甙(3)新決明內(nèi)酯-8-O-β-D-葡萄糖甙(4)新決明內(nèi)酯-6-O-β-D-半乳糖甙進一步的合成研究表明，R1、R2、R3可被進一步被所酰化，得到如下，即R1～R3分別為C1-C4的?；?，如化合物(6)化合物R1R2R3(6) COCH3COCH3COCH3儀器分析結(jié)果，證明了所提取的化合物(1)～(5)具有上述的結(jié)構(gòu)。
將所得到的組分用于動物試驗，表明化合物(1)～(4)對高血脂豚鼠血清膽固醇具有調(diào)節(jié)作用，對阻止發(fā)胖有益，具有降脂、減肥的作用。
以下實施例和試驗例用于說明本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的范圍。
實施例1化合物(1)～(5)的提取及結(jié)構(gòu)鑒定提取化合物(1)～(5)包括如下步驟1、取決明子(Cassia obtusifolis和Cassia tora的種子，產(chǎn)自中國安徽省)1千克，粉碎成粗粉，用10升乙醇加熱回流提取，減壓回收溶劑，得浸膏(A)210克。棄去藥渣；2、取浸膏(A)210克，用1000克多孔樹脂D101、D201、D061(天津農(nóng)藥廠生產(chǎn))等量混合的多孔樹脂吸附，先用10升水洗滌，再用5升乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得浸膏(B)10克；3、取浸膏(B)10克，用1000克硅膠H(生產(chǎn)廠家，牌號，規(guī)格)進行柱層析，用氯仿作為洗脫劑，分段收集，TLC檢測，合并相同組分后，回收溶劑；再用甲醇重結(jié)晶，分別得到化合物(1)(0.02g)、化合物(2)(2.42g)、化合物(3)(1.05g)、化合物(4)(0.5g)以及化合物(5)(0.32g)。
化合物(1)為黃色針狀結(jié)晶，熔點187～189℃(甲醇)，高分辨質(zhì)譜得分子量258.052849，分子式為C14H10O5,EI-MS(m/e)為258、229、162、115、69,13C-NMR及1H-NMR數(shù)據(jù)見表1和表2，確認化合物(1)為新決明內(nèi)酯(即去甲決明內(nèi)酯)。
化合物(2)為黃色針狀結(jié)晶，熔點252～254℃(甲醇)，F(xiàn)AB-MS(m/e)421(M+1)、259(甙元+1)、235,13C-NMR及1H-NMR數(shù)據(jù)見表1和表2，化合物(2)稀酸水解后生成化合物(1)和葡萄糖。碳譜顯示糖與6位羥基相連。確認化合物(2)為新決明內(nèi)酯-6-O-β-D-葡萄糖甙。
化合物(3)為黃色針狀結(jié)晶，熔點263～265℃(甲醇)，F(xiàn)AB-MS(m/e)421(M+1)、259(甙元+1)、235,13C-NMR及1H-NMR數(shù)據(jù)見表1和表2，化合物(3)水解后生成化合物(1)和葡萄糖。碳譜顯示糖與8位羥基相連。確認化合物(3)為新決明內(nèi)酯-8-O-β-D-葡萄糖甙。
化合物(4)為黃色針狀結(jié)晶，熔點258～260℃(甲醇)，F(xiàn)AB-MS(m/e)421、259(甙元+1)、235,13C-NMR及1H-NMR數(shù)據(jù)見表1和表2，化合物(4)酸水解后生成化合物(1)和半乳糖。碳譜顯示糖與6位羥基相連。確認化合物(4)為新決明內(nèi)酯-6-O-β-D-半乳糖甙。
化合物(5)為黃色針狀結(jié)晶，熔點234～236℃(甲醇)。TCL Rf與決明內(nèi)酯一致。
表113C-NMR分析 化合物(1)化合物(2)化合物(3)化合物(4)1 182.8 183.6183.4183.53 168.2 168.5168.5168.44 139.6 140.4140.2140.34a159.4 159.4159.5159.45 104.3 102.3104.3102.46 164.0 168.4164.0167.27 102.7 101.7101.6101.68 101.7 101.7105.8101.68a158.0 158.2157.0158.39 152.2 151.8151.0151.19a159.4 159.4159.8159.310106.4 106.4106.3106.410a 161.5 161.2161.5161.31120.1 20.1 20.1 20.11′ 100.1100.299.82′ 73.4 74.0 76.23′ 77.2 77.3 78.34′ 69.5 69.6 73.15′ 76.2 76.3 71.06′ 60.5 60.5 61.0表21H-NMR分析化合物(1) 化合物(2)化合物(3) 化合物(4)4 6.6(s) 6.6(s) 6.6(s)6.6(s)5 7.0(d.s=3.5) 7.0(d) 7.1(d)7.1(d)6 10.2(s)-- 10.2(s) --7 5.9(d.s=3.5) 6.1(d) 6.0(d)6.0(d)8 10.4(s)10.3(s) --10.3(s)9 15.0(s)14.9(s) 14.9(s) 14.9(s)106.7(s) 6.7(s) 6.7(s)6.7(s)112.5(s) 2.5(s) 2.5(s)2.5(s)11 4.9(d.J=7.6) 5.2(d.J=7.6) 4.7(d.J=7.6)21-612.9-3.8(m) 2.9-3.8(m)2.9-3.8(m)實施例2化合物(6)的制備取化合物(1)10mg溶于吡啶中，加醋酐2ml，放置24小時后，傾入冰水中，過濾，得化合物(1)的乙?；衔?6)。
化合物(6)為黃色針狀結(jié)晶，熔點156～158℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)385(M++1)、384(M+)、342(M+-COCH3)、299(M+-2×COCH3)、257(M+-3×COCH3)、162、115。可以確認化合物(6)為6,8,10-三乙酰新決明內(nèi)酯。
試驗例1新決明內(nèi)酯及其衍生物對高血脂豚鼠血清膽固醇的影響試驗方法參考王福華等，中華外科雜志1991；8(1):17。取體重300～500g健康豚鼠60只，按體重、性別隨機均分為6組，每組10只，各組♂♀兼用，第1組每日按豚鼠100g體重喂高膽固醇飼料(基礎(chǔ)飼料+0.5％膽固醇)20g；第2、3、4、5組為實驗組，分別為高膽固醇飼料+化合物(1)、(2)、(3)、(4)10mg/(kg.d)×30d；第6組只給基礎(chǔ)飼料。給藥各組于連續(xù)給藥至30d的未次給藥后24小時，以1g/kg烏拉坦ip麻醉，取心血，分離血清。測定血漿中的TC、TG的含量。結(jié)果如表3表3 降脂減肥有效成分對高膽固醇豚鼠血清膽固醇及膽汁酸的影響
與正常組比*P＜0.05,**P＜0.01從表3可見每天在基礎(chǔ)飼料中加0.5％的高膽固醇致使動植物血清膽固醇升高和總膽汁酸降低，當(dāng)加服不同劑量的降脂減肥有效成分10mg/(kg.d)×30d，可降低血血漿中TC、TG的含量，其中以化合物(2)作用最為顯著，表明其對血脂具有調(diào)節(jié)作用，可促使脂代謝的平衡，對阻止高血脂肥胖的發(fā)生是有益的。
在上述方法中，膽固醇的測定采用酶分析法，利用BGH公司(臺灣)酶試劑測試藥盒，按說明操作進行，ENCOREII自動生化分析儀測試。
權(quán)利要求
1.通式[A]的化合物 其中，R3為H或C2-C4的酰基，R1、R2相同或不同，分別為H、糖基、C2-C4的?；?br> 2.如權(quán)利要求1的化合物，其中，R3為H,R1是H,R2是H。
3.如權(quán)利要求1的化合物，其中，R3為H,R1是葡糖基，R2是H。
4.如權(quán)利要求1的化合物，其中，R3為H,R1是H,R2是葡糖基。
5.如權(quán)利要求1的化合物，其中，R3為H,R1是半乳糖基，R2是H。
6.如權(quán)利要求1的化合物，其中，R1、R2和R3均為乙?；?。
7.前述權(quán)利要求1-6之一的化合物在降脂減肥藥物的制備中的應(yīng)用。
8.含有如權(quán)利要求1的化合物的藥物組合物。
9.如權(quán)利要求8的藥物組合物，其中，所述的化合物是新決明內(nèi)酯-6-O-β-D-葡萄糖甙。
全文摘要
從決明子中提取的通式[A]的新決明內(nèi)酯以及衍生物,其中,R
文檔編號A61K36/00GK1309133SQ0010089
公開日2001年8月22日 申請日期2000年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月16日
發(fā)明者潘曉東 申請人:潘曉東