專利名稱：減毒的豬生殖及呼吸綜合癥病毒株及其應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株新的豬生殖與呼吸綜合癥(PRRS)病毒的發(fā)現(xiàn)、分離、鑒定和用途。本發(fā)明還涉及豬PRRS疾病的診斷與保護(hù)性抗原和疫苗，以及其制備和應(yīng)用的方法。
本文所有的公開(kāi)物和專利申請(qǐng)，均作為參考文獻(xiàn)引用，就象每個(gè)公開(kāi)物和專利申請(qǐng)具體和單獨(dú)指明的那樣是作為參考文獻(xiàn)而引用。
最早描述豬生殖及呼吸綜合癥(PRRS)的是美國(guó)(1987年)和德國(guó)(1990年)。后來(lái)報(bào)道這種疾病的其它一些國(guó)家包括法國(guó)(1)，丹麥(2)，荷蘭(3)，日本(4)，加拿大(5)，西班牙(6)，英格蘭(7)。PRRS可能對(duì)美國(guó)和歐洲的豬飼養(yǎng)者造成經(jīng)濟(jì)災(zāi)難。有證據(jù)表明，美國(guó)和歐洲分離株具有很大的遺傳性和抗原性差別(29)。
這種綜合癥已有各種不同的稱呼，如神秘的豬病，豬不育和呼吸綜合癥(SIRS)，青紫流產(chǎn)胎，藍(lán)耳豬病，“Lelystad病毒”，“Heko-heko”疾病，豬流行性流產(chǎn)和呼吸綜合癥(PEARS)(8-10)。
由PRRS病毒引起的疾病可由以下一些特征進(jìn)行鑒定大母豬嚴(yán)重的生育失敗，導(dǎo)致木乃伊化，死產(chǎn)和衰弱豬的發(fā)生率增加的晚期流產(chǎn)；發(fā)情期恢復(fù)延遲的慢性病，輕微到嚴(yán)重的呼吸不暢，包括打噴嚏，咳嗽以及幼豬鼻眼流出物；斷奶前、斷奶及生長(zhǎng)中的豬死亡率增加；成長(zhǎng)豬到成熟豬中一種輕微的類似流感的疾??；結(jié)膜炎及淋巴結(jié)增大(11-13)。呼吸綜合癥常常與一些繼發(fā)性細(xì)菌病原體的嚴(yán)重感染相關(guān)，包括出血敗血性巴斯德氏菌，副豬嗜血桿菌及豬鏈球菌(8)。實(shí)驗(yàn)性接種小豬，顯示出一些臨床病癥，如抑郁癥，厭食，發(fā)熱，腹瀉，坐姿，眼周浮腫(12)，有研究估計(jì)，在91個(gè)荷蘭飼養(yǎng)場(chǎng)中由于PRRS引起的經(jīng)濟(jì)損失是每年每頭母豬平均29.5kg，這是由于每頭母豬每窩生產(chǎn)的小豬數(shù)量減少，延長(zhǎng)了產(chǎn)小豬的間隔期并加快了大母豬更換率(3)。
與這種疾病相關(guān)的病毒是一種有包膜的RNA病毒，屬于披膜病毒科的動(dòng)脈炎病毒屬。有關(guān)的形態(tài)學(xué)，形態(tài)發(fā)生和病毒組成的資料首先提示，PRRS病毒屬于動(dòng)脈炎病毒屬。通過(guò)分析基因組構(gòu)成及基因表達(dá)策略，并比較推斷的蛋白質(zhì)序列，可以證實(shí)該結(jié)論。這些動(dòng)脈炎病毒也包括馬動(dòng)脈炎病毒(EAV)，乳酸脫氫酶升高病毒(LDV)和猿猴出血熱病毒(SHFV)。PRRS病毒屬于單鏈RNA病毒，具有正極性的病毒基因組，其大小約為15kb(15)。據(jù)估計(jì)這些球形病毒粒子直徑為48～83nm，含有被包膜包圍的25～30nm的核心(3)。正鏈RNA基因組至少個(gè)有三種主要的結(jié)構(gòu)蛋白，稱其為N，M和E。其中N蛋白被認(rèn)為是核衣殼的主要成分，而M和E是膜相關(guān)蛋白(16)。已經(jīng)測(cè)定了來(lái)自重疊cDNA克隆的分離株CDI-NL-2.91(巴斯德研究所保藏號(hào)I-1102)的PRRS病毒的基因組RNA的核苷酸序列(17)，在該分離株得到的15088bp連續(xù)序列中已鑒定了八個(gè)開(kāi)發(fā)讀框(ORFs)。另一株美國(guó)分離株ATCC VR 2332的基因組3’一部分也已經(jīng)克隆并測(cè)序(18)，所得的3358個(gè)核苷酸含有6個(gè)ORF，與PRRS病毒的歐洲株的第2到7個(gè)ORFs和動(dòng)脈炎病毒屬中的其它成員有同源性。
如前面所述，有證據(jù)顯示，PRRS病毒的不同分離株之間的遺傳性和抗原性差異很大。因此，有必要分離、鑒定并應(yīng)用新的PRRS病毒分離株。在本文中，我們報(bào)道了命名為JK-100的一種新的PRRS病毒株的發(fā)現(xiàn)、分離和用途。
本發(fā)明包括取自受感染豬群中選定小豬的PRRS病毒株的鑒定和分離，所選用的小豬顯示出病毒血癥和血清轉(zhuǎn)變的跡象，但還沒(méi)有臨床癥狀。更具體地說(shuō)，我們已經(jīng)鑒定并分離了一株命名為JK-100的新的PRRS病毒株。
這種命名為JK-100的PRRS病毒株按國(guó)際承認(rèn)的用于專利程序的微生物保藏的布達(dá)佩斯條約，于2000年8月8日在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏號(hào)為CCTCC V200005。
本發(fā)明也提供了基本上相應(yīng)于JK-100株的PRRS病毒株。術(shù)語(yǔ)“基本上相應(yīng)于”指的是JK-100的自發(fā)變異和人工變異株，特別是那些可由以下技術(shù)檢測(cè)的變異株，如雜交，PCR和用JK-100特異性材料如JK-100特異性抗體的ELISA。
本發(fā)明提供了在某種細(xì)胞系如MARC145細(xì)胞系中高效價(jià)繁殖JK-100株的方法。本發(fā)明提供了包括JK-100株的物質(zhì)組合物。更具體地說(shuō)，本發(fā)明提供了包含活的、滅活的或減毒的JK-100病毒的物質(zhì)組合物。
本發(fā)明還提供了用于接種動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物，更具體地說(shuō)是豬或豬類，以保護(hù)動(dòng)物抵抗PRRS病的疫苗組合物。更具體地說(shuō)，該疫苗組合物包括活的、滅活的或者減毒的JK-100病毒株；或者JK-100的抗原性部分或組份；來(lái)源于JK-100的蛋白質(zhì)或其抗原性多肽，或者模擬其抗原性成分的肽；以及合適的載體或佐劑。因此，本發(fā)明也提供了制備和使用活體病毒或滅活的病毒抗原(常規(guī)的或重組的抗原)的方法，以及通過(guò)用稀釋劑或/和佐劑分別結(jié)合免疫有效量的病毒得到的疫苗。
本發(fā)明也提供了一種檢測(cè)樣品，特別是來(lái)自動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物，更具體地說(shuō)是豬的生物樣品，如血液或血清、痰、唾液、精液或組織的樣品中來(lái)自JK-100的抗原的診斷試劑盒，該試劑盒包含特異識(shí)別JK-100的部分或組分的抗體，以及適當(dāng)?shù)目乖瓩z測(cè)分析的檢測(cè)工具。本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)樣品中特異性識(shí)別JK-100的抗體的診斷試劑盒，所述樣品特別是來(lái)自動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物，更具體地說(shuō)是豬的生物樣品，如血液或血清、痰、唾液、精液或組織的樣品，該試劑盒包含JK-100；JK-100的抗原性部分或組分；來(lái)源于JK-100的蛋白或抗原性多肽；或來(lái)源于JK-100的抗原多肽；模擬JK-100抗原性組分的肽；和抗體檢測(cè)分析的適當(dāng)?shù)臋z測(cè)工具。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員很容易根據(jù)特殊情況需要而進(jìn)行一些必要的調(diào)整。
除非另有說(shuō)明，本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)，與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常的理解具有相同的意義。盡管在實(shí)踐或試驗(yàn)本發(fā)明時(shí)可以與本文所述類似或等價(jià)的任何方法和材料，但本文還是描述了優(yōu)選的方法和材料。
如上所述，本發(fā)明描述了PRRS病毒分離株JK-100的分離，以獲得用作疫苗和診斷分析的病毒抗原。接種疫苗是抗PRRS病毒或其組分的主動(dòng)免疫，最終目的是保護(hù)宿主動(dòng)物抵抗后來(lái)的自然出現(xiàn)的PRRS病毒的攻擊。病毒疫苗的兩個(gè)廣義的分類是減毒活疫苗和非感染性疫苗。
非感染性疫苗包括失活的“滅活”病毒疫苗，亞單位疫苗，合成肽和生物合成多肽疫苗，以及抗獨(dú)特型抗體疫苗?！皽缁睢钡幕颉八赖摹辈《疽呙缬山?jīng)化學(xué)試劑或射線處理破壞了其感染力的病毒顆粒組成。用以下方法能很方便地制備疫苗PRRS病毒在豬肺巨噬細(xì)胞培養(yǎng)物或者其它支持病毒生長(zhǎng)的細(xì)胞體系中生長(zhǎng)，再用已熟知的技術(shù)，如用福爾馬林或γ-輻射滅活法滅活純化的或者沒(méi)有純化的病毒。然后將滅活的PRRS病毒與佐劑結(jié)合，如弗氏佐劑或氫氧化鋁或者其它佐劑，該組合物即可注射入豬體內(nèi)。這些病毒粒子保留了引起免疫應(yīng)答的能力，并能預(yù)防感染。用更小的PRRS病毒組分，如多肽、肽、或病毒抗原成分的模擬肽制成的疫苗也能用作死疫苗。
減毒的病毒指的是經(jīng)受了在細(xì)胞培養(yǎng)物中連續(xù)傳代或其它方法減毒的任何病毒。減毒疫苗是含有對(duì)宿主致病力已減小或消失的有機(jī)體的活疫苗。施用減毒疫苗產(chǎn)生主動(dòng)免疫。通過(guò)在不同于自然宿主種類細(xì)胞中重復(fù)傳代而減弱活體病毒毒性是產(chǎn)生減毒活病毒疫苗的主要方法之一。通過(guò)病毒在豬肺巨噬細(xì)胞，其它物種的肺巨噬細(xì)胞，或者其它細(xì)胞系統(tǒng)，或其它動(dòng)物如兔中連續(xù)傳代，直到其失去致病性，可制備針對(duì)PRRS的減毒疫苗。優(yōu)選的能用于產(chǎn)生減毒PRRS的非宿主細(xì)胞包括非洲綠猴的腎細(xì)胞(22)和MARC-145細(xì)胞(19)?；铙w病毒疫苗可經(jīng)過(guò)皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、口服用藥，或者作為口咽部噴霧狀藥劑施用。
針對(duì)PRRS的活疫苗或死疫苗也可通過(guò)重組DNA技術(shù)制得，通過(guò)該技術(shù)，將病毒基因組或其部分摻入到諸如牛痘病毒、皰疹病毒、假狂犬病病毒、腺病毒的載體系統(tǒng)或其它能如此表達(dá)病毒抗原的合適的載體系統(tǒng)中。重組載體可包含含有編碼來(lái)源于PRRS病毒的蛋白或抗原肽的核苷酸序列的核酸；病毒的抗原性部分或組分；模擬病毒抗原性多肽或其抗原性組分的蛋白或肽；以及合適的載體或佐劑。動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物，更特別是豬，接種這種載體體系后將會(huì)增強(qiáng)其針對(duì)PRRS的保護(hù)性免疫應(yīng)答。
PRRS的血清學(xué)診斷可用本領(lǐng)域熟知的方法檢測(cè)血清或初乳樣品來(lái)完成，該方法包括免疫過(guò)氧化物酶單層分析測(cè)定(IPMA)，免疫熒光抗體(IFA)，酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)以及血清病毒中和(SVN)試驗(yàn)(23，27，30)。一旦鑒定出被感染的動(dòng)物，就可用本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法分離PRRS病毒。然后將PRRS病毒增殖到高效價(jià)，轉(zhuǎn)化成高水平的抗原物質(zhì)，可通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法獲得其衍生物。例如，通過(guò)稀釋、濃縮或提取病毒可得到抗原物質(zhì)。在中和試驗(yàn)中向病毒-血清混合物中加入10％或者20％的豚鼠新鮮血清可得到更高效價(jià)的中和抗體(24，25)。同時(shí)也表明，這種病毒-血清混合物不是直接在37℃保溫60分鐘，而是首先在4℃保溫24小時(shí)或者48小時(shí)，然后與補(bǔ)體在37℃保溫60分鐘時(shí)，可增加許多血清樣品中需要補(bǔ)體的中和抗體的效價(jià)(24，25)。另一方面，可在分子水平鑒定這種保護(hù)性抗原，并可通過(guò)重組技術(shù)進(jìn)行繁殖和表達(dá)。衍生物的例子包括按照本發(fā)明有效的其亞基和重組體形式。
可用以下方法產(chǎn)生亞單位制劑。用經(jīng)典的生化方法，從感染了PRRS病毒的宿主細(xì)胞溶胞產(chǎn)物制備病毒蛋白。用檢測(cè)抗原表達(dá)的技術(shù)，如IFA監(jiān)測(cè)感染細(xì)胞中感染原的生長(zhǎng)。用現(xiàn)有的PRRS病毒純制劑，我們可以利用重組DNA技術(shù)的宿主直接產(chǎn)生亞單位。用標(biāo)準(zhǔn)方法，從感染了PRRS病毒的細(xì)胞培養(yǎng)物的溶胞產(chǎn)物可很容易地制備PRRS病毒的遺傳物質(zhì)。編碼已鑒定為重要免疫原蛋白的基因，或者編碼可能是PRRS病毒致免疫的蛋白的基因，可以用從共有序列產(chǎn)生的引物進(jìn)行定位，然后亞克隆到本領(lǐng)域公知的表達(dá)載體類型中。
這種載體可在細(xì)胞中表達(dá)，或在無(wú)細(xì)胞酶轉(zhuǎn)錄/翻譯系統(tǒng)中表達(dá)?？杀磉_(dá)和純化由該載體編碼的抗原性蛋白，如果它被正確地翻譯后修飾，就可按照本發(fā)明用作免疫原。
經(jīng)鑒定是編碼免疫原性蛋白的基因，可以用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增和純化以便亞克隆以及DNA測(cè)序。例如，分離的基因或者基因片段可以直接克隆到載體中，或者首先連接到具有合乎需要的限制性酶切位點(diǎn)的接頭上。從克隆的DNA片段獲得的DNA測(cè)序數(shù)據(jù)可與已知的序列，如Gen Bank登錄庫(kù)中的序列相比較，以便鑒定所分離的有機(jī)體并更精確地探索PRRS病毒的分子生物學(xué)基礎(chǔ)，以及預(yù)防由它引起的疾病。
上面提到的制劑要求有指示試劑鑒定抗原性蛋白或者檢測(cè)宿主細(xì)胞中PRRS病毒的存在。這種指示劑能從接觸了PRRS病毒的豬中分離的多克隆超免疫血清中獲得，或者通過(guò)開(kāi)發(fā)針對(duì)完整PRRS病毒的單克隆抗體組而獲得。針對(duì)PRRS病毒的抗原的單克隆抗體，可通過(guò)裂解感染細(xì)胞，以梯度離心法從裂解物中純化PRRS病毒，用SDS-PAGE電泳法分離并純化蛋白而制得。SDS-PAGE凝膠可用考馬斯藍(lán)或者銀染劑染色而得到PRRS病毒蛋白和碳水化合物的帶型?？捎檬躊RRS病毒感染豬的恢復(fù)期血清或用超免疫血清對(duì)部分SDS-PAGE凝膠進(jìn)行Western印跡分析而檢測(cè)豬中哪些蛋白是抗原性的，因而是免疫原。與血清抗體結(jié)合的轉(zhuǎn)印蛋白，可通過(guò)順序加入適當(dāng)?shù)挠眠^(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗-抗體綴合物和識(shí)別過(guò)氧化物酶的顯色底物來(lái)觀測(cè)。更精確地測(cè)定抗原反應(yīng)性不是通過(guò)整個(gè)蛋白質(zhì)，而是對(duì)蛋白質(zhì)片段進(jìn)行SDS-PAGE電泳來(lái)測(cè)定。
可通過(guò)從SDS-PAGE凝膠中提取特殊蛋白并注射到適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)鼠系中來(lái)產(chǎn)生針對(duì)特殊蛋白的單克隆抗體組。從免疫鼠脾臟分離的B-細(xì)胞可以與一種永久細(xì)胞系融合，并篩選鑒定產(chǎn)生針對(duì)靶蛋白的抗體的穩(wěn)定雜交瘤。
收集受PRRS病毒感染的細(xì)胞，經(jīng)梯度離心純化，并與針對(duì)PRRS病毒的單克隆抗體組接觸，以測(cè)定PRRS病毒表面存在哪些抗原性表位。然后用熒光標(biāo)記的抗免疫球蛋白顯示已結(jié)合單克隆抗體的細(xì)胞。然后可大量生產(chǎn)特異性針對(duì)PRRS病毒表面抗原的單克隆抗體，并可預(yù)防性地施用到豬群中。例如已制得了抗該病毒核衣殼蛋白和19kDa膜蛋白的單克隆抗體(26，28)。有研究發(fā)現(xiàn)，從這種病毒的歐洲分離株制得的單克隆抗體不和美國(guó)分離株結(jié)合，表明美國(guó)和歐洲分離株推斷的核衣殼間存在恒定的抗原性差異(31)。
針對(duì)PRRS病毒表面抗原的具有活性的單克隆和多克隆抗體，不僅可用作選擇體外產(chǎn)生的抗原蛋白的工具，而且本身可能用作治療劑。針對(duì)PRRS病毒表面抗原決定簇的抗體在小豬中施用時(shí)，很可能會(huì)針對(duì)PRRS病毒產(chǎn)生被動(dòng)免疫。
針對(duì)PRRS病毒產(chǎn)生的抗體也可用于野外實(shí)驗(yàn)，通過(guò)以下分析方法監(jiān)測(cè)豬群中PRRS病毒的存在，如用ELISA或Western印跡通過(guò)結(jié)合能專一識(shí)別該蛋白質(zhì)的抗體到該蛋白質(zhì)上而顯示特異的PRRS病毒蛋白，如PRRS病毒表面攜帶的蛋白的存在。這種方法可用于鑒定某些家畜是否是不含PRRS病毒的。同時(shí)，這種方法用在常規(guī)的豬篩選計(jì)劃方面時(shí)，可對(duì)種畜群的發(fā)育及生長(zhǎng)情況向飼養(yǎng)者報(bào)警。
材料與方法病毒的分離從受感染但未出現(xiàn)PRRS病的臨床跡象的小豬中收集血清樣品。通過(guò)0.45微米濾膜過(guò)濾血清，小容量等分，然后于-60℃貯存。
在含有鋪滿單層MARC-145細(xì)胞的75cm2燒瓶中接種1ml血清(19)。細(xì)胞系在補(bǔ)充了10％胎牛血清的Eagle極限必需培養(yǎng)基(MEM)中生長(zhǎng)并在37℃保溫(20)。接種培養(yǎng)物保存在含有5％胎牛血清的MEM中，并在32℃保溫。每天觀察細(xì)胞以證明致細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)。最初通過(guò)細(xì)胞變圓來(lái)觀察CPE，接種后3～4天，細(xì)胞從基質(zhì)上的脫壁率為70％。
在另一個(gè)含有鋪滿單層的MARC-145細(xì)胞的75cm2培養(yǎng)瓶中接種1ml培養(yǎng)基。剩余的培養(yǎng)基小容量等分，并在-60℃貯存。
該過(guò)程重復(fù)5次。從第5次傳代獲得的效價(jià)為5.5 log TCID50/ml。
受孕卵上的檢驗(yàn)傳代5次的自然分離株(0.5ml)接種到10日齡的受孕雞蛋中，保溫5天。接種后雞蛋的尿囊液進(jìn)一步通過(guò)SPF雞蛋傳代二次。用雞紅血細(xì)胞與傳代三次的尿囊液進(jìn)行血凝試驗(yàn)(HA)(21)。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)該病毒呈HA陰性。
豬腎細(xì)胞上的檢驗(yàn)PK15細(xì)胞系在25cm2燒瓶中生長(zhǎng)，所用的培養(yǎng)基是Dulbecco改進(jìn)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(DMEM)，并補(bǔ)加10％的胎牛血清。
將1ml自然分離株接種到單層細(xì)胞中，在含有5％胎牛血清的DMEM中于37℃維持。培養(yǎng)基用同樣方法盲傳二次(21)。
該病毒對(duì)PK15細(xì)胞不產(chǎn)生致細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)。
病毒的后續(xù)傳代該病毒在MARC-145細(xì)胞系中進(jìn)一步傳代到20代。后續(xù)的病毒傳代物產(chǎn)生更顯著的CPE，第20代傳代物效價(jià)達(dá)到8.17 logTCID50／ml。
通過(guò)滴定可測(cè)定每次病毒傳代物的病毒效價(jià)，也可通過(guò)免疫熒光抗體分析(IFA)測(cè)試以檢驗(yàn)這種病毒。
免疫熒光分析通過(guò)IFA(免疫熒光抗體分析)證實(shí)這種自然分離株是PRRS病毒，IFA用的是命名為SDOW17(1)的PRRS病毒屬特異性單克隆抗體和來(lái)自沒(méi)有顯示PRRS病臨床跡象的受感染豬的多克隆抗血清。
MARC-145細(xì)胞接種到96孔微量培養(yǎng)板中，在37℃ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。用MEM對(duì)病毒分離物進(jìn)行連續(xù)稀釋。稀釋的病毒加入到孔中，再培養(yǎng)48小時(shí)。該細(xì)胞用無(wú)水乙醇固定并空氣干燥。
來(lái)自SDOW17的單克隆抗體和豬的多克隆抗血清用作這種試驗(yàn)的主要抗體。用于SDOW17和豬血清的第二抗體分別是FITC綴合的抗小鼠IgG和FITC綴合的抗豬IgG(11)。
熒光僅在細(xì)胞的胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)，顯示出PRRS病毒的存在。
體內(nèi)試驗(yàn)該試驗(yàn)用傳代20代的病毒在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。6log TCID50/ml的病毒接種五只3周齡小豬。實(shí)驗(yàn)包括有一個(gè)對(duì)照小豬。整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，小豬都沒(méi)有出現(xiàn)PRRS疾病的癥狀。
收集三周后小豬的血清用于IFA。用來(lái)自SDOW17的單克隆體和沒(méi)有顯示PRRS病癥的受感染豬的多克隆抗血清一起檢測(cè)受試血清。
結(jié)果顯示這種自然分離物是PRRS病毒，在體內(nèi)不產(chǎn)生臨床病癥。
功效試驗(yàn)為了表明病毒株JK-100可防止PRRS，進(jìn)行了接種疫苗攻擊研究。對(duì)PRRS抗體呈陰性的小豬、小母豬和/或大母豬(在下文中統(tǒng)稱為“豬”)，用活的或死的JK-100接種免疫。沒(méi)有接種免疫的豬分開(kāi)飼養(yǎng)用作對(duì)照組。檢測(cè)全體豬的血清轉(zhuǎn)變。隨后，免疫接種和對(duì)照組豬接受PRRS攻擊病毒。每天觀察食物攝取、直腸溫度和其它臨床癥狀。對(duì)照組豬顯示出疾病跡象，而接觸JK-100(接種的)豬沒(méi)有出現(xiàn)臨床病癥。這種接種疫苗攻擊研究的結(jié)果表明，對(duì)臨床PRRS的防護(hù)作用是用JK-100免疫接種的結(jié)果。
前述的詳細(xì)描述僅僅是為了理解清楚而提供的，而不應(yīng)理解為必要的限定，因?yàn)樽鞒鲂薷膶?duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。
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權(quán)利要求
1.一種命名為JK-100的豬生殖及呼吸綜合癥病毒分離株，其于2000年8月8日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCCV200005。
2.一種包含權(quán)利要求1的病毒的物質(zhì)組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的物質(zhì)組合物，其中的病毒是滅活的。
4.一種含有命名為JK-100的豬生殖及呼吸綜合癥病毒分離株的疫苗組合物，其中該病毒株于2000年8月8日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCCV200005。
5.如權(quán)利要求4的疫苗組合物，進(jìn)一步包括一種佐劑。
6.權(quán)利要求4的疫苗組合物，其中的病毒已被滅活。
7.權(quán)利要求6的疫苗組合物，進(jìn)一步包括一種佐劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及豬生殖及呼吸綜合癥(PRRS)病毒的一株新病毒株,并描述了這種PRRS病毒株的發(fā)現(xiàn)、分離、鑒定及用途。本發(fā)明還包括含有活的、死的,或者病毒的該病毒株,或者該病毒株的部分或成分的物質(zhì)組合物。本發(fā)明還提供了疫苗組合物及以其為基礎(chǔ)的診斷試劑盒。
文檔編號(hào)A61K39/12GK1284382SQ0012127
公開(kāi)日2001年2月21日 申請(qǐng)日期2000年8月10日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月10日
發(fā)明者況慧星, 張德鴻 申請(qǐng)人:分子農(nóng)業(yè)生物學(xué)院